Orientador: André Sampaio Pupo / Banca: Fernando Maurício Francis Abdalla / Banca: Carlos Allan Cândido Dias Júnior / Banca: Maria de Fátima Magalhães Lázari / Banca: Flávia Heberler-Barbosa Trovão / Resumo: As catecolaminas endógenas adrenalina e noradrenalina controlam importantes funções fisiológicas através da ativação de 1A-ARs, que são receptores com 7 domínios transmembrana os quais ativam proteínas G. Muitos agonistas de 1-ARs são utilizados na terapêutica, principalmente por conta de seu efeito vasoconstritor, porém, a taquifilaxia observada com a oximetazolina, um agonista de 1-ARs da classe das imidazolinas, é um efeito adverso importante e pode ser observado principalmente com a utilização de descongestionantes nasais por períodos de tempo prolongado. No presente estudo, investigamos a participação de PKC e GRK2 nos processos de fosforilação, dessensibilização e internalização de 1A-ARs induzidos pelos agonistas noradrenalina e oximetazolina. Segundo os resultados obtidos, a oximetazolina, mas não a fenilefrina, induziu taquifilaxia nas contrações de artéria caudal de rato. Além disso, 1A-ARs ativados pela oximetazolina são fosforilados principalmente pela GRK2, seguida de rápida dessensibilização e internalização. Já 1A-ARs ativados pela noradrenalina são fosforilados principalmente pela PKC, sem dessensibilização nem rápida internalização. Esses resultados em conjunto demonstram que a oximetazolina e a noradrenalina regulam os 1A-ARs através de diferentes mecanismos, envolvendo diferentes quinases / Abstract: The endogenous cathecolamines epinephrine and norepinephrine control important physiological functions through activation of 1A-ARs, which are 7-transmembrane receptors that activate G proteins. Several 1-ARs agonists are therapeutically useful in reason of its vasoconstrictor effects; however, tachyphylaxis in the vasoconstrictor effects of nasal decongestant containing oxymetazoline, an imidazoline 1-ARs agonist, is an important adverse effect observed after prolonged treatment. On the present study, we investigated the roles of PKC and GRK2 on the 1A-AR phosphorylation, desensitization and internalization process after receptor activation by norepinephrine and oxymetazoline. The results show that oxymetazoline, but not phenylephrine, induce tachyphylaxis in contractions of rat tail artery. Moreover, 1A-ARs activated by oxymetazoline are phosphorylated predominantly by GRK2, followed by rapid desensitization and internalization whereas 1A-ARs activated by norepinephrine are phosphorylated predominantly by PKC and not followed by desensitization or rapid internalization. These results show that norepinephrine and oxymetazoline regulate 1A-ARs through different mechanisms, involving different protein kinases / Doutor

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Luiz Carlos da Silva Filho / Banca: Noeli Pereira Rocha / Banca: Carlos Alan Candido Doas Junior / Resumo: Apocinina é o mais empregado inibidor de NADPH oxidase, um complexo multienzimático capaz de catalisar a redução unieletrônica do oxigênio molecular ao radical ânion superóxido. Apesar de controvérsias sobre sua seletividade, a apocinina tem sido utilizada como um das mais promissoras drogas em diversos modelos experimentais de inflamação. Neste estudo nosso objetivo foi caracterizar as características antioxidantes, pró-oxidantes e antinociceptivas da apocinina e dos compostos estruturalmente relacionados vanilina e ácido vanílico. Descobrimos que estes compostos são relativamente fracos como antioxidantes. Por outro lado, a apocinina e a vanilina, mas não o ácido vanílico mostraram significativas características pró-oxidantes. No que diz respeito aos efitos antinociceptivos em ratos, a administração oral de 100 mg/Kg de apocinina, vanilina e ácido vanílico, uma hora antes dos testes, foi capaz de reduzir significativamente o edema da pata provocada por carragenina e a dor no teste de formalina (fase inflamatória) A apocinina foi também capaz de reduzir o efeito nociceptivo induzido por capsaicina, cinamaldeído, mentol e glutamato. Utilizando antagonistas específicos, descobrimos que a via serotonérgica, mas não a via mediada por óxido nítrico está envolvida no mecanismo de antinocicepção da apocinina. Concluímos que não há relação entre as propriedades antioxidantes, pró-oxidantes, inibição de NADPH oxidase e os efeitos antinociceptivos estudados. Assim, os efeitos farmacológicos obtidos para a apocinina é uma confirmação de que este composto fitoquímico é muito mais do que um inibidor de NADPH oxidase. Estudos adicionais deverão ser realizados, mas as propriedades antiinflamatórias e antinociceptivas obtidas neste trabalho e os efeitos já descritos na literatura é um indicativo que esta molécula simples e barata se tornará um real anti-inflamatório e/o analgésico / Abstract: Apocynin is the most employed inhibitor of NADPH oxidase, a multienzymatic complex capable of catalyzing the one-electron reduction of molecular oxygen to the superoxide anion. Despite controversies about its selectivity, apocynin has been used as one of the most promising drugs in several experimental models of inflammatory diseases. In this study our aim was to characterize the antioxidant, pro-oxidant and antinociceptive properties of apocynin and the structurally-related compounds vanillin and vanillic acid. We found that apocynin, vanillin and vanillic acid are poor antioxidants. Conversely, apocynin and vanillin, but not vanillic acid, showed significant pro-oxidant characteristics. Regarding antinociceptive effects in rats, the oral administration of 100 mg/Kg of apocynin, vanillin and vanillic, one hour before the tests, was able to reduce significantly the paw edema pain provoked by carrageenan and the pain in the formalin test (inflammatory phase). Apocynin was also able to reduce the nociceptive effect induced by capsaicin, cinnamaldehyde, menthol and glutamate. By using specific antagonists, we found that serotonergic, but not the nitric oxide pathway seems to be involved in the mechanism of antinociception of apocynin. In conclusion, there is no relationship between antioxidant, pro-oxidant, inhibition of NADPH oxidase and the antinociception effects observed in these studies. Hence, the pharmacological effects obtained for apocynin is a confirmation that this phytochemical is much more than an NADPH oxidase inhibitor. Additional studies must be done, but the anti-inflammatory and antinociceptive properties of apocynin obtained in this work and the effects described in the literature are indicative that this simple and inexpensive molecule will become a real anti-inflammatory and analgesic drugs / Doutor

Orientador: Luiz Carlos da Silva Filho / Banca: Marco Antônio Barbosa Ferreira / Banca: Fenelon Martinho Lima Pontes / Resumo: A corrosão é um processo espontâneo de transformação química que degrada os materiais, principalmente os metais, condenando as propriedades físico-químicas que lhes dão emprego. Dessa forma, torna-se necessária a substituição das peças afetadas pela corrosão tanto nas indústrias como nas obras públicas. Estudos da Organização Mundial da Corrosão (OMC) estimam que os gastos com a manutenção dos materiais afetados chegam em média a 2,8 % do Produto Interno Bruto (PIB) mundial. Buscando soluções economicamente viáveis, o desenvolvimento de eficientes inibidores de corrosão aparece como alternativa para diminuir o custo da manutenção dos metais. Os inibidores funcionam como películas protetoras que interferem na ação eletroquímica, prevenindo ou diminuindo os efeitos da corrosão. Algumas substâncias orgânicas polares que possuem elétrons deslocalizados despertam interesse de grupos científicos devido a sua potencialidade de ação como inibidores de corrosão. Dentre estes compostos as quinolinas vêm recebendo atenção principalmente por se tratar de uma classe de moléculas extremamente versátil devido a sua estrutura π-conjugada que permite atuação destes derivados em diversas áreas de aplicação. Neste trabalho foi realizada a síntese de derivados quinolínicos por meio de reações multicomponentes promovidas por pentacloreto de nióbio, além de desenvolver uma nova rota para produção de derivados aminoquinolínicos. As substâncias sintetizadas foram avaliadas como inibidores/retardador... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Corrosion is a spontaneous process of chemical transformation that degrades materials, especially metals, condemning their physicochemical properties. Thus, it is necessary to replace the parts affected by corrosion in both industries and public works. Studies by the World Corrosion Organization (WTO) estimate that spending on the maintenance of affected materials averages 2.8% of world gross domestic product (GDP). Seeking economically viable solutions, the development of efficient corrosion inhibitors appears as an alternative to lowering the cost of metal maintenance. Inhibitors act as protective films that interfere with electrochemical action, preventing or decreasing the effects of corrosion. Some polar organic substances that have delocalized electrons arouse interest of scientific groups due to their potential action as corrosion inhibitors. Among these compounds, quinolines have been receiving attention mainly because they are an extremely versatile class of molecules due to their π-conjugated structure that allows these derivatives to act in several application areas. In this work, the synthesis of quinolinic derivatives was performed by means of multicomponent reactions promoted by niobium pentachloride, besides developing a new route for the production of aminoquinolinic derivatives. The synthesized substances have been evaluated as corrosive process inhibitors / retarders for AISI 430 steel in 1M HCl. For the characterization and verification of the anticorrosive... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A leucemia linfóide aguda de células T (LLA-T) é um tipo agressivo de câncer hematológico que surge a partir da transformação maligna de progenitores de células T. Apesar do progresso significativo no tratamento atual, os desafios concentram-se na morbidade após os regimes de quimioterapia convencionais e na sobrevida pós-recaída. Além disso, os pacientes com LLA-T apresentam pior prognóstico quando comparados àqueles com precursores de células B, consequentemente, novas abordagens terapêuticas ainda se fazem necessárias para aprimorar os resultados naquele subtipo. YM-155 é um derivado imidazólico originalmente classificado como supressor transcricional de survivina e tem demonstrado potente efeito antiproliferativo sobre uma grande variedade de tumores humanos, porém a atividade desse composto ainda é pouco explorada em linhagens de células T. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de YM-155 no crescimento e morte celular em linhagens de LLA-T infantil. O presente estudo demonstrou que YM-155 exibiu atividade antiproliferativa e potente efeito indutor de apoptose nessas células, na qual a linhagem JURKAT mostrou ser mais sensível ao tratamento em relação a CCRF-CEM, apresentando o valor de CI50, respectivamente, 73,11 ± 7,65 nM e 2,17 ± 0,08 μM. Além disso, YM-155 diminuiu significativamente a capacidade de formação de colônias e induziu o bloqueio do ciclo celular da CCRF-CEM na fase S e, na linhagem JURKAT, diminuiu substancialmente a população em G2/M e aumentou a fração Sub-G1. No entanto, em ambas, não foi observada a inibição da expressão de survivina após tratamento com YM-155, assim como a inibição da expressão dos genes VEGF e Bcl-xL, o que sugere que esse composto, em linhagens LLA-T mutadas para TP53, esteja atuando de forma independe da inibição de survivina e do fator de transcrição SP-1. Conclui-se que YM-155 é eficaz na redução do crescimento e aumento de morte celular, portanto representa um agente antitumoral promissor em linhagens de leucemia linfóide aguda de células T. / T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological cancer that arises from the malignant transformation of T-cell progenitors. Despite the significant progress in current treatment, challenges remain the lifelong morbidity after present chemotherapy regimens and post-relapse survival. Additionally, patients with T-ALL have poor prognosis compared to those with B-cell precursor, consequently, novel therapeutic approaches are still needed to improve the outcome in this cohort. YM-155 is an imidazolium derivative originally discovered as supressant of survivin transcription and has potent antiproliferative effects on a variety of human cancer, but, YM-155 effect in T-ALL cell line is underexplored. Based on this information, the present study aimed to evaluate YM-155 effect on cell lines derived from pediatric T-ALL. The drug exhibited antiproliferative activity and induced apoptosis. JURKAT cells (IC50 value: was 73.11 ± 7.65 nM) was more sensitive to treatment than CCRF-CEM (IC50 value: 2.17 ± 0.08 uM). Moreover, YM- 155 decreased clonogenic capacity and affected cell cycle dynamic. In CCRF- CEM, the treatment induced S phase arrest and, in JURKAT cells, decreased G2/M population and increased sub-G1 fraction. However, in both cell line, inhibition of survivin expression was not observed after treatment with YM-155, as well as the inhibition of VEGF and Bcl-xL genes expression, suggesting that this compound, in p53-deficient T-ALL cell line, is acting independently of survivin and SP-1 transcription factor inhibition. This results reinforcing the likelihood of using YM-155 as a therapeutic approach to combat leukemia and increase knowledge about mechanisms in vitro.

CAPES / A carne e seus derivados representam uma parte importante da dieta humana. Porém, devido a sua riqueza na composição química são suscetíveis a alterações de ordem físico-química como a oxidação lipídica, tornando necessário o uso de aditivos para sua conservação. A tendência é utilizar produtos naturais como alternativas aos aditivos químicos. Entre os produtos naturais, a manjerona e o pólen apícola apresentam, em sua composição, metabólitos secundários com alta atividade antioxidante. O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades bioativas de dois produtos, pólen apícola orgânico e manjerona (Origanum majorana L.), bem como sua aplicação como antioxidantes naturais em hambúrgueres. No pólen apícola desidratado, foi realizada caracterização palinológica e determinação da composição centesimal. O pólen apícola e a manjerona foram extraídos individualmente com etanol 80% em shaker, a 40 ºC/60 minutos. Os compostos fenólicos e flavonoides totais dos extratos etanólicos de pólen apícola e manjerona foram quantificados e a identificação feita por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR). A atividade antioxidante dos extratos foi determinada e comparada à de antioxidantes comerciais por quatro métodos distintos. Após os extratos serem evaporados e liofilizados, foram aplicados separadamente na concentração de 0,3% em formulações de hambúrgueres de carne bovina, também foi elaborada uma formulação padrão, com 0,01% de butilhidroxitolueno; além da formulação controle, sem antioxidantes. Os hambúrgueres foram caracterizados através da determinação da composição centesimal. A oxidação lipídica foi determinada pelo índice de peróxido a cada 14 dias, e pelo índice de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) a cada 7 dias. Após avaliação microbiológica foi realizada a análise sensorial. Verificou-se que o pólen apícola foi classificado como heterofloral, com predominância da família Asteraceae. Os resultados obtidos na composição centesimal do pólen apícola, com exceção do teor de umidade, estão em conformidade com a legislação brasileira. O extrato de manjerona apresentou o maior teor de compostos fenólicos e flavonoides totais em relação ao extrato de pólen apícola. Pela técnica de CLAE foi possível identificar e quantificar os flavonoides rutina, miricetina, quercetina e canferol, e os ácidos fenólicos, cafêico, p-cumárico, ferúlico e trans-cinâmico. Os extratos apresentaram alta atividade antioxidante in vitro pelos quatro métodos avaliados, sendo esta atividade atribuída à presença de compostos fenólicos. Os resultados obtidos para composição centesimal dos hambúrgueres indicam que com exceção do conteúdo de carboidratos, os demais parâmetros estão de acordo com a legislação brasileira. Com relação à oxidação lipídica, não houve a formação de peróxidos em nenhuma formulação, durante todo o período em que os produtos permaneceram congelados. Os extratos de manjerona e pólen apícola demonstraram resultados satisfatórios pelo TBARS, portanto, a concentração de antioxidantes naturais, foi suficiente para manter a estabilidade oxidativa. Sob os aspectos microbiológicos, os hambúrgueres atenderam à legislação vigente. Os índices de aceitabilidade para a avaliação global foram superiores a 70% para as formulações controle, padrão e adicionada de pólen apícola, no entanto a aplicação de manjerona interferiu negativamente nas características sensoriais. / The meat and its derivatives represent an important part of the human diet. However, due to its richness in chemical composition are susceptible to changes in physicalchemical and lipid oxidation, requiring the use of additives for its preservation. The trend is to use natural products as alternatives to the chemical additives. Among the natural products, marjoram and bee pollen present in its composition, secondary metabolites with high antioxidant activity. The aim of this study was to evaluate the bioactive properties of two products, organic bee pollen and marjoram (Origanum majorana L.) and its application as natural antioxidants in burgers. Dehydrated in bee pollen, pollen characterization was performed and determination of chemical composition. The bee pollen and marjoram were individually extracted with 80% ethanol in a shaker at 40 °C/60 minutes. Phenolic compounds and total flavonoid of ethanol extracts of pollen and marjoram were quantified and the identification made by high performance liquid chromatography on reversed phase (HPLC-RP). The antioxidant activity of the extracts was determined and compared to that of commercial antioxidants by four different methods. After the extracts were evaporated and lyophilized, were applied separately at a concentration of 0.3% in formulations of beef burgers, was also drafted a standard formulation with 0.01% butylhydroxytoluene; beyond the control formulation without antioxidants. The burgers were characterized by determining the chemical composition. Lipid oxidation was determined by peroxide value every 14 days, and the rate of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) every 7 days. After microbiological evaluation was performed sensory analysis. It was found that bee pollen was classified as heterofloral, predominantly family Asteraceae. The results on the chemical composition of bee pollen, with the exception of moisture content, the other parameters are in accordance with Brazilian law. The extract of marjoram had the highest content of total phenolics and flavonoids in relation to the extract of pollen. By HPLC technique was possible to identify and quantify flavonoids rutin, myricetin, quercetin and kaempferol, and phenolic acids, caffeic, p-coumaric, ferulic and transcinnamic acid. The extracts showed high antioxidant activity in vitro by the four methods evaluated, this activity being attributed to the presence of phenolic compounds. The results obtained for proximate composition of burgers indicate that with the exception of carbohydrate content, the other parameters are in accordance with Brazilian law. With respect to lipid oxidation, no formation of peroxides in any formulation during the period in which the products remained frozen. The extracts of bee pollen and marjoram demonstrated by the TBARS satisfactory results, therefore, the concentration of natural antioxidants was sufficient to maintain oxidative stability. Under the microbiological aspects, the burgers attended the law. The rate of acceptability for the overall evaluation was above 70% for the control formulations, standard and added bee pollen, however the application of marjoram negative influence on sensory characteristics.

CAPES / A carne e seus derivados representam uma parte importante da dieta humana. Porém, devido a sua riqueza na composição química são suscetíveis a alterações de ordem físico-química como a oxidação lipídica, tornando necessário o uso de aditivos para sua conservação. A tendência é utilizar produtos naturais como alternativas aos aditivos químicos. Entre os produtos naturais, a manjerona e o pólen apícola apresentam, em sua composição, metabólitos secundários com alta atividade antioxidante. O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades bioativas de dois produtos, pólen apícola orgânico e manjerona (Origanum majorana L.), bem como sua aplicação como antioxidantes naturais em hambúrgueres. No pólen apícola desidratado, foi realizada caracterização palinológica e determinação da composição centesimal. O pólen apícola e a manjerona foram extraídos individualmente com etanol 80% em shaker, a 40 ºC/60 minutos. Os compostos fenólicos e flavonoides totais dos extratos etanólicos de pólen apícola e manjerona foram quantificados e a identificação feita por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR). A atividade antioxidante dos extratos foi determinada e comparada à de antioxidantes comerciais por quatro métodos distintos. Após os extratos serem evaporados e liofilizados, foram aplicados separadamente na concentração de 0,3% em formulações de hambúrgueres de carne bovina, também foi elaborada uma formulação padrão, com 0,01% de butilhidroxitolueno; além da formulação controle, sem antioxidantes. Os hambúrgueres foram caracterizados através da determinação da composição centesimal. A oxidação lipídica foi determinada pelo índice de peróxido a cada 14 dias, e pelo índice de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) a cada 7 dias. Após avaliação microbiológica foi realizada a análise sensorial. Verificou-se que o pólen apícola foi classificado como heterofloral, com predominância da família Asteraceae. Os resultados obtidos na composição centesimal do pólen apícola, com exceção do teor de umidade, estão em conformidade com a legislação brasileira. O extrato de manjerona apresentou o maior teor de compostos fenólicos e flavonoides totais em relação ao extrato de pólen apícola. Pela técnica de CLAE foi possível identificar e quantificar os flavonoides rutina, miricetina, quercetina e canferol, e os ácidos fenólicos, cafêico, p-cumárico, ferúlico e trans-cinâmico. Os extratos apresentaram alta atividade antioxidante in vitro pelos quatro métodos avaliados, sendo esta atividade atribuída à presença de compostos fenólicos. Os resultados obtidos para composição centesimal dos hambúrgueres indicam que com exceção do conteúdo de carboidratos, os demais parâmetros estão de acordo com a legislação brasileira. Com relação à oxidação lipídica, não houve a formação de peróxidos em nenhuma formulação, durante todo o período em que os produtos permaneceram congelados. Os extratos de manjerona e pólen apícola demonstraram resultados satisfatórios pelo TBARS, portanto, a concentração de antioxidantes naturais, foi suficiente para manter a estabilidade oxidativa. Sob os aspectos microbiológicos, os hambúrgueres atenderam à legislação vigente. Os índices de aceitabilidade para a avaliação global foram superiores a 70% para as formulações controle, padrão e adicionada de pólen apícola, no entanto a aplicação de manjerona interferiu negativamente nas características sensoriais. / The meat and its derivatives represent an important part of the human diet. However, due to its richness in chemical composition are susceptible to changes in physicalchemical and lipid oxidation, requiring the use of additives for its preservation. The trend is to use natural products as alternatives to the chemical additives. Among the natural products, marjoram and bee pollen present in its composition, secondary metabolites with high antioxidant activity. The aim of this study was to evaluate the bioactive properties of two products, organic bee pollen and marjoram (Origanum majorana L.) and its application as natural antioxidants in burgers. Dehydrated in bee pollen, pollen characterization was performed and determination of chemical composition. The bee pollen and marjoram were individually extracted with 80% ethanol in a shaker at 40 °C/60 minutes. Phenolic compounds and total flavonoid of ethanol extracts of pollen and marjoram were quantified and the identification made by high performance liquid chromatography on reversed phase (HPLC-RP). The antioxidant activity of the extracts was determined and compared to that of commercial antioxidants by four different methods. After the extracts were evaporated and lyophilized, were applied separately at a concentration of 0.3% in formulations of beef burgers, was also drafted a standard formulation with 0.01% butylhydroxytoluene; beyond the control formulation without antioxidants. The burgers were characterized by determining the chemical composition. Lipid oxidation was determined by peroxide value every 14 days, and the rate of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) every 7 days. After microbiological evaluation was performed sensory analysis. It was found that bee pollen was classified as heterofloral, predominantly family Asteraceae. The results on the chemical composition of bee pollen, with the exception of moisture content, the other parameters are in accordance with Brazilian law. The extract of marjoram had the highest content of total phenolics and flavonoids in relation to the extract of pollen. By HPLC technique was possible to identify and quantify flavonoids rutin, myricetin, quercetin and kaempferol, and phenolic acids, caffeic, p-coumaric, ferulic and transcinnamic acid. The extracts showed high antioxidant activity in vitro by the four methods evaluated, this activity being attributed to the presence of phenolic compounds. The results obtained for proximate composition of burgers indicate that with the exception of carbohydrate content, the other parameters are in accordance with Brazilian law. With respect to lipid oxidation, no formation of peroxides in any formulation during the period in which the products remained frozen. The extracts of bee pollen and marjoram demonstrated by the TBARS satisfactory results, therefore, the concentration of natural antioxidants was sufficient to maintain oxidative stability. Under the microbiological aspects, the burgers attended the law. The rate of acceptability for the overall evaluation was above 70% for the control formulations, standard and added bee pollen, however the application of marjoram negative influence on sensory characteristics.

Orientador: Fernanda Canduri / Banca: Andreia Machado Leopoldino / Banca: José Ramon Beltran Abrego / Resumo: As CDKs têm sido extensivamente estudadas, porque exercem papéis essenciais na regulação da proliferação celular, nos processos neuronais e transcricionais. A progressão do ciclo celular é firmemente controlada pela atividade das CDKs. Este projeto de Mestrado tem como objetivo estudar a interação das proteínas CDK8 e CDK10 com vários inibidores, e estabelecer as bases estruturais para inibição das mesmas. Foram realizadas modelagens moleculares dos complexos binários CDKs:Inibidores, utilizando como molde a estrutura da CDK2 complexada com os mesmos ligantes: ATP, flavopiridol, olomoucina e roscovitina. Para realização dessas modelagens foi utilizado o programa Parmodel, que é uma implementação paralela do programa MODELLER. Espera-se que os modelos computacionais produzam avanços no entendimento de suas estruturas, destacando-se seus sítios de ligações, para um possível estudo sobre inibidores específicos para estas CDKs. / Abstract: The CDKs have been extensively studied because of their essential role in the regulation of cell proliferation, in the neuronal process and transcription. Cell cycle progression is tightly controlled by the activity of CDKs. This master project aimed to study the interaction of the CDK8 and CDK10 with several inhibitors in order to establish the structural bases for its inhibition. Were carried out the molecular modeling of the binary complexes CDKs:Inhibitors, using as template the CDK2 structure with the following ligands and inhibitors: ATP, Flavopiridol, Olomoucine and Roscovitine. For the achievement of those modeling was utilized the Parmodel program which is a parallel implementation of the MODELLER program. One expects that the computational models produce advances in the agreement structures, showing their binding sites, for a possible study about specific inhibitors against CDKs. / Mestre

Orientador: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Stelio Pacca Loureiro Luna / Banca: Lídia Mitsuko Mitsubara / Banca: Helcya Mime Hulse / Banca: Eliana Reiko Matushima / Resumo: O presente estudo aborda os efeitos causados pela contenção química com metadona (0,1mg/kg), dexmedetomidina (5µg/kg) e cetamina S(+) (8mg/kg) em macacos bugios (Alouatta guariba clamitans), bem como compara a qualidade e o tempo na reversão anestésica com antagonistas α2-adrenérgicos isolados ou associados a antagonistas narcóticos em macacos do novo mundo. Foram utilizados cinco macacos bugios, adultos e hígidos. O protocolo anestésico foi aplicado, por via intramuscular. Cinco minutos após a sedação do animal, o mesmo foi colocado em mesa com colchão térmico, onde foram aferidos os seguintes parâmetros: frequência cardíaca, respiratória, temperatura retal, pressão arterial sistólica e reflexos palpebrais. Estes parâmetros foram aferidos em intervalos de 10 minutos. Após 45 minutos da anestesia, foi aplicado a solução NaCl 0,9% para o tratamento controle, 25µg/kg de atipamezol para o tratamento ATI, 0,5 mg/kg de ioimbina para o tratamento IOI, atipamezol (25µg/kg) com naloxona (0,2 mg/kg) para o tratamento ATINALOX e o tratamento IOINALOX composto de ioimbina (0,5 mg/kg) associado à naloxona (0,2 mg/kg), administrados, por via IV, na veia ulnar dos primatas. Após a aplicação do reversor, o animal foi colocado em uma gaiola para avaliação da recuperação feita por 3 pesquisadores. O período de recuperação total foi compreendido desde a aplicação do antagonista até a total recuperação do paciente. A recuperação foi avaliada utilizando-se escores variavam de zero (0) a três (3), de acordo com Galante (2013). Alguns animais apresentaram sialorréia após a aplicação IV de atipamezol e ioimbina. Concluiu-se que a associação de metadona, dexmedetomidina e cetamina foi eficaz para contenção química desses animais, permitindo a realização de procedimentos clínicos com duração de até 45 minutos. O tratamento IOINALOX foi mais eficaz no quesito tempo, porém o tratamento ATINALOX obteve a melhor / Abstract: The present study addressed the effects caused by chemical restraint with methadone (0.1mg/kg), dexmedetomidine (5µg/kg) and ketamine S(+) (8 mg/kg) in Howley monkeys (Alouatta guariba clamitans) as well as the comparison of the quality and the time of the anesthetic reversal with isolated or associated narcotic α2-adrenergic antagonists in New world monkeys. Five adult and healthy Howley monkeys were used. The anesthetic protocol was administered via intramuscular. Five minutes after sedation, the animal was put on a table with thermal mattress where the following parameters were measured: cardiac and respiratory frequencies, rectal temperature, systolic arterial pressure and palpebral reflexes. These parameters were measured every 10 minutes. After 45 minutes of anesthesia a solution of NaCl 0.9% was administered to the control treatment, 25µg/kg of atipamezole for the ATI treatment, 0.5 mg/kg of yohimbine to the IOI treatment, atipamezole (25µg/kg) associated with naloxone (0.2 mg/kg) to the ATINALOX treatment and the IOINALOX treatment was composed of yohimbine (0.5 mg/kg) associated with naloxone (0.2 mg/kg), administered via intravenous in the primates' ulnar vein. After the reverser administration the animal was placed on a cage and the period of full recovery was evaluated by three researchers. The period of full recovery was determined from the antagonist administration until the patient's full recovery. The recovery was evaluated using scores that varied from zero (0) to three (3), accordingly to Galante, 2013. Some animals showed drooling after the intravenous administration of atipamezole and yohimbine. The association of methadone, dexmedetomidine and ketamine was effective to the chemical restraint of these animals allowing the performance of clinical procedures by up to 45 minutes. The IOINALOX treatment was the most effective regarding to time but the ATINALOX treatment gained the best recorvery / Doutor

O presente trabalho teve como objetivo estudar a influência de 8 compostos fenólicos de baixa massa molar, oriundos da degradação da lignina, sobre a fermentação de glicose a etanol, em meio semidefinido, utilizando-se as leveduras Saccharomyces cerevisiae PE-2 e de panificação. Esses compostos são formados quando o bagaço de cana-de-açúcar é pré-tratado, por explosão a vapor. Assim, p-hidroxibenzaldeído, vanilina, siringaldeído, ácido p-hidroxibenzoico, ácido vanílico, ácido siríngico, ácido cumárico e ácido ferúlico foram adicionados individualmente aos meios de fermentação. Objetivou-se, também, identificar e quantificar os produtos da bioconversão desses compostos pela S. cerevisiae PE-2, por cromatografia líquida seguida de espectrometria de massas. Os resultados mostraram que o p-hidroxibenzaldeído e o ácido p-hidroxibenzoico não foram tóxicos para ambas as cepas. Para a cepa PE-2, o siringaldeído e os ácidos cumárico e ferúlico também não apresentaram toxicidade. No caso da S. cerevisiae de panificação, a vanilina, o siringaldeído e o ácido vanílico (1,0 g.L-1) dificultaram o consumo de glicose, diminuíram a produtividade volumétrica (Qp) e aumentaram o desvio de glicose para ácido acético. Vanilina (1,0 g.L-1) aumentou o fator de conversão de glicose em células (YX/S). Os ácidos siríngico e ferúlico (1,0 g.L-1) e o ácido cumárico (0,6 e 1,0 g.L-1) diminuíram YX/S (~50%), aumentaram o desvio de glicose para glicerol, dificultaram o consumo de glicose e diminuíram Qp, tendo os ácidos cumárico e ferúlico apresentado o maior efeito inibitório. Para a S. cerevisiae PE-2, a presença da vanilina provocou a queda de Qp, devido à dificuldade inicial em consumir o substrato. Já os ácidos vanílico e siríngico foram bastante inibitórios, dificultando o consumo da glicose, diminuindo Qp e aumentando os desvios de glicose para a produção de glicerol e ácido acético. Os ácidos cumárico e ferúlico aumentaram o YX/S (~ 45 e 80%). Quanto à bioconversão dos compostos fenólicos pela levedura S. cerevisiae PE-2, apenas os ácidos que apresentam carboxila benzílica (ácidos p-hidroxibenzoico, vanílico e siríngico) não foram transformados. A cepa PE-2 transformou rapidamente os aldeídos, formando os respectivos ácidos e alcoóis (esses últimos, provavelmente, formados em maior extensão). Esta levedura também foi capaz de converter os ácidos cumárico e ferúlico, mas neste trabalho não foram identificados os produtos dessa transformação. Concluiu-se que os compostos afetaram mais a Qp do que YX/S. O fator de conversão de glicose em etanol não foi afetado por nenhum dos compostos. Alguns provocaram um maior desvio de glicose para a formação de glicerol. O desvio de glicose para ácido acético, nos meios aos quais se adicionou os aldeídos, acompanhou a bioconversão dos mesmos em seu produto de redução, preferencialmente. Este trabalho confirmou os dados da literatura de que a inibição dos processos fermentativos não depende apenas da natureza do composto, mas também de sua concentração e do tipo de micro-organismo. / The main objective of the present work was to investigate the influence of eight low molecular weight phenolic compounds, obtained from lignin degradation, in the fermentation of glucose to ethanol using S. cerevisiae PE-2 and the baker\'s yeast S. cerevisiae in a semi-defined medium. These compounds are originated from the pretreated sugarcane bagasse by steam explosion. Thus, 4-hydroxybenzaldehyde, vanillin, syringaldehyde, 4-hydroxybenzoic acid, vanillic acid, syringic acid, coumaric acid and ferulic acid were added separately in the fermentative media. Moreover, the bioconversion products of these molecules by S. cerevisiae were identified and quantified by high performance liquid chromatography and mass spectrometry. These results indicated that 4-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzoic acid were not toxic for both strain. Additionally, syringaldehyde and coumaric and ferulic acids were also not toxic for PE-2 strain. Vanillin, syringaldehyde and vanillic acid (at 1.0g.L-1) made the glucose consumption slower, reduced the volumetric productivity (Qp), increased the deviation of glucose to produce acetic acid for the baker\'s yeast S. cerevisiae system. Vanillin (at 1.0 g.L-1) increased the cellular mass yield. Syringic and ferulic acids (at 1.0g.L-1) and coumaric acid (at 0.6 and 1.0 g.L-1) highly inhibited the microbial growth (about 50 %), increased the deviation of glucose to produce the glycerol and made slower the glucose consumption, reducing Qp. Coumaric and ferulic acids were the greatest inhibitors compounds for the baker\'s yeast S. cerevisiae. For Saccharomyces cerevisiae PE-2, the presence of vanillin led to a Qp reduction, based on the initial difficult in substrate consumption. Vanillic and syringic acids were extremely inhibitory, making difficult the glucose consumption, reducing Qp and increasing both, glycerol and acetic acid production by deviation of glucose. Coumaric and ferulic acids increased the cellular yield (about 48 and 80 %). Concerning the bioconvertion of the phenolic acids by S. cerevisiae PE-2, only those molecules presenting the benzilic carboxyl group (4-hydroxybenzoic, vanillic and syringic acids) did not reacted. In contrast, aldehydes were rapidly transformed into their respective acids and alcohols (being this last one probably formed in greater amount). S. cerevisiae PE-2 was also capable to convert coumaric and ferulic acids, however, herein none products were identified. Thus, the compounds most affect ethanol productivity than the cellular mass yield. The ethanol yield was not affected by any of the compounds. Some of them led to a greater glucose deviation to produce glycerol and acetic acid. This work confirmed previously data published in the literature indicating that the inhibition of fermentative process did not depend exclusively on the compounds, but also its concentration and microorganism type.

O presente trabalho teve como objetivo estudar a influência de 8 compostos fenólicos de baixa massa molar, oriundos da degradação da lignina, sobre a fermentação de glicose a etanol, em meio semidefinido, utilizando-se as leveduras Saccharomyces cerevisiae PE-2 e de panificação. Esses compostos são formados quando o bagaço de cana-de-açúcar é pré-tratado, por explosão a vapor. Assim, p-hidroxibenzaldeído, vanilina, siringaldeído, ácido p-hidroxibenzoico, ácido vanílico, ácido siríngico, ácido cumárico e ácido ferúlico foram adicionados individualmente aos meios de fermentação. Objetivou-se, também, identificar e quantificar os produtos da bioconversão desses compostos pela S. cerevisiae PE-2, por cromatografia líquida seguida de espectrometria de massas. Os resultados mostraram que o p-hidroxibenzaldeído e o ácido p-hidroxibenzoico não foram tóxicos para ambas as cepas. Para a cepa PE-2, o siringaldeído e os ácidos cumárico e ferúlico também não apresentaram toxicidade. No caso da S. cerevisiae de panificação, a vanilina, o siringaldeído e o ácido vanílico (1,0 g.L-1) dificultaram o consumo de glicose, diminuíram a produtividade volumétrica (Qp) e aumentaram o desvio de glicose para ácido acético. Vanilina (1,0 g.L-1) aumentou o fator de conversão de glicose em células (YX/S). Os ácidos siríngico e ferúlico (1,0 g.L-1) e o ácido cumárico (0,6 e 1,0 g.L-1) diminuíram YX/S (~50%), aumentaram o desvio de glicose para glicerol, dificultaram o consumo de glicose e diminuíram Qp, tendo os ácidos cumárico e ferúlico apresentado o maior efeito inibitório. Para a S. cerevisiae PE-2, a presença da vanilina provocou a queda de Qp, devido à dificuldade inicial em consumir o substrato. Já os ácidos vanílico e siríngico foram bastante inibitórios, dificultando o consumo da glicose, diminuindo Qp e aumentando os desvios de glicose para a produção de glicerol e ácido acético. Os ácidos cumárico e ferúlico aumentaram o YX/S (~ 45 e 80%). Quanto à bioconversão dos compostos fenólicos pela levedura S. cerevisiae PE-2, apenas os ácidos que apresentam carboxila benzílica (ácidos p-hidroxibenzoico, vanílico e siríngico) não foram transformados. A cepa PE-2 transformou rapidamente os aldeídos, formando os respectivos ácidos e alcoóis (esses últimos, provavelmente, formados em maior extensão). Esta levedura também foi capaz de converter os ácidos cumárico e ferúlico, mas neste trabalho não foram identificados os produtos dessa transformação. Concluiu-se que os compostos afetaram mais a Qp do que YX/S. O fator de conversão de glicose em etanol não foi afetado por nenhum dos compostos. Alguns provocaram um maior desvio de glicose para a formação de glicerol. O desvio de glicose para ácido acético, nos meios aos quais se adicionou os aldeídos, acompanhou a bioconversão dos mesmos em seu produto de redução, preferencialmente. Este trabalho confirmou os dados da literatura de que a inibição dos processos fermentativos não depende apenas da natureza do composto, mas também de sua concentração e do tipo de micro-organismo. / The main objective of the present work was to investigate the influence of eight low molecular weight phenolic compounds, obtained from lignin degradation, in the fermentation of glucose to ethanol using S. cerevisiae PE-2 and the baker\'s yeast S. cerevisiae in a semi-defined medium. These compounds are originated from the pretreated sugarcane bagasse by steam explosion. Thus, 4-hydroxybenzaldehyde, vanillin, syringaldehyde, 4-hydroxybenzoic acid, vanillic acid, syringic acid, coumaric acid and ferulic acid were added separately in the fermentative media. Moreover, the bioconversion products of these molecules by S. cerevisiae were identified and quantified by high performance liquid chromatography and mass spectrometry. These results indicated that 4-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzoic acid were not toxic for both strain. Additionally, syringaldehyde and coumaric and ferulic acids were also not toxic for PE-2 strain. Vanillin, syringaldehyde and vanillic acid (at 1.0g.L-1) made the glucose consumption slower, reduced the volumetric productivity (Qp), increased the deviation of glucose to produce acetic acid for the baker\'s yeast S. cerevisiae system. Vanillin (at 1.0 g.L-1) increased the cellular mass yield. Syringic and ferulic acids (at 1.0g.L-1) and coumaric acid (at 0.6 and 1.0 g.L-1) highly inhibited the microbial growth (about 50 %), increased the deviation of glucose to produce the glycerol and made slower the glucose consumption, reducing Qp. Coumaric and ferulic acids were the greatest inhibitors compounds for the baker\'s yeast S. cerevisiae. For Saccharomyces cerevisiae PE-2, the presence of vanillin led to a Qp reduction, based on the initial difficult in substrate consumption. Vanillic and syringic acids were extremely inhibitory, making difficult the glucose consumption, reducing Qp and increasing both, glycerol and acetic acid production by deviation of glucose. Coumaric and ferulic acids increased the cellular yield (about 48 and 80 %). Concerning the bioconvertion of the phenolic acids by S. cerevisiae PE-2, only those molecules presenting the benzilic carboxyl group (4-hydroxybenzoic, vanillic and syringic acids) did not reacted. In contrast, aldehydes were rapidly transformed into their respective acids and alcohols (being this last one probably formed in greater amount). S. cerevisiae PE-2 was also capable to convert coumaric and ferulic acids, however, herein none products were identified. Thus, the compounds most affect ethanol productivity than the cellular mass yield. The ethanol yield was not affected by any of the compounds. Some of them led to a greater glucose deviation to produce glycerol and acetic acid. This work confirmed previously data published in the literature indicating that the inhibition of fermentative process did not depend exclusively on the compounds, but also its concentration and microorganism type.