Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-07-14T11:04:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T11:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os principais desafios na criopreservação de sêmen de felinos de vida livre são desenvolver ou aprimorar uma metodologia eficiente na captura de indivíduos, desenvolver uma técnica mais prática e eficiente na coleta de sêmen com boa qualidade para criopreservação, e também desenvolver equipamentos de resfriamento e congelamento que sejam portáteis e que dispensem o uso de energia elétrica. Objetivou-se, portanto, por meio do presente trabalho adaptar uma metodologia de coleta farmacológica de sêmen e de um método de criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas que sejam viáveis para animais de vida livre, capturados por armadilhas de laço. Foram usadas armadilhas de laço compostas por um sistema catapulta, um sistema de contenção e um sistema de monitoramento, nas quais foram realizadas adaptações para melhor adaptação da técnica a três biomas brasileiros Caatinga, Pantanal e Mata Atlântica. O presente trabalho foi o primeiro a capturar onças pintadas e pardas na Caatinga, sendo que a unidade de avaliação do esforço de captura foi “laços-dia”, ou seja, o número de laços armados ao dia que resultou na captura de um animal. O esforço para captura de onça pintada foi de 30,3, 212,5 e 351 laços-dia/captura para o Pantanal, Caatinga e Mata Atlântica, respectivamente. Possivelmente a baixa taxa de captura na Mata Atlântica se deu pela soma de dois fatores: a baixa densidade populacional e a topografia da região, que limitou a área de captura. O mesmo não foi observado para a onça parda neste bioma, cujo esforço de captura foi de 144 laços-dia/captura, possivelmente devido à maior densidade desta espécie. O sucesso de captura (eventos de captura/dias de campanha) de onça pintada foi semelhante ao obtido por trabalhos que usaram cães farejadores, porém essa metodologia exige a manutenção de uma matilha treinada, além de conferir maior risco de acidentes tanto para o animal, quanto para a equipe. Para o estudo da coleta farmacológica de sêmen três onças pardas (Puma concolor) de cativeiro e onze onças pintadas (Panthera onca), sendo seis mantidas em cativeiro e cinco de vida livre, foram anestesiadas com a associação de Medetomidina (0,08- 0,1 mg/kg) e Ketamina (5 mg/Kg). Passados entre 20 e 40 minutos da indução anestésica a uretra dos animais foi sondada com uma sonda uretral estéril para gatos, por onde foi possível coletar ejaculado em todos os animais. Por meio desta técnica coletou-se em média 106,7 μL de sêmen nas onças pardas contendo 524,1 x 106 /mL e 347,2 μL nas onças pintadas contendo 2635,2 x 106 espermatozoides / mL. As avaliações de vigor, motilidade e patologia espermática demonstraram que a técnica não afeta a qualidade do sêmen em relação às demais metodologias usadas em felinos. Para o congelamento do sêmen foram utilizados animais mantidos em cativeiro (seis onças pintadas e três onças pardas). A etapa de resfriamento foi dividida em dois tratamentos, um com a metodologia convencional como uso de gelo e água (Resfriamento A) e a outra com material refrigerante reciclável congelado em nitrogênio líquido (Resfriamento B). Os resultados das avaliações de rotina (vigor, motilidade e teste hiposmótico), com sondas fluorescentes e de análise computadorizada do sêmen demonstraram que não houve diferença entre os dois tratamentos testados. Por meio do presente estudo foi possível desenvolver metodologias que viabilizaram a criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas de vida livre. Portanto, o uso de armadilhas de laço associada à coleta farmacológica de sêmen por cateterização uretral, com medetomidina, e resfriamento usando gelo reciclável congelado em nitrogênio líquido mostrou-se eficiente e seguro nas atividades propostas. / The major challenges for developing assisted reproduction technologies in wild felines consist on:improve or even develop capture methodologies that are more practical and more efficient; develop new methodologies to collect great quality freezable semen; and develop portable freezing devices that can be used without electric energy. We aimed to adapt a pharmacological method for semen collection and a cryopreservation method that are more efficient for wild animals, captured through a foot snare trap. We used foot snare trap made with a catapult system, a restrain system and a tracking system, in which some adaptations were made for matching the technique to three biomes Caatinga, Pantanal and Atlantic Forest. This is the first jaguar and cougar capture report at Caatinga. The jaguar capture rate was 30.3, 212.5 and 351snare-day/capture at Pantanal, Caatinga and Atlantic Forest, respectively. Possibly the low capture rate at Atlantic Forest was related to two factors: the low population density and the topography, which limited the capture area. However it was not observed for pumas at the same biome, whose capture rate was 144 snare-day/capture, possibly due to the higher density of this specie. The capture success (capture events/ expedition days) was similar to studies that used trailing hounds, however this method requires the maintenance of a trained pack, and confer increased risk for the animal and researchers. To study the pharmacological method for semen collection, three captive cougars and six captive and five wild jaguars were chemically restrained with a combination of medetomidine (0.08 to 0.1 mg/Kg) and Ketamine (5 mg/Kg). After the medetomidine administration – 20 to 40 minutes – the urethra was catheterized using a urinary tomcat catheter, through we could collect semen from all animals. Using this technique we could collect an average of 106.7 μL containing 524.1 sperm/mL from the cougars and 347.2 μL containing 2635.2 sperm/mL from the jaguars. The sperm motility, sperm progressive motility and sperm morphology analysis demonstrated that the methodology don`t affect the sperm quality comparing with other technologies used in felines. To study the cryopreservation protocol we used only captive animals (six jaguars and three cougars). The cooling step was divided into two treatments, one using a standardized method with ice and water (Cooling A) and the other one using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen (Cooling B). All results from the routine analysis (sperm motility, sperm progressive motility, sperm morphology), the fluorescent probes and the computerized sperm analysis demonstrated that there was no difference between both treatments. Through this thesis it was possible to develop methodologies that make viable the semen cryopreservation from wild jaguars and cougars. For this purpose it is recommended the foot snare trap to capture the animals; in combination with the semen collection via urethral catheterization using a pharmacological method and the cryopreservation protocol using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen at the cooling step.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Ciências Animais, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-23T14:52:03Z No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / A inseminação artificial é uma poderosa ferramenta para os programas de melhoramento genético e conservação de raças, porém, é menos difundida em ovinos. Isso ocorre devido aos resultados irregulares e baixos de fertilidade após a sincronização do estro e inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Um dos fatores que pode contribuir para a piora nesse resultado é a assincronia do estro e da ovulação após o tratamento hormonal. Neste estudo objetivou-se avaliar diferentes alternativas para aumentar a eficiência dos protocolos de sincronização do estro utilizados em programas de IATF em ovinos. Entre as abordagens utilizadas estão (1) o uso de diferentes promotores do desenvolvimento folicular (eCG e FSH:LH) em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso e seco); (2) o uso do protocolo longo com MAP em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso, seco e transições); (3) o uso do estradiol associado a progesterona (4) o uso de diferentes doses de eCG e momentos de aplicação; e (5) o