Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Luiza Silva Almeida (luizaalmeida@bce.unb.br) on 2013-07-31T19:05:31Z No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-31T20:42:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-31T20:42:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / O sucesso da utilização da maioria das técnicas de reprodução assistida (TRA) depende da disponibilidade de ovócitos saudáveis e no estágio adequado para seu uso. Como um dos fatores limitantes na utilização das TRAs é a disponibilidade de ovócitos competentes, é importante buscar alternativas para auxiliar esses ovócitos melhorando com isso a eficiência dessas técnicas. O objetivo deste trabalho foi testar dois diferentes sistemas de maturação, o sistema SPOM (Simulated Physiological Oocyte Maturation) e a retenção meiótica na presença de ITS (Insulina-transferrina-Selênio), para aumentar a competência do ovócito e consequentemente incrementar a produção de embriões in vitro. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro, sendo que os provenientes de folículos de 1-3 mm foram dissecados da córtex ovariana e os de 3-8 mm, obtidos por punção folicular. Para a avaliação dos estágios de maturação nuclear, os ovócitos foram corados com lacmóide e para verificar o efeito dos sistemas de MIV na produção de embriões, foi avaliada a taxa de clivagem, blastocisto, tamanho dos embriões e número total de células. O corante azul de Trypan foi utilizado para verificar a viabilidade das células do cumulus após a retenção. Os dados de taxa de maturação nuclear e desenvolvimento embrionário foram avaliados pelo teste do χ 2 , e os dados referentes a tamanho e número de células pelo teste de Kruskar-Wallis. O primeiro sistema de maturação a ser testado foi o sistema SPOM em ovócitos de folículos aspirados, com a dose 0,01 UI/ml de FSH, utilizada na MIV convencional, onde as taxas de clivagem, D7 e D8 foram drasticamente reduzidas (P<0,05) quando comparadas com as do grupo controle. O aumento da dose de FSH para 0,1 UI/ml, no sistema SPOM, em ovócitos obtidos de folículos de 1-3 mm não aumentou a produção de embriões (P0<0,05), entretanto em ovócitos obtidos de folículos de 3-6 mm teve efeito prejudicial, sendo as taxas de clivagem e blastocistos inferiores (P<0,05) as do grupo controle Da mesma forma, quando o SPOM foi utilizado na presença de FSH recombinante (FRSr), de BSA como suplemento dos meios e o cultivo realizado sob baixa tensão de O2, uma redução (P<0,05) na taxa de blastocisto foi observada, mas o tamanho e número de células dos embriões foram semelhantes (P>0,05) aos do controle. A segunda alternativa testada foi o uso da cilostamida, inibidor da PDE3, e ITS no cultivo de pré-maturação por 8 e 24 horas. Na concentração de 20µM, a cilostamida reteve 91% dos ovócitos em VG por até 24 horas, entretanto o desenvolvimento embrionário destes embriões foi comprometido, com baixas taxas de clivagem e de embriões em D7 (P<0,05). Foi também avaliada a diminuição da concentração de cilostamida durante o bloqueio e a presença do ITS. Foi observado que a redução da concentração de cilostamida associada ao período menor de retenção causou um aumento da produção de blastocisto semelhante às taxas obtidas para o controle e que o ITS não afetou (P>0,05) à resposta dos ovócitos a retenção com cilostamida. Conclui-se que o sistema SPOM utilizando FSHr, BSA e baixa tensão de O2 afetou o desenvolvimento embrionário. Além disso, a cilostamida quando utilizada para bloquear a meiose tem efeito deletério nos ovócitos e células do cumulus se utilizada por 24 horas na concentração de 20 μM. A menor concentração (10μM) e menor tempo de exposição (8 horas) pode amenizar esse efeito, mas também não causa nenhum incremento na produção de embriões. A presença de ITS durante o bloqueio não afeta a produção de embriões. Mais estudos devem ser realizados na tentativa de utilizar a retenção para incrementar a qualidade de ovócitos utilizados para as TRAs. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The successful use of most assisted reproductive techniques (ART) depends on the availability of healthy and competent oocytes. Considering that one of the limiting factors for using ART's is the availability of good quality oocytes, it is important to find new alternatives which could help those oocytes and then improving the efficiency of these biotechnology. The aim of this study was to test two different maturation systems, the SPOM (simulated physiological oocyte maturation) methodology and the meiotic inhibition in the presence of ITS (Insulin-Transferrin- Selenium), to improve oocyte competence and consequently, the in vitro embryos production. Oocytes were obtained from slaughter house ovaries, being those from follicles from 3-8 mm diameter were obtained by aspiration and those from 1-3mm follicles by dissection. To evaluate maturational stage oocytes were stained with lacmoid, and to verify the effect of maturation system on in vitro embryos production cleavage rate, blastocyst at D7 and D8 rates, embryo size and total cell number were used. The trypan blued stain was used to evaluate cumulus cells viability after meiotic inhibition. Data of nuclear maturation and embryo development were evaluated by the χ2 test and those of embryo size and total cell number by Kruskar-Wallis test. At first, SPOM system was tested in aspirated oocytes, with 0.01 IU/ml of FSH, used in conventional IVM, where rates of cleavage, D7 and D8 were drastically reduced compared to control (P<0.05). Increasing the dose of FSH to 0.1 IU/ml in the SPOM system did not affect (P<0.05) the results and embryos production remained low. When oocytes from follicles of 1- 3 mm were used, although the embryo rate was low for both group, no effect of SPOM system was observed. However, when recombinant FSH (FSHr) was associated with BSA instead of FCS and culture was performed under low oxygen a reduction (P<0.05) on blastocyst rates were observed, but the size and total cell number were similar to the control (P>0.05). The second alternative to be tested was the use of cilostamide, an inhibitor of PDE3A, associated with ITS on pre- maturation culture for 8 and 24 h. Cilostamide concentration of 20μM retained 91% of oocytes in GV for 24 hours, however, embryonic development and quality of these embryos were compromised presented lower cleavage and blastocyst rates than the control (P<0.05). Decreasing cilostamide concentration and the presence of ITS associated with lower period of meiotic inhibition was also evaluated. It was observed that lower concentration (10µM) during less time of inhibition (8h) caused an increase in embryo production being the rates similar to the control (40.7% vs 51.8%) and that ITS had no effect (P>0.05) oocyte response to cilosminde inhibition. It can be concluded that SPOM using FSHr, BSA and low O2 tension does not affect embryo development. In addition, cilostamide had a deleterious effect in oocytes and cumulus cells when used for 24 h at 20 μM concentration to inhibit meiosis. Lower concentration (10μM) with less time of exposure (8 hours) eliminated the deleterious effect but did not increase embryo production. More studies are needed to establish the use of meiotic inhibition associated with other substances to improve oocyte quality to be use on ART’s.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:11:40Z No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-30T21:05:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T21:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) Previous issue date: 2018-08-27 / A pecuária de corte moderna dispõe de diversas ferramentas a serem utilizadas na busca de maior eficiência econômica. Tal eficiência pressupõe uma maior produtividade de bezerros desmamados por hectare, além, da busca incessante de agregar um maior número de arrobas produzidas por hectare, para que a pecuária se torne tão competitiva quanto a agricultura. A fim de buscar um incremento nos índices de prenhez dentre as fêmeas bovinas trabalhadas com protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), o uso da Inseminação Artificial Intracornual pode ser utilizada como uma ferramenta para este fim. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência do uso desta técnica em vacas Nelore pluríparas não lactantes e suas correlações com as respectivas taxas de prenhez. Foram sincronizadas 400 fêmeas para o trabalho, sendo divididas em 2 grupos com 200 animais cada (grupo 1 e grupo 2). O grupo 1 foi trabalhado em um dia e o grupo 2 no dia seguinte, seguindo esta ordem em todos os manejos do protocolo hormonal. Todos os animais do experimento receberam o mesmo protocolo; no dia 0 foi inserido um dispositivo intravaginal novo com 1 g de progesterona (Sincrogest®, Ouro Fino, Brasil) e aplicação por via intramuscular de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brasil). No dia 8 os dispositivos foram retirados e aplicado simultaneamente 1 mg de cipionato de estradiol (SincroCP®, Ourofino, Brasil); 0,526 mg de Cloprostenol Sódico (Sincrocio®, Ouro Fino, Brasil), 300 UI de eCG (SincroECG®, Ourofino, Brasil). A inseminação foi realizada a partir de 48 horas após a retirada do dispositivo intravaginal. Antes da realização da inseminação, os ovários das vacas foram avaliados por meio de ultrassom (Sonoscape A5VET, transdutor linear 7MHz, China); fêmeas com folículo pré-ovulatório menor que 11,0 mm ou sem folículo dominante foram descartadas do trabalho. Fêmeas com folículos maiores ou iguais a 11,0 mm eram inseminadas alternadamente, no corpo ou corno uterino, de modo que cada lote ficou composto por 50 fêmeas inseminadas no corpo e 50 no corno uterino, perfazendo um total de 100 animais para o grupo 1 e 100 animais para o grupo 2. O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a inseminação artificial. Utilizou-se a estatística descritiva seguida pelo teste de normalidade D' Agostino-Pearson omnibus, seguido do teste Chi-quadrado para comparação entre dois grupos no programa GraphPad Prism ® 6. Os dados estão expressos em média ± desvio padrão da média, e P ≤ 0.05 considerado significativo. Entre as fêmeas que foram inseminadas no método convencional (inseminação no corpo do útero logo após a passagem da cérvix), a taxa média de gestação foi de 59,0% e no método experimental (deposição do sêmen dentro do corno uterino), a taxa média de gestação foi de 54,0%, não havendo diferença estatística entre os grupos (P>0,05). / The modern herd livestock has several tools to be used in the search for greater economic efficiency. Such efficiency presupposes a higher productivity of weaned calves per hectare, in addition to the incessant search to aggregate a larger number of kilograms per hectare, so that livestock farming becomes as competitive as agriculture. In order to increase the pregnancy rates among bovine females treated with IATF protocols, the use of Intracornual Artificial Insemination can be used as a tool for this purpose. The objective of the present study was to evaluate the efficiency of the use of this technique in non-lactating pluriparous Nelore cows and their correlations with the respective pregnancy rates. 400 females were synchronized for the work; divided into 2 groups with 200 animals each (group 1 and lot 2). Group 1 was worked on one day and group 2 the next day, following this order in all managements of the hormonal protocol. All animals in the experiment received the same protocol; on day 0 a new intravaginal device with 1 g of progesterone was inserted (Sincrogest®, Ouro Fino, Brazil) and intramuscular application of 2 mg of Estradiol Benzoate (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brazil). On day 8 the devices were removed and simultaneously applied 1 mg of estradiol cypionate (SincroCP®, Ourofino, Brazil); 0.526 mg Cloprostenol Sodium (Sincrocio®, Ouro Fino, Brazil), 300 IU of eCG (SincroECG®, Ourofino, Brazil). Insemination was performed 48 hours after the remotion of the intravaginal device. Prior to insemination, cow ovaries were evaluated by ultrasound (Sonoscape A5VET, 7MHz linear transducer, China); females with preovulatory follicles smaller than 11.0 mm or without dominant follicle were discarded from work. Females with a follicle greater than or equal to 11.0 mm were inseminated alternately in the uterine body or horn, so that each group was composed of 50 cows inseminated in the body and 50 in the uterine horn, making a total of 100 cows for group 1 and 100 cows for group 2. The diagnosis of gestation was performed 30 days after artificial insemination. Descriptive statistics were used followed by the D 'Agostino-Pearson omnibus normality test, followed by the Chi-square test for comparison between two groups in the GraphPad Prism ® program. Data are expressed as mean ± standard deviation of the mean, and P ≤ 0.05 considered significant. Among the females that were inseminated in the conventional method (insemination in the body of the uterus shortly after the passage of the cervix), the mean pregnancy rate was 59.0% and in the experimental method (deposition of semen within the uterine horn), the rate mean of gestation was 54.0%, there being no statistical difference between the groups.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-04Bitstream added on 2014-06-13T20:37:15Z : No. of bitstreams: 1 peres_rfg_me_botfmvz.pdf: 340579 bytes, checksum: d156d075316c35b86500d5e40a305727 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo desses experimentos foi avaliar os efeitos da concentração de progesterona pré e pós-ovulação em fêmeas Nelore submetidas ao protocolo: D0-benzoato de estradiol (2,0mg, Estrogin®) + CIDR®; D9-retirada do dispositivo + cipionato de estradiol (0,5mg, ECP®) + dinoprost trometamina (PGF2α, 12,5mg, Lutalyse®); D11- IATF. No Exp.1, 1.153 novilhas Nelore cíclicas foram divididas aleatoriamente para receber CIDR® sem utilização prévia ou utilizados previamente por 18 dias e 0, 200 ou 300UI de eCG (Folligon®) no D9. No Exp.2, 702 vacas Nelore solteiras foram divididas para receber aplicação de PGF2α no D7 ou D9 e 0 ou 300 UI de eCG no D9. Nestes experimentos o diâmetro do maior folículo (ØFD) foi avaliado no D11. Amostras de sangue para dosagem de P4 foram colhidas no D9 e D18 (7d pós-IATF). No Exp.3, 1.332 vacas paridas foram avaliadas no D7 quanto à presença de CL, sendo divididas para receber PGF2α no D7 ou D9. Amostras de sangue foram colhidas no D9. O diagnóstico de gestação foi realizado no D41. Variáveis contínuas foram avaliadas pelo PROC GLM e binomiais pelo PROC LOGISTIC. Considerou-se efeito significativo quando P<0,05 e tendência quando P<0,1. No Exp.1, as novilhas tratadas com CIDR® sem utilização prévia apresentaram maior [P4D9] (3,06±0,09 vs. 2,53±0,09 ng/ml). A [P4D9] afetou negativamente o ØFD. Novilhas que não receberam eCG apresentaram menor ØFD (0UI: 11,5±0,1a; 200UI: 11,9±0,1b; 300UI: 12,0±0,1bmm). O ØFD afetou positivamente a [P4D18]. Houve efeito de dose de eCG na [P4D18] (0UI: 2,77±0,11a; 200UI: 3,18±0,11b; 300UI: 4,87±0,11cng/ml) e na taxa de sincronização [TS; 0UI: 83,8%(337/402)a; 200UI:88,5%(339/383)ab; 300UI: 94,3%(347/368)b]. A [P4D9] tendeu a afetar negativamente e o ØFD influenciou positivamente a TS. Houve interação entre eCG e [P4D9] na taxa de... / The aim of this trial was to evaluate the effect of pre- and post-ovulatory progesterone concentration in Nellore cattle treated with the protocol: D0-estradiol benzoate (2.0mg, Estrogin®) + CIDR®; D9–CIDR® withdrawal + of estradiol cypionate (0.5mg, ECP®) + dinoprost trometamine (12.5mg, Lutalyse®); D11-TAI. In Exp.1, 1,153 cycling Nellore heifers were randomly assigned to receive on D0 either a non-previously used or a 18d-previously CIDR® and 0, 200UI or 300UI of eCG (Folligon®) on D9. In Exp.2, 702 non-lactating Nellore cows were assigned to receive PGF2α treatment either on D7 or D9 and 0 or 300 IU of eCG on D9. On these experiments, the diameter of the largest follicle (ØFD) was measured on D11. Blood samples were collected on D9 and D18 (seven days after TAI) to evaluate serum progesterone concentrations. In Exp.3, 1,332 suckled Nellore cows were evaluated on D7 for luteal tissue presence. Cows were assigned to receive PGF2α either on D7 or D9. Blood samples were collected on D9. Pregnancy diagnosis was performed on D41. Continuous variables were evaluated by PROC GLM and binary by PROC LOGISTIC. Significant differences were considered when P<0.05 and tendencies when P<0.1. In Exp.1, heifers treated with non-previously used CIDR® had greater [P4D9] (3.06±0.09 vs. 2.53±0.09 ng/ml). The [P4D9] negatively affected the ØFD. There was effect of eCG dosage on ØFD (0IU: 11.5±0.1a; 200IU: 11.9±0.1b; 300IU: 12.0±0.1bmm). The ØFD positively affected the [P4D18]. The eCG dosage influenced the [P4D18] (0UI: 2.77±0.11a; 200UI: 3.18±0.11b; 300UI: 4.87±0.11cng/ml). Treatment with eCG affected synchronization rate [SR; 0IU: 83.8% (337/402)a; 200IU: 88.5% (339/383)ab; 300IU: 94.3% (347/368)b]. The [P4D9] tended to negatively affect, and the ØFD positively affected the SR. There was interaction between eCG and [P4D9] on conception...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-19Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 guasti_pn_me_botfmvz.pdf: 2206876 bytes, checksum: 80444b4bd8d4d68f6bed119ca1696223 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A colheita de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação representam um grande avanço biotecnológico na equinocultura, e pode ser a última chance de preservação do material genético de garanhões após sua morte inesperada ou lesões que impossibilitem a cobertura ou colheita de sêmen. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores utilizados para a recuperação dos espermatozóides epididimários em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia ao utilizar baixa dose inseminante (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 58 testículos, o ducto epididimário de um testículo de cada garanhão foi lavado com o diluidor sem pentoxifilina–Botu-Sêmen®1 (Controle) e o ducto epididimário do testículo contralateral, com o diluidor contendo 7,18 mM de pentoxifilina–Botu-Turbo®2 (PTX). No Experimento II, foi utilizado um “pool de espermatozóides” dos testículos de dois garanhões. As amostras foram congeladas e direcionadas às inseminações artificiais em diferentes doses inseminantes, formando os seguintes grupos: 800x106 espermatozóides recuperados com o diluidor sem pentoxifilina (800 Controle), 100x106 espermatozóides recuperados com diluidor sem pentoxifilina (100 Controle) e 100x106 espermatozóides recuperados com o diluidor com pentoxifilina (100 PTX). O índice de concepção para as éguas inseminadas nos grupos 800 Controle, 100 Controle e 100 PTX foi de 68% (11/16), 31,25% (5/16) e 50% (8/16), respectivamente. Frente aos resultados obtidos, conclui-se inseminações artificiais com apenas 100x106 espermatozóides colhidos com o meio diluidor contendo pentoxifilina garantem índices aceitáveis de concepção e maximiza o uso de espermatozóides epididimários congelados / The recovery of spermatozoa from epididymal cauda and its cryopreservation represents a great technological advance, since it is the last possibility to preserve genetic material from dead or deceased valuable males. The aims of this study were to compare the effectiveness of two extenders used for recovery of epididymal sperm in relation to its freezability (Experiment I) and conception rates provided by each methodology using a low insemination dose (Experiment II). In Experiment I, 58 testis were used, epididymal cauda of each stallion were separated and flushed with a skim milk-extender either without (Botu-Sêmen®; Control Group) or with 7,18 mM of pentoxifylline (Botu-Turbo®; PTX Group) and then frozen. In Experiment II, a “pool” of epididymal sperm from 2 stallions was used. The samples were frozen and artificial insemination was performed using different insemination doses, comprising the following groups: 800x106 sperm recovered without PTX (800 Control); 100x106 sperm recovered without PTX (100 Control) and 100x106 sperm recovered with PTX (100 PTX). The conception rates were 68% (11/16), 31.25% (5/16) e 50% (8/16) for 800 Control, 100 Control and 100 PTX group, respectively. Based in these results, it was possible to conclude that artificial inseminations with 100x106 sperm recovered with PTX guarantee acceptable conception rates and maximize the use of frozen equine epididymal sperm

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T19:38:30Z : No. of bitstreams: 1 vita_b_me_botfmvz.pdf: 1310712 bytes, checksum: 968ab4386692666cb0cda1f45e9f5d04 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade... / This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:38:46Z : No. of bitstreams: 1 beltran_mp_me_botfmvz.pdf: 148138 bytes, checksum: 1776ee2d4797eee98e40fdd19aa6dc82 (MD5) / Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... / This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below)

Resumo: Não disponível / Abstract: Although motile sperm organelle morphology examination (MSOME) was developed only as a selection criterion, its application as a method for classifying sperm morphology may represent an improvement in the evaluation of semen quality. This study aimed to determine the prognostic value of normal sperm morphology by MSOME regarding clinical pregnancy (CP) after intrauterine insemination (IUI). A total of 156 IUI cycles performed in 111 couples were prospectively analyzed. All subjects received 75IU recombinant FSH every other day from the third day of the cycle. On the 10th day of the cycle, follicular development started to be monitored by vaginal ultrasound. When one or two follicles measuring ≥17mm were observed, recombinant hCG was administered and IUI was performed 12-14h and 36-40h after hCG. Before the IUI procedure, sperm samples were analyzed according to MSOME at 8400x magnification with an inverted microscope equipped with DIC/Nomarski differential interference contrast optics. At least 200 motile spermatozoa per semen sample were evaluated and percentages of normal spermatozoa were determined. Pregnancy occurred in 34 IUI cycles (CP rate per cycle: 21.8%, per patient: 30.6%). A statistically significant higher incidence of normal spermatozoa according to the MSOME criterion was found in the group of men in which IUI cycles resulted in pregnancy (2.6±3.1%) compared to the group that did not achieve pregnancy (1.2±1.7%; P=0.019). Logistic regression showed that the percentage of normal cells in the MSOME was determinant for the likelihood of clinical pregnancy (OR: 1.28; 95% CI: 1.08 to 1.51; P=0.003). The ROC curve showed an area under the curve of 0.63 and an optimum cut-off point of 2% of normal sperm form. At this cut-off level, the ability of the percentage of sperm normal form by MSOME to predict pregnancy present 50% sensitivity, 40% positive predictive value, 79%... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: João Batista Alcântara Oliveira / Coorientador: Mário Cavagna / Banca: Anice Maria Vieira de Camargo Martins / Banca: Claudia Guilhermino Petersen / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:01Z No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Condições de cultivo in vitro também afetam a produção de embriões e a expressão de importantes genes, podendo alterar a competência de oócitos para a produção de embriões futuros. O FSH em baixas concentrações pode afetar a produção desses embriões. A busca por melhores condições de cultura e um sistema in vitro que seja menos variável e ao mesmo tempo em que simule o animal in vivo, levou ao desenvolvimento de vários sistemas de cultura para a maturação in vitro de oócitos bovinos. Para comparar a eficiência dos sistemas de MIV foram utilizados quatro grupos: 1) TCM-199 controle; 2) ?-MEM, 3) ?-MEM 1 FSH 4) ?-MEM 10 FSH. O meio de cultura do grupo 1, é um meio não definido, devido a presença de soro fetal bovino utilizado. Os grupos dois, três e quatro são definidos, onde foi usado o polyvinilalcohol-PVA como doador de macromolécula sintética. FSH de suíno foi usado nos grupos 1, 3 e 4. No 1 º e 3 grupo o a concentração de FSH foi de 1 ng /mL e no 4 grupo a concentração foi 10ng/mL. Ovários bovinos foram coletados em um abatedouro. Oócitos com citoplasma homogêneo e com mais de três camadas de células da granulosa foram utilizados. Oócitos maturos dos quatro tratamentos foram fertilizados in vitro com sêmen preparado pelo método de gradiente Percoll. Prováveis zigotos com até duas ou três camadas de células do cumulus foram cultivados em gotas de 50 ml de meio SOF, acrescido de 10% de SFB e 1 mg /mL BSA sob óleo mineral em uma atmosfera úmida 5% CO2 a 38,5 ° C. A taxa de clivagem foi avaliada 72 horas após a FIV, taxa de blastocisto foi avaliada 168-192 horas pós FIV. As taxas de clivagem e blastocisto foram calculados com base no número de oócitos. A expressão dos seguintes genes (Bax, Bcl-2 e Conexina 43) foram avaliadas, em blastocistos por RT-PCR. O teste de ANOVA foi utilizado para comparar o número de blastocistos. Não houve diferença na proporção de embriões com mais de oito blastômeros em todos os grupos testados, indicando que a taxa de desenvolvimento durante as primeiras 72h pós FIV, foi semelhante nos oócitos maturados em meio quimicamente definido e de oócitos maturados no meio contendo soro. O gene Bax é um marcador pró-apoptóticas e o Bcl um marcador anti-apoptótico. A conexina 43 (Cx43) pode ser um marcador de competência do embrião. GAPDH foi utilizado como controle interno. O gene Bax não foi expresso em nenhum grupo. Os genes Bcl-2 e da conexina 43 foram expressos, principalmente no ?-MEM 10. Resultados inéditos mostram que não foram observadas diferenças na taxa de blastocisto em nenhum dos grupos (30% a 40%), a forte expressão de BCL2 e da Cx43 no grupo contendo 10 ng / mL de FSH podem indicar que FSH pode melhorar a qualidade do embrião, sob condições definidas.

Orientador: Nelson Rodrigues Netto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T13:56:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_PauloAugusto_D.pdf: 1913506 bytes, checksum: 4bc4cfa6b4dc011c6b5a36042a0d32fc (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: No período de 1990 a 1994, 331 pacientes do sexo masculino com infertilidade primária foram tratados no ambulatório da Disciplina de Urologia da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP. O tratamento compreendeu uma fase inicial, denominada convencional, que incluiu o tratamento clínico e cirúrgico (varicocelectomia). Os pacientes que não engravidaram nesta fase foram a seguir encaminhados para tratamento através de reprodução assistida. O tratamento convencional incluiu 258 pacientes (77,95%) que receberam tratamento clínico através do uso de citrato de clomifeno (50 mg ao dia por via oral) ou administração de gonadotrofina coriônica humana (2000 UI por via intramuscular por semana) associada à gonadotrofina da menopausa (1000 UI por via intramuscular por semana) e acompanhados por 12 meses. Ao término deste período, quatro pacientes apresentaram gravidez (1,55%). Os outros 73 pacientes (22,05%) receberam tratamento cirúrgico (varicocelectomia) e clínico por apresentarem varicocele uni ou bilateral ao exame físico especial. Após seguimento de 18 meses, 1 O pacientes apresentaram gestação (13,70%). O resultado geral do tratamento convencional foi de 4,23%. Dentre os 317 casais que não apresentaram gestação, 63 foram tratados por reprodução assistida. Empregou-se a técnica de inseminação intra-uterina (AIH) quando foi possível recuperar inicialmente, através das técnicas de capacitação, dois ou mais milhões de espermatozóides com motilidade progressiva (graus A e B). Trinta e seis casais (57,14%) foram '1' tratados através de um a nove ciclos de AIH, num total de 131 ciclos. Observou-se 14 gestações (38,89%) com taxa de gravidez de 10,69% por ciclo. Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em função do número de espermatozóides inseminados (entre dois e cinco milhões ou entre cinco e 10 milhões). Empregou-se a técnica de fertilização in vitro quando a recuperação inicial de espermatozóides foi inferior a dois milhões. Vinte e sete casais (42,86%) foram tratados por esta técnica, num total de 37 ciclos. Ocorreu gravidez em três casos (11,11 % por ciclo). com taxa de gravidez de 8,11 % Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em relação ao número de espermatozóides utilizados no procedimento (entre um e dois milhões ou menos de um milhão de espermatozóides com motilidade progressiva). O resultado geral do tratamento por reprodução assistida foi de 26,98%. Concluiu-se que a reprodúção assistida deve ser o tratamento deI escolha para os pacientes com infertilidade primária, portadores ou não de varicocele, por ser mais eficaz que o tratamento convencional / Abstract: From 1990 to 1 994, 331 male patients with primary infertility were treated at the Department of Urology of the University of Campinas Medical School - UNICAMP. The initial approach included conventional medical and surgical (varicocelectomy) regimens. Patients who did not achieve pregnancy with these modalities underwent assisted reproduction therapy. The conventional treatment group included 258 patients treated medically (clomiphene citrate, 50 mg qd, or chorionic human gonadotropin, 2000 UI/week, assodated with human menopausa I gonadotropin, 1000 UI/week, administered for 12 months). A total of 4 patients achieved pregnancy (1,55%). Surgical Aof total 73 patients underwent (varicocelectomy) nd medical treatment and were followed for 18 months. Pregnancy was achieved in 10 patients (13,70%). The pregnancy rate for conventional treatment was 4.23%. A total of 317 patients did not achieve pregnancy with conventional treatment. Of these, 63 were submitted to assisted reproduction. Intrauterine insemination (AIH) was selected when initial capacitation could recover at least 2 million motile sperms (grades A and B). A total of 36 patients (57,14%) received 1 to 9 cycles of AIH, totalizing 131 cycles. Pregnancy was observed in 14 patients (38.89%) with a pregnancy rate of 10.69% per cycle. There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa inseminated (2 to 5 and 5 to 10 million sperms). In vitro fertilization (IVF) was used when the initial capacitation could recover less than 2 million motile sperms. A total of 27 patients (42.86%) were treated with 37 cycles of IVF and 3 (11.11 %) achieved pregnancy (pregnancy rate per cycle of 8.11 %). There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa used for the in vitro fertilization (1 to 2 millions or lower than 1 million motile sperm). The total pregnancy rate for assisted reproduction was 26.98%. In conclusion, assisted reproduction is the treatment of choice for mal e patients with primary infertility, with or without varicocele, in view of its higher efficacy rate compared to conventional treatment / Doutorado / Doutor em Cirurgia

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Para entender melhor a influência da nutrição na eficiência reprodutiva de vacas Nelore lactantes, utilizou-se o seguinte experimento: 593 primíparas, 423 secundíparas e 893 multíparas Nelore lactantes foram sincronizadas com 38,3 ± 0,4 DPP, utilizando protocolo de IATF à base de P4/E2, e inseminadas 49,2 ± 0,3 DPP. Trinta dias após IATF foi realizado DG para ressincronização das vacas não gestantes, e 30 dias após termino da EM um segundo DG foi realizado. O ECC das vacas foi avaliado no parto, na IA e no DG. O peso corporal das matrizes foi mensurado na IA e no DG, e o peso corporal dos bezerros no desmame. Foram colhidas amostras de sangue de 535 vacas (sendo, 38% de primíparas, 24% de secundíparas e 38% de multíparas) após o parto (21 ± 0,4 DPP), na IA e no DG para dosagem das concentrações séricas de IGF-I e BHB, por ELISA. Os dados do experimento foram analisados através do programa SAS® 9.4 (SAS Inst., Cary, NC). O efeito de DPP sobre o ECC se comportou de maneira diferente de acordo com a paridade, em que as secundíparas e as multíparas começaram a se recuperar entre 20 e 60 DPP e as primíparas seguiram perdendo ECC até 80 DPP (P < 0,0001). Um maior ECC ao parto melhorou os resultados reprodutivos durante a EM, em diferentes intensidades de acordo com ECC e com a paridade (P < 0,05). Não foi identificado o efeito da alteração de ECC entre o parto e a IA nos resultados da primeira IATF (P > 0,26). Maior ECC na inseminação melhorou a taxa de prenhez à primeira IATF, ind... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre