A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa causada por Rickettsia rickettsii, transmitida pelo carrapato-estrela Amblyomma sculptum no interior do estado de São Paulo, onde equinos e capivaras são utilizados como sentinelas para FMB por serem considerados hospedeiros primários deste carrapato. Objetivou-se com este trabalho verificar a ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em sentinelas clássicos (equinos) e potenciais (ovinos, bovinos e gambás) para FMB que vivem em diferentes ambientes do Campus \"Luiz de Queiroz\", da Universidade de São Paulo, em Piracicaba-SP. De fevereiro de 2017 a janeiro de 2018 foram amostrados 156 hospedeiros, 48 que habitam áreas urbanas, sem a presença ou trânsito de capivaras (15 equinos e 33 gambás), 60 ovinos que frequentam pastagens sem presença de capivaras, mas adjacentes a matas ciliares ocupadas pelos roedores, e 48 que frequentam pastagens por onde transitam capivaras (31 bovinos e seis equinos) ou matas ciliares ocupadas pelos roedores (11 gambás). Quando possível, a amostragem envolveu a coleta de ectoparasitos. O soro obtido após centrifugação do sangue colhido foi analisado em duas etapas, triagem e titulação, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Na triagem todas as amostras foram testadas contra R. rickettsii, e consideradas positivas se apresentassem título de anticorpos >= 64. As amostras positivas foram diluídas na etapa de titulação e testadas contra R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis e R. rhipicephali para determinação do título máximo de anticorpos para cada espécie. Das 156 amostras testadas, 15 estavam soropositivas, 1/60 ovinos, 1/31 bovinos, 7/21 equinos e 6/44 gambás; os títulos finais variaram de 64 a 4.096. Foi possível determinar o possível antígeno envolvido em reação homóloga (PAERH) em seis amostras, um equino (R. bellii) e quatro gambás e um ovino (R. rickettsii). Foram registrados os carrapatos Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens e Rhipicephalus microplus, e as pulgas Ctenocephalides felis e Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus nos hospedeiros amostrados. Conclui-se que equinos e gambás podem ser utilizados como sentinelas para FMB no Campus \"Luiz de Queiroz\", mas os ovinos não. Não foi possível concluir se os bovinos podem ser utilizados com esta função. R. bellii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre na área urbana do Campus \"Luiz de Queiroz\" e é capaz de infectar cavalos. R. rickettsii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre no Campus \"Luiz de Queiroz\" em áreas de permanência e trânsito de capivaras / Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease caused by Rickettsia rickettsii, transmitted by the tick Amblyomma sculptum outside the metropolitan region in the State of São Paulo, where horses and capybaras are used as sentinels for BSF as they are considered primary hosts for this tick. This survey aimed to verify the occurrence of antibodies against Rickettsia rickettsii in sentinels (horses) and potential sentinels (sheep, cattle and opossums) for BSF that lives in different environments of the \"Luiz de Queiroz\" Campus, University of São Paulo, in Piracicaba, SP, Brazil. A total of 156 host were sampled between February of 2017 and January of 2018; 48 that live in urban areas, with no presence or transit of capybaras (15 horses and 33 opossums), 60 sheep that regularly graze on capybara-free pastures adjacent to a riparian forest occupied by these rodents, and 48 that occupy, cross or regularly graze on pastures (31 cows and six horses) or riparian forests (11 opossums) that are areas used by capybaras. Whenever possible, host sampling included ectoparasites collection. Sera obtained after centrifugation of the collected blood was analyzed in two steps, screening and titration, by the indirect immunofluorescence assay technique (IFA). All samples were tested against R. rickettsii during the screening, and those that presented antibodies titers >= 64 were considered positive. Positive samples were diluted during titration and tested against R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis and R. rhipicephali for determination of maximum antibodies titers for each species. Of the 156 tested samples, 15 were seropositive, 1/60 sheep, 1/31 cows, 7/21 horses and 6/44 opossums; antibodies endpoint titers ranged from 64 to 4.096. Possible antigen involved in a homologous reaction (PAIHR) was determined for six samples, one horse (R. bellii), four opossums and one sheep (R. rickettsii). The ticks Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens and Rhipicephalus microplus, and the fleas Ctenocephalides felis and Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus were collected from the sampled hosts. Results showed that horses and opossums may be used as sentinels for BSF in the \"Luiz de Queiroz\" Campus, but the sheep do not. It wasn\'t possible to determine if the cows may be used as sentinels. R. bellii, or a very closely related microorganism, occurs in the urban area of the \"Luiz de Queiroz\" Campus and is capable to infect horses. R. rickettsii, or a very closely related microorganism, occurs in capybara-transit areas of the \"Luiz de Queiroz\" Campus