uso de dois protocolos curtos com diferentes fontes de progesterona (MAP e P4). Em todos os experimentos, diferentes avaliações quanto a manifestação estral, condição folicular, lutea e hormonal foram realizadas para determinar a eficiência das alternativas propostas. Apesar do protocolo longo com MAP apresentar um melhor desempenho na sincronia do estro e/ou ovulação na época seca do que na época chuvosa, os resultados mostraram que esse protocolo não sincroniza eficientemente a ovulação, o que poderia afetar negativamente as taxas de fertilidade após IATF. A sincronia do estro e ovulação também é prejudicada quando se utiliza 400 UI de eCG, 24 horas antes da remoção do pessário de progesterona. O uso de diferentes fontes de estradiol, em conjunto com a progesterona, auxilia no recrutamento de uma nova onda e padroniza a condição folicular ovariana, portanto essa abordagem pode ser usada em estudos futuros, para atingir essa finalidade. A utilização da progesterona tanto em um protocolo longo, quanto no curto, resulta em uma boa sincronia da ovulação, contudo, o protocolo curto parece apresentar uma maior eficiência em sincronizar o tempo das ovulações. Essa abordagem em um programa de IATF com a utilização de sêmen congelado, não melhora as taxas de fertilidade utilizando a inseminação artificial por via cervical superficial, contudo, quando a inseminação é realizada por via laparoscópica resulta em valores próximos a 70% de taxa de fertilidade. / Artificial insemination is a powerful tool for breeding programs and conservation of breeds, however, it is less widespread in sheep. This is due to irregular and low fertility results after estrus synchronization and fixed-time artificial insemination (FTAI). One of the factors that may contribute to the decline of this result is the is the asynchrony of estrus and ovulation after hormonal treatment. This study aimed to evaluate different alternatives to increase the efficiency of estrus synchronization protocols used in FTAI programs in sheep. Among the approaches used are (1) the use of different promoters of follicular development (eCG and FSH:LH) in different seasons (rainy and dry); (2) using the long-term protocol with MAP in different seasons (rainy, dry and transitions); (3) the use of estradiol associated with progesterone (4) the use of different doses of eCG and application times; and (5) the use of two short-term protocols with different sources of progesterone (MAP and P4). In all experiment, different assessments of the estrous manifestation, follicular, luteal and hormonal condition were performed to determine the effectiveness of the proposed alternatives. Despite long-term protocol with MAP perform better in synchrony of estrus and/or ovulation in the dry season than in the rainy season, the results showed that this protocol does not effectively synchronize ovulation, which could negatively affect fertility rates after TAI. Synchrony of estrus and ovulation is also impaired when using 400 UI of eCG 24 hours before removal of progesterone pessaries. The use of different sources of estradiol in combination with progesterone, helps to recruit a new wave and standardizes the ovarian follicular condition, so this approach can be used in future studies to achieve this purpose. The use of progesterone in both a long protocol as in short, results in a good synchronization of ovulation, however, the short protocol seems to have a higher efficiency in synchronizing the time of ovulation. This approach in a FTAI program with frozen semen does not improve fertility rates using superficial cervical artificial insemination, however, when insemination is performed laparoscopically it results in values close to 70% fertility rate.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:00:32Z No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / A criopreservação de embriões ovinos tem sido amplamente difundida, porém seus índices de sobrevivência e prenhez têm mostrado grande variação. Neste estudo, embriões produzidos in vivo foram congelados ou vitrificados e reaquecidos para avaliação ultraestrutural e determinação do padrão de atividade mitocondrial e integridade do citoesqueleto. Os embriões foram colhidos de ovelhas superovuladas, classificados e selecionados para criopreservação. Embriões submetidos à congelação lenta (n=22) foram exposto à solução de 0,75M de etilenoglicol (EG) por 10 minutos, 1,5M de EG por 10 minutos, acondicionados em palhetas de 0,25mL e submetidos a curva de congelação programável (-1°C/min, seeding a -7°C, 0,3°C/min até -35°C) com posterior imersão em nitrogênio líquido. Embriões vitrificados (n=24) foram submetidos à solução de 10% de EG+10% de DMSO por 1 minuto e 30 segundos, passando para a solução de 20% de EG+20% de DMSO com 0,5M de sacarose por 30 segundos acondicionados em OPS e mergulhados em nitrogênio líquido. Os embriões descongelados/reaquecidos foram cultivados por 1 hora, reclassificados em estereomicroscópio e subdivididos para avaliação. Os embriões criopreservados mostraram variável grau de desorganização de citoesqueleto e ausência de marcação para atividade mitocondrial. Foi possível correlacionar os achados anteriores com a ultraestrutura e distribuição das organelas pelo citoplasma. Embriões congelados mostraram características ultraestruturais semelhantes a embriões frescos de mesma qualidade. Embriões vitrificados apresentaram maior frequência de grandes vesículas de digestão. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of sheep embryos has been widespread, but their survival rate and pregnancy have shown great variation. After in vivo production sheep embryos were frozen or vitrified and processed for ultrastructural evaluation and determining the pattern of mitochondrial activity and integrity of the cytoskeleton. Embryos were collected from superovulated ewes, classified and selected for cryopreservation. Embryos subjected to slow freezing (n = 22) were exposed to 0.75 M ethylene glycol (EG) for 10 minutes, 1.5M EG for 10 minutes, packed in 0.25mL straws and subjected to programmable freezing (-1 ° C / min, seeding at -7 ° C, 0.3 ° C / min to -35 ° C) followed by immersion in liquid nitrogen. Vitrified embryos (n = 24) were placed in 10% EG +10% DMSO solution for 1 minute and 30 seconds, then in 20% EG +20% DMSO solution with 0,5M sucrose for 30 seconds packed in OPS and dipped in liquid nitrogen. The cryopreserved embryos were warmed, cultured for 1 hour, reclassified and subdivided for evaluation. Cryopreserved embryos showed variable degree of cytoskeleton disorganization and no marker for mitochondrial activity. It was possible to correlate these findings with the ultrastructure and distribution of the organelles. Frozen embryos showed ultrastructural features similar to fresh embryos of the same quality. Vitrified embryos showed a higher frequency of large digestion vesicles.

Orientador: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Ed Hoffmann Madureira / Banca: Ciro Moraes Barros / Resumo: Avaliou-se a secreção de LHe FSH de plasmático em novilhasdurantea exposição à diferentes concentrações de progesterona(P4) e após a administração deGnRH ou benzoatodeestradiol (BE). Novenovilhas Nelore, pré-sincronizadas com PgF2a, emintervalo de 12 dias, foram submetidas a 6protocolos comrepetições casualizadas. Os 3 grupos de P4foram: CL (Corpo Lúteo), IMPL+CL (DIB® ecorpo lúteo) e IMPL(DIB®), eapós a remoçãodaP4 estimuladascom GnRH ou BE. Durante a P4, foicoletado sangue a cada12h e nos dias 3, 4 e 5 acada 15 min durante 6 h em 1 animalde cada grupo, depois da retiradados implantes e/ou aplicação de PgF2a, coletas foramrealizadas a cada 3hpor 24 h (BE) ou a cadahora por10h (GnRH) para quantificação de LH e FSH. O exame ultrasonográfico foi realizado a cada 12 he após o términodascoletas de sangue às 24h e 48h. Às 12 h após colocação do implante, o grupo IMPL+CLapresentou menorconcentração de LHque o grupo IMPL,após 36 h os grupos IMPL+C e IMPL apresentaram menorconcentração de LH que o grupo CL e às 60 h o grupo IMPL apresentou menor secreção que o grupo CL. Após 24 h da colocação dos implantes, o grupo IMPL apresentou maior secreção de FSH que os demais grupos, e após 48 e 60 h o grupo IMPL+CL apresentou maior secreção de FSH que o grupo CL. No grupo IMPL, a amplitude máxima do pico de LH foi maior após o GnRH quando comparado com o BE. No grupo CL as novilhas apresentaram menor número de folículos ovarianos e maior diâmetro do maior folículo em relação aos grupos IMPL+CL e IMPL. Quando foi aplicado BE, o grupo IMPL+CL apresentou menor taxa de ovulação com 24 h que os grupos CL e IMPL. Os protocolos de sincronização da ovulação empregados foram ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The LH and FSH secretion and follicle profile was evaluated during expositionto different progesterone (P4) concentration and afterGnRH or estradiol benzoate (BE) administration inNelore heifers. Nine heifers were pré-sinchronized with PGF2a (two injection with 12 days interval) received 6 treatments randomly repeated . There were 3 P4 groups: CL (corpus luteum), IMPL+CL (DIB®and CL) and IMPL (DIB®)that were stimulatedwith GnRH or BE after P4 removal. During P4 blood samples were collected every12 hand on days 3, 4and 5 every 15 minfor 6 hfrom 1 animal per group, after P4 device removal, every 3 hfor 24 h (BE)orevery hour for 10 h(GnRH), for LH and FSH quantification. Ultrasound examination was realizedevery 12 h until the end of blood samples, andthereafter 24 and 48 h. At 12hafter implant insertion the IMPL+CLgroup presented lower LH concentration than IMPL group, after 36 hthe animals with implant presented lower LH concentration than CL group, and after 60h the IMPL group had lower LH secretionthan CL one. On IMPL group,themaximum LH peak amplitude was higher in animalsthat received GnRH comparedto BE. Group with CL presented fewer follicles and higher largest follicle diameterthan IMPL+CLand IMPL. When BE was injected the IMPL+CL group presented lower ovulation rateat 24 h than CL and IMPLgroups. The ovulation synchronization protocols used wereefficient in promoting a preovulatory LH peak in Neloreheifers, independentlyof an associated CL or not to progesterone device. The GnRH treatment induced a higher LH peak amplitude and with an higer efficiency in stimulating ovulation in 24h than BE treatment, in animals with higher progesterone...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Ciro Moraes Barros / Resumo: O objetivo desses experimentos foi avaliar os efeitos da concentração de progesterona pré e pós-ovulação em fêmeas Nelore submetidas ao protocolo: D0-benzoato de estradiol (2,0mg, Estrogin®) + CIDR®; D9-retirada do dispositivo + cipionato de estradiol (0,5mg, ECP®) + dinoprost trometamina (PGF2α, 12,5mg, Lutalyse®); D11- IATF. No Exp.1, 1.153 novilhas Nelore cíclicas foram divididas aleatoriamente para receber CIDR® sem utilização prévia ou utilizados previamente por 18 dias e 0, 200 ou 300UI de eCG (Folligon®) no D9. No Exp.2, 702 vacas Nelore solteiras foram divididas para receber aplicação de PGF2α no D7 ou D9 e 0 ou 300 UI de eCG no D9. Nestes experimentos o diâmetro do maior folículo (ØFD) foi avaliado no D11. Amostras de sangue para dosagem de P4 foram colhidas no D9 e D18 (7d pós-IATF). No Exp.3, 1.332 vacas paridas foram avaliadas no D7 quanto à presença de CL, sendo divididas para receber PGF2α no D7 ou D9. Amostras de sangue foram colhidas no D9. O diagnóstico de gestação foi realizado no D41. Variáveis contínuas foram avaliadas pelo PROC GLM e binomiais pelo PROC LOGISTIC. Considerou-se efeito significativo quando P<0,05 e tendência quando P<0,1. No Exp.1, as novilhas tratadas com CIDR® sem utilização prévia apresentaram maior [P4D9] (3,06±0,09 vs. 2,53±0,09 ng/ml). A [P4D9] afetou negativamente o ØFD. Novilhas que não receberam eCG apresentaram menor ØFD (0UI: 11,5±0,1a; 200UI: 11,9±0,1b; 300UI: 12,0±0,1bmm). O ØFD afetou positivamente a [P4D18]. Houve efeito de dose de eCG na [P4D18] (0UI: 2,77±0,11a; 200UI: 3,18±0,11b; 300UI: 4,87±0,11cng/ml) e na taxa de sincronização [TS; 0UI: 83,8%(337/402)a; 200UI:88,5%(339/383)ab; 300UI: 94,3%(347/368)b]. A [P4D9] tendeu a afetar negativamente e o ØFD influenciou positivamente a TS. Houve interação entre eCG e [P4D9] na taxa de... / Abstract: The aim of this trial was to evaluate the effect of pre- and post-ovulatory progesterone concentration in Nellore cattle treated with the protocol: D0-estradiol benzoate (2.0mg, Estrogin®) + CIDR®; D9-CIDR® withdrawal + of estradiol cypionate (0.5mg, ECP®) + dinoprost trometamine (12.5mg, Lutalyse®); D11-TAI. In Exp.1, 1,153 cycling Nellore heifers were randomly assigned to receive on D0 either a non-previously used or a 18d-previously CIDR® and 0, 200UI or 300UI of eCG (Folligon®) on D9. In Exp.2, 702 non-lactating Nellore cows were assigned to receive PGF2α treatment either on D7 or D9 and 0 or 300 IU of eCG on D9. On these experiments, the diameter of the largest follicle (ØFD) was measured on D11. Blood samples were collected on D9 and D18 (seven days after TAI) to evaluate serum progesterone concentrations. In Exp.3, 1,332 suckled Nellore cows were evaluated on D7 for luteal tissue presence. Cows were assigned to receive PGF2α either on D7 or D9. Blood samples were collected on D9. Pregnancy diagnosis was performed on D41. Continuous variables were evaluated by PROC GLM and binary by PROC LOGISTIC. Significant differences were considered when P<0.05 and tendencies when P<0.1. In Exp.1, heifers treated with non-previously used CIDR® had greater [P4D9] (3.06±0.09 vs. 2.53±0.09 ng/ml). The [P4D9] negatively affected the ØFD. There was effect of eCG dosage on ØFD (0IU: 11.5±0.1a; 200IU: 11.9±0.1b; 300IU: 12.0±0.1bmm). The ØFD positively affected the [P4D18]. The eCG dosage influenced the [P4D18] (0UI: 2.77±0.11a; 200UI: 3.18±0.11b; 300UI: 4.87±0.11cng/ml). Treatment with eCG affected synchronization rate [SR; 0IU: 83.8% (337/402)a; 200IU: 88.5% (339/383)ab; 300IU: 94.3% (347/368)b]. The [P4D9] tended to negatively affect, and the ØFD positively affected the SR. There was interaction between eCG and [P4D9] on conception... / Mestre

A inseminação artificial (IA) é uma técnica cada vez mais utilizada na suinocultura moderna, pois propicia ao suinocultor vantagens quanto ao desempenho dos reprodutores, ao controle dos cruzamentos e à facilidade na introdução de material genético. Entretanto, a produção de doses inseminantes com qualidade é um dos principais fatores envolvidos no sucesso da técnica. Nesse contexto, a adequada mensuração da concentração espermática do ejaculado suíno é parte fundamental da rotina de trabalho de Centrais de Inseminação Artificial em Suínos. Foram realizados dois experimentos onde se objetivou: Experimento 1 - avaliar a acurácia, a precisão e a robustez do volume do ejaculado do Espermiodensímetro de Karras (ESPM) e do Espectrofotômetro (ESPT), em comparação à Câmara de Neubauer (CN), técnica padrão e também produzir uma tabela de correção de escala do ESPM; Experimento 2 - avaliar o tempo gasto e a repetibilidade de cada técnica, além de comparar a tabela ajustada do ESPM produzida no Experimento 1 com a tabela padrão do ESPM. Utilizaram-se 141 ejaculados, que revelaram concentrações espermáticas médias (milhões de sptz/mL) e número médio de doses que poderiam ser produzidas, respectivamente de 229,1 e 22,6; 185,0 e 18,5; 283,6 e 28,0 para a CN, o ESPT e o ESPM. O viés médio (acurácia) obtido através da média da diferença do resultado da técnica alternativa e da técnica padrão, e o desvio-padrão do viés médio (precisão) do ESPT, em comparação à CN, foram, respectivamente de - 44,1 e 52,6, enquanto que para o ESPM foram de 54,5 e 44,8 (milhões de sptz/mL). Observou-se que o ESPT tende a subestimar e o ESPM a superestimar a concentração espermática, em comparação à CN. O ESPT foi igualmente preciso e mais acurado que o ESPM. Houve pouca influência do volume do ejaculado sobre os resultados do ESPM e do ESPT através dos resultados de robustez para o volume do ejaculado. O ESPM apresentou maior repetibilidade e menor tempo gasto para a realização dos exames, seguido do ESPT e, por último, da CN (P<0,05). A tabela produzida com os dados do Experimento 1 apresentou resultados mais aproximados aos da CN, em comparação com a tabela padrão do ESPM (2,96 bilhões de espermatozóides vivos/dose vs 2,36 bilhões de espermatozóides vivos/dose, respectivamente). Maiores informações de outras Centrais de Inseminação Artificial em Suínos (CIAS) sobre o uso a campo da tabela ajustada produzida, denominada \"Tabela Ajustada para o Espermiodensímetro LPS-FMVZ-USP\", seriam úteis para comprovar a sua eficiência a campo. / Artificial Insemination (AI) in swine is a rising technique that has been used during the last years at the swine production systems, because it furnish several advantages to the producers just like boar high efficiency, better breeding control and easiness in introducing foreign genetic materials. Nevertheless, high quality insemination doses output is one of the most important factors involving the technique success. In this manner, a correct measurement of the spermatic concentration of boars is a basic work routine of the Swine Artificial Insemination Centers (CIAS). Two trials had been performed, whose objectives were: Experiment 1 - evaluate the accuracy, precision and robustness for ejaculation volume of Spermdensimeter (ESPM) and Spectrofotometer (ESPT) in relation to the Neubauer Count chamber (CN), designed as the standard technique. Moreover, produce a scale correction of the ESPM table; Experiment 2 - evaluate the spent time and repetitiousness of each technique, and compare the ESPM adjusted table produced in Experiment 1 with the ESPM standard table. A total of 141 boar ejaculation was used for spermatic concentration measurement by the techniques described above. The average spermatic concentrations (106 sptz/mL) and average doses number were, respectively: 229.1 and 22.6, 185.0 and 18.5, 283.6 and 28.0 for CN, ESPT and ESPM. ESPT mean bias (accuracy) and standard deviation bias (precision), in relation to the CN were, respectively -44.1 and 52.6, while ESPM were 54.4 and 44.8 (106 sptz/mL). Through these results its possible to conclude that ESPT has a tendency to subestimate and ESPM to superestimate the spermatic concentration in relation to the CN. ESPT was more accurate and equally precise than ESPM. Little effect of ejaculation volume on accuracy and precision in both techniques (ESPM and ESPT) was confirmed by the robustness results. ESPM presented a minor coefficient of variation and timeless, followed by ESPT, and finally by CN (P<0,05). The adjusted table produced with Experiment 1 data presented similar results to CN, in relation to the ESPM standard table (2.96 billion of lives sptz/dose vs 2.36 billion of lives sptz/dose, respectively). Complementary data from others CIAS about field use of the ESPM adjusted table produced, named \"Adjusted Table for Karras Spermdensimeter LPS-FMVZ-USP\", would be useful to prove it efficiency.

Orientador: Luis Alberto Magna / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-11-07T17:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bottcher-Luiz_Fatima_D.pdf: 2915887 bytes, checksum: bd2b1488cc71b0228fa4e739ef95db4d (MD5) Previous issue date: 1996 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

A inseminação artificial (IA) é uma técnica cada vez mais utilizada na suinocultura moderna, pois propicia ao suinocultor vantagens quanto ao desempenho dos reprodutores, ao controle dos cruzamentos e à facilidade na introdução de material genético. Entretanto, a produção de doses inseminantes com qualidade é um dos principais fatores envolvidos no sucesso da técnica. Nesse contexto, a adequada mensuração da concentração espermática do ejaculado suíno é parte fundamental da rotina de trabalho de Centrais de Inseminação Artificial em Suínos. Foram realizados dois experimentos onde se objetivou: Experimento 1 - avaliar a acurácia, a precisão e a robustez do volume do ejaculado do Espermiodensímetro de Karras (ESPM) e do Espectrofotômetro (ESPT), em comparação à Câmara de Neubauer (CN), técnica padrão e também produzir uma tabela de correção de escala do ESPM; Experimento 2 - avaliar o tempo gasto e a repetibilidade de cada técnica, além de comparar a tabela ajustada do ESPM produzida no Experimento 1 com a tabela padrão do ESPM. Utilizaram-se 141 ejaculados, que revelaram concentrações espermáticas médias (milhões de sptz/mL) e número médio de doses que poderiam ser produzidas, respectivamente de 229,1 e 22,6; 185,0 e 18,5; 283,6 e 28,0 para a CN, o ESPT e o ESPM. O viés médio (acurácia) obtido através da média da diferença do resultado da técnica alternativa e da técnica padrão, e o desvio-padrão do viés médio (precisão) do ESPT, em comparação à CN, foram, respectivamente de - 44,1 e 52,6, enquanto que para o ESPM foram de 54,5 e 44,8 (milhões de sptz/mL). Observou-se que o ESPT tende a subestimar e o ESPM a superestimar a concentração espermática, em comparação à CN. O ESPT foi igualmente preciso e mais acurado que o ESPM. Houve pouca influência do volume do ejaculado sobre os resultados do ESPM e do ESPT através dos resultados de robustez para o volume do ejaculado. O ESPM apresentou maior repetibilidade e menor tempo gasto para a realização dos exames, seguido do ESPT e, por último, da CN (P<0,05). A tabela produzida com os dados do Experimento 1 apresentou resultados mais aproximados aos da CN, em comparação com a tabela padrão do ESPM (2,96 bilhões de espermatozóides vivos/dose vs 2,36 bilhões de espermatozóides vivos/dose, respectivamente). Maiores informações de outras Centrais de Inseminação Artificial em Suínos (CIAS) sobre o uso a campo da tabela ajustada produzida, denominada \"Tabela Ajustada para o Espermiodensímetro LPS-FMVZ-USP\", seriam úteis para comprovar a sua eficiência a campo. / Artificial Insemination (AI) in swine is a rising technique that has been used during the last years at the swine production systems, because it furnish several advantages to the producers just like boar high efficiency, better breeding control and easiness in introducing foreign genetic materials. Nevertheless, high quality insemination doses output is one of the most important factors involving the technique success. In this manner, a correct measurement of the spermatic concentration of boars is a basic work routine of the Swine Artificial Insemination Centers (CIAS). Two trials had been performed, whose objectives were: Experiment 1 - evaluate the accuracy, precision and robustness for ejaculation volume of Spermdensimeter (ESPM) and Spectrofotometer (ESPT) in relation to the Neubauer Count chamber (CN), designed as the standard technique. Moreover, produce a scale correction of the ESPM table; Experiment 2 - evaluate the spent time and repetitiousness of each technique, and compare the ESPM adjusted table produced in Experiment 1 with the ESPM standard table. A total of 141 boar ejaculation was used for spermatic concentration measurement by the techniques described above. The average spermatic concentrations (106 sptz/mL) and average doses number were, respectively: 229.1 and 22.6, 185.0 and 18.5, 283.6 and 28.0 for CN, ESPT and ESPM. ESPT mean bias (accuracy) and standard deviation bias (precision), in relation to the CN were, respectively -44.1 and 52.6, while ESPM were 54.4 and 44.8 (106 sptz/mL). Through these results its possible to conclude that ESPT has a tendency to subestimate and ESPM to superestimate the spermatic concentration in relation to the CN. ESPT was more accurate and equally precise than ESPM. Little effect of ejaculation volume on accuracy and precision in both techniques (ESPM and ESPT) was confirmed by the robustness results. ESPM presented a minor coefficient of variation and timeless, followed by ESPT, and finally by CN (P<0,05). The adjusted table produced with Experiment 1 data presented similar results to CN, in relation to the ESPM standard table (2.96 billion of lives sptz/dose vs 2.36 billion of lives sptz/dose, respectively). Complementary data from others CIAS about field use of the ESPM adjusted table produced, named \"Adjusted Table for Karras Spermdensimeter LPS-FMVZ-USP\", would be useful to prove it efficiency.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-27Bitstream added on 2014-08-13T18:01:18Z : No. of bitstreams: 1 000725292.pdf: 1356413 bytes, checksum: 9864b7ad4f4eb2a259a94c49faefdd28 (MD5) / A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:08Z : No. of bitstreams: 1 000809964.pdf: 1108463 bytes, checksum: 43fa89dc624ca99b382ecaa200b42518 (MD5) / A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ...