Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Resumo: A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita, importante em medicina veterinária e humana por ocasionar abortos e doenças congênitas em diversas espécies. A viabilidade da transmissão sexual do Toxoplasma gondii em vacas, sorologicamente negativas para a infecção por T. gondii, submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com sêmen criopreservado e contaminado com taquizoítos de T. gondii, por meio das técnicas (RIFI, bioprova e nested PCR). Inicialmente, utilizou-se a bioprova (em inoculação camundongos) objetivando avaliar a sobrevivência de taquizoítos de T. gondii em sêmen, criopreservado em DMSO (2,5%, 5,0%, 7,5%, 8,0% e 10,0%) e congelado em nitrogênio líquido (-196°C). Foram selecionadas 10 vacas em idade reprodutiva, soronegativas: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Os animais foram submetidos ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e tratados com dose única de estreptomicina (25mg/Kg) contra leptospirose. Das 10 vacas, cinco foram inseminadas com sêmen convencional (Glicerol 3%) e mantidas como grupo controle. As outras cinco foram inseminadas com sêmen criopreservado com DMSO (8%), contendo 1x106 taquizoítos de T. gondii. Nas datas experimentais 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 e 100 dias pós-inoculação (IATF), exames clínicos, hematológicos e sorológicos e moleculares (nested PCR) foram realizados. A soroconversão ocorreu em quatro fêmeas bovinas, pertencentes ao grupo que receberam sêmen infecta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxoplasmosis is a cosmopolitan zoonosis, highly relevant in human and veterinary medicine for causing abortion and congenital diseases in several animal species. This study evaluated, using different techniques (indirect immunofluorescence assay, bioassay and nested PCR), the viability of sexual transmission of Toxoplasma gondii in cows, serologically negative for the T. gondii infeccion, submitted to fixed time artificial insemination (FTAI) with cryopreserved semen, infected with tachyzoites of T .gondii. Initially, bioassays (inoculation in mice) were performed, seeking to analyze the survival of T. gondii tachyzoites in semen, cryopreserved in DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and frozen in liquid nitrogen (-196 °C). Ten cows at reproductive age were selected, all serologically negative: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Animals underwent the protocol for fixed time artificial insemination (FTAI) and were treated with a single dose of streptomycin (25 mg/Kg) against leptospirosis. From these ten cows, five were inseminated with conventional semen (3% Glycerol) and kept as a control group. The five remaining animals were inseminated with semen cryopreserved with DMSO (8%), containing 1x106 T. gondii tachyzoites. On experimental days 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 and 100 after inoculation (FTAI), clinical, hematological and serological exams and molecular tests (nested PCR) were conducted. Seroconversion occurred in four bovine females which belonged to the group which received semen infected with T. gondii tachyzoites (RH strain). 21 days post artificial insemination (DPAI), it was possible to diagnose, in one animal (number 1008) from the same group, mutual increasing of serological titles, varying from 64 to 256 (28th, 35th, and 42nd DPAI). Starting on the 49th, up un... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Objetivou-se avaliar protocolos de sincronização do estro e da ovulação, com esponja impregnada de acetato de medroxiprogesterona (MAP), mantida por diferentes períodos (G - grupo - I e GII - 6 dias, GIII e GIV - 9 dias e GV e GVI - 13 dias) e associado a duas dosagens de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG, GII, GIV e GVI - 350UI e GIII, GV e GVI - 500UI). Assim, ovelhas da raça Santa Inês (n=53) receberam pessários intra-vaginais de MAP, com administração do eCG no momento da retirada. A inseminação foi realizada 48 horas após a retirada dos pessários, pela via cervical superficial, empregando-se sêmen fresco. A taxa de gestação foi determinada através da ultra-sonografia 60 dias após a inseminação. A progesterona plasmática foi determinada através de radiomunoensaio. As taxas de estro e prenhez nos grupos GI, GII, GIII, GIV, GV e GVI foram, respectivamente, 90% e 30 %; 100% e 33,3%; 100% e 33,3; 20% e 20%; 100% e 37,50 % e 80% e 40%. Foi observada diferença estatística quanto ao número de ovelhas em estro (P<0,05), mas a taxa de prenhez entre os grupos foram semelhantes. No momento da retirada do pessário, a concentração de progesterona foi superior (P<0,05) para os grupos de nove dias (GII e GV). Conforme os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que a dosagem de eCG não influenciou os resultados obtidos e que o protocolo de curta duração pode ser utilizado com eficácia semelhante ao de longa duração, para a sincronização de estro das ovelhas. / Abstract: The aim was to analyze the estrous and ovulation synchronization's protocols, with medroxyprogesterone acetate (MAP), maintained by different periods (G - group - I and GII - 6 days, GIII and GIV - 9 days and GV and GVI - 13 days) and linked to two doses of equine chorionic gonadotropin (eCG, GII, GIV and GVI - 350UI and GIII, GV and GVI- 500UI). Thus, Santa Ines sheep breed (n=53) received intravaginal pessaries of MAP, with administration of eCG at the time of withdrawal. The insemination was performed 48 hours after the withdrawal of pessaries, through superficial cervical, using fresh sperm. The pregnancy rate was determined by ultrasound 60 days after insemination. The progesterone plasma was determined by radiomunoensaio. The rate of estrus and pregnancy in groups GI, GII, GIII, GIV, GV and GVI were respectively, 90% and 30%; 100% and 33.3%; 100% and 33.3; 20% and 20%; 100% and 37.50% and 80% and 40%. The number of ewes in estrus was a statistical difference in (P< 0.05) , but the pregnancy rates between the groups were similar. At the time of withdrawal of the pessaries, the concentration of progesterone was higher (P <0.05) for groups of nine days (GII and GV). It was concluded that the strength of eCG did not influence the results and that the protocol of short duration can be used with similar efficacy to the long-term for the synchronization of estrus of sheep. / Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Maria Inês Lenz Souza / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Mestre

In recent years, in dairy cattle, while it was observed a gradual increase in productivity, a decrease occurred in the reproductive efficiency. Several factors, such as increased incidence of diseases, higher susceptibility to heat stress and increase of dry matter intake, have been awarded as possible causes for the decrease in fertility. Increased dry matter intake is associated with increased liver blood flow, which is associated with an increase in liver metabolism of steroid hormones. Given the high metabolism of steroid hormones in high producing dairy cows, six studies were carried out, which in this thesis are divided in three chapters, involving hormone supplementation in lactating dairy cows. The first study aimed to increase the synchronization rate of dairy cows submitted to a fixed time artificial insemination (FTAI) estradiol (E2)/progesterone (P4)-based protocol. For this purpose, two experiments were performed, the first (n = 44 cows) compared a 2.0 vs 3.0 mg of estradiol benzoate (EB) associated to a P4 implant at the beginning of the protocol. The second experiment (n = 82 cows) performed presynchronization with GnRH prior to the onset of a FTAI protocol to produced different follicular development stages at the time of E2/P4: emergence vs. dominance. Daily ultrasound and hormone evaluations were performed. Other four experiments are described in the second (n = 1070 cows) and third (n = 1498 cows) chapter, which have been developed to evaluate the effect of P4 supplementation after ovulation in lactating dairy cows. In general, these studies evaluated the effect of supplementation on the corpus luteum (CL) development and function, mRNA abundance for interferon stimulated genes (ISG), on fertility of cows subjected to AI after estrus detection or FTAI protocol, or to embryo transfer. Increasing the EB dose from 2.0 for 3.0 mg did not improve emergence wave synchronization. In fact, it induced luteolysis in a larger number of cows. Altering the stage of the estrous cycle of the cows at the beginning of the E2/P4-based FTAI protocol did not improve synchronization of wave emergence. Post ovulation P4 supplementation did not affect CL development and function, and did not increase the mRNA abundance for ISG. Cows subjected to AI after estrus detection or after an E2/P4-based FTAI protocol did not have increased fertility. However when P4-supplemented cows were subjected to a GnRH-based FTAI protocol there was an improvement in the fertility of about 8%. Thus, we can concluded that regardless of the EB dose or stage of the estrous cycle at beginning of the E2/P4-based FTAI protocol, still there are cows that fail to have a synchronized emergence of a new wave and/or to ovulate at the end protocol. Additionally, depending on the protocol used, P4 supplementation may increase the fertility of dairy cows, but compromises the fertility when embryos are transferred. / Nos últimos anos, em rebanhos leiteiros, foi observado um aumento acentuado da produtividade acompanhado de uma diminuição da eficiência reprodutiva das vacas lactantes. Diversos fatores, como o aumento da incidência de doenças, da suscetibilidade ao estresse térmico e da ingestão de matéria seca, têm sido atribuídos como possíveis causas para esse decréscimo na fertilidade. Aumento da ingestão de matéria seca está associado maior fluxo sanguíneo hepático, que por sua vez está relacionado com aumento da metabolização hepática de diversas moléculas, entre elas os hormônios esteroides. Tendo em vista o alto metabolismo destes hormônios nas vacas leiteiras, foram realizados seis estudos, que na presente tese estão divididos em três capítulos, envolvendo suplementação hormonal em vacas leiteiras lactantes. O primeiro capítulo teve como objetivo aumentar a taxa de sincronização de vacas leiteiras ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) à base de estradiol (E2)/progesterona (P4). Para isso foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro (n = 44 vacas) utilizando dose de 2.0 ou 3.0 mg de benzoato de estradiol (BE) associado a um dispositivo de P4, no início do protocolo. No segundo (n = 82 vacas), foi realizada uma pré-sincronização com GnRH para iniciar o protocolo de IATF em diferentes estágios foliculares: recrutamento vs. dominância. Avaliações ultrassonográficas e dosagens hormonais foram feitas. Outros 4 experimentos, descritos no segundo (n = 1070 vacas) e no terceiro (n = 1498 vacas) capítulo, foram desenvolvidos para avaliar o efeito da suplementação de P4 após a ovulação em vacas leiteiras. Nesses estudos, foram avaliados os efeitos desta suplementação na formação e função do corpo lúteo (CL), na expressão de genes estimulados por interferon (ISG), na fertilidade de vacas submetidas a IA, através da observação de estro ou de protocolo de IATF, e em receptoras de embrião. A dose de 3.0 mg de BE, além de não aumentar a taxa de sincronização da emergência de uma nova onda folicular, induziu luteólise em um maior número de vacas que a dose de 2.0 mg. Independente da fase do ciclo estral, no início do protocolo a base de E2/P4, houve falhas na indução na sincronização da emergência e de ovulação. A suplementação com P4 após a ovulação não alterou a formação e função do CL, mas também não aumentou a expressão de ISG. Vacas submetidas a IA após detecção de estro ou submetidas à IATF em protocolos a base de E2/P4 não apresentaram aumento na fertilidade, no entanto quando submetidas ao protocolo de IATF à base de GnRH foi observado em torno de 8% de incremento de fertilidade. Contudo, receptoras de embrião suplementadas com P4 tiveram menor fertilidade. Assim, concluiu-se que independente da dose de EB ou do momento do ciclo estral em que se inicia o protocolo de IATF à base de E2/P4 há falhas de emergência de uma nova onda e/ou de ovulação ao final do protocolo. Além disso, dependendo do protocolo utilizado, a suplementação com P4 pósovulação pode aumentar a fertilidade de vacas submetidas à IATF, contudo compromete a fertilidade de receptoras de embrião.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-24Bitstream added on 2014-06-13T20:36:09Z : No. of bitstreams: 1 meneghetti_m_me_botfmvz.pdf: 184024 bytes, checksum: b833a6860023243a1fd026c9cdb4eef2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do mês de parição na condição corporal (CC) no início de estação de monta e na resposta a dois protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em vacas primíparas de corte. No experimento I (exp. I) foi avaliado a alteração da CC pré e pós-parto em 87 novilhas Nelore e 68 u sangue Red Angus, inseminadas para parir de Setembro a Dezembro. A CC foi avaliada mensalmente no pré e pós-parto de Junho a Fevereiro. No exp. II as 155 vacas do exp. I foram sincronizadas entre 29 e 129 dias pós-parto (DPP), com o protocolo: remoção dos bezerros (RB) por 48 h antes do primeiro GnRH (100 mcg, Fertagyl®, INTERVET) e foi inserido dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®, Pfizer, 1,9 g). Após 6,5 dias, foi feita nova RB por 46h; o CIDR® foi removido; e foi aplicado prostaglandina 2 (PGF2 ) (25 mg, Lutalyse®, Pfizer). Entre 42 e 46h após a PGF2 as vacas receberam nova aplicação de GnRH e foram inseminadas. No exp. III, 538 primíparas de duas fazendas (60 Nelore e 123 u sangue Red Angus na fazenda 1 e 355 Nelore na fazenda 2), entre 33 e 104 DPP foram sincronizadas com o protocolo: inserção do CIDR® junto à de Benzoato de Estradiol (2,0 mg, Estrogin®, Farmavet), No dia 7 foi aplicado PGF2 (12,5 mg, Lutalyse®, Pfizer). No dia 9 foi retirado o CIDR®, foi feita RB e aplicado 0,5 mg de Cipionato de Estradiol (E.C.P.®, Pfizer). A IATF foi realizada 46 a 52 h após a retirada do CIDR®. A taxa de sincronização foi avaliada (exceto na fazenda 2 do exp. III) por dois exames de ultra-som (Aloka SSD-500, 5,0 MHz) e determinada pela presença e ausência de folículo dominante na IATF e 48 h após. O diagnóstico de gestação foi feito por ultra-som 28 dias após a IATF. A análise estatística do exp. I foi feita no PROC MIXED e dos exp. II e III no PROC LOGISTIC do SAS... / The aim of this study was to evaluate the calving date effect on body condition score (BCS) at the beginning of breeding season and on the response to a two timed artificial insemination (TAI) protocols in first-calf beef heifers. In experiment I (exp. I) was evaluated the BCS change pre and post-partum. Eighty seven Nelore heifers and 68 u blood Red Angus were inseminated to calve from September to December. The BCS were monthly measured from June to February, during the pre and post-partum of these animals. In exp. II, the cows from exp. I were TAI when they were between 29 and 129 days post-partum (DPP) with the protocol: calf removal (CR) for 48 h before the first GnRH (100 mcg, Fertagyl®, INTERVET) and an insertion of an intravaginal progesterone device (1.9 g, CIDR®, Pfizer). After 6,5 days a new CR was performed, the CIDR® was removed and was injected prostaglandin F2? (PGF2?) (25 mg, Lutalyse®, Pfizer). Between 42 and 46 h after PGF2? was injected a new GnRH and cows were TAI. In exp. III, 538 primiparous cows from two herds (60 Nelore and 123 u blood Red Angus from farm 1 and 355 Nelore from farm 2), between 33 and 104 DPP were synchronized with the protocol: day 0, insertion of a CIDR® and a injection of 2.0 mg of estradiol benzoate (Estrogin®, Farmavet), on day 7 was injected PgF2? (12.5 mg, Lutalyse®, Pfizer), in the CIDR® withdraw (Day 9) was injected estradiol cipionate (0.5 mg, E.C.P.®, Pfizer) and a CR was done, the TAI was preformed 46 to 52 hours after the device withdraw. In the TAI moment and 48 hours later a ultrasound scan (Aloka SSD-500, 5.0 MHz) was performed to determine the ovulation rate (except in the farm 2 of exp. 3). The pregnancy diagnosis was made by ultrasound 28 days after the TAI. The statistic analysis in exp. I was performed with PROC MIXED and in exp.II and III with PROC LOGISTIC from SAS... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:31:49Z : No. of bitstreams: 1 perez_gc_me_botfmvz.pdf: 244671 bytes, checksum: d92a00f6fbf47e3db20740d4e0a01437 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos foram avaliar o efeito da remoção de bezerros (RB) no desenvolvimento folicular e na indução de ciclicidade e a eficácia do MGA precedendo protocolos de IATF, que utilizam GnRH ou BE, nas taxas de concepção a IATF e gestação. Foram utilizadas 163 vacas paridas em anestro da raça Nelore com 80 ± 29 dias pós-parto e ECC de 3,0 ± 0,29, divididas em 4 grupos: G1: (n=40, controle); G2: (n=42, RB): RB (60 h) 11 dias antes da estação de monta (EM); G3: (n=43, MGA + GnRH): MGA (MGA PREMIX®, 0,5 mg/dia, v.o.) por 10 dias, seguido por RB (60 h), após este período receberam GnRH (CYSTORELIN®, 50 mcg, i.m). Após 6,5 dias, PGF2α (LUTALYSE®, 25 mg, i.m.) que foi seguida por outra RB (54h). Após a RB, todos os animais receberam GnRH e foram inseminados; G4: (n=38, MGA + BE): MGA por 10 dias, seguido por RB (60h), após este período receberam BE (Estrogin , 1,0 mg, i.m.). Após 7 dias, PGF2α que foi seguida por outra RB (54h). Após 24 horas da PGF2α, os animais receberam BE e foram inseminados 30 horas depois. Após a IATF, nos 4 grupos, foi realizado observação de cio e IA (30 d) e por monta natural por mais 32 dias. A ciclicidade, o efeito do MGA e RB no desenvolvimento folicular, as taxas de sincronização, concepção e gestação foram determinados por exames ultra-sonográficos. A variável dias para ficar gestante foi analisada pela curva de sobrevivência, enquanto que as variáveis binomiais e contínuas foram analisadas por regressão logística e pelo GLM do SAS, respectivamente. Foram incluídos no modelo efeito de tratamento, ordem, sexo da cria e suas interações e ECC como co-variável. O MGA foi fornecido, ao G3 e G4, diariamente e os animais ingeriram, em média, 0,99 mg/dia de MGA. O MGA aumentou (P<0,05) o diâmetro do maior folículo (11,2 ± 0,28 vs. 10,3 ± 0,29 mm, respectivamente), que também foi maior (P<0,05) na associação MGA + RB... / The objectives of this trial were to evaluate the effects of calf removal (CR) on follicular development and its ability to induce cyclicity and the effects of melengestrol acetate (MGA) preceding TAI protocols, with GnRH or EB on conception and pregnancy rates. Suckled anestrous Nellore cows (n=163) with 80 ± 29 days postpartum and BCS of 3.0 ± 0.29 were assigned into one of four groups: G1: (n=40, control); G2: (n=42, CR): calf removal (60 h) 11 days before the breeding season (BS). G3: (n=43, MGA + GnRH): MGA (MGA PREMIX®, 0.5 mg/day, v.o.) per 10 days, followed by CR (60 h), and GnRH (CYSTORELIN®, 50 mcg, i.m) after CR. Cows received by PGF2α (LUTALYSE®, 25 mg, i.m.) 6.5 days later, and another CR (54h) followed by GnRH and TAI; G4: (n=38, MGA + EB): MGA per 10 days, followed by CR (60h) and injection of EB (Estrogin , 1.0 mg, i.m.) after CR. Cows received PGF2α 7 days later and 24 hours after that, all animals received another EB and were TAI 30 hours later. Calf removal was performed between PGF2α and EB (54 h). After TAI, in all groups, was performed heat detection and AI (30 d) and natural service per more 32 days. Cyclicity status, effect of MGA supplementation and CR on follicular development, synchronization, conception and pregnancy rates were determined by ultrasound. The variable days to pregnancy was analyzed by survival analyses and the binomial and continuous variables were analyzed by logistic regression and GLM of SAS, respectively. The effects of treatment, parity, calf gender and interactions were included in the model, BCS was included as covariable. The MGA was offered to G3 and 4 daily (mixed into the mineral) and the average consumption was 0.99 mg/day. MGA supplementation increased (P<0.05) follicular diameter (11.2 ± 0.28 vs. 10.3 ± 0.29 mm, respectively) Follicular diameter was also increased (P<0.05) when MGA was associated with CR (11.3 ± 0.26 mm)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:07:09Z : No. of bitstreams: 1 garcia_wr_me_botfmvz.pdf: 238200 bytes, checksum: bdfcb81b8d18c74773dc24d7cc9f1694 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi o testar a combinação de tratamentos hormonais com progesterona (CIDR), gonadorelina (análogo de GnRH), prostaglandina F2a (PGF2a) e cipionato de estradiol (ECP), com a finalidade de avaliar tratamentos hormonais de sincronização da ovulação e viabilizar a inseminação artificial em tempo fixo (IATF), em vacas mestiças lactantes Holandês-Zebu mantidas a pasto no verão. O trabalho foi dividido em 2 experimentos. Experimento I foi realizado entre Dezembro (2001) a Fevereiro (2002), em Fernandópolis, SP, Brasil. Os animais foram divididos aleatoriamente em 4 tratamentos: Controle (n=51): inseminação artificial (IA) 12 horas após detecção do estro; GP + CIDR (n=50): GnRH - 6dias - PGF2a e IA 12 horas após detecção do estro; ECPsynch + CIDR (n=52): GnRH - 6dias - PGF2a - 24hs – ECP - 48hs - IATF e Ovsynch + CIDR (n=53): GnRH - 6dias - PGF2a - 36hs – GnRH - 12hs - IATF. A análise estatística foi procedida por CATMOD (com nível de significância de P<0,05). A eficiência na detecção de estro foi de 50,9%. A taxa de ciclicidade foi influenciada por ordem de lactação (P<0,001; sendo de 41,4% nas vacas primíparas e de 72,6% nas multíparas) e por escore de condição corporal (ECC; P<0,001). A resposta ovulatória ao 1° GnRH foi influenciada por ECC (P< 0,01). A taxa de sincronização de ovulação não foi influenciada por tratamentos (P=0,45, sendo de 75,4% no protocolo Ovsynch + CIDR e de 73,0% no protocolo ECPsynch + CIDR), porém condição corporal (P<0,05) proporcionou efeito sobre a taxa de sincronização. Na taxa de prenhez a IATF, foi verificada interação entre os tratamentos e ordem de lactação (P<0,01), sendo o protocolo ECPsynch + CIDR mais eficiente nas multíparas (50,0%) em relação ao Ovsynch + CIDR (16,7%), e nas primíparas o protocolo Ovsynch + CIDR (37,9%) foi superior... / The objective of this experiment was to evaluate the combination of hormonal treatments with progesterone (CIDR), gonadorelin (GnRH analogue), prostaglandin F2a (PGF2a) and estradiol cypionate (ECP), in protocols that allow fixed time artificial insemination (TAI) in crossbred cows managed in a grazing based dairy system during the summer. The experiment was divided in two trials. Trial I was conducted from December (2001) to February (2002), in Fernandópolis, SP, Brazil. The animals were randomly assigned to one of 4 treatment groups: Control (n=51) AI 12 hours after estrus detection; GP + CIDR (n=50): GnRH - 6day - PGF2a - AI 12 hours after estrus detection; ECPsynch + CIDR (n=52): GnRH - 6day - PGF2a - 24h – ECP - 48h - AI and Ovsynch + CIDR (n=53): GnRH - 6day - PGF2a - 36h – GnRH - 12h - AI. Data were analyzed by CATMOD procedure of SAS. Efficiency in the heat detection was 50,9%. The cyclicity was influenced by parity (P<0,001; 41,4% in primiparous cows and of 72,6% in multiparous cows) and by body condition score (BCS, P<0,001). The ovulatory response to the first GnRH injection was influenced by BCS (P<0,01). Synchronization rate was not influenced by treatments (P=0,45, 75,4% in the Ovsynch+CIDR and of 73,0% in the ECPsynch+CIDR), but it was influenced by BCS (P<0,05). Interactions were observed between treatments and parity (P <0,01) in the pregnancy rate at TAI. Treatment ECPsynch+CIDR was more efficient in multiparous cows (50,0%) when compared with Ovsynch+CIDR (16,7%). In primiparous cows the Ovsynch+CIDR (37,9%) was more efficient then ECPsynch+CIDR (25,0%). Pregnancy rate in groups with TAI was influenced by BCS (P<0,01). The service rate in GP+CIDR, evaluated for 5 day after the application of PGF2a, was influenced by cyclic status (P<0,05). Conception rate of the animals that were inseminated after the heat detection (GP+CIDR and Control) was influenced by BCS (P<0,05)...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-06-13T18:48:18Z : No. of bitstreams: 1 sanchesjunior_cp_me_botfmvz.pdf: 521404 bytes, checksum: c19df2c844afe1ed0e76070de6937621 (MD5) / Objetivou-se com este estudo avaliar a utilização de dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis) em vacas Holandesas em lactação sem CL e com P4 ≤1,0 ng/mL no início de um protocolo de sincronização da ovulação à base de E2/P4 para IATF (exp 1) ou TETF (exp 2) no sucesso da prenhez. Estes experimentos foram realizados em 9 fazendas, sendo 4 destinadas a IATF (n = 341) e 5, a TETF (n = 356). O protocolo utilizado nos experimentos foi: d-10 2mg IM BE (2,0mL de Estrogin, Farmavet, SP, Brasil) + CIDR (1,9g de P4, CIDR®, Zoetis, SP, Brasil); d-3 25mg IM Dinoprost Trometamina (5,0mL de Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2 remoção do CIDR + 1mg IM de Cipionato de Estradiol (0,5mL ECP®, Zoetis, SP, Brasil); d 0 IATF (exp1) ou d 7 TETF (exp 2). No d-10, os animais sem corpo lúteo à ultrassonografia (US) foram distribuídos aleatoriamente para receberem 1 CIDR (1CIDR) ou 2 CIDR (2CIDR). O diâmetro do folículo ovulatório [d0 (exp 1)] e presença de CL [d7 (exp 1 e 2)] foram avaliados por US. Amostras de sangue foram colhidas para dosagem de P4 nos dias -10, -3 e 7. Foram consideradas sincronizadas vacas com CL 7 dias após a IA (d7) ou com CL no momento da TE, consistente com a ovulação do folículo ovulatório; no exp 2, apenas vacas com CL (d7) que receberam embrião foram utilizadas. Diagnósticos de gestação foram realizados por US aos 32 e 60 d. Para avaliar as variáveis binomiais, foi utilizado o PROC GLIMMIX, e as contínuas, o PROC MIXED. Efeitos foram considerados significantes quando P ≤0,05 e tendência quando P >0,05 e P ≤0,10. Não houve efeito do tratamento na taxa de sincronização [1CIDR = 74,1% (329/451) vs. 2CIDR = 71,1% (298/423)]. A concentração de P4 no d-10 não diferiu entre os tratamentos (1CIDR = 0,59 ± 0,12 ng/mL vs. 2CIDR = 0,68 ± 0,12 ng/mL)... / The aim of this study was to evaluate the use of two progesterone (P4) intravaginal devices (CIDR ®, Zoetis) in lactating Holstein cows without CL with P4 ≤ 1.0 ng / mL at the start of a E2/P4 ovulation synchronization protocol for TAI (exp 1) or TET (exp 2) on pregnancy success. These experiments were conduced in 9 farms, 4 destined to TAI (n = 341) and 5 TET (n = 356). The protocol used in the experiments was: d-10 2 mg IM EB (2.0 mL Estrogin, Farmavet, SP, Brazil) + CIDR (1.9 g of P4, CIDR ®, Zoetis, SP, Brazil); d-3 25 mg dinoprost tromethamine IM (5.0 mL Lutalyse ®, Zoetis, SP, Brazil), d-2 CIDR removal + 1 mg estradiol cypionate IM (0.5 mL, ECP ®, Zoetis, SP, Brazil); TAI d0 (exp 1) or TET d7(exp 2). On d-10, animals without a corpus luteum detected by ultrasonography (US) were randomly divided into groups to receive 1 CIDR (1CIDR) or 2 CIDR (2CIDR). The ovulatory follicle diameter [d0 (exp 1)] and presence of CL [d7 (exp 1 and 2)] were evaluated by US. Blood samples were collected for P4 measurement on days -10, -3 and 7. Were considered synchronized cows when they had CL 7 days after AI (d7) or CL at the time of ET, consistent with ovulation of detected ovulatory follicle; In exp 2 only cows CL (d7) receiving embryo were used. Pregnancy diagnosis were performed using US on days 32 and 60. Was used to evaluate binomial variables PROC GLIMMIX and PROC MIXED for continuous. Effects were considered significant when P ≤ 0.05 and tendency when P> 0.05 and P ≤ 0.10. There was no effect of treatment on synchronization rate [1CIDR = 74.1% (329/451) vs. 2CIDR = 71.1% (298/423). P4 concentration on d-10 did not differ between treatments (1CIDR = 0.59 ± 0.12 ng/mL vs. 2CIDR = 0.68 ± 0.12 ng/mL). P4 concentration was higher for 2CIDR treatment (2.14 ± 0.31 ng / mL) compared to 1CIDR (1.71 ± 0.28 ng / mL) at d-3 (PGF moment)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 996495 bytes, checksum: d0704166d94adb1ce9c77dd01311d0e5 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was evaluate the effectiveness of the Mangalarga Marchador stallions semen diluted with glycine-yolk egg based extender or milk-based extender and cooled at 5 °C for 24 hours, assessed by in vitro tests and of fertility in vivo. In Experiment 1, were used 5 ejaculated of 3 stallions. Following semen collection, the experimental group was divided into two treatments: 1 - cooling and dilution of semen with the milk-based extender, 2 - cooling and dilution of semen with extender glycine-egg yolk based extender. Semen was packaged in samples containing 12 mL of diluted semen with 30 x 106 viable sperm / mL concentration and then stored in Equitainer® for 24 hours. The sperm quality was evaluated after its dilution and after its cooling. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility, spermatic vigor, sperm morphology, integrity of the plasma membrane integrity by supravital test and epifluorescent using the dyes carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and propidium iodide (PI); plasma membrane functionality by hypoosmotic test and progressive motility and spermatic vigor during the spermatic thermo-resistance test (TTR) for 90 minutes. The vigor of semen diluted with Kenney was higher (p <0.05) than T2 in the assessment of fresh diluted semen. No statistical difference was observed in other seminal characteristics from the fresh diluted semen. In the cooled semen, the Kenney extender had a better motility and spermatic vigor after the 24 hours storage, but Foote extender had higher average values for reactive spermatozoa percentage to the hypoosmotic test and the viabity to the epifluorescent test (p<0,05). In Experiment 2, the objective was to evaluate the fertility of cooled semen with both extenders previously described. Seventeen semen samples of stallion 1 and twenty three samples of stallion 2 were collected. Following semen collection, the semen was diluted with two extenders used in Experiment 1, and adjusted to an insemination dose of 500 million viable sperm in a final volume of 15 mL per dose. Semen was packaged in Equitainer® and cooled down to 5° C and storage for at least 24 hours. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility and vigor of the diluted and cooled semen; the sperm morphology of fresh semen and cooled with both extenders. Thirty one estrous cycles of 26 mares were used in the first period and 43 cycles of 28 mares in the second period. After detection 30 mm follicle size, the mares were randomly assigned into two groups: group A (mares inseminated with semen cooled with Kenney extender) and group B (mares inseminated with semen cooled with dilutive Foote). The stallions semen were used randomly among mares. The inseminations were done after a period of at least 24 hours of storage at 5° C. Semen was deposited in the body uterus, after the detection of a 30-40 mm follicle detection throughout ovulation. The inseminations were performed only on fixed days (Tuesday, Thursday and Saturday). The pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography. As results, Kenney extender had higher progressive motility and spermatic vigor maintance after cooling compared to T2 extender. The pregnancy rate was higher from treatment A than treatment B (p<0,05), 55,26% (21/38) and 30,56% (11/36), respectively. With this data, it is possible to conclude that: the integrity and functionality of sperm cell plasma membrane evaluation tests are considered ancillary assessments in predicting the reproductive potential of stallions, but are not yet conclusive. The glycine-egg yolk based extender was not effective in preserving the seminal characteristics, and its fertility rate was not acceptable. The milk based extender proposed by Kenney et al. (1975) is still an excellent option for use in programs of AI with cooled semen from Mangalarga Marchador breed. / Objetivou-se neste estudo avaliar a eficácia de dois diluidores um à base de licina-gema de ovo e outro à base de leite em pó resfriado a 5 °C por 24 horas na preservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador, determinada por meio de testes in vitro e avaliação da fertilidade in vivo. No experimento 1, foram utilizados cinco ejaculados de três garanhões da raça Mangalarga Marchador, que foram divididos em dois tratamentos: Kenney - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor à base de leite (Kenney et al., 1975); Foote - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor de glicina-gema de ovo (Foote, 2002). Amostras de 12 mL de sêmen foram diluídas numa concentração de 30 x 106 espermatozoides viáveis/mL e, depois, armazenadas em Equitainer® por 24 horas. A qualidade seminal foi avaliada após diluição e resfriamento do sêmen. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva; vigor espermático; morfologia espermática; integridade da membrana plasmática pelo teste supravital e da epifluorescência utilizando os corantes diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídeo; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico; e motilidade progressiva e vigor espermáticos durante o teste de termorresistência por 90 minutos. O vigor espermático do sêmen diluído com Kenney foi superior (P<0,05) ao do Foote na avaliação do sêmen fresco diluído. Não houve diferença estatística entre as demais características seminais avaliadas no sêmen fresco diluído. No sêmen resfriado, o Kenney propiciou a manutenção da motilidade e do vigor espermático após as 24 horas de armazenamento, porém o Foote apresentou maiores valores médios (P<0,05) para porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico e viáveis pelo teste de epifluorescência. Os valores médios da motilidade progressiva e do vigor espermático durante os testes de termorresistência do sêmen resfriado foram inferiores ao preconizado pelo CBRA (1998) aos 30 minutos com o diluidor de Foote e aos 60 minutos com o dilluidor Kenney. No experimento 2, avaliou-se a fertilidade do sêmen resfriado com ambos os diluidores. Foram realizadas 17 coletas do sêmen do garanhão 1 e 23 coletas do garanhão 2. Após as coletas, o sêmen foi diluído com os diluidores utilizados no experimento 1 e ajustado para uma dose inseminante de 500 milhões de espermatozoides viáveis num volume final de 15 mL por dose. O sêmen foi acondicionado no Equitainer®, resfriado até 5 oC e armazenado por no mínimo 24 horas. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva e vigor espermático do sêmen diluído e resfriado; e morfologia espermática do sêmen fresco e resfriado com ambos os diluidores. Foram utilizados 31 ciclos estrais de 26 éguas no primeiro período experimental e 43 ciclos de 28 éguas no segundo período experimental. Após a detecção de folículo de 30 mm, as éguas foram distribuídas ao acaso em dois grupos: grupo A (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Kenney) e grupo B (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Foote). O sêmen dos garanhões foi utilizado aleatoriamente entre as éguas. As inseminações foram realizadas depois de no mínimo 24 horas de armazenamento do sêmen. O sêmen foi depositado no corpo do útero, a partir da detecção de um folículo de 30-40 mm até a observação da ovulação. As inseminações foram feitas somente em dias predeterminados (terça-feira, quinta-feira e sábado) e o diagnóstico de gestação foi realizado por meio de ultrassonografia transretal. O diluidor de Kenney se mostrou superior ao Foote na manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático após o período de resfriamento. A taxa de gestação do grupo A, 55,26% (21/38), foi maior (P<0,05) que a do grupo B, 30,56% (11/36). Os testes de avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática da célula espermática auxiliam na predição do potencial fecundante do garanhão, porém ainda não são conclusivos. O diluidor seminal à base de glicina-gema de ovo (Foote, 2002) não é eficaz em preservar as características seminais e não possibilita obter índice de fertilidade aceitável. O diluidor proposto por Kenney et al. (1975) ainda é uma ótima opção para inseminação artificial com sêmen resfriado de garanhões da raça Mangalarga Marchador.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-22. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:08Z : No. of bitstreams: 1 000866261.pdf: 2011639 bytes, checksum: de26a1680120fdc75d49c236f0f98bb9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de investigar os efeitos da administração de 2,5 mg de benzoato de estradiol (BE) seguido de 1500 mg de progesterona de longa ação (P4 LA) sobre a dinâmica molecular endometrial, características morfológicas do útero e concentrações plasmáticas de estrógeno e progesterona em éguas receptoras acíclicas, foram avaliados: a expressão proteica e as alterações na abundância relativa dos transcritos para os receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) no endométrio por meio da RT-qPCR e imunohistoquímica; as características morfológicas do útero por ultrassonografia e palpação retal; e as concentrações plasmáticas do estrógeno e progesterona por meio de radioimunoensaio. A aplicação de 2,5 mg, 5 mg ou 10 mg de BE foram eficazes em causar edema uterino máximo 24 h após a administração. A dose de 2,5 mg de BE provocou picos de concentração de estradiol similares aos de éguas tratadas com 5 mg, 10 mg e aos de éguas cíclicas, sem elevar a concentração de estrógeno conjugado como observado com as outras doses de BE. Ainda, a concentração de P4 foi reduzida após a aplicação da P4 LA quando 10 mg de BE foram utilizados. A administração dos tratamentos hormonais alterou a abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR de forma similar às alterações encontradas em éguas cíclicas quando o final do estro e início do diestro foram comparados. Em conclusão, o uso de 2,5 mg de BE seguido de 1500 mg de P4 LA provoca alterações similares na morfologia uterina, abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR no endométrio, e de concentrações circulantes de estrógeno e progesterona às encontradas em éguas cíclicas / To investigate the effects of the administration of 2.5 mg of estradiol benzoate (EB) followed by 1500 mg of long acting progesterone (LA P4) on endometrial molecular dynamics, uterine morphological characteristics, as well as estrogen and progesterone plasma concentrations in non-cyclic recipient mares, we evaluated: protein expression and changes in relative abundance of transcripts for estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) in the endometrium by RT-qPCR and immunohistochemistry; uterine morphological characteristics by ultrasonography and rectal palpation; and estrogen and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay. The administration of 2.5 mg, 5 mg or 10 mg of EB were effective at promoting maximum uterine edema 24 h after their injection. The dose of 2.5 mg of EB caused similar estradiol concentration peaks to those observed in mares treated with 5 mg or10 mg of EB and to those observed in cyclic mares, which was not followed by increased concentrations of estrogen conjugate as observed for the other doses. Moreover, P4 concentration was reduced 24 h after LA P4 administration when the dose of 10 mg of EB was injected. The administration of the hormonal protocols altered the relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR in non-cyclic mares as observed in cyclic ones when late estrus and early diestrus were compared. In conclusion, the use of 2.5 mg of EB followed by 1500 mg of LA P4 causes similar uterine morphology changes, relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR, and estrogen and progesterone circulating concentrations to those found in cyclic mares

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-09. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:08Z : No. of bitstreams: 1 000870620.pdf: 854848 bytes, checksum: 8c79744870f5da8cb69ae19583f3ce62 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the imprinted genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group.