Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-19Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 guasti_pn_me_botfmvz.pdf: 2206876 bytes, checksum: 80444b4bd8d4d68f6bed119ca1696223 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A colheita de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação representam um grande avanço biotecnológico na equinocultura, e pode ser a última chance de preservação do material genético de garanhões após sua morte inesperada ou lesões que impossibilitem a cobertura ou colheita de sêmen. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores utilizados para a recuperação dos espermatozóides epididimários em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia ao utilizar baixa dose inseminante (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 58 testículos, o ducto epididimário de um testículo de cada garanhão foi lavado com o diluidor sem pentoxifilina–Botu-Sêmen®1 (Controle) e o ducto epididimário do testículo contralateral, com o diluidor contendo 7,18 mM de pentoxifilina–Botu-Turbo®2 (PTX). No Experimento II, foi utilizado um “pool de espermatozóides” dos testículos de dois garanhões. As amostras foram congeladas e direcionadas às inseminações artificiais em diferentes doses inseminantes, formando os seguintes grupos: 800x106 espermatozóides recuperados com o diluidor sem pentoxifilina (800 Controle), 100x106 espermatozóides recuperados com diluidor sem pentoxifilina (100 Controle) e 100x106 espermatozóides recuperados com o diluidor com pentoxifilina (100 PTX). O índice de concepção para as éguas inseminadas nos grupos 800 Controle, 100 Controle e 100 PTX foi de 68% (11/16), 31,25% (5/16) e 50% (8/16), respectivamente. Frente aos resultados obtidos, conclui-se inseminações artificiais com apenas 100x106 espermatozóides colhidos com o meio diluidor contendo pentoxifilina garantem índices aceitáveis de concepção e maximiza o uso de espermatozóides epididimários congelados / The recovery of spermatozoa from epididymal cauda and its cryopreservation represents a great technological advance, since it is the last possibility to preserve genetic material from dead or deceased valuable males. The aims of this study were to compare the effectiveness of two extenders used for recovery of epididymal sperm in relation to its freezability (Experiment I) and conception rates provided by each methodology using a low insemination dose (Experiment II). In Experiment I, 58 testis were used, epididymal cauda of each stallion were separated and flushed with a skim milk-extender either without (Botu-Sêmen®; Control Group) or with 7,18 mM of pentoxifylline (Botu-Turbo®; PTX Group) and then frozen. In Experiment II, a “pool” of epididymal sperm from 2 stallions was used. The samples were frozen and artificial insemination was performed using different insemination doses, comprising the following groups: 800x106 sperm recovered without PTX (800 Control); 100x106 sperm recovered without PTX (100 Control) and 100x106 sperm recovered with PTX (100 PTX). The conception rates were 68% (11/16), 31.25% (5/16) e 50% (8/16) for 800 Control, 100 Control and 100 PTX group, respectively. Based in these results, it was possible to conclude that artificial inseminations with 100x106 sperm recovered with PTX guarantee acceptable conception rates and maximize the use of frozen equine epididymal sperm

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T19:38:30Z : No. of bitstreams: 1 vita_b_me_botfmvz.pdf: 1310712 bytes, checksum: 968ab4386692666cb0cda1f45e9f5d04 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade... / This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:38:46Z : No. of bitstreams: 1 beltran_mp_me_botfmvz.pdf: 148138 bytes, checksum: 1776ee2d4797eee98e40fdd19aa6dc82 (MD5) / Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... / This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below)

Resumo: Não disponível / Abstract: Although motile sperm organelle morphology examination (MSOME) was developed only as a selection criterion, its application as a method for classifying sperm morphology may represent an improvement in the evaluation of semen quality. This study aimed to determine the prognostic value of normal sperm morphology by MSOME regarding clinical pregnancy (CP) after intrauterine insemination (IUI). A total of 156 IUI cycles performed in 111 couples were prospectively analyzed. All subjects received 75IU recombinant FSH every other day from the third day of the cycle. On the 10th day of the cycle, follicular development started to be monitored by vaginal ultrasound. When one or two follicles measuring ≥17mm were observed, recombinant hCG was administered and IUI was performed 12-14h and 36-40h after hCG. Before the IUI procedure, sperm samples were analyzed according to MSOME at 8400x magnification with an inverted microscope equipped with DIC/Nomarski differential interference contrast optics. At least 200 motile spermatozoa per semen sample were evaluated and percentages of normal spermatozoa were determined. Pregnancy occurred in 34 IUI cycles (CP rate per cycle: 21.8%, per patient: 30.6%). A statistically significant higher incidence of normal spermatozoa according to the MSOME criterion was found in the group of men in which IUI cycles resulted in pregnancy (2.6±3.1%) compared to the group that did not achieve pregnancy (1.2±1.7%; P=0.019). Logistic regression showed that the percentage of normal cells in the MSOME was determinant for the likelihood of clinical pregnancy (OR: 1.28; 95% CI: 1.08 to 1.51; P=0.003). The ROC curve showed an area under the curve of 0.63 and an optimum cut-off point of 2% of normal sperm form. At this cut-off level, the ability of the percentage of sperm normal form by MSOME to predict pregnancy present 50% sensitivity, 40% positive predictive value, 79%... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: João Batista Alcântara Oliveira / Coorientador: Mário Cavagna / Banca: Anice Maria Vieira de Camargo Martins / Banca: Claudia Guilhermino Petersen / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:01Z No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Condições de cultivo in vitro também afetam a produção de embriões e a expressão de importantes genes, podendo alterar a competência de oócitos para a produção de embriões futuros. O FSH em baixas concentrações pode afetar a produção desses embriões. A busca por melhores condições de cultura e um sistema in vitro que seja menos variável e ao mesmo tempo em que simule o animal in vivo, levou ao desenvolvimento de vários sistemas de cultura para a maturação in vitro de oócitos bovinos. Para comparar a eficiência dos sistemas de MIV foram utilizados quatro grupos: 1) TCM-199 controle; 2) ?-MEM, 3) ?-MEM 1 FSH 4) ?-MEM 10 FSH. O meio de cultura do grupo 1, é um meio não definido, devido a presença de soro fetal bovino utilizado. Os grupos dois, três e quatro são definidos, onde foi usado o polyvinilalcohol-PVA como doador de macromolécula sintética. FSH de suíno foi usado nos grupos 1, 3 e 4. No 1 º e 3 grupo o a concentração de FSH foi de 1 ng /mL e no 4 grupo a concentração foi 10ng/mL. Ovários bovinos foram coletados em um abatedouro. Oócitos com citoplasma homogêneo e com mais de três camadas de células da granulosa foram utilizados. Oócitos maturos dos quatro tratamentos foram fertilizados in vitro com sêmen preparado pelo método de gradiente Percoll. Prováveis zigotos com até duas ou três camadas de células do cumulus foram cultivados em gotas de 50 ml de meio SOF, acrescido de 10% de SFB e 1 mg /mL BSA sob óleo mineral em uma atmosfera úmida 5% CO2 a 38,5 ° C. A taxa de clivagem foi avaliada 72 horas após a FIV, taxa de blastocisto foi avaliada 168-192 horas pós FIV. As taxas de clivagem e blastocisto foram calculados com base no número de oócitos. A expressão dos seguintes genes (Bax, Bcl-2 e Conexina 43) foram avaliadas, em blastocistos por RT-PCR. O teste de ANOVA foi utilizado para comparar o número de blastocistos. Não houve diferença na proporção de embriões com mais de oito blastômeros em todos os grupos testados, indicando que a taxa de desenvolvimento durante as primeiras 72h pós FIV, foi semelhante nos oócitos maturados em meio quimicamente definido e de oócitos maturados no meio contendo soro. O gene Bax é um marcador pró-apoptóticas e o Bcl um marcador anti-apoptótico. A conexina 43 (Cx43) pode ser um marcador de competência do embrião. GAPDH foi utilizado como controle interno. O gene Bax não foi expresso em nenhum grupo. Os genes Bcl-2 e da conexina 43 foram expressos, principalmente no ?-MEM 10. Resultados inéditos mostram que não foram observadas diferenças na taxa de blastocisto em nenhum dos grupos (30% a 40%), a forte expressão de BCL2 e da Cx43 no grupo contendo 10 ng / mL de FSH podem indicar que FSH pode melhorar a qualidade do embrião, sob condições definidas.

Orientador: Nelson Rodrigues Netto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T13:56:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_PauloAugusto_D.pdf: 1913506 bytes, checksum: 4bc4cfa6b4dc011c6b5a36042a0d32fc (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: No período de 1990 a 1994, 331 pacientes do sexo masculino com infertilidade primária foram tratados no ambulatório da Disciplina de Urologia da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP. O tratamento compreendeu uma fase inicial, denominada convencional, que incluiu o tratamento clínico e cirúrgico (varicocelectomia). Os pacientes que não engravidaram nesta fase foram a seguir encaminhados para tratamento através de reprodução assistida. O tratamento convencional incluiu 258 pacientes (77,95%) que receberam tratamento clínico através do uso de citrato de clomifeno (50 mg ao dia por via oral) ou administração de gonadotrofina coriônica humana (2000 UI por via intramuscular por semana) associada à gonadotrofina da menopausa (1000 UI por via intramuscular por semana) e acompanhados por 12 meses. Ao término deste período, quatro pacientes apresentaram gravidez (1,55%). Os outros 73 pacientes (22,05%) receberam tratamento cirúrgico (varicocelectomia) e clínico por apresentarem varicocele uni ou bilateral ao exame físico especial. Após seguimento de 18 meses, 1 O pacientes apresentaram gestação (13,70%). O resultado geral do tratamento convencional foi de 4,23%. Dentre os 317 casais que não apresentaram gestação, 63 foram tratados por reprodução assistida. Empregou-se a técnica de inseminação intra-uterina (AIH) quando foi possível recuperar inicialmente, através das técnicas de capacitação, dois ou mais milhões de espermatozóides com motilidade progressiva (graus A e B). Trinta e seis casais (57,14%) foram '1' tratados através de um a nove ciclos de AIH, num total de 131 ciclos. Observou-se 14 gestações (38,89%) com taxa de gravidez de 10,69% por ciclo. Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em função do número de espermatozóides inseminados (entre dois e cinco milhões ou entre cinco e 10 milhões). Empregou-se a técnica de fertilização in vitro quando a recuperação inicial de espermatozóides foi inferior a dois milhões. Vinte e sete casais (42,86%) foram tratados por esta técnica, num total de 37 ciclos. Ocorreu gravidez em três casos (11,11 % por ciclo). com taxa de gravidez de 8,11 % Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em relação ao número de espermatozóides utilizados no procedimento (entre um e dois milhões ou menos de um milhão de espermatozóides com motilidade progressiva). O resultado geral do tratamento por reprodução assistida foi de 26,98%. Concluiu-se que a reprodúção assistida deve ser o tratamento deI escolha para os pacientes com infertilidade primária, portadores ou não de varicocele, por ser mais eficaz que o tratamento convencional / Abstract: From 1990 to 1 994, 331 male patients with primary infertility were treated at the Department of Urology of the University of Campinas Medical School - UNICAMP. The initial approach included conventional medical and surgical (varicocelectomy) regimens. Patients who did not achieve pregnancy with these modalities underwent assisted reproduction therapy. The conventional treatment group included 258 patients treated medically (clomiphene citrate, 50 mg qd, or chorionic human gonadotropin, 2000 UI/week, assodated with human menopausa I gonadotropin, 1000 UI/week, administered for 12 months). A total of 4 patients achieved pregnancy (1,55%). Surgical Aof total 73 patients underwent (varicocelectomy) nd medical treatment and were followed for 18 months. Pregnancy was achieved in 10 patients (13,70%). The pregnancy rate for conventional treatment was 4.23%. A total of 317 patients did not achieve pregnancy with conventional treatment. Of these, 63 were submitted to assisted reproduction. Intrauterine insemination (AIH) was selected when initial capacitation could recover at least 2 million motile sperms (grades A and B). A total of 36 patients (57,14%) received 1 to 9 cycles of AIH, totalizing 131 cycles. Pregnancy was observed in 14 patients (38.89%) with a pregnancy rate of 10.69% per cycle. There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa inseminated (2 to 5 and 5 to 10 million sperms). In vitro fertilization (IVF) was used when the initial capacitation could recover less than 2 million motile sperms. A total of 27 patients (42.86%) were treated with 37 cycles of IVF and 3 (11.11 %) achieved pregnancy (pregnancy rate per cycle of 8.11 %). There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa used for the in vitro fertilization (1 to 2 millions or lower than 1 million motile sperm). The total pregnancy rate for assisted reproduction was 26.98%. In conclusion, assisted reproduction is the treatment of choice for mal e patients with primary infertility, with or without varicocele, in view of its higher efficacy rate compared to conventional treatment / Doutorado / Doutor em Cirurgia

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Para entender melhor a influência da nutrição na eficiência reprodutiva de vacas Nelore lactantes, utilizou-se o seguinte experimento: 593 primíparas, 423 secundíparas e 893 multíparas Nelore lactantes foram sincronizadas com 38,3 ± 0,4 DPP, utilizando protocolo de IATF à base de P4/E2, e inseminadas 49,2 ± 0,3 DPP. Trinta dias após IATF foi realizado DG para ressincronização das vacas não gestantes, e 30 dias após termino da EM um segundo DG foi realizado. O ECC das vacas foi avaliado no parto, na IA e no DG. O peso corporal das matrizes foi mensurado na IA e no DG, e o peso corporal dos bezerros no desmame. Foram colhidas amostras de sangue de 535 vacas (sendo, 38% de primíparas, 24% de secundíparas e 38% de multíparas) após o parto (21 ± 0,4 DPP), na IA e no DG para dosagem das concentrações séricas de IGF-I e BHB, por ELISA. Os dados do experimento foram analisados através do programa SAS® 9.4 (SAS Inst., Cary, NC). O efeito de DPP sobre o ECC se comportou de maneira diferente de acordo com a paridade, em que as secundíparas e as multíparas começaram a se recuperar entre 20 e 60 DPP e as primíparas seguiram perdendo ECC até 80 DPP (P < 0,0001). Um maior ECC ao parto melhorou os resultados reprodutivos durante a EM, em diferentes intensidades de acordo com ECC e com a paridade (P < 0,05). Não foi identificado o efeito da alteração de ECC entre o parto e a IA nos resultados da primeira IATF (P > 0,26). Maior ECC na inseminação melhorou a taxa de prenhez à primeira IATF, ind... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-07-14T11:04:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T11:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os principais desafios na criopreservação de sêmen de felinos de vida livre são desenvolver ou aprimorar uma metodologia eficiente na captura de indivíduos, desenvolver uma técnica mais prática e eficiente na coleta de sêmen com boa qualidade para criopreservação, e também desenvolver equipamentos de resfriamento e congelamento que sejam portáteis e que dispensem o uso de energia elétrica. Objetivou-se, portanto, por meio do presente trabalho adaptar uma metodologia de coleta farmacológica de sêmen e de um método de criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas que sejam viáveis para animais de vida livre, capturados por armadilhas de laço. Foram usadas armadilhas de laço compostas por um sistema catapulta, um sistema de contenção e um sistema de monitoramento, nas quais foram realizadas adaptações para melhor adaptação da técnica a três biomas brasileiros Caatinga, Pantanal e Mata Atlântica. O presente trabalho foi o primeiro a capturar onças pintadas e pardas na Caatinga, sendo que a unidade de avaliação do esforço de captura foi “laços-dia”, ou seja, o número de laços armados ao dia que resultou na captura de um animal. O esforço para captura de onça pintada foi de 30,3, 212,5 e 351 laços-dia/captura para o Pantanal, Caatinga e Mata Atlântica, respectivamente. Possivelmente a baixa taxa de captura na Mata Atlântica se deu pela soma de dois fatores: a baixa densidade populacional e a topografia da região, que limitou a área de captura. O mesmo não foi observado para a onça parda neste bioma, cujo esforço de captura foi de 144 laços-dia/captura, possivelmente devido à maior densidade desta espécie. O sucesso de captura (eventos de captura/dias de campanha) de onça pintada foi semelhante ao obtido por trabalhos que usaram cães farejadores, porém essa metodologia exige a manutenção de uma matilha treinada, além de conferir maior risco de acidentes tanto para o animal, quanto para a equipe. Para o estudo da coleta farmacológica de sêmen três onças pardas (Puma concolor) de cativeiro e onze onças pintadas (Panthera onca), sendo seis mantidas em cativeiro e cinco de vida livre, foram anestesiadas com a associação de Medetomidina (0,08- 0,1 mg/kg) e Ketamina (5 mg/Kg). Passados entre 20 e 40 minutos da indução anestésica a uretra dos animais foi sondada com uma sonda uretral estéril para gatos, por onde foi possível coletar ejaculado em todos os animais. Por meio desta técnica coletou-se em média 106,7 μL de sêmen nas onças pardas contendo 524,1 x 106 /mL e 347,2 μL nas onças pintadas contendo 2635,2 x 106 espermatozoides / mL. As avaliações de vigor, motilidade e patologia espermática demonstraram que a técnica não afeta a qualidade do sêmen em relação às demais metodologias usadas em felinos. Para o congelamento do sêmen foram utilizados animais mantidos em cativeiro (seis onças pintadas e três onças pardas). A etapa de resfriamento foi dividida em dois tratamentos, um com a metodologia convencional como uso de gelo e água (Resfriamento A) e a outra com material refrigerante reciclável congelado em nitrogênio líquido (Resfriamento B). Os resultados das avaliações de rotina (vigor, motilidade e teste hiposmótico), com sondas fluorescentes e de análise computadorizada do sêmen demonstraram que não houve diferença entre os dois tratamentos testados. Por meio do presente estudo foi possível desenvolver metodologias que viabilizaram a criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas de vida livre. Portanto, o uso de armadilhas de laço associada à coleta farmacológica de sêmen por cateterização uretral, com medetomidina, e resfriamento usando gelo reciclável congelado em nitrogênio líquido mostrou-se eficiente e seguro nas atividades propostas. / The major challenges for developing assisted reproduction technologies in wild felines consist on:improve or even develop capture methodologies that are more practical and more efficient; develop new methodologies to collect great quality freezable semen; and develop portable freezing devices that can be used without electric energy. We aimed to adapt a pharmacological method for semen collection and a cryopreservation method that are more efficient for wild animals, captured through a foot snare trap. We used foot snare trap made with a catapult system, a restrain system and a tracking system, in which some adaptations were made for matching the technique to three biomes Caatinga, Pantanal and Atlantic Forest. This is the first jaguar and cougar capture report at Caatinga. The jaguar capture rate was 30.3, 212.5 and 351snare-day/capture at Pantanal, Caatinga and Atlantic Forest, respectively. Possibly the low capture rate at Atlantic Forest was related to two factors: the low population density and the topography, which limited the capture area. However it was not observed for pumas at the same biome, whose capture rate was 144 snare-day/capture, possibly due to the higher density of this specie. The capture success (capture events/ expedition days) was similar to studies that used trailing hounds, however this method requires the maintenance of a trained pack, and confer increased risk for the animal and researchers. To study the pharmacological method for semen collection, three captive cougars and six captive and five wild jaguars were chemically restrained with a combination of medetomidine (0.08 to 0.1 mg/Kg) and Ketamine (5 mg/Kg). After the medetomidine administration – 20 to 40 minutes – the urethra was catheterized using a urinary tomcat catheter, through we could collect semen from all animals. Using this technique we could collect an average of 106.7 μL containing 524.1 sperm/mL from the cougars and 347.2 μL containing 2635.2 sperm/mL from the jaguars. The sperm motility, sperm progressive motility and sperm morphology analysis demonstrated that the methodology don`t affect the sperm quality comparing with other technologies used in felines. To study the cryopreservation protocol we used only captive animals (six jaguars and three cougars). The cooling step was divided into two treatments, one using a standardized method with ice and water (Cooling A) and the other one using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen (Cooling B). All results from the routine analysis (sperm motility, sperm progressive motility, sperm morphology), the fluorescent probes and the computerized sperm analysis demonstrated that there was no difference between both treatments. Through this thesis it was possible to develop methodologies that make viable the semen cryopreservation from wild jaguars and cougars. For this purpose it is recommended the foot snare trap to capture the animals; in combination with the semen collection via urethral catheterization using a pharmacological method and the cryopreservation protocol using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen at the cooling step.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Ciências Animais, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-23T14:52:03Z No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / A inseminação artificial é uma poderosa ferramenta para os programas de melhoramento genético e conservação de raças, porém, é menos difundida em ovinos. Isso ocorre devido aos resultados irregulares e baixos de fertilidade após a sincronização do estro e inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Um dos fatores que pode contribuir para a piora nesse resultado é a assincronia do estro e da ovulação após o tratamento hormonal. Neste estudo objetivou-se avaliar diferentes alternativas para aumentar a eficiência dos protocolos de sincronização do estro utilizados em programas de IATF em ovinos. Entre as abordagens utilizadas estão (1) o uso de diferentes promotores do desenvolvimento folicular (eCG e FSH:LH) em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso e seco); (2) o uso do protocolo longo com MAP em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso, seco e transições); (3) o uso do estradiol associado a progesterona (4) o uso de diferentes doses de eCG e momentos de aplicação; e (5) o uso de dois protocolos curtos com diferentes fontes de progesterona (MAP e P4). Em todos os experimentos, diferentes avaliações quanto a manifestação estral, condição folicular, lutea e hormonal foram realizadas para determinar a eficiência das alternativas propostas. Apesar do protocolo longo com MAP apresentar um melhor desempenho na sincronia do estro e/ou ovulação na época seca do que na época chuvosa, os resultados mostraram que esse protocolo não sincroniza eficientemente a ovulação, o que poderia afetar negativamente as taxas de fertilidade após IATF. A sincronia do estro e ovulação também é prejudicada quando se utiliza 400 UI de eCG, 24 horas antes da remoção do pessário de progesterona. O uso de diferentes fontes de estradiol, em conjunto com a progesterona, auxilia no recrutamento de uma nova onda e padroniza a condição folicular ovariana, portanto essa abordagem pode ser usada em estudos futuros, para atingir essa finalidade. A utilização da progesterona tanto em um protocolo longo, quanto no curto, resulta em uma boa sincronia da ovulação, contudo, o protocolo curto parece apresentar uma maior eficiência em sincronizar o tempo das ovulações. Essa abordagem em um programa de IATF com a utilização de sêmen congelado, não melhora as taxas de fertilidade utilizando a inseminação artificial por via cervical superficial, contudo, quando a inseminação é realizada por via laparoscópica resulta em valores próximos a 70% de taxa de fertilidade. / Artificial insemination is a powerful tool for breeding programs and conservation of breeds, however, it is less widespread in sheep. This is due to irregular and low fertility results after estrus synchronization and fixed-time artificial insemination (FTAI). One of the factors that may contribute to the decline of this result is the is the asynchrony of estrus and ovulation after hormonal treatment. This study aimed to evaluate different alternatives to increase the efficiency of estrus synchronization protocols used in FTAI programs in sheep. Among the approaches used are (1) the use of different promoters of follicular development (eCG and FSH:LH) in different seasons (rainy and dry); (2) using the long-term protocol with MAP in different seasons (rainy, dry and transitions); (3) the use of estradiol associated with progesterone (4) the use of different doses of eCG and application times; and (5) the use of two short-term protocols with different sources of progesterone (MAP and P4). In all experiment, different assessments of the estrous manifestation, follicