Orientador: Douglas Roberto Monteiro / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Farli Aparecida Carrilho Boer / Banca: Debora de Barros Barbosa / Resumo: O tirosol é uma molécula de quorum-sensing (QS) que participa do controle da morfogênese em Candida albicans. Contudo, seu efeito como agente antimicrobiano sobre biofilmes de Streptococcus mutans permanece desconhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tirosol em diferentes concentrações sobre a produção de ácido e formação de biofilmes por S. mutans ATCC 25175, bem como quantificar biofilmes pré-formados desta espécie desenvolvidos sobre espécimes de hidroxiapatita (HA) e tratados com tirosol. A concentração inibitória mínima (CIM) de tirosol sobre células no estado planctônico foi determinada de acordo com o método da microdiluição. Na sequência, biofilmes de S. mutans foram formados durante 48 horas sobre espécimes de HA na presença de diferentes concentrações de tirosol (11,25, 22,5, 50, 100 e 200 mmol l-1), usando saliva artificial como meio de cultura. Após, a produção de ácido foi avaliada através da mensuração do pH do meio, enquanto a formação de biofilmes foi determinada através da quantificação da biomassa total (BT), atividade metabólica (AM) e número de unidades formadoras de colônias (UFCs). Ainda, biofilmes pré-formados (24 horas) de S. mutans foram tratados com tirosol a 100 e 200 mmol l-1 por 1 minuto, duas vezes ao dia, durante três dias, totalizando biofilmes de 96 horas. Em seguida, a atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da quantificação da BT, AM, número de UFCs e composição da matriz extracelular (proteínas e carboidratos). Gluconato de clorexidina (490 μmol l-1) foi usado como controle positivo. Os dados foram analisados por ANOVA a um critério, seguido pelos testes de Tukey e Holm-Sidak (α = 0,05). Microscopia eletrônica de varredura (MEV) foi utilizada na análise da estrutura dos biofilmes. A CIM de tirosol foi 90 mmol l-1. Tirosol em concentrações... / Abstract: Tyrosol is a quorum-sensing molecule (QS) that participates in the control of Candida albicans morphogenesis. However, its effect as an antimicrobial agent on Streptococcus mutans biofilms remains unknown. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of tyrosol at different concentrations on the acid production and biofilm formation by S. mutans ATCC 25175, as well as to quantify pre-formed biofilms of this species developed on hydroxyapatite (HA) specimens and treated with tyrosol. Minimum inhibitory concentration (MIC) of tyrosol against planktonic cells was determined in accordance with the microdilution method. Subsequently, S. mutans biofilms were formed during 48 hours on HA specimens in the presence of different concentrations of tyrosol (11.25, 22.5, 50, 100 and 200 mmol l-1), using artificial saliva as culture medium. Next, the acid production was assessed by pH determination of the medium, while the biofilm formation was determined through quantification of total biomass (TB), metabolic activity (MA) and number of colony-forming units (CFUs). Further, S. mutans pre-formed biofilms (24 h) were treated with tyrosol at 100 and 200 mmol l-1 twice a day for 1 min, during 3 days, totaling 96-h biofilms. Then, the antimicrobial activity was evaluated through quantification of TB, MA, number of CFUs and composition of biofilms' extracellular matrix (proteins and carbohydrates). Chlorhexidine gluconate (490 μmol l-1) was used as positive control. Data were analyzed by one-way ANOVA, followed by Tukey's and Holm-Sidak's tests (α = 0.05). Scanning electron microscopy (SEM) observations were performed in order to analyze biofilms' structure. MIC of tyrosol was 90 mmol l-1. Tyrosol at sub-inhibitory concentrations (11.25 and 22.5 mmol l-1) was not able to significantly reduce acid production by S. mutans biofilms. However, biofilms... / Mestre

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antônio Carlos Paes / Banca: Helio Langoni / Banca: Geraldo de Nardi Junior / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: O presente estudo investigou a eficácia do ceftiofur intramamário no tratamento estendido com dez aplicações, a cada 12 horas, na mastite subclínica por estafilococos em primíparas bovinas. Foram utilizados 60 animais da raça holandesa, divididos em quadro grupos: G1 = Grupo negativo ou sem infecção estafilocócica, CMT negativo e CCS < 200.000 células/mL; G2 = Grupo com infecção estafilocócica não tratado, CMT positivo (2+ ou 3+) e CSS > 200.000 células/mL; G3 = Grupo com infecção tratado no início da lactação (entre 15 e 100 dias de lactação), CMT positivo (2+ ou 3+) e CCS > 200.000 células/mL e G4 = Grupo tratado final da lactação (entre 101 e 200 dias de lactação), CMT positivo (2+ ou 3+) e CCS > 200.000 células/mL. As amostras de leite foram coletadas em cinco momentos: M0 ou dia zero (diagnóstico da mastite subclínica), M1 = 7 dias após o diagnóstico da mastite subclínica e início da terapia estendida, M2 = 2 dias após o término do tratamento estendido (dia 14 após o diagnóstico da mastite subclínica), M3 = 7 dias após M2 (dia 21 após o diagnóstico da mastite ou 9 dias após o final do tratamento), M4 = 7 dias após M3 (dia 28 após o diagnóstico da mastite ou 16 dias após o final do tratamento). Nos grupos tratados com ceftiofur intramamário, foi evidenciada a cura microbiológica com redução na CCS em 73,34% no G3 e 46,66% no G4. Assim, nos grupos tratados (G3 + G4) e não tratado (G2), as taxas de cura foram, respectivamente, 60,00% e 26,66% (p<0,05). Foram isoladas 45 linhagens de Staphylococcus spp., das quais foram identificados principalmente S. aureus (51,12%), S. intermedius (40,0%) e S. epidermidis (8,88%). O perfil de sensibilidade microbiana "in vitro" dos isolados apresentou maiores índices de sensibilidade para oxacilina (80,00%), ceftiofur (77,78%) e cefalexina (77,78%), seguidos do ciprofloxacino (66,66%) e gentamicina (60,00%). Em contraste... / Abstract: This study investigated the efficacy of extended ceftiofur intramammary therapy using 10 applications by five days in primiparous heifers infected by staphylococcal subclinical mastitis. Sixty Holstein cows were divided in four groups: G1 = negative group or without staphylococcal infection, CMT-negative and SCC<200.000 cells/mL; G2 = untreated group with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL; G3 = treated early lactation group (15-100 days of lactation) with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL, G4 = treated late of lactation group (101-200 days of lactation) with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL. The milk samples were collected at five moments: M0 or day zero (diagnosis of subclinical mastitis), M1 = 7 days after diagnosis of subclinical mastitis and early extended therapy, M2 = 2 days after the end of the extended treatment (day 14 after the diagnosis of subclinical mastitis), M3 = 21 days after diagnosis of mastitis (9 days after the end of treatment), M4 = 28 days after diagnosis of mastitis (16 days after the end of treatment). In the groups treated with intramammary ceftiofur, microbiological cure was observed with reduction in SCC in 73.34% and 46.66% of animals for G3 and G4, respectively. Thus, in the treated (G3 + G4) and untreated (G2) groups, microbiological cure rates were 60.00% and 26.66% (p<0.05), respectively. Forty-five Staphylococcus spp. strains were isolated. From these, S. aureus (51.12%), S. intermedius (40.0%), and S. epidermidis (8.88%) were the most common species. In vitro antimicrobial susceptibility profile of isolates showed that the most effective drugs were oxacillin (80.0%), ceftiofur (77.78%), and cephalexin (77.78%), followed by ceftriaxone (69.0%), ciprofloxacin (66.66%) and gentamicin (60,0%). In contrast, high-resistance rates of isolates were founded to cloxacillin (24.44%), penicillin... / Doutor

Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Rosilene Fernandes da Rocha / Banca: João Ernesto de Carvalho / Banca: Maria Cristina Volpato / Banca: Caio Cezar Randi Ferraz / Resumo: O objetivo desta tese foi reunir os resultados de estudos que avaliaram os efeitos in vitro e in vivo de irrigantes endodônticos e medicações intracanais, incluindo própolis e extratos de plantas, sobre microorganimos, endotoxinas (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA) em canais radiculares, bem como a citotoxicidade e atividade antimicrobiana de extratos de plantas contra micro-organismos de interesse para Odontologia. No estudo dos efeitos do hidróxido de cálcio e polimixina B sobre endotoxinas em canais radiculares, observou-se que estas medicações intracanais detoxificaram endotoxinas alterando sua capacidade de estimular a produção de anticorpos por linfócitos B. No próximo estudo, foram avaliados os efeitos in vitro de irrigantes endodônticos (NaOCl 2,5% e 5%; clorexidina 2%, hidróxido de cálcio 0,14% e polimixina B) sobre endotoxinas em canais radiculares. Somente hidróxido de cálcio e polimixina B conseguiram neutralizar endotoxinas quando utilizados como irrigantes, sendo que NaOCl e clorexidina não foram efetivos. Quanto à análise da ação de extrato de própolis como irrigante dos canais radiculares sobre Escherichia coli e endotoxinas, verificou-se que o extrato de própolis promoveu eliminação completa de E. coli e redução significativa de endotoxinas, porém, somente com a utilização de medicações contendo hidróxido de cálcio os níveis de endotoxinas ficaram baixos. O estudo seguinte foi in vivo, analisando a eficácia do tratamento endodôntico para redução de endotoxinas em canais radiculares com infecção primária. Observou-se que a combinação de clorexidina com água de cal (hidróxido de cálcio 0,14%) como irrigante foi a mais efetiva na redução de endotoxinas e que a medicação intracanal (pasta de hidróxido de cálcio e clorexidina) neutralizou os efeitos citotóxicos do conteúdo dos canais. Em um estudo mais recente, foi avaliada in vitro a ação de medicações intracanais em... / Abstract: This thesis aimed to collect results from studies that evaluated in vitro and in vivo effects of endodontic irrigants and intracanal medication, such as propolis and plant extracts on microorganisms, endotoxins (LPS) and lipoteichoic acid (LTA) in root canals, as well as cytotoxicity and antimicrobial activity of plant extracts against microorganisms of interest for Dentistry.! In the study of the effects of calcium hydroxide and polymyxin B for endotoxins in root canals, it was observed that these intracanal medications neutralized endotoxins by altering its ability to stimulate the production of antibodies by B-lymphocytes. In the next study, it was evaluated in vitro effects of endodontic irrigants (2.5% and 5% NaOCl, 2% chlorhexidine, 0.14% calcium hydroxide and polymyxin B) on endotoxins in root canals. Only calcium hydroxide and polymyxin B were able to neutralize endotoxins when used as irrigants, while NaOCl and chlorhexidine were not effective. Regarding the analysis of the action of propolis extract as root canals irrigating on Escherichia coli and endotoxin, it was found that propolis extract promoted complete elimination of E. coli and significant reduction of endotoxins, but only with the use of medications containing calcium hydroxide the endotoxin levels were low. The following study, in vivo, analyzed the effectiveness of endodontic treatment for endotoxin reduction in root canals with primary infection. It was observed that the combination of chlorhexidine with limewater (0.14% calcium hydroxide) as irrigant was the most effective in reducing endotoxins and that the intracanal medication, calcium hydroxide paste and chlorhexidine, neutralized the cytotoxic effects of the content of root canals. In a more recent in vitro study, it was assessed different intracanal medications action of neutralizing the effects of lipoteichoic acid (LTA) to induce the production of pro-inflammatory cytokines and nitric oxide in macrophages....

Orientador: Carla Raquel Fontana Mendonça / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Juliana Cabrini Carmello / Banca: Eliane Trovatti / Banca: Cristiane Costa Quishida / Resumo: A necessidade de superar a resistência dos micro-organismos frente aos fármacos disponíveis, a fim de se chegar ao sucesso terapêutico leva a uma constante exploração de novas abordagens para este fim. Os sistemas de efluxo multidrogas tem sido um profundo obstáculo para uma terapêutica bem-sucedida utilizando-se antimicrobianos existentes hoje no mercado. A descoberta de bloqueadores desses sistemas complementa estudos envolvendo terapias nãoconvencionais, como a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (Antimicrobial Photodynamic Therapy - aPDT). Este estudo teve como objetivo avaliar a aPDT mediada pelo azul de metileno (AM) associada com inibidores de bomba de efluxo em diferentes espécies microbianas. Para isso, foram utilizados como inibidor o verapamil, em biofilmes de Escherichia coli e Staphylococcus aureus, e verapamil e farnesol para Candida albicans. A determinação da combinação ideal de Inibidor/AM foi feita através do cruzamento de diferentes concentrações dos compostos, de tal forma que todas as combinações possíveis fossem avaliadas, nas concentrações previamente determinadas através da concentração inibitória mínima. O metabolismo celular para todas as condições experimentais foi avaliado por meio do ensaio de redução do XTT. As combinações onde foram verificadas a redução de 80% no metabolismo foram plaqueadas e a contagem de células (UFC/ml) determinada. Os resultados obtidos permitiram observar que para E. coli, foram necessárias uma dose maior de luz (44 J/cm2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Conventional antimicrobials are mostly ineffective due to emerging antimicrobial resistance acquired by pathogenic micro-organisms. The need to overcome this resistance to reach therapeutic success has led to exploration of new approaches. Multidrug efflux systems have been a profound obstacle to achieve success in some specific cases with the available antibiotics today. The discovery of efflux pump inhibitors systems can act as an adjuvant to alternative therapies such as Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). This study aimed to evaluate the association of aPDT mediated by methylene blue (MB), with efflux pump inhibitors in different microbial species. Verapamil was used as an inhibitor in biofilm of Escherichia coli and Staphylococcus aureus, and verapamil and farnesol were expected to block the pumps for Candida albicans. The determination of the optimal combination of Inhibitor/MB was carried out by crossing different concentrations of the compounds. Cell metabolism for all experimental conditions was assessed by XTT reduction assay. The combinations where 80% of metabolism reduction was observed, cells were plated and colony count units (cfu/ml) determined. The E. coliresults showed requirement of higher light dose (44 J/cm2 ) and a lower concentration of verapamil (215 μg/mL) to achieve reduction of 3.4 log10 (CFU/mL). Compared to S. aureus, a lower dose of light (22 J/cm2 ) was needed, and a higher concentration of verapamil (312 μg/mL), was necessary to obtain reduction of 3.65 log10 (CFU/ml). For C. albicans, verapamil presented lower reduction of biofilm viable cells compared to farnesol. Setting the same light dose (44 J/cm2 ), the combination verapamil/MB: 215/400 showed reduction of 2,82 log10 (CFU/mL) and farnesol/MB: 22/200 determined reduction of 3.82 log10 (CFU/mL). Briefly, aPDT mediated MB, associated with an efflux pump... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Vera Aparecida de Oliveira Tiera / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Iêda Aparecida Pastre Fertonani / Resumo: O presente trabalho descreve a síntese, caracterização e o estudo do mecanismo da atividade antimicrobiana de derivados anfifílicos de quitosana contra o fungo Aspergillus flavus. As quitosanas utilizadas nas sínteses foram obtidas pela desacetilação heterogênea de quitosana comercial. O derivado hidrofílico foi obtido pela reação de quitosana com cloreto de 2-cloro-N,N-dietilaminoetil (DEAE). O grau de substituição (GS) de grupos DEAE inseridos na cadeia polimérica foi determinado utilizando-se as técnicas de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio (RMN¹H) e Espectroscopia de absorção na região do Infravermelho (FTIV), obtendo-se 40% de substituição (QD 40% DEAE). Em seguida, a quitosana-DEAE foi degradada com nitrito de sódio para obtenção de polímeros com diferentes massas moleculares (Mw). As massas moleculares foram determinadas por Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), e os valores obtidos foram 8 - 25 - 60 - 116 e 136 kDa respectivamente. Na sequência, as quitosanas de diferentes Mw foram alquiladas com dodecilaldeído seguido pela redução com borohidreto de sódio, obtendo-se derivados com ~20% de conteúdo hidrofóbico caracterizados por RMN¹H e FTIV. O comportamento em solução dos derivados anfifílicos foi estudado utilizando Espectroscopia de Fluorescência, e os resultados mostraram que em baixas concentrações os derivados de quitosana se auto-associam formando domínios hidrofóbicos. A agregação ocorre a partir da concentração de agregação crítica (CAC) que... / Abstract: This study describes the synthesis, characterization and the study of mechanism and antimicrobial activity of chitosan derivatives against the fungus Aspergillus flavus. Chitosan was obtained by the heterogeneous deacetylation of commercial chitosan. The hydrophilic derivative was obtained by reaction of chitosan with 2-chloro-N, N-diethylaminoethyl (DEAE) chloride. The degree of substitution (GS) of DEAE groups was determined using the techniques of Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen (NMR¹H) and Absorption Spectroscopy in the Infrared region (FTIV), obtaining 40% of substitution. Afterwards, samples of the obtained derivative were degraded with sodium nitrite to obtain polymers with different molecular weights (Mw). Molecular weights were determined by Gel Permeation Chromatography (GPC), and the obtained values were 8 - 25 - 60 - 116 and 136 kDa respectively. Subsequently, chitosans with different molecular masses were alkylated with dodecyl aldehyde followed by reduction with sodium borohydride to provide ~ 20% hydrophobic content that was characterized by NMR¹H. The solution behavior of the amphiphilic derivatives was studied using Fluorescence Spectroscopy, and the results showed that at low concentrations, chitosan derivatives form self-assembled particles with hydrophobic domains. Derivatives self-aggregate at the critical aggregation concentrations (CAC), which were shown to be dependent on the molecular mass and degree of substitution by hydrophobic groups ... / Mestre

Orientador: José Geraldo Nery / Banca: Marilia de Freitas Calmon / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Moacir Fernandes de Godoy / Banca: Marcia Perez dos Santos Cabrera / Resumo: Apesar dos avanços na intervenção médica, hemorragia traumática fatal continua a ser uma das principais causas de morte no mundo. Nesse sentido muitos esforços têm sido dedicados à pesquisa e ao desenvolvimento de novos agentes hemostáticos que possam atuar mais efetivamente no controle de hemorragias. Embora a maior parte dos agentes hemostáticos seja de natureza orgânica, recentemente estudos envolvendo a utilização de zeólitas como agentes hemostáticos têm demonstrado resultados promissores para o controle de sangramento. Estes estudos revelam que quando em contato com o sangue, as zeólitas adsorvem rapidamente as moléculas de água, com isso, concentrando as proteínas e elementos celulares essenciais para a formação do coágulo. Além disso, a superfície da zeólita que contém cargas negativas fornece um ambiente químico favorável que funciona como um ativador de contato do padrão intrínseco do processo de coagulação. Neste contexto, os objetivos deste trabalho são as sínteses, caracterização e modulação de diferentes materiais zeolíticos nas escalas nanométricas e micrométricas (Faujasita (FAU), Gismondina (GIS), Mordenita (MOR), zeólita A (LTA), zeólita Beta (BEA), Titâno Silicato (TS-1)) juntamente com seus derivados de troca iônica para que os mesmos possam ser utilizados como agentes hemostáticos coagulantes no controle de sangramentos através da aceleração do processo de coagulação. As caracterizações fisico-química (DRX, MEV, AFM, Microscopia de contraste de fase, BET,... / Abstract: Despite the advances in medical intervention, traumatic fatal hemorrhage remains a major cause of death worldwide. In this direction, many efforts have been dedicated to the research and development of new hemostatic agents that can act more effectively to control hemorrhages. Although the majority of hemostatic agents is of an organic nature recently studies involving the use of zeolites as hemostatic agents have shown encouraging results for the control of bleeding. These studies shows that when in contact with the blood, zeolites adsorbs rapidly the water molecules in their pores, thereby concentrating the proteins and cellular elements to clot formation. Moreover, the surface of the zeolite containing negative charge provides a chemical environment favorable which acts as an activator of the contact pattern of the intrinsic coagulation cascade. In this context, the main of this research are the synthesis, characterization and modulation of different zeolitic materials in both micrometric and nanometric scales (Faujasite (FAU), Gismondine (GIS), Mordenite (MOR), zeolite A (LTA), Beta zeolite (BEA), Titanium-Silicate (TS-1)) with their derivate ion exchange, so that they can be used as hemostatic agents to control bleeding by accelerating the clotting process. The physico-chemical characterizations (XRD, SEM, AFM, Phase Contrast Microscopy, BET, MAS-NRM, FTIR) showed that the synthesized materials are in agreement with data reported in the literature for these materials. ... / Doutor

Orientador: Daiane Cristina Sass / Banca: Eduardo José Crevelin / Banca: Derlene Attili de Angelis / Resumo: As bactérias do gênero Xanthomonas afetam culturas agrícolas de grande importância econômica no Brasil. O controle destas doenças realizado pela utilização de produtos químicos, entre outras práticas, causa impactos negativos na saúde e ao meio ambiente. Isso torna a busca de alternativas sustentáveis de combate a estas doenças cada vez mais importante. Uma possível alternativa aos produtos químicos que tem despertado grande interesse é a aplicação de metabólitos secundários. Suspeita-se que fungos que vivem em ambientes extremos como a Antártica podem produzir metabólitos secundários ainda desconhecidos. Dessa maneira, este projeto teve como objetivo principal investigar a potencial atividade de metabólitos secundários produzidos por 33 fungos isolados do solo contra três espécies de Xanthomonas economicamente importantes para a agricultura do país. Para tanto, foram utilizados fungos coletados em solo em expedição à Antártica (2013) no âmbito do INCT Criosfera, que estão preservados junto à Central de Recursos Microbianos da UNESP. Os extratos (n=66) foram testados contra Xanthomonas patogênicas das culturas de tomate (Xanthomonas euvesicatoria), frutas cítricas (Xanthomonas citri subsp. citri) e maracujá (Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae). Do total de extratos brutos submetidos a bioensaio contra os fitopatógenos, 18 (27,27%) apresentaram taxa de inibição ≥ 90%. Os extratos com potencial inibitório tiveram origem em fungos identificados por sequenciamento da região I... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bacteria of the genus Xanthomonas affect agricultural crops of great economic importance in Brazil. Control of these diseases is made by the use of chemicals, among other practices, that causes negative impacts on human health and the environment. This makes the search for sustainable alternatives to combat these diseases increasingly important. A possible alternative to chemicals that have aroused great interest is the application of secondary metabolites. It is suspected that fungi living in extreme environments such as Antarctica may produce secondary metabolites as of yet unknown. Therefore this study had as main objective investigate the potential activity of secondary metabolites produced by 33 fungi isolated from the soil against three economically important Xanthomonas species. For this purpose fungi previously collected in the Antarctic expedition (2013) under the INCOS Criosfera and preserved at the Microbial Resource Center of UNESP were utillized. The extracts produced by the 33 isolates (n = 66) were tested against pathogenic Xanthomonas of tomato crops: Xanthomonas euvesicatoria; citrus: Xanthomonas citri subsp. citri; and of passion fruit culture, Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae. From the total of extracts submitted to bioassay against phytopathogens, 18 (27.27%) presented inhibition rate ≥ 90%. The extracts with inhibitory potential were produced by fungi identified through sequencing of the ITS4 and ITS5 regions as belonging to the Ascomycota phylum, g... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A segurança dos alimentos é uma questão importante para a indústria e os consumidores de alimentos. Neste contexto, a indústria de alimentos tem um desafio tecnológico devido ao aumento da preocupação sobre a utilização de conservantes químicos e ao aumento da demanda por alimentos mais naturais e minimamente processados. Este trabalho teve como objetivos a incorporação de extrato de alho em nano estruturas de fosfatidilcolina e avaliação da sua atividade antimicrobiana contra Listeria monocytogenes; avaliou-se, a produção de nanolipossomas com a combinação de nisina e extrato de alho, e avaliar a sua atividade antimicrobiana contra bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Como resultado, foram obtidos nanolipossomas contendo extrato de alho com 174,6 nm de diâmetro hidrodinâmico, polidispersividade de 0,26; potencial zeta de -16,2 mV e eficiência de encapsulação de 47,46%. Estes nanolipossomas reduziram em 4 ciclos logarítmicos a contagem de células viáveis em quatro das cinco cepas de Listeria spp testesdos, depois de 10 horas de incubação a 37°C em leite integral. No segundo momento, foram desenvolvidos nanolipossomas contendo a mistura nisina/extrato de alho, os quais apresentaram um diâmetro hidrodinâmico de 179 nm, potencial zeta de -27,7 mV e uma eficiência de encapsulação de 82% e 90%, para nisina e extrato de alho respectivamente. Estes nanolipossomas reduziram em 5-6 ciclos logarítmicos a contagem de células viáveis de bactérias gram-positivas em 3-4 ciclos logarítmicos a contagem de bactérias gram-negativas, comparados com o controle, quando incubadas em leite integral a 37°C. Os produtos livres e encapsulados (extrato de alho e nisina/extrato de alho) apresentaram idênticos resultados de atividade antimicrobiana. Sendo assim, é possível afirmar que o processo de encapsulção manteve as propriedades antimicrobianas dos compostos analisados. Os resultados deste estudo indicam que nanolipossomas que contêm a combinação de nisina e extrato de alho têm um alto potencial como antimicrobiano para uso em alimentos. / Food safety is an important issue for the industry and food consumers. In this context, food industry has a technological challenge due to increase of the concern about the use of chemical preservatives and the rising demand for more natural and minimally processed foods. This study aimed to the incorparation of garlic extract into nano estrutures of phosphatidilcholine and evaluation of its antimicrobial activity against Listeria monocytogenes; also, to produce nano liposomes with the combination of nisin and garlic extract and the evaluation of its antimicrobial activity against gram-negative and gram-positive bacteria. As results, were obtained nano liposomes containing garlic extract with 174.6 ± 17.3 nm of hidrodinamic diameter, polidispersivity index of 0.26, zeta potencial of -16,2 mV and with an entrapment efficiency of 47.46%. These nano liposomes decreased in 4 log cycles in viable cell counts in four of the five strains of Listeria spp. tested, later of 10 hours of incubation at 37°C in whole milk. In a second moment, were development nano liposomes containing the combination of nisin/garlic extract, which had a hidrodinamic diameter of 179 nm, zeta potencial of -27.7 mV and an entrapment efficiency of 82% and 90% for nisin and garlic extract, respectively. These nanoliposomes decreased in 5-6 log cycles the viable gram-positive bacteria counts and 3-4 log cycles the viable gram-negative bacteria counts, comparated with the control, when incubated in whole milk at 37°C. The free and encapsulated products (garlic extrac and nisin/garlic extract) showed identical results of antimicrobial activity. Therefore, it can say that the encapsulation process kept the antimicrobial properties of the compounds analyzed. The results of this study indicate that nanoliposomes containing the combination of nisin and garlic extract has a hight potencial as antimicrobial for food use.

O filo Actinobacteria é um importante grupo de bactérias Gram positivas amplamente distribuídas nos ambientes aquáticos e terrestres, são grandes produtores de compostos biologicamente ativos e, portanto, de grande interesse biotecnológico. O gênero Streptomyces destaca-se como maior produtor destes compostos, sendo responsável por cerca de 70% dos antibióticos que hoje utilizamos. A identificação dos organismos deste gênero ainda é um desafio. Durante muitos anos a identificação foi realizada somente com base em características morfológicas e fisiológicas. Atualmente, com o avanço das técnicas moleculares, há um grande número de espécies relatadas em bancos de dados genômicos. Este trabalho tem por objetivo identificar isolados de actinobactérias presentes no Laboratório de Microbiologia Ambiental ICBS/UFRGS com auxílio das técnicas de BOX-PCR, amplamente utilizado em estudos de diversidade dentro deste filo, e URP-PCR. E, além disso, realizar purificação parcial de um composto antimicrobiano efetivo contra bactérias produzido pelo isolado Streptomyces 8S. Os primers URP e BOX1AR produziram distintos padrões de amplificação nos isolados estudados, porém não foi possível investigar as relações de similaridade entre eles. Ainda o sequenciamento da região 16S rDNA não foi eficiente para identificar as espécies. Para a purificação do composto antimicrobiano foi realizada extração líquido-líquido com o solvente acetato de etila, posteriormente cromatografia de gel-filtração (Sephadex G-75) e troca iônica (SP-Sepharose e DEAE-celulose). A atividade antimicrobiana do composto foi recuperada após cada etapa. O composto manteve-se ativo após os ensaios de estabilidade frente à adição de EDTA, enzimas proteolíticas e altas temperaturas. Isto sugere que o composto antimicrobiano não é de origem protéica. Este trabalho sugere novos estudos a partir dos resultados preliminares obtidos, como a amplificação de todo o fragmento 16S rDNA dos isolados de actinobactérias e a investigação do composto antimicrobiano através de cromatografias de alta resolução. / The Actinobacteria phylum is an important group of Gram positive bacteria widely distributed in terrestrial and aquatic environments. They are major producers of biologically active compounds and therefore of great biotechnological interest. The genus Streptomyces stands out as the largest producer of these compounds, accounting for about 70% of the antibiotics that we use today. The identification of these organisms is still a challenge. For many years the identification was carried out only based on morphological and physiology characteristics. Today, with the advance of molecular techniques, there are a large number of species reported in genomics database. This work aims to identify isolates of actinobacterias present in the Laboratório de Microbiologia Ambiental ICBS / UFRGS with the help of BOX-PCR techniques, widely used in diversity studies within this phylum, and URP-PCR. And besides that, performing partial purification of an antimicrobial compound effective against bacteria produced by Streptomyces 8S isolated. The URP and BOX1AR primers produced different amplification patterns in the isolates, but it was not possible to investigate the relationship of similarity between them. Also the sequencing of 16S rDNA was not efficient to identify the species. To purify the antimicrobial compound was carried out liquid-liquid extraction with the solvent ethyl acetate, subsequently chromatography: gel-filtration (Sephadex G-75) and ion exchange (SP-Sepharose and DEAE-cellulose). The antimicrobial in question did not adhere to the SP-Sepharose column, showing that it has negative charge. The antimicrobial activity of the compound was recovered after each step. The compound remained active after the stability tests like the addition of EDTA, proteolytic enzymes and high temperatures. This suggests that the antimicrobial compound is not a protein. This work suggests further studies based on the obtained preliminary results such as the amplification of the entire 16S rDNA of actinobacterias isolated fragment and the investigation of the antimicrobial compound using high resolution chromatography.

Orientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Coorientador: Claudinei da Cruz / Banca: Silvia Patrícia Carraschi de Oliveira / Banca: Wilson Gomez Manrique / Banca: Eduardo Makoto Onaka / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: O presente estudo teve por objetivos avaliar a eficácia terapêutica a segurança clínica e ecotoxicológica do antimicrobiano fosfomicina para o tratamento de aeromonose e streptococose em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Para tal, a segurança clínica foi avaliada com as doses de 10, 20 e 40 mg de fosfomicina.kg-1; os estudos de eficácia com a dose terapêutica de 10 mg de fosfomicina.kg-1, foram conduzidos com peixes desafiados com Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae; os ensaios de ecotoxicidade foram feitos para a determinação de CL50 em peixes (O. niloticus) e plantas aquáticas (Lemna minor) e de CE50 para crustáceos (Daphnia magna) e moluscos (Pomacea canaliculata). Nos estudos foram utilizadas tilápias de 112g ± 5,6g, acondicionadas em tanques de 400 L (n=10). Ambos os estudos de eficácia terapêutica com 10 mg.kg-1 demonstraram a eficácia para A. hydrophila e S. agalactiae, pois nas análises de reisolamento destes microrganismos não ocorreu crescimento dos mesmos em amostras de fígado, rim, baço e cérebro dos peixes tratados quando comparados aos grupos infectados e não tratados nos quais o número de unidades formadoras de colônias (UFC) foi de 7,6 ± 2,4 por placa. Na infecção por A. hydrophila apresentaram microcitose e linfopenia, assim como, trombocitose na fase inicial da infecção seguida de trombocitopenia. Lesões nos tecidos hepáticos e renais corroboraram as alterações da atividade enzimática sérica de ALT, AST, FA e nos níveis de creatinina, cole... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to evaluate the therapeutic efficacy of clinical and ecotoxicological safety of antimicrobial fosfomycin for the treatment of aeromonose and streptococcosis in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). For this, clinical safety was evaluated with doses of 10, 20 and 40 mg of fosfomycin.kg-1; Efficacy studies with the therapeutic dose of 10 mg of fosfomycin.kg-1 were conducted with fish challenged with Aeromonas hydrophila and Streptococcus agalactiae; The ecotoxicity assays were performed for the determination of LC50 in fish (O. niloticus) and aquatic plants (Lemna minor) and EC50 for crustaceans (Daphnia magna) and molluscs (Pomacea canaliculata). In the studies, tilapia of 112 g ± 5.6 g were used, packed in 400 L tanks (n = 10). Both therapeutic efficacy studies with 10 mg.kg-1 demonstrated efficacy for A. hydrophila and S. agalactiae, because in the reisolation analyzes of these microorganisms there was no growth in liver, kidney, spleen and brain samples of treated fish, While in the infected and untreated groups, mean growth was greater than ten colony forming units (CFU) per plaque. In the A. hydrophila infection they presented microcytosis and lymphopenia, as well as thrombocytosis in the initial phase of infection followed by thrombocytopenia. Liver and renal tissue damage corroborated the changes in serum enzyme activity of ALT, AST, FA and creatinine, cholesterol and triglyceride levels. In S. agalactiae infection, there was a decrease in the n... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor