Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-30Bitstream added on 2014-06-13T19:16:16Z : No. of bitstreams: 1 martins_t_me_botfmvz.pdf: 1373980 bytes, checksum: f2c744fca36213ab387227a01d3d9dc0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito das concentrações de progesterona no desenvolvimento folicular e a influência do diâmetro folicular e duração do proestro na concepção de novilhas púberes inseminadas após detecção de cio ou submetidas à IATF. No exp.1, 723 novilhas foram sincronizadas com o protocolo: D0: benzoato de estradiol (BE, 2,0 mg, Estrogin®) + CIDR®; D7: dinoprost trometamina (PGF2a, 12,5 mg, Lutalyse ). As novilhas foram distribuídas aleatoriamente no dia 0 para inserção de CIDR® sem utilização prévia (CIDR1) ou utilizado previamente por 18 dias (CIDR3) e retirada no dia 7 ou dia 9 seguido de detecção de cio e inseminação 12h após o cio. No exp.2, 1083 novilhas foram sincronizadas de acordo com o exp1, entretanto todos dispositivos foram removidos no dia 9 e os animais foram inseminados 48 h (0,5 mg, i.m., ECP® no dia 9), 54 ou 72 h (100 μg, im., Fertagyl® no dia da IATF). No exp.3 474 novilhas foram distribuídas aleatoriamente para receberem: D-1: 2mg de BE no grupo 3; D0: 1 e 2 mg de BE respectivamente nos grupos 1 e 2. Todas novilhas foram sincronizadas com CIDR1, receberam 12,5 mg de PGF2a no dia 7 e 0,5 mg de ECP no dia 9. No grupo 2 foi aplicado 200 UI de eCG no dia 9. As novilhas foram inseminadas 48 horas após a remoção do dispositivo, perfazendo assim 3 grupos experimentais: grupo 1 (1 mg de BE no D0), grupo 2 (200 UI de eCG no D9) e grupo 3 (CIDR por 10 dias). Nos exp.1 e 2 o diâmetro do maior folículo (ØFD) e amostras de sangue (P4) foram obtidas em um subgrupo de animais no dia 7 e dia 9. No dia da IA e IATF foi feita avaliação do ØFD em um subgrupo de animais no exp.3 e em todos animais no exp1 e 2. Amostras de sangue para dosagem de P4 foram colhidas 7 dias após a IA ou IATF em um subgrupo de animais do exp.1 e em todos animais nos... / The aim of this trial was to evaluate the effect of progesterone concentration in follicular development and influence of follicular diameter and length of proestrus in the conception rate of pos pubertal heifers inseminated after detection of estrus or submitted to TAI. In exp.1, 723 heifers were synchronized with the protocol: D0: estradiol benzoate (EB, 2.0 mg, Estrogin®) + CIDR®; D7: dinoprost trometamina (PGF2a, 12.5 mg, Lutalyse ). The heifers were randomly assigned on D0 for inserting CIDR® without prior use (CIDR1) or previously used for 18 days (CIDR3) and were withdraw on day 7 or day 9 followed by heat detection and insemination 12 hours after estrus. In exp.2, 1083 heifers were synchronized according to exp1, however all devices were removed in day 9 and the animals were inseminated 48h (0.5 mg, i.m., ECP® on day 9), 54 ou 72 h (100 μg, im., Fertagyl® on day TAI). In exp.3, 474 heifers were randomly assigned to receive: D-1: 2 mg of EB in group 3; D0: 1 and 2 mg of EB respectively in groups 1 and 2. All heifers were synchronized with CIDR1, received 12.5 mg of PGF2a on day 7 and 0.5 mg of ECP on day 9. In the group 2 was administered 200 UI of eCG on day 9. The heifers were inseminated 48 hours after device removal, so three experimental groups were formed: group 1 (1 mg of EB on D0), group 2 (200 UI of eCG on D9) and group 3 (CIDR for 10 days). In the exp.1 and 2 the diameter of the largest follicle (ØFD) and sample of blood (P4) were obtained of subset of animals on day 7 and day 9. On days of AI and TAI the diameter of the largest follicle (ØFD) was measured in the subset of animals in the exp.3 and all animals in the exp.1 and exp.2. Blood samples for P4 assays were harvested seven days after AI or TAI in subset of animals the exp.1 and all heifers the exp.2 and exp.3. Pregnancy diagnosis was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-15Bitstream added on 2014-06-13T19:17:39Z : No. of bitstreams: 1 avanzi_br_me_botfmvz.pdf: 301713 bytes, checksum: 920ca718618ae33debd22ce01fc1f970 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A utilização de sêmen criopreservado na reprodução de eqüinos depara-se com obstáculos como: variabilidade entre garanhões e ejaculados ao processo de criopreservação, taxas de prenhez inferiores ao sêmen fresco e refrigerado, manejo mais trabalhoso e oneroso das éguas e ausência de padrões de qualidade na distribuição e comercialização do sêmen. Neste trabalho foram realizados dois experimentos, no qual primeiramente, avaliou-se o efeito de diferentes concentrações espermáticas em palhetas de 0,5 mL (100, 200 e 400 x 106 de espermatozóides totais/mL) sobre algumas variáveis de qualidade seminal pós-descongelação como: parâmetros de cinética espermática através de análise computadorizada, integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica. Posteriormente, realizou-se um estudo comparativo entre a inseminação pós-ovulação e a inseminação em tempo pré-determinado, avaliando-se os resultados de concepção e acúmulo de fluido intra-uterino pós-inseminação. Ao empregar a metodologia de inseminação pós-ovulação, realizou-se uma única inseminação dentro do intervalo de até 6 horas pós-ovulação com 800x106 de espermatozóides totais e para o método programado, realizaram-se duas inseminações após 24 e 40 horas pós-indução da ovulação, com 400x106 de espermatozóides totais cada. Foi observado efeito significativo da concentração espermática (p<0,05) sobre algumas variáveis de cinética espermática como: motilidade total, motilidade progressiva, velocidade ao longo de uma trajetória média, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, freqüência de batimento flagelar e espermatozóides rápidos, com superioridade para a criopreservação em concentrações mais baixas. No entanto, para as variáveis de integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica não foram... / The cryopreserved semen application in equine reproduction appears with obstacles as variability between stallions and ejaculates at the cryopreservation process, lower pregnancy rates compared to the fresh and cooled semen, harder and onerous mares’ management and absence of quality pattern in distribution and semen commercialization. In this study were realized two experiments which one, firstly, was evaluated the effect of different sperm concentrations in straws of 0.5 mL (100, 200 and 400x106 total sperm/mL) over some variables of seminal quality after thaw as: parameters from sperm kinetics by computer analysis, plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation. Subsequently, it was realized a comparative study between the insemination after ovulation and the insemination in fixed-time, evaluating the results of conception and intrauterine fluid collection after insemination. When the methodology of insemination after ovulation was employed, it was realized a single insemination during the interval of 6 hours after ovulation with 800x106 total spermatozoa and for the programmed method, two inseminations with 400x106 doses of total spermatozoa each one, were done after 24 and 40 hours after induction of ovulation. It was observed significant effect from sperm concentration (p<0,05) over some variables of sperm kinetics like: total motility, progressive motility, velocity in the average path velocity, straight line velocity, curvilinear velocity, beat cross frequency and rapid spermatozoa, with superiority for cryopreservation in lower concentrations. However, for the variables of plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation were not observed significant effects. In respect to the insemination methods, it was not observed significative effect (p<0.05) over the pregnancy rates between one insemination after ovulation and two inseminations... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:59:35Z : No. of bitstreams: 1 fioratti_eg_me_botfmvz.pdf: 886721 bytes, checksum: 138629ffeb23e3040d4251bc7120ebe1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi verificar a influência da adição de antiinflamatórios esteróides (AIES) ao diluidor seminal na motilidade e funcionalidade espermática e a eficiência da dexametasona na imunomodulação da resposta inflamatória após a cobertura. A dexametasona foi selecionada entre quinze diferentes AIES. Foram analisadas a motilidade (CASA), a integridade da membrana plasmática e acrossomal e o potencial da membrana mitocondrial dos espermatozóides nos momentos zero, 30, 60 e 120 minutos após a diluição. A intensidade da reação inflamatória provocada pelo sêmen foi mensurada em éguas resistentes e susceptíveis à endometrite persistente pós cobertura utilizando exame ultrassonográfico e citologia exfoliativa do útero, concentração de neutrófilos e de óxido nítrico do fluído uterino e taxa de recuperação embrionária. Dentre os AIES testados a dexametasona foi a que apresentou menor efeito deletério sobre as caracteísticas de motilidade e na morfofuncionalidade espermática. Quinze éguas resistentes e 15 susceptíveis à endometrite persistente após cobertura foram submetidas ao tratamento com dexametasona sistêmica e intra uterina adicionada ao diluidor de sêmen. As éguas susceptíveis apresentaram resposta inflamatória mais intensa durante as primeiras 8 horas após a inseminação artificial (p<0,05), porém, após 24 horas as concentrações de óxido nítrico foram semelhantes entre as éguas resistentes e susceptíveis, apesar das éguas susceptíveis manterem a reação inflamatória mais intensa até esse momento (p<0,05). As taxas de recuperação embrionária foram maiores para as éguas resistentes do que para as susceptíveis (p<0,05). Os tratamentos com dexametasona não se mostraram eficazes na imunomodulação da resposta inflamatória induzida pela cobertura / The objective of this study was to assess the influence of the addition of anti-inflammatory steroids (AIS) in the seminal extender in sperm viability and functionality, and efficiency of dexamethasone on immune modulation of inflammatory response after mating. Dexamethasone was selected from fifteen different AIS. Motility, membrane and acrosomal integrity and mitochondrial membrane potential of spermatozoa in moments 0, 30, 60 e 120 minutes after dilution were analyzed. The intensity of the inflammatory reaction caused by sperm was measured in resistant and susceptible mares using ultrasound examination and exfoliative cytology of the uterus, concentration of neutrophils and nitric oxide in uterine fluid and rate of embryo recovery. Among the AIS tested dexamethasone maintained the sperm motility parameters and did not show any deleterious effects on sperm structure and function (p>0.05). Fifteen mares resistant and 15 susceptible to post-breeding endometritis were subjected to treatment with dexamethasone systemic and intra uterine added to the semen extender. Susceptible mares showed more severe inflammatory response during the first 8 hours after artificial insemination (p<0.05), while 24 hours after mating the concentrations of nitric oxide were similar between resistant and susceptible mares, despite the fact that susceptible mares presented inflammatory reaction more intensive in this moment (p<0.05). The embryo recovery rates were higher for mares resistant compared to susceptible (p<0.05). Treatments with dexamethasone were not effective in the immunomodulation of the inflammatory response induced by mating

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-12Bitstream added on 2014-06-13T20:38:45Z : No. of bitstreams: 1 iwamura_j_me_botfmvz.pdf: 434455 bytes, checksum: ddccafed0c8a8b01cf8b0ac42dc74c37 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se avaliar protocolos de sincronização do estro e da ovulação, com esponja impregnada de acetato de medroxiprogesterona (MAP), mantida por diferentes períodos (G – grupo - I e GII – 6 dias, GIII e GIV – 9 dias e GV e GVI – 13 dias) e associado a duas dosagens de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG, GII, GIV e GVI – 350UI e GIII, GV e GVI – 500UI). Assim, ovelhas da raça Santa Inês (n=53) receberam pessários intra-vaginais de MAP, com administração do eCG no momento da retirada. A inseminação foi realizada 48 horas após a retirada dos pessários, pela via cervical superficial, empregando-se sêmen fresco. A taxa de gestação foi determinada através da ultra-sonografia 60 dias após a inseminação. A progesterona plasmática foi determinada através de radiomunoensaio. As taxas de estro e prenhez nos grupos GI, GII, GIII, GIV, GV e GVI foram, respectivamente, 90% e 30 %; 100% e 33,3%; 100% e 33,3; 20% e 20%; 100% e 37,50 % e 80% e 40%. Foi observada diferença estatística quanto ao número de ovelhas em estro (P<0,05), mas a taxa de prenhez entre os grupos foram semelhantes. No momento da retirada do pessário, a concentração de progesterona foi superior (P<0,05) para os grupos de nove dias (GII e GV). Conforme os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que a dosagem de eCG não influenciou os resultados obtidos e que o protocolo de curta duração pode ser utilizado com eficácia semelhante ao de longa duração, para a sincronização de estro das ovelhas. / The aim was to analyze the estrous and ovulation synchronization´s protocols, with medroxyprogesterone acetate (MAP), maintained by different periods (G – group - I and GII - 6 days, GIII and GIV - 9 days and GV and GVI - 13 days) and linked to two doses of equine chorionic gonadotropin (eCG, GII, GIV and GVI - 350UI and GIII, GV and GVI- 500UI). Thus, Santa Ines sheep breed (n=53) received intravaginal pessaries of MAP, with administration of eCG at the time of withdrawal. The insemination was performed 48 hours after the withdrawal of pessaries, through superficial cervical, using fresh sperm. The pregnancy rate was determined by ultrasound 60 days after insemination. The progesterone plasma was determined by radiomunoensaio. The rate of estrus and pregnancy in groups GI, GII, GIII, GIV, GV and GVI were respectively, 90% and 30%; 100% and 33.3%; 100% and 33.3; 20% and 20%; 100% and 37.50% and 80% and 40%. The number of ewes in estrus was a statistical difference in (P< 0.05) , but the pregnancy rates between the groups were similar. At the time of withdrawal of the pessaries, the concentration of progesterone was higher (P <0.05) for groups of nine days (GII and GV). It was concluded that the strength of eCG did not influence the results and that the protocol of short duration can be used with similar efficacy to the long-term for the synchronization of estrus of sheep.

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Coorientador: Jacira Neves da Costa Torreão / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Carlo Aldrovandi Torreão Marques / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Resumo: O objetivo geral do estudo foi avaliar o desempenho reprodutivo e produtivo de ovelhas deslanadas das raças Santa Inês (SI) e Morada Nova (MN) criadas em regime de pasto e suplementadas. Para isto o trabalho foi dividido em três experimentos apresentados na forma de capítulo. O primeiro capítulo teve como objetivo verificar a eficiência reprodutiva destas ovelhas após serem submetidas a "flushing", a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e repasse com monta natural durante estação de monta de 75 dias. Neste experimento foram utilizadas 27 ovelhas SI e 24 MN, as quais permaneceram em pasto de Andropogon gayanus com suplementação média de 1% do peso vivo fornecida em cochos coletivos. Dois rufiões foram utilizados para observação de estro e dois reprodutores Dorper para a inseminação e repasse. Após 30 dias do início da suplementação as ovelhas foram sincronizadas com protocolo hormonal a base de progestágeno, eCG e cloprostenol. A apresentação de estro foi observada 12, 24, 36 e 48h e a IATF foi realizada 56h após o final do protocolo hormonal. Foi realizado repasse com monta natural dos 15 aos 45 dias e diagnóstico de prenhez aos 70 dias após IATF. A taxa de estro após sincronização hormonal, de prenhez e de partos múltiplos, foram testadas quanto aos efeitos da raça, semana de suplementação e classe de escore corporal (1,0-2,0, 2,5-3,0 e ≥3,5) pelo teste exato de Fisher (p<0,05). O segundo capítulo teve como objetivo avaliar o efeito de dois níveis de suplementação concentrada (0,5 e 1,5% do peso vivo) fornecidos individualmente para 10 ovelhas prenhes de cada raça durante a metade final da gestação e lactação (75 dias) sobre o desempenho reprodutivo e produtivo das ovelhas. Sendo assim, foram analisados o peso e escore da condição corporal (ECC) das ovelhas, o peso dos cordeiros, a eficiência de produção... (Resumo completo, clicar acesso eletrôni / Abstract: The overall objective of this study was to evaluate the reproductive and productive performance of Santa Inês (SI) and Morada Nova (MN) ewes created the pasture and supplemented. For this the work was divided into three experiments exposed as chapter. The first chapter was to verify the reproductive efficiency of these ewes after being subjected to "flushing", the fixed-time artificial insemination (TAI) and pass with natural mating during the breeding season of 75 days. In this experiment we used 27 SI and 24 MN ewes, which remained in pasture supplementation with Andropogon gayanus average of 1% of body weight provided in troughs collective. Two vasectomized rams were used for estrus observation of and two Dorpers breeders for insemination and natural breeding. After 30 days starting supplementation ewes were synchronized with hormone protocol based at progestin, eCG and cloprostenol. The onset of estrous was observed 12, 24, 36 and 48h and 56h TAI was performed after the end of hormonal protocol. Ewes was exposed to rams for natural mating from 15 to 45 days and pregnancy diagnostic was 70 days after TAI. The rate of estrous after hormonal protocol, pregnancy and multiple births, were tested for the effects of breed, weeks of supplementation and body condition score (1.0-2.0, 2.5 to 3.0, and ≥3.5) by Fisher's exact test (p<0.05). The second chapter aimed to evaluate the effect of two levels of concentrate supplementation (0.5 and 1.5% of body weight) provided individually for 10 pregnant ewes of each breed during the latter half of pregnancy and lactation (75 days) on productive and reproductive performance of ewes. Therefore, we analyzed the weight and body condition score (BCS) of the sheep, the weight of the lambs, the efficiency of lamb production, productivity at birth and at weaning... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Gonçalves Franco Júnior / Banca: Anice Maria Vieira Camargo Martins / Banca: Edson Borges / Banca: Jorge Nahas Filho / Banca: Ana Lúcia Kalinin / Resumo: Nas últimas décadas, alguns parâmetros laboratoriais têm sido propostos para identificar o potencial de saúde oocitária em Reprodução Assistida: 1. Maturidade nuclear e citoplasmática (pesquisa); 2. Dismorfismo (anomalias intracitoplasmáticas); 3. Fertilizaçao. Habitualmente, esses parâmetros (exceto a maturação citoplasmática) são avaliados pelo simples emprego de sistemas de microscopia de luz convencional. Nos últimos oito anos, foram relatados diversos estudos em oócitos humanos sobre a birrefringência da zona pelúcida (BF-ZP), a espessura da ZP, e a visualização do fuso meiótico (FM). Entretanto, ainda é discutível o poder desses novos parâmetros na seleção de óvulos com o pontecial de originar embriões com taxas de implantação elevadas, além disso, seu sistema de visualização e quantificação é complexo e dispendioso. O objetivo deste estudo foi investigar uma possível correlação entre esses parâmetros tradicionais com a BF-ZP, espessura da ZP e o FM. Dessa forma, um total de 73 pacientes que participaram do programa de injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) no Centro de Reprodução Humana "Prof Franco Júnior" tiveram seus óvulos avaliados quanto a maturação nuclear (n=83), maturação citoplasmática (n=29), dismorfismo (n=280) e fertilização (n=216) sendo os resultados correlacionados com a imagem do FM (presença ou ausência), a intensidade da BF-ZP (positiva ou negativa) e a espessura da ZP. Os dados finais revelaram uma fraca correlação entre a maturação, o dismorfismo e a fertilização oocitária com a imagem do FM, a intensidade da BF-ZP, e a espessura da ZP. Entretanto, esses parâmetros poderiam ser responsáveis por identificar pontos biológicos diferentes do potencial de qualidade oocitária. Assim sendo, seria uma medida coerente, a utilização desses parâmetros, em forma conjunta, através de um escore de qualidade oocitária. / Abstract: During the last decades, three laboratorial parameters have been proposed to identify the potential of the oocyte quality in ART: 1- Nuclear and cytoplasmic maturation; 2-Dysmorphims (intracytoplasmic abnormalities); 3 - Fertilization. These parameters (except the cytoplasmic maturation) are assessed by a simple system of conventional light microscopy. In the last eight years, numerous studies about zona pellucida birefringence (BF-ZP), zona pellucida thickness and meiotic spindle visualization have been reported. However, it is still controversial the power of these parameters in selecting oocyte with potential to develop into implantation-competent embryos. Furthermore, the microscopy system is complex and expensive. The present study aims to evaluate whether there is any correlation between the classical parameters with BF-ZP, ZP thickness and spindle image. A total of 73 patients who participated in an ICSI program had their oocytes evaluated such nuclear maturation (n=83), cytoplasmic maturation (n=29), dysmorphism (n=280) and fertilization (n=216) being its results correlated to the spindle image (presence or absence), BF-ZP intensity (positive or negative) and ZP thickness. The final results showed a low correlation between maturation, dysmorphism and fertilization compared to spindle image and ZP characteristics (BF-ZP, ZP thickness). However, these factors can be responsible to identify specific biological differ from the oocyte potential. Concluding, the use of these factors in association, as a score (oocyte quality score), could be the correct evaluation. / Doutor

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Eduardo Malschitzky / Resumo: A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / Abstract: In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Luciano Andrade Silva / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Um grande fator limitante dos programas de transferência de embrião é o número de receptoras disponíveis durante a estação de monta. A aspiração de folículos ≥25mm promove a formação de uma estrutura lútea capaz de produzir progesterona em concentrações semelhantes ao diestro (>2ng/ml). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a formação lútea de folículos ≥25mm aspirados, o útero e a taxa de prenhez destes animais após a inovulação. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos: grupo controle (indução da ovulação com 2500 UI de hCG), grupo aspiração (aspiração do folículo ≥25mm) e hCG+aspiração (aplicação de 2500 UI de hCG 24h antes da aspiração de folículo ≥25mm). Cada égua foi acompanhada ultrassonograficamente para detecção da ovulação, aplicação de 7,5mg de PGF2α cinco dias após a ovulação para indução da luteólise e para determinação do momento da aspiração. O experimento foi dividido em: fase 1 - dosagens de progesterona intrafoliculares e plasmáticas e avaliação ultrassonográfica por modo B e Power Doppler das estruturas lúteas e útero; fase 2 - teste de fertilidade. As concentrações de P4 intrafoliculares foram maiores para os folículos aspirados com diâmetros maiores e a aplicação prévia do hCG aumentou estas nos folículos entre 25-29mm, bem como, a resposta ao tratamento. A aspiração folicular promoveu aumento nas concentrações de P4 plasmáticas a concentrações semelhantes ao diestro (≥2ng/mL), no entanto, as estruturas formadas a partir da aspiração apresentam luteinização mais lenta. O aumento da P4 plasmática foi capaz de promover alterações uterinas semelhantes ao diestro espontâneo e taxa de 43% de prenhez foi atingida com as éguas aspiradas. Conclui-se que a aspiração de folículos ≥25mm pode ser uma opção para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The major limiting factor of embryo transfer programs is the number of available recipient mares during the breeding season. The aspiration of follicles ≥25 mm leads to the formation of a structure capable of producing progesterone at concentrations similar to diestrus (> 2ng/ml). The present work aims to evaluate the luteal structure from ablation of follicles ≥25mm, uterine conditions and pregnancy rates after embryo transfer. Mares were randomly assigned into three groups: control group (ovulation induction with 2500 IU hCG), ablation group (follicle ≥25mm ablation) and hCG + ablation (2500 IU of hCG injection 24h before ablation of follicle ≥25mm ). Each mare was monitored by ultrasound for detection of ovulation and the determination of the time of ablation. A 7.5 mg dose of PGF2α was administered five days post ovulation to induce luteolysis. The experiment was divided into: phase 1 - intrafollicular plasma progesterone measurement and ultrasound evaluation by B-mode and power Doppler of luteal structures and uterus; phase 2 - fertility test. Concentrations of intrafollicular P4 were greater for larger follicles and hCG was efficient on increasing these levels on follicles 25-29mm, as well as increasing its response to treatment. Follicular ablation induced an increase in P4 plasma concentrations to values similar to diestrus (≥ 2ng/ml), however, the formed structures showed a delay on the luteinisation process. The increase in plasma P4 was able also to promote changes in the uterus that were similar to diestrous and these mares showed a 43% pregnancy rate. In conclusion, ablation of follicles ≥25mm can be an option for programs with limited number of recipients, however, more studies are still needed to explain ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Flavia Thomaz Verechia Pereira / Banca: Cristiana Andrighetto / Banca: Vanessa Gomes Ueno / Resumo: A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / Abstract: The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ... / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Mario Binelli / Resumo: O presente estudo avaliou se a concentração de P4 durante o desenvolvimento do folículo ovulatório em protocolo a base de P4/BE e com uma aplicação de GnRH em seu início interfere na prenhez à IATF em vacas Holandesas em lactação. A hipótese é que vacas com maior P4 no dia da aplicação da 1ª dose de PGF2α terão maior fertilidade. Para alterar a P4 os animais (n=594) foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos para receberem um ou dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brasil). O protocolo utilizado foi: no d-11 inserção de 1 CIDR (novo ou previamente usado por 9 dias) + aplicação de 2mg i.m. de BE (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brasil) + 100mcg i.m. de GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brasil); d-4, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost + 1mg i.m. de ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brasil) + retirada do dispositivo de P4; d0, IATF. Os animais do grupo 2CIDR receberam um CIDR adicional no d-11, o qual foi retirado no d-4. Nos d-11 (n= 117), d-4 (n= 351), d0 (n= 214) e d10 (n= 72) foram colhidas amostras de sangue para determinação da concentração de P4. A P/IA foi determinada através de US nos d32 (DG1) e d60 (DG2). Dados binários foram analisados pelo PROC GLIMMIX, e os dados contínuos pelo PROC MIXED do SAS (foi considerada diferença significativa se P<0,05 e tendência se P<0,1). A P4 não diferiu entre os tratamentos no d-11 (1CIDR= 4,2±0,4 ng/ml; 2CIDR= 4,5± 0,4ng/ml; P>0,1), e no d-4 (1CIDR= 3,5±0,2ng/ml; 2CIDR= 3,8±0,2 ng/ml; P>0,1), porém foi detectada interação entre tratamento e presença de CL no início do protocolo na P4 no d-4 (sem presença de CL e 1CIDR= 2,7±0,3ng/ml; 2CIDR= 3,6±0,3ng/ml, com presença de CL e 1CIDR= 4,3±0,3ng/ml; 2CIDR= 4,0±0,3ng/ml; P<0,05). Não houve diferença na prenhez a IATF e nas perdas gestacionais entre os tratamentos [DG1: 1CIDR= 20,0 ... / Abstract: The present study evaluated if P4 concentration during ovulatory follicle development in a timed artificial insemination (TAI) protocol based on P4/E2 affects pregnancy per AI in lactating Holstein cows. Our hypothesis is that cows that present higher P4 concentration at PGF2α administration have also higher fertility. To alter P4, animals (n=594) were randomly assigned to receive one or two intravaginals devices of P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brazil). TAI protocol utilized was: d-11 intravaginal device of P4 (new or previously used by 9 days) + 2mg im EB (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brazil) + 100mcg im GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brazil); d-4, 25mg im Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brazil); d-2, 25mg im Dinoprost + 1mg im ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brazil) + CIDR removal; d0, TAI. Animals in the group 2CIDR received an adicional CIDR at d-11, which was removed at d-4. At d-11 (n=117), d-4 (n=351), d0 (n=214) and d10 (n=72), blood samples were taken from cows for P4 concentration measurements. Pregnancy per AI was determined by ultrasound at d32 (DG1) and d60 (DG2). The binomial data were analyzed using PROC GLIMMIX and continuous data using PROC MIXED of SAS. An effect was considered significant when P<0.05 and tendency when P<0.1. P4 did not differ among treatments at d-11 (1CIDR=4.2±0.4ng/ml; 2CIDR=4.5±0.4ng/ml; P>0.1), and at d-4 (1CIDR=3.5±0.2ng/ml; 2CIDR=3.8±0.2 ng/ml; P>0.1). An interaction was detected between treatment and CL presence at the beginning of TAI protocol in P4 at d-4 (without CL and 1CIDR=2.7±0.3ng/ml; 2CIDR= 3.6±0.3ng/ml, with CL and 1CIDR=4.3±0.3ng/ml; 2CIDR= 4.0±0.3ng/ml; P<0.05). There was no difference among treatments in pregnancy per AI and pregnancy loss between DG1 and DG2 [DG1: 1CIDR= 20,0% (81/310) vs. 2CIDR= 15,7% (65/284); DG2: 1CIDR= 18,2% (74/310) vs. 2CIDR= 13,8% (57/283); Pregnancy loss: 1CIDR= 14,1% (7/81) vs. 2CIDR= 11,5% (7/64); P>0,1]. 37,0% (28/63)... / Mestre