Introdução: A bronquiolite aguda é a principal causa de internação de lactentes menores de um ano de idade e tem como principal agente etiológico o vírus sincicial respiratório (VSR). O diagnóstico baseia-se na apresentação clínica e epidemiologia. A maioria das medidas terapêuticas é controversa e apesar da etiologia viral, a prescrição de antibióticos sistêmicos é freqüente. Não está claro se a pesquisa etiológica viral pode influenciar na conduta nesses lactentes. Objetivo: Analisar o impacto da realização de pesquisa etiológica viral sobre a conduta terapêutica, em lactentes internados com bronquiolite aguda. Casuística e métodos: Foi realizado estudo de coorte histórica que incluiu lactentes menores de 12 meses, internados no Hospital Universitário da USP durante dois anos, com diagnóstico de alta de bronquiolite aguda e que tiveram coletado aspirado de nasofaringe, para pesquisa viral, por imunofluorescência indireta (IFI), à admissão. Foram excluídos os lactentes com fatores de risco conhecidos para desenvolver doença grave. As informações foram coletadas dos prontuários. As alterações de condutas realizadas até 24 horas após a divulgação do diagnóstico etiológico foram consideradas associadas ao resultado da IFI. Resultados: Dentre 1199 lactentes, menores de 12 meses hospitalizados, 71% apresentaram diagnóstico de doença aguda do aparelho respiratório, sendo que 33% apresentaram bronquiolite. Desses, 33 foram excluídos e 20 não puderam ter a análise concluída. A idade média, dos 230 lactentes estudados, foi de 4 meses (± 2,7) e 56% foram do sexo masculino. Broncodilatadores, corticosteróides e antibióticos foram prescritos, à admissão em 80%, 52% e 55% dos casos, respectivamente. A pesquisa viral foi positiva para algum vírus em 165 casos e negativa em 65. O VSR foi identificado em 146 casos e outros vírus em 19. Os grupos com pesquisa viral negativa e positiva foram semelhantes com relação à prescrição de antibióticos (52% x 56%, respectivamente, p = 0,636), corticosteróide (42% x 56% -p = 0,052) e broncodilatadores (74% x 83%, p = 0,114) à admissão. A suspensão de antibióticos predominou nos pacientes com pesquisa viral positiva (35,6% x 9,2%, p < 0,001). Não houve alteração significante quanto as prescrições de corticosteróides e broncodilatadores. Também na comparação entre pacientes VSR (+) e com resultado negativo para pesquisa viral, o padrão de alterações de conduta foi semelhante. Houve suspensão de antibióticos em 32,2% e 9,2%, respectivamente (p < 0,001). O resultado positivo da pesquisa viral foi o único fator independentemente associado à suspensão de antibióticos, tanto no grupo com pesquisa viral positiva para qualquer vírus (RR = 3,37, p = 0,005) como no grupo VSR(+) (RR = 3,33, p = 0,006) Conclusão: Em lactentes hospitalizados com BA, o resultado positivo da pesquisa viral por IFI, foi determinante da suspensão de antibióticos sistêmicos, prescritos à admissão. / Background: Acute bronchiolitis is the leading cause of infant hospitalization, and it is most commonly caused by respiratory syncytial virus (RSV). Etiological tests are not required for its diagnosis, which can be made clinically. The most prescribed therapeutic measures are controversial, and in spite of the viral etiology, the prescription of systemic antibiotics is frequent. It remains unclear whether viral screening could contribute to therapy adjustment. Objective: To analyze the impact of viral screening on the therapeutic management of hospitalized infants with acute bronchiolitis. Patients and methods: A retrospective cohort was performed to assess the impact of RSV screening on medication prescription. The study included infants up to 1 year of age who were hospitalized at the University Hospital USP for 2 years, with bronchiolitis as discharge diagnosis and who had nasopharyngeal samples collected on admission for virus screening, by indirect immunofluorescence assay (IFA). Infants were excluded if they had a known risk factors for developing severe disease. Clinical information was obtained from the patients medical records. Therapeutic changes were considered to be associated with viral screening when made within 24 hours of the release of IFA results. Result: Among 1199 hospitalized infants younger than 12 months, 71% were diagnosed with acute lower respiratory disease, of which 33% had bronchiolitis. Of these, 33 were excluded and 20 could not have the analysis completed. The average age of the 230 infants studied was 4 months (+/- 2.7) and 56% were male. Bronchodilators, steroids and antibiotics were prescribed on admission for 80%, 52%, and 55% of cases, respectively. The viral test was positive for some virus in 165 cases and negative in 65. RSV was identified in 146 cases and other viruses in the 19. At admission, the groups with negative or positive viral test were similar regarding the prescription of antibiotics (52% vs 56% respectively, p=0.636), corticosteroids (42% vs 56%, p=0.052) and bronchodilators (74% vs 83%, p=0.114). The discontinuation of antibiotics predominated in patients who tested positive for virus (35.6% vs 9.2%, p<0.001). There were no significant changes regarding the prescription of corticosteroids and bronchodilators. Also, when comparing patients with viral test positive for RSV or negative for any virus the patterns were similar. There was discontinuation of antibiotics in 32.2 % and 9.2%, respectively (p=0.001). The positive result of viral test was the only independent factor associated with the discontinuation of antibiotics, both in the group with positive viral test for any virus (RR=3.37, p=0.005) and in the RVS (+) group (RR=3.33, p=0.006). Conclusion: In hospitalized infants with acute bronchiolitis, the positive result for virus screening, by IFA was an independent factor associated to the discontinuation of systemic antibiotics prescribed at admission.

O presente trabalho teve como objetivo otimizar ensaios sorológicos para serem utilizados na pesquisa de anticorpos dirigidos ao Herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) e com eles explorar grupos de risco para adquirir, transmitir e desenvolver doença relacionada à esta infecção, como o sarcoma de Kaposi (SK). Tomando como base a literatura disponível, as condições do laboratório e a experiência profissional acumulada na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foram selecionados e utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) e Western blot (WB) para a pesquisa de anticorpos dirigidos a antígenos (Ag) de fase latente (LANA) e lítica da infecção por HHV-8. Para a padronização dos testes sorológicos foram utilizadas amostras de soro de 44 pacientes com SK e 21 controles sadios do Laboratório, e para o cálculo de prevalência de infecção HHV-8 em diferentes populações de São Paulo, soros de 3 grupos de indivíduos: - 477 pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK; - 683 pacientes institucionalizados com deficiência mental e/ou física; - 736 profissionais da área da saúde, sadios. Foram empregados na preparação das lâminas de IFI e nas tiras de WB respectivamente, as células BCBL-1 latentemente infectadas pelo HHV-8 ou estimuladas com forbol éster e o antígeno viral bruto obtido de sobrenadante de lisado das mesmas células. Os resultados obtidos na padronização da IFI-LANA mostraram baixa especificidade do ensaio devendo ser acompanhado pelo teste confirmatório de WB-LANA. Por outro lado, a IFI-Lítico se mostrou altamente sensível e específica, prescindindo do teste confirmatório de WB-Lítico. Este último, devido à complexidade de componentes antigênicos aliado aos diferentes perfis de reatividade de anticorpos encontrados em soros controle positivo e negativo, não se mostrou útil para ser empregado no presente trabalho. Levando em consideração os resultados obtidos na IFI-LANA confirmados pelo WB-LANA e na IFI-Lítico, foi possível determinar a prevalência de infecção HHV-8 no grupo de pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK que foi de 19,3%, sendo detectados 4,8% de soros positivos para Ag LANA e 17% para Ag Lítico. Neste grupo de pacientes, houve associação estatisticamente significante entre sorologia HHV-8 positiva, sexo masculino e prática homossexual. Baixas prevalências de anticorpos foram detectadas nos pacientes institucionalizados com deficiência mental e/ou física (1,6%) e nos profissionais da área da saúde (1,1%). Anticorpos dirigidos a Ag LANA foram encontrados em 0,6% e 0,95% dos casos, e para Ag Líticos em 1,0% e 0,3% dos casos, respectivamente. Os resultados obtidos mostram que São Paulo não é região endêmica desta infecção viral e que pacientes institucionalizados e profissionais da área da saúde não são grupos de alto risco para adquirir e transmitir o HHV-8; nenhum caso de SK foi relatado neste grupo de indivíduos na ocasião da coleta das amostras de soro. Quanto ao grupo de pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK, embora 19,3% deles tenham resultado sorologia HHV-8 positiva sendo a maioria para Ag de fase lítica de replicação viral, apenas 2% desenvolveram SK em estudo longitudinal de 5 anos. A explicação encontrada para o baixo número de casos de SK nesta população de indivíduos foi a introdução em 1994, de terapia anti-retroviral em São Paulo, que mudou o curso da infecção HIV e das doenças à ela associadas. Enfim, foi possível implantar ensaios sorológicos de pesquisa de anticorpos específicos, que juntos, apresentam alta sensibilidade e especificidade e que podem ser empregados em levantamentos epidemiológicos e no diagnóstico de infecção HHV-8. / The objective of the present study was to optimize serologic assays to be employed in the search for antibodies against human herpesvirus type 8 (HHV-8) and use them to survey groups at risk to acquire, transmit and develop disease related to this infection, such as Kaposi’s sarcoma (KS). On the basis of the available literature and of the Laboratory conditions and professional experience accumulated in the Immunology Section of the Adolfo Lutz Institute of São Paulo, we selected and used indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blot (WB) for the search of antibodies against antigens (Ag) of the latent (LANA) and lytic phase of HHV-8 infection. Serum samples from 44 patients with KS and from 21 healthy controls from the laboratory were used for the standardization of the serologic tests, and sera from the following 3 groups of individuals were used to calculate the prevalence of HHV-8 infection in different São Paulo populations:- 477 patients infected with HIV/AIDS without KS; - 683 institutionalized patients with mental and/or physical deficiency; - 736 healthy professionals from the health area. For the preparation of IFA slides and WB strips, we respectively used BCBL-1 cells latently infected with HHV-8 or stimulated with phorbol ester and the crude antigen obtained from the supernatant of a lysate of the same cells. The results obtained in the standardization of the IFA-LANA showed low specificity of the assay, which needed to be accompanied by the confirmatory WB-LANA test. In contrast, the IFA-Lytic proved to be highly sensitive and specific, requiring no confirmatory WB-Lytic test. The latter, due to the complexity of the antigenic components joined to the different reactive profiles of the antibodies detected in positive and negative control sera, was not found to be useful for the present study. Considering the results obtained by IFA-LANA confirmed by WB-LANA and those obtained by IFA-Lytic, it was possible to determine the prevalence of HHV-8 infection in the group of HIV-AIDS patients without KS, which was 19.3%, with the detection of 4.8% sera positive for LANA Ag and 17% positive for Lytic Ag. In this group of patients there was a statistically significant association between HHV-8-positive serology, male sex and homosexual practice. Low antibody prevalences were detected in institutionalized patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and in health professionals (1.1%). Antibodies against LANA Ag were detected in 0.6% and 0.95% of cases, and antibodies against Lytic Ag in 1.0% and 0.3% of cases, respectively. The results obtained show that São Paulo is not an endemic region for this viral infection and that institutionalized patients and health professionals are not groups at high risk to acquire and transmit HHV-8; no case of KS was reported by these groups on the occasion of the collection of serum samples. With respect to the patients infected with HIV/AIDS without KS, although 19.3% of them showed HHV-8-positive serology, in most cases for Ag of the lytic phase of viral replication, only 2% developed KS in a 5 year longitudinal study. The small number of KS cases detected in this population is explained by the introduction in 1994 of antiretroviral therapy in São Paulo, which changed the course of HIV infection and of the diseases associated with it. In conclusion, it was possible to set up serologic assays for the detection of specific antibodies which, considered jointly, presented high sensitivity and specificity and which could be used in epidemiologic surveys and in the diagnosis of HHV-8 infection.

Introdução: A bronquiolite aguda é a principal causa de internação de lactentes menores de um ano de idade e tem como principal agente etiológico o vírus sincicial respiratório (VSR). O diagnóstico baseia-se na apresentação clínica e epidemiologia. A maioria das medidas terapêuticas é controversa e apesar da etiologia viral, a prescrição de antibióticos sistêmicos é freqüente. Não está claro se a pesquisa etiológica viral pode influenciar na conduta nesses lactentes. Objetivo: Analisar o impacto da realização de pesquisa etiológica viral sobre a conduta terapêutica, em lactentes internados com bronquiolite aguda. Casuística e métodos: Foi realizado estudo de coorte histórica que incluiu lactentes menores de 12 meses, internados no Hospital Universitário da USP durante dois anos, com diagnóstico de alta de bronquiolite aguda e que tiveram coletado aspirado de nasofaringe, para pesquisa viral, por imunofluorescência indireta (IFI), à admissão. Foram excluídos os lactentes com fatores de risco conhecidos para desenvolver doença grave. As informações foram coletadas dos prontuários. As alterações de condutas realizadas até 24 horas após a divulgação do diagnóstico etiológico foram consideradas associadas ao resultado da IFI. Resultados: Dentre 1199 lactentes, menores de 12 meses hospitalizados, 71% apresentaram diagnóstico de doença aguda do aparelho respiratório, sendo que 33% apresentaram bronquiolite. Desses, 33 foram excluídos e 20 não puderam ter a análise concluída. A idade média, dos 230 lactentes estudados, foi de 4 meses (± 2,7) e 56% foram do sexo masculino. Broncodilatadores, corticosteróides e antibióticos foram prescritos, à admissão em 80%, 52% e 55% dos casos, respectivamente. A pesquisa viral foi positiva para algum vírus em 165 casos e negativa em 65. O VSR foi identificado em 146 casos e outros vírus em 19. Os grupos com pesquisa viral negativa e positiva foram semelhantes com relação à prescrição de antibióticos (52% x 56%, respectivamente, p = 0,636), corticosteróide (42% x 56% -p = 0,052) e broncodilatadores (74% x 83%, p = 0,114) à admissão. A suspensão de antibióticos predominou nos pacientes com pesquisa viral positiva (35,6% x 9,2%, p < 0,001). Não houve alteração significante quanto as prescrições de corticosteróides e broncodilatadores. Também na comparação entre pacientes VSR (+) e com resultado negativo para pesquisa viral, o padrão de alterações de conduta foi semelhante. Houve suspensão de antibióticos em 32,2% e 9,2%, respectivamente (p < 0,001). O resultado positivo da pesquisa viral foi o único fator independentemente associado à suspensão de antibióticos, tanto no grupo com pesquisa viral positiva para qualquer vírus (RR = 3,37, p = 0,005) como no grupo VSR(+) (RR = 3,33, p = 0,006) Conclusão: Em lactentes hospitalizados com BA, o resultado positivo da pesquisa viral por IFI, foi determinante da suspensão de antibióticos sistêmicos, prescritos à admissão. / Background: Acute bronchiolitis is the leading cause of infant hospitalization, and it is most commonly caused by respiratory syncytial virus (RSV). Etiological tests are not required for its diagnosis, which can be made clinically. The most prescribed therapeutic measures are controversial, and in spite of the viral etiology, the prescription of systemic antibiotics is frequent. It remains unclear whether viral screening could contribute to therapy adjustment. Objective: To analyze the impact of viral screening on the therapeutic management of hospitalized infants with acute bronchiolitis. Patients and methods: A retrospective cohort was performed to assess the impact of RSV screening on medication prescription. The study included infants up to 1 year of age who were hospitalized at the University Hospital USP for 2 years, with bronchiolitis as discharge diagnosis and who had nasopharyngeal samples collected on admission for virus screening, by indirect immunofluorescence assay (IFA). Infants were excluded if they had a known risk factors for developing severe disease. Clinical information was obtained from the patients medical records. Therapeutic changes were considered to be associated with viral screening when made within 24 hours of the release of IFA results. Result: Among 1199 hospitalized infants younger than 12 months, 71% were diagnosed with acute lower respiratory disease, of which 33% had bronchiolitis. Of these, 33 were excluded and 20 could not have the analysis completed. The average age of the 230 infants studied was 4 months (+/- 2.7) and 56% were male. Bronchodilators, steroids and antibiotics were prescribed on admission for 80%, 52%, and 55% of cases, respectively. The viral test was positive for some virus in 165 cases and negative in 65. RSV was identified in 146 cases and other viruses in the 19. At admission, the groups with negative or positive viral test were similar regarding the prescription of antibiotics (52% vs 56% respectively, p=0.636), corticosteroids (42% vs 56%, p=0.052) and bronchodilators (74% vs 83%, p=0.114). The discontinuation of antibiotics predominated in patients who tested positive for virus (35.6% vs 9.2%, p<0.001). There were no significant changes regarding the prescription of corticosteroids and bronchodilators. Also, when comparing patients with viral test positive for RSV or negative for any virus the patterns were similar. There was discontinuation of antibiotics in 32.2 % and 9.2%, respectively (p=0.001). The positive result of viral test was the only independent factor associated with the discontinuation of antibiotics, both in the group with positive viral test for any virus (RR=3.37, p=0.005) and in the RVS (+) group (RR=3.33, p=0.006). Conclusion: In hospitalized infants with acute bronchiolitis, the positive result for virus screening, by IFA was an independent factor associated to the discontinuation of systemic antibiotics prescribed at admission.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa causada por Rickettsia rickettsii, transmitida pelo carrapato-estrela Amblyomma sculptum no interior do estado de São Paulo, onde equinos e capivaras são utilizados como sentinelas para FMB por serem considerados hospedeiros primários deste carrapato. Objetivou-se com este trabalho verificar a ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em sentinelas clássicos (equinos) e potenciais (ovinos, bovinos e gambás) para FMB que vivem em diferentes ambientes do Campus \"Luiz de Queiroz\", da Universidade de São Paulo, em Piracicaba-SP. De fevereiro de 2017 a janeiro de 2018 foram amostrados 156 hospedeiros, 48 que habitam áreas urbanas, sem a presença ou trânsito de capivaras (15 equinos e 33 gambás), 60 ovinos que frequentam pastagens sem presença de capivaras, mas adjacentes a matas ciliares ocupadas pelos roedores, e 48 que frequentam pastagens por onde transitam capivaras (31 bovinos e seis equinos) ou matas ciliares ocupadas pelos roedores (11 gambás). Quando possível, a amostragem envolveu a coleta de ectoparasitos. O soro obtido após centrifugação do sangue colhido foi analisado em duas etapas, triagem e titulação, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Na triagem todas as amostras foram testadas contra R. rickettsii, e consideradas positivas se apresentassem título de anticorpos >= 64. As amostras positivas foram diluídas na etapa de titulação e testadas contra R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis e R. rhipicephali para determinação do título máximo de anticorpos para cada espécie. Das 156 amostras testadas, 15 estavam soropositivas, 1/60 ovinos, 1/31 bovinos, 7/21 equinos e 6/44 gambás; os títulos finais variaram de 64 a 4.096. Foi possível determinar o possível antígeno envolvido em reação homóloga (PAERH) em seis amostras, um equino (R. bellii) e quatro gambás e um ovino (R. rickettsii). Foram registrados os carrapatos Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens e Rhipicephalus microplus, e as pulgas Ctenocephalides felis e Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus nos hospedeiros amostrados. Conclui-se que equinos e gambás podem ser utilizados como sentinelas para FMB no Campus \"Luiz de Queiroz\", mas os ovinos não. Não foi possível concluir se os bovinos podem ser utilizados com esta função. R. bellii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre na área urbana do Campus \"Luiz de Queiroz\" e é capaz de infectar cavalos. R. rickettsii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre no Campus \"Luiz de Queiroz\" em áreas de permanência e trânsito de capivaras / Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease caused by Rickettsia rickettsii, transmitted by the tick Amblyomma sculptum outside the metropolitan region in the State of São Paulo, where horses and capybaras are used as sentinels for BSF as they are considered primary hosts for this tick. This survey aimed to verify the occurrence of antibodies against Rickettsia rickettsii in sentinels (horses) and potential sentinels (sheep, cattle and opossums) for BSF that lives in different environments of the \"Luiz de Queiroz\" Campus, University of São Paulo, in Piracicaba, SP, Brazil. A total of 156 host were sampled between February of 2017 and January of 2018; 48 that live in urban areas, with no presence or transit of capybaras (15 horses and 33 opossums), 60 sheep that regularly graze on capybara-free pastures adjacent to a riparian forest occupied by these rodents, and 48 that occupy, cross or regularly graze on pastures (31 cows and six horses) or riparian forests (11 opossums) that are areas used by capybaras. Whenever possible, host sampling included ectoparasites collection. Sera obtained after centrifugation of the collected blood was analyzed in two steps, screening and titration, by the indirect immunofluorescence assay technique (IFA). All samples were tested against R. rickettsii during the screening, and those that presented antibodies titers >= 64 were considered positive. Positive samples were diluted during titration and tested against R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis and R. rhipicephali for determination of maximum antibodies titers for each species. Of the 156 tested samples, 15 were seropositive, 1/60 sheep, 1/31 cows, 7/21 horses and 6/44 opossums; antibodies endpoint titers ranged from 64 to 4.096. Possible antigen involved in a homologous reaction (PAIHR) was determined for six samples, one horse (R. bellii), four opossums and one sheep (R. rickettsii). The ticks Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens and Rhipicephalus microplus, and the fleas Ctenocephalides felis and Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus were collected from the sampled hosts. Results showed that horses and opossums may be used as sentinels for BSF in the \"Luiz de Queiroz\" Campus, but the sheep do not. It wasn\'t possible to determine if the cows may be used as sentinels. R. bellii, or a very closely related microorganism, occurs in the urban area of the \"Luiz de Queiroz\" Campus and is capable to infect horses. R. rickettsii, or a very closely related microorganism, occurs in capybara-transit areas of the \"Luiz de Queiroz\" Campus

O presente trabalho teve como objetivo otimizar ensaios sorológicos para serem utilizados na pesquisa de anticorpos dirigidos ao Herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) e com eles explorar grupos de risco para adquirir, transmitir e desenvolver doença relacionada à esta infecção, como o sarcoma de Kaposi (SK). Tomando como base a literatura disponível, as condições do laboratório e a experiência profissional acumulada na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foram selecionados e utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) e Western blot (WB) para a pesquisa de anticorpos dirigidos a antígenos (Ag) de fase latente (LANA) e lítica da infecção por HHV-8. Para a padronização dos testes sorológicos foram utilizadas amostras de soro de 44 pacientes com SK e 21 controles sadios do Laboratório, e para o cálculo de prevalência de infecção HHV-8 em diferentes populações de São Paulo, soros de 3 grupos de indivíduos: - 477 pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK; - 683 pacientes institucionalizados com deficiência mental e/ou física; - 736 profissionais da área da saúde, sadios. Foram empregados na preparação das lâminas de IFI e nas tiras de WB respectivamente, as células BCBL-1 latentemente infectadas pelo HHV-8 ou estimuladas com forbol éster e o antígeno viral bruto obtido de sobrenadante de lisado das mesmas células. Os resultados obtidos na padronização da IFI-LANA mostraram baixa especificidade do ensaio devendo ser acompanhado pelo teste confirmatório de WB-LANA. Por outro lado, a IFI-Lítico se mostrou altamente sensível e específica, prescindindo do teste confirmatório de WB-Lítico. Este último, devido à complexidade de componentes antigênicos aliado aos diferentes perfis de reatividade de anticorpos encontrados em soros controle positivo e negativo, não se mostrou útil para ser empregado no presente trabalho. Levando em consideração os resultados obtidos na IFI-LANA confirmados pelo WB-LANA e na IFI-Lítico, foi possível determinar a prevalência de infecção HHV-8 no grupo de pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK que foi de 19,3%, sendo detectados 4,8% de soros positivos para Ag LANA e 17% para Ag Lítico. Neste grupo de pacientes, houve associação estatisticamente significante entre sorologia HHV-8 positiva, sexo masculino e prática homossexual. Baixas prevalências de anticorpos foram detectadas nos pacientes institucionalizados com deficiência mental e/ou física (1,6%) e nos profissionais da área da saúde (1,1%). Anticorpos dirigidos a Ag LANA foram encontrados em 0,6% e 0,95% dos casos, e para Ag Líticos em 1,0% e 0,3% dos casos, respectivamente. Os resultados obtidos mostram que São Paulo não é região endêmica desta infecção viral e que pacientes institucionalizados e profissionais da área da saúde não são grupos de alto risco para adquirir e transmitir o HHV-8; nenhum caso de SK foi relatado neste grupo de indivíduos na ocasião da coleta das amostras de soro. Quanto ao grupo de pacientes infectados pelo HIV/AIDS sem SK, embora 19,3% deles tenham resultado sorologia HHV-8 positiva sendo a maioria para Ag de fase lítica de replicação viral, apenas 2% desenvolveram SK em estudo longitudinal de 5 anos. A explicação encontrada para o baixo número de casos de SK nesta população de indivíduos foi a introdução em 1994, de terapia anti-retroviral em São Paulo, que mudou o curso da infecção HIV e das doenças à ela associadas. Enfim, foi possível implantar ensaios sorológicos de pesquisa de anticorpos específicos, que juntos, apresentam alta sensibilidade e especificidade e que podem ser empregados em levantamentos epidemiológicos e no diagnóstico de infecção HHV-8. / The objective of the present study was to optimize serologic assays to be employed in the search for antibodies against human herpesvirus type 8 (HHV-8) and use them to survey groups at risk to acquire, transmit and develop disease related to this infection, such as Kaposi’s sarcoma (KS). On the basis of the available literature and of the Laboratory conditions and professional experience accumulated in the Immunology Section of the Adolfo Lutz Institute of São Paulo, we selected and used indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blot (WB) for the search of antibodies against antigens (Ag) of the latent (LANA) and lytic phase of HHV-8 infection. Serum samples from 44 patients with KS and from 21 healthy controls from the laboratory were used for the standardization of the serologic tests, and sera from the following 3 groups of individuals were used to calculate the prevalence of HHV-8 infection in different São Paulo populations:- 477 patients infected with HIV/AIDS without KS; - 683 institutionalized patients with mental and/or physical deficiency; - 736 healthy professionals from the health area. For the preparation of IFA slides and WB strips, we respectively used BCBL-1 cells latently infected with HHV-8 or stimulated with phorbol ester and the crude antigen obtained from the supernatant of a lysate of the same cells. The results obtained in the standardization of the IFA-LANA showed low specificity of the assay, which needed to be accompanied by the confirmatory WB-LANA test. In contrast, the IFA-Lytic proved to be highly sensitive and specific, requiring no confirmatory WB-Lytic test. The latter, due to the complexity of the antigenic components joined to the different reactive profiles of the antibodies detected in positive and negative control sera, was not found to be useful for the present study. Considering the results obtained by IFA-LANA confirmed by WB-LANA and those obtained by IFA-Lytic, it was possible to determine the prevalence of HHV-8 infection in the group of HIV-AIDS patients without KS, which was 19.3%, with the detection of 4.8% sera positive for LANA Ag and 17% positive for Lytic Ag. In this group of patients there was a statistically significant association between HHV-8-positive serology, male sex and homosexual practice. Low antibody prevalences were detected in institutionalized patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and in health professionals (1.1%). Antibodies against LANA Ag were detected in 0.6% and 0.95% of cases, and antibodies against Lytic Ag in 1.0% and 0.3% of cases, respectively. The results obtained show that São Paulo is not an endemic region for this viral infection and that institutionalized patients and health professionals are not groups at high risk to acquire and transmit HHV-8; no case of KS was reported by these groups on the occasion of the collection of serum samples. With respect to the patients infected with HIV/AIDS without KS, although 19.3% of them showed HHV-8-positive serology, in most cases for Ag of the lytic phase of viral replication, only 2% developed KS in a 5 year longitudinal study. The small number of KS cases detected in this population is explained by the introduction in 1994 of antiretroviral therapy in São Paulo, which changed the course of HIV infection and of the diseases associated with it. In conclusion, it was possible to set up serologic assays for the detection of specific antibodies which, considered jointly, presented high sensitivity and specificity and which could be used in epidemiologic surveys and in the diagnosis of HHV-8 infection.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the natural infection of chickens of extensive breeding of an area considered endemic for spotted fever in the state of Rio Grande do Sul through serological survey, as well as to perform the experimental infection by Rickettsia parkeri these birds. In the first study, 300 blood samples were collected and the sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) to identify the presence of anti-Rickettsia spp. antibodies. The occurrence of anti-Rickettsia spp. antibodies observed was 1.33% (4/300), with titers ranging from 64 to 256 for R. parkeri, Rickettsia rickettsii and/or Rickettsia bellii. In the second step, was performed the experimental infection by R. parkeri. 64 chickens were used divided into eight groups which were inoculated with different amounts of the agent by several routes of administration. Group 1 (G1) - inoculated with 2,5 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (1 ml) intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (2 ml) IM, G3 - 1 ml of inoculum subcutaneously (SC); G4 - 2 ml of inoculum SC; G5 - 1 ml of the inoculum intraperitoneally (IP); G6 - 2 ml of inoculum IP, and G7 and G8 1 ml and 2 ml of culture medium Vero cells IM respectively (negative control groups). The sera of chickens were evaluated at 3, 7, 14 and 21 days post infection (PI) by IFA, to verify the dynamics of antibodies in acute and chronic infection. To identify the multiplication of R. parkeri in tissues during the same period PI, PCR was performed from fragments of spleen and lung of chickens euthanized. Birds of G4 and G3, in order of importance, had the highest average antibody showing the highest levels at seven and 14 days PI. G2, G4 and G6 showed higher mean antibody compared to G1, G3 and G5 respectively, considering the infection dose-dependent. Rickettsial DNA was not detected in the tissues evaluated. The results of both studies suggest that chickens of extensive breeding from endemic area searched do not participate as a reservoir and/or amplifier host in the epidemiology of spotted fever of region and based in the experimental infection, it was verified that birds seroconverted by the challenge by R. parkeri, but no replication of the agent in the tissues analyzed, nor the presence of rickettsemia. / Este estudo teve como objetivo avaliar a infecção natural de galinhas de criação extensiva de uma área considerada endêmica para a febre maculosa no estado do Rio Grande do Sul através de pesquisa sorológica, bem como realizar a infecção experimental por Rickettsia parkeri nessas aves. No primeiro estudo, foram coletadas 300 amostras de sangue e os soros foram testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para identificar a presença de anticorpos anti-Rickettsia spp. A ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia spp. observada foi de 1,33% (4/300), com títulos variando de 64 a 256 para R. parkeri, Rickettsia rickettsii e/ou Rickettsia bellii. Na segunda etapa, foi realizada a infecção experimental por R. parkeri, o qual foram utilizadas 64 galinhas caipiras divididas em oito grupos, onde foram inoculadas diferentes quantidades do agente por diversas vias de administração. Grupo 1 (G1) - inoculado com 2,5 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (1 ml) via intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (2 ml) via IM; G3 - 1 ml do inóculo via subcutânea (SC); G4 - 2 ml de inóculo via SC; G5 - 1 ml do inóculo via intraperitoneal (IP); G6 - 2 ml de inóculo via IP, e o G7 e G8 - 1 e 2 ml de meio de cultivo de células Vero via IM respectivamente (grupos controles negativos). Os soros das aves foram avaliados aos 3, 7, 14 e 21 dias pós infecção (PI) por meio de RIFI, para avaliar a dinâmica de anticorpos em infecção aguda e crônica. Para identificar a multiplicação de R. parkeri nos tecidos, no mesmo período PI, foi realizado o PCR a partir de fragmentos de baço e pulmão colhidos das galinhas eutanasiadas. As aves do G4 e G3, em ordem de importância, apresentaram as maiores médias de anticorpos apresentando os níveis mais elevados aos sete e 14 dias PI. Os grupos G2, G4 e G6 apresentaram médias de anticorpos superiores comparado ao G1, G3 e G5 respectivamente, sendo considerada a infecção dose-dependente. Não foi detectado DNA rickettsial nos tecidos avaliados. Os resultados de ambos os estudos sugerem que as galinhas de criação extensiva da área endêmica pesquisada não participaram como reservatório e/ou hospedeiro amplificador na epidemiologia da febre maculosa na região e baseado na infecção experimental, verificou-se que as aves soroconverteram mediante o desafio por R. parkeri, porém não houve a multiplicação do agente nos tecidos analisados, bem como a presença de rickettsemia.