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Zusammenfassung Da die meisten Fälle männlicher Unfruchtbarkeit immer noch idiopatisch bleiben, könnte eine Untersuchung der Mechanismen, in denen Gene der Spermatogenese-Kontrolle involviert sind, helfen, die Gründe besser zu verstehen. Diese Arbeit besteht aus zwei Teilen die zwei verschiedene Aspekte humaner Fertilitätsforschung betreffen. Das erste Projekt betrifft die Analyse des coiled coil domain containing 33 (CCDC33) Proteins und seiner Rolle als peroxisomal testis specific 1 (PXT1) Interaktionspartner. Im zweite Projekt haben wir die Ursache männlicher Unfruchtbarkeit in Mäusen mit multiplen knockouts bestimmt und den Phänotyp anlaysiert. Folgende Gene wurden ausgeknocked: Tnp2, Hist1h1t, Theg, Acr, Creb3l4 and Tex22. Im ersten Teil dieser Arbeit wurden Domänen, die bei der CCDC33 und PXT1-Interaktion beteilgt sind, identifiziert. Die Interaktion dieser beiden Proteine wurde duch Kaczmarek identifiziert (Kaczmarek, 2009). Wir zeigten, dass nicht die coiled coil Domänen für die Interaktion mit PXT1 verantwortlich sind, sondern eine Aminosäuresequenz welche der Sequenz in Leucin-reichen Domänen ähnlich ist. Durch induzierte Mutagenese in der PXT1-Sequenz haben wir Aminosäuresequenzen identifiziert, die für die Interaktion von PXT1 und CCDC33 bedeutend sind. PXT1 ist ein erstes peroxisomales Protein das eine funktionale BH3-ähnliche Domäne enthält, die dafür bekannt ist Apoptose zu induzieren. Aufgrund von Experimenten mit Co-transfizieretn HeLa Zellen konnten wir eine Co-Lokalisation von CCDC33 und PXT1 im Zytoplasma nachweisen. Zudem zeigten Zellen mit Co-Lokalisation beider Proteine eine Reduktion der Apoptoserate im Vergleich zu Zellen die nur mit dem PXT1-Konstrukt transfiziert waren. Dieser Befund könnte suggerieren, dass die physikalische Bindung beider Proteine die PXT1-induzierte Apoptose verhindert. Durch Western Blot und immunhistochemische Experimente konnten wir zeigen, dass das CCDC33 Protein in den Hoden während der Spermatogenese ab dem Spermatocyten- Stadium lokalisiert ist. Sowohl die Interaktion von CCDC33 und PXT1 als auch das Expressionsmuster beider Gene implizieren, dass Ccdc33 in der Kontrolle der Spermatogenese involiert sein könnte. Wir postulieren, dass CCDC33 ein neues peroxisomales Protein sein könnte, welches Apoptose während der Spermatogenes reguliert. Jedoch sind weitere Untersuchungen, u.a. die Analyse von CCDC33 knockout Maus-Modellen, nötig, um feststellen zu können ob Ccdc33 für die männliche Fertilität essentiell ist. Im zweiten Teil dieser Arbeit wird die Analyse von knockout Mäuselinien, in denen 6 keimzellspezifische Gene funktionsunfähig gemacht wurden, beschrieben. In ca. 20% der Mäuse wurde Unfruchtbarkeit festgestellt. In beiden, männlichen fruchtbaren und unfruchtbaren 6xKO Mäusen, ist die Zahl an Spermatozoa mit abnormalen Kopf erhöht und Sperma-Motilität reduziert. Nach Kreuzung von weiblichen wildtyp Mäusen mit männlichen 6xKO Tieren, benötigte das Sperma bemerkenswert längere Zeit um die Oocyte zu befreuchten as im Vergleich zu WT Sperma. Die Unterschiede im Phänotyp der 6xKO Mäuse sind sowohl dem genetischen Hintergrund als auch der Inaktivierung der sechs keimzellspezifischen Gene zuzuschreiben. Um genauer zu untersuchen welche Gene bei der Unfruchhtbarkeit der 6xKO Mäuse involviert sein könnten haben wir ein Transkriptom Assay durchgeführt und die Genexpression in den Hoden von 5xKO Tieren, die fertil waren, mit der in 6xKO Mäusen, die infertil waren, verglichen. Wir haben ein neues Gen, 4933400A11Rik, identifiziert und charakterisiert, welches für die Unfruchtbarkeit männlicher 6xKO Mäuse verantwortlich sein könnte. In WT Mäusen ist 4933400A11Rik in den Keimzellen exprimiert. 4933400A11Rik mRNA wurde ab Tag 16 post partum, wenn primäre Spermatozyten produziert werden, bis zu den ausgewachsenen Spermien detektiert. Es ist jedoch nicht klar, ob die mRNA die in den Spermien entdeckt wurde ein Ergebniss der Expression von 4933400A11Rik sind, oder ob es sich dabei um restliche Moleküle handelt welche während der Spermatogenese nicht abgebaut wurden. 4933400A11RIK weist Sequenzähnlichkeiten zur Aktinfilament capping Proteinfamile auf. Wir zeigten, dass 4933400A11RIK mit F-Aktin capping Protein Untereinheit alpha-1 colokalisiert. Proteine dieser Familie sind bekannt dafür das Wachstum des Zytoskeletts durch Regulation der Aktinfilament-Reorganisation zu kontrollieren. Deregulation der Aktinzytoskelett-Reorganisation in Keimzellen könnte die zugrundeliegende Ursache der männlichen Unfruchtbarkeit in 6x KO Mäusen sein, denn 4933400A11Rik wird in den Hoden fertiler 6xKO Mäuse, aber nicht in den Hoden infertiler 6xKO Mäuse exprimiert. Um die Frage eindeutig zu beantworten, ob das Gen 4933400A11Rik die Fertilität beeinflusst, sollten 4933400A11Rik knockout Mäuse generiert und analysiert werden. Das ´Rescue-Experiment´ könnte ebenso die Involvierung dieses Gens bei männlichen Fertilität bestätigen. Zusammenfassend präsentiert diese Arbeit interessante Erkenntnisse über die potentielle Funktion von CCDC33 bei der Regulation der Spermatogenese. Außerdem zeigen wir kumulierte Effekte von 6 keimzellspezifischen Genen und einem neuen Gen, 4933400A11Rik, welches für die weitere Forschung männlicher Unfruchtbarkeit interessant sein könnte.

While the introduction of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) has revolutionized the treatment of male infertility, concerns have been raised regarding the risk of chromosomal abnormalities in pregnancies derived from ICSI. Studies on sperm from infertile men have suggested that this population may produce higher rates of aneuploid sperm. Thus, we hypothesized that defects in early meiotic events may contribute to both male infertility and the production of aneuploid sperm. We used immunofluorescent techniques to observe the synapsis and recombination of chromosomes during meiosis, and fluorescent in-situ hybridization (FISH) to assess sperm aneuploidy. We analyzed testicular tissue from thirty-one men (10 fertile and 21 infertile men). We observed that ~36% (5/14) of men with impaired spermatogenesis displayed reduced genome-wide recombination. When all men were pooled, we observed an inverse correlation between the frequency of sex chromosome recombination and XY disomy in the sperm. We combined immunofluorescent and FISH techniques to study recombination patterns on chromosomes 13, 18 and 21 in fifteen men (5 fertile and 10 infertile men). Four of the infertile men displayed altered recombination distributions on at least one of the chromosome arms studied. Finally, we examined early meiotic events in two biopsies from an azoospermic t(8;13) carrier. While global recombination rates were not altered, recombination frequencies were reduced specifically on the rearranged chromosomes. Asynapsed quadrivalents were observed in 90% and 87% of pachytene nuclei from the first and second biopsies, respectively, and were frequently associated with the sex chromosomes. BRCA1 and γH2AX, two proteins implicated in meiotic sex chromosome inactivation, localized along asynapsed regions regardless of whether or not they were associated with the sex chromosomes, suggesting that regions of autosomal chromosomes that fail to synapse undergo transcriptional silencing in humans. In summary, we observed that a subset of infertile men display alterations in the number and position of meiotic crossovers, which may contribute to both infertility and an increased risk of sperm aneuploidy. The fidelity of synapsis is also a critical factor in determining the outcome of gametogenesis in humans, as the transcriptional inactivation of asynapsed regions may silence meiotic genes, leading to meiotic arrest and infertility.

The experiences of African women with primary infertility were explored. These women were from Durban and surrounding rural areas, in KwaZulu / Natal. The aims of the study were to describe their perception of infertility using King's (1981) Interacting Systems Model and to describe the actions they undertook in response to their problem of primary infertility. A purposive sample of the first ten consenting women with primary infertility, five from the academic hospital and five from a private gynaecological practice were selected on the day when they attended either health centre. Case studies were conducted using in-depth interviews. Women's personal, interpersonal and social systems were adversely affected by their problem of being unable to conceive. For example in the taped discussions, all ten participants had a low self-image in regard to their personal system which was reflected in all but four, when measured with Rosenberg's Self-Esteem Scale (Rosenberg, 1979). All women were found to be at various stages in the grief process, only one having attained acceptance (Kubler-Ross, 1969). Eight women were married and the remaining two were single. Four of the married participants had experienced problems with "in-laws", which has led to poor interpersonal relationships, unlike the other four married participants. Despite not being major decision-makers in the household, all the participants were allowed to make their own decisions about whom they saw in regard to infertility. All the women concerned made use of formal medical facilities but four participants made use of traditional and/or faith healers as well. Some of the problems identified were the lack of emotional support from nursing personnel as well as their own lack of understanding of causes, investigations and treatment of female infertility. Recommendations regarding effective nursing care of women with infertility and the possible formation of support groups, were made. As all the participants were literate, informative pamphlets could be developed. Areas of further research were identified. / Thesis (M.Cur.)-University of Natal, Durban, 1994.

Urogenital chlamydia infection, caused by the bacterium Chlamydia trachomatis (CT), is the most common sexually transmitted bacterial infection in Sweden. In 2008 it was estimated by WHO that there were 105.7 million new cases of CT worldwide, an increase by 4.2 million cases (4.1%) compared to 2005. If untreated, CT infections can progress to serious reproductive health problems, especially in women. These complications include subfertility/infertility, ectopic pregnancy and chronic pain. The CT infection is often asymptomatic and reliable diagnostic methods and contact tracing are important tools for identifying infected individuals. CT infection is classified in the Swedish Communicable Diseases Act as a serious disease; consequently, written reporting and contact tracing are compulsory. Previous or ongoing CT infection is not uncommon in infertile couples, especially in women with tubal factor infertility (TFI). We have tested 244 infertile couples for CT antibodies, and CT IgG positive couples were tested for CT DNA in urine. The prevalence of CT antibodies was higher in infertile men and women, and ongoing CT infection was common. Our results support a role of CT in infertility and underscore the importance of prevention of CT infection. Contact tracing was studied during using questionnaires. A total of 544 questionnaires was sent to tracers in a Swedish county and 534 (98%) were completed. Centralized contact tracing performed by experienced tracers is effective; on average 65% of sexual contacts found by contact tracing are CT-infected. Our data show that it is worthwhile to extend the tracing period beyond 6 months as 30% of reported sexual contacts between months 7-12 were CT-infected. Contact tracing may be performed face-to-face at the clinic or by telephone. Because of the severe consequences of CT infection there is a need for useful methods for both primary and secondary prevention of CT and other sexually transmitted infections (STIs). An important sub-population for CT/STI-prevention is the “core group”, i.e. a subpopulation with high incidence of STIs combined with risky sexual behaviours. This subpopulation contributes particularly to the spread of STIs in the population. Therefore, we have developed and evaluated a brief standardised but flexible manual-based single-session intervention based on motivational interviewing (MI) for the reduction of high risk sexual behaviour. Women (n=105) and men (n=119) at high risk of contracting CT infection were randomly eighter offered brief MI counselling or standard care. Our findings support the effectiveness of brief MI-based counselling in reducing high-risk sexual behaviour and incident CT infection in women (p<0.01) but not in men. Our results suggest that gender aspects need to be considered and that men and women should be treated differently for achieving maximal risk-reduction. Whereas it might be sufficient to include information and motivation when performing risk-reducing counselling on women, counsellors may also add other components, such as behavioural skills and booster sessions, when counselling is performed on men. / Klamydiainfektion orsakas av Chlamydia trachomatis och är den vanligaste sexuellt överförda bakterieinfektionen. WHO har uppskattat att det år 2008 var 105,7 miljoner nya fall av klamydia i världen, en ökning med 4,2 miljoner fall (4,1 %) jämfört med år 2005. Klamydiainfektion är ett folkhälsoproblem och klassificeras i den svenska smittskyddslagen som en allmänfarlig sjukdom varför det är obligatoriskt att smittspåra och göra en skriftlig anmälan till smittskyddsläkaren och Smittskyddsinstitutet. Klamydiainfektionen ger oftast inga symtom och tillförlitliga diagnostiska metoder och smittspårning är viktiga ”redskap” för att hitta smittade personer. Om klamydiainfektionen inte behandlas kan den leda till allvarliga hälsoproblem, speciellt hos kvinnor. Bland komplikationer efter klamydiainfektion ingår ofrivillig barnlöshet, utomkvedshavandeskap och kronisk buksmärta. Tecken på tidigare eller pågående klamydiainfektion är vanliga hos ofrivilligt barnlösa par, speciellt hos kvinnor med skadade äggledare som orsak till barnlösheten. Våra resultat ger stöd för betydelsen av klamydia vid ofrivillig barnlöshet och understryker vikten av förebyggande åtgärder mot klamydia samt klamydiaprovtagning av både män och kvinnor vid utredning av ofrivillig barnlöshet. Centraliserad klamydiasmittspårning utförd av erfarna smittspårare är effektiv och i genomsnitt är 65 % av spårade sexuella kontakter klamydiasmittade. Våra data visar att det lönar sig att förlänga smittspårningsperioden från 6 till 12 månader eftersom betydligt fler klamydiasmittade kontakter då hittas. Den så kallade ”Västerbottensmodellen” med en smittspårningsperiod på 12 månader rekommenderas nu av Socialstyrelsen. Kontaktspårning kan utföras antingen på mottagningen eller per telefon. På grund av risk för allvarliga konsekvenser av klamydia finns det behov av metoder för att förebygga klamydiasmitta. En viktig grupp för prevention är den så kallade ”kärngruppen", alltså de personer som har en hög förekomst av klamydia och andra sexuellt överförda infektioner i kombination med sexuellt riskbeteende. Denna grupp bidrar särskilt till spridningen av sexuellt överförda infektioner bland befolkningen. Därför har vi utvecklat och utvärderat en kort samtalsmetod som bygger på metoden motiverande samtal (MI, motivational interviewing) för att minska sexuellt risktagande. Våra fynd visar att kort MI-baserad rådgivning för att minska sexuellt riskbeteende och klamydiainfektion fungerar bra på kvinnor men inte lika bra på män. Resultaten tyder på att genusaspekter måste beaktas och att kvinnor och män ska behandlas på olika sätt för att uppnå maximal riskminskning. Det kan vara tillräckligt att fokusera på information och motivation vid rådgivning av kvinnor men för rådgivning av män kan man behöva komplettera med beteendemässiga färdigheter och/eller upprepad MI-baserad rådgivning för att nå god effekt.

Denna studie undersökte kulturella skillnader i emotionella och kognitiva aspekter av subjektivt välbefinnande, mer specifikt uttryckt; nivåer av positiva, negativa och balanserade känslor och hur dessa påverkar välbefinnande. Studien innefattar 212 infertilitetsdrabbade kvinnor i det individualistiska landet Sverige och det kollektivistiska landet Iran. Korrelationsanalys, regressionsanalys och One-way ANOVA användes för att besvara forskningsfrågorna. Resultaten visade ingen kulturell skillnad i kognitivt välbefinnande; men Svenska kvinnor uppgav högre känslonivåer, medan de Iranska i större utsträckning kunde uppleva motsatta känslotillstånd samtidigt. Balanserad affekt var huvudsaklig prediktor för välbefinnande i båda grupper. Resultaten diskuterades utifrån teori om individualism, kollektivism och infertilitet i relation till subjekivt välbefinnande. / This study examined cultural differences in the cognitive and emotional aspects of subjective well-being, more specifically the levels of positive, negative and balance affect and how these affect cognitive well-being. It involves 212 infertile women in the individualistic country Sweden and the collectivistic country Iran. Analyses of correlation, stepwise and linear regression as well as One-Way ANOVA were used to answer the research questions. The results showed no cultural difference in cognitive well-being, and Swedish women reported higher levels of affect while the Iranian to a higher extent experienced positive and negative emotions simultaneously. Balance affect was the best predictor for well-being in both samples.

In den letzten Jahren wurde ein inverser Zusammenhang zwischen der Zunahme an Fettgewebe und der Funktionalität von Spermatozoen festgestellt, dessen molekulare Ursachen weitgehend unbekannt sind. Möglichweise spielen Sekretionsprodukte des Fettgewebes, sogenannte Adipokine, dabei eine entscheidende Rolle. Um diese Hypothese zu prüfen, wurden in einer Querschnittsstudie Sexualhormonkonzentionen, Spermiogrammparameter und die Konzentration der Adipokine Adiponektin, Leptin, Resistin, Chemerin, Vaspin, Visfatin (Nampt) und Progranulin im Serum von normalgewichtigen, präadipösen und adipösen Probanden bestimmt. Die Adipokinkonzentrationen im Serum wurden mit den korrespondierenden Werten im Seminalplasma (SP) verglichen. Desweiteren wurden die gemessenen Adipokinspiegel beider Körperflüssigkeiten auf Zusammenhänge mit Sexualhormonkonzentrationen im Blut und den Parametern des klassischen Spermiogramms (WHO) untersucht. Dabei zeigte sich, dass die altersgemachten präadipösen/adipösen Probanden signifikant weniger progressiv motile und normomorphe Spermatozoen aufwiesen als die Gruppe der Normalgewichtigen (p<0,05). In ihrem SP war die Konzentration von Adiponektin signifikant erniedrigt, während die von Chemerin im Vergleich zu normalgewichtigen Männern erhöht war (p<0,05). Außerdem konnte nachgewiesen werden, dass die mittlere Konzentration von Adiponektin (400-fach), Leptin (5-fach), Resistin (1,5-fach) und Chemerin (1,5-fach) im Serum signifikant höher als die im SP war. Demgegenüber fand sich bei Vaspin (4-fach), Progranulin (50-fach) und Visfatin (100-fach) die Konzentration im SP signifikant erhöht. Bei Korrelationsanalysen unter Einschluss der Ergebnisse aus der Gesamtgruppe korrelierte von allen untersuchten Adipokinen nur die SP-Konzentration von Adiponektin direkt und signifikant mit der im Serum (p<0.01). Zudem zeigten Adiponektin, Chemerin und Progranulin im SP direkte Assoziation mit den Spermiogrammparametern Spermienkonzentration, Spermienanzahl und progressive Motilität (p<0.05). Wir konnten erstmals nachweisen, dass eine Vielzahl von Adipokinen im männlichen Reproduktionstrakt präsent sind und dort möglicherweise einen Einfluss auf die Spermienqualität in Abhängigkeit vom Körpergewicht haben könnten.

While the introduction of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) has revolutionized the treatment of male infertility, concerns have been raised regarding the risk of chromosomal abnormalities in pregnancies derived from ICSI. Studies on sperm from infertile men have suggested that this population may produce higher rates of aneuploid sperm. Thus, we hypothesized that defects in early meiotic events may contribute to both male infertility and the production of aneuploid sperm. We used immunofluorescent techniques to observe the synapsis and recombination of chromosomes during meiosis, and fluorescent in-situ hybridization (FISH) to assess sperm aneuploidy. We analyzed testicular tissue from thirty-one men (10 fertile and 21 infertile men). We observed that ~36% (5/14) of men with impaired spermatogenesis displayed reduced genome-wide recombination. When all men were pooled, we observed an inverse correlation between the frequency of sex chromosome recombination and XY disomy in the sperm. We combined immunofluorescent and FISH techniques to study recombination patterns on chromosomes 13, 18 and 21 in fifteen men (5 fertile and 10 infertile men). Four of the infertile men displayed altered recombination distributions on at least one of the chromosome arms studied. Finally, we examined early meiotic events in two biopsies from an azoospermic t(8;13) carrier. While global recombination rates were not altered, recombination frequencies were reduced specifically on the rearranged chromosomes. Asynapsed quadrivalents were observed in 90% and 87% of pachytene nuclei from the first and second biopsies, respectively, and were frequently associated with the sex chromosomes. BRCA1 and γH2AX, two proteins implicated in meiotic sex chromosome inactivation, localized along asynapsed regions regardless of whether or not they were associated with the sex chromosomes, suggesting that regions of autosomal chromosomes that fail to synapse undergo transcriptional silencing in humans. In summary, we observed that a subset of infertile men display alterations in the number and position of meiotic crossovers, which may contribute to both infertility and an increased risk of sperm aneuploidy. The fidelity of synapsis is also a critical factor in determining the outcome of gametogenesis in humans, as the transcriptional inactivation of asynapsed regions may silence meiotic genes, leading to meiotic arrest and infertility.

Thesis (M. Sc.)--University of Canterbury, 2006. / Typescript (photocopy). Includes bibliographical references (leaves 79-88). Also avialable via the World Wide Web.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2003. / Härtill 4 uppsatser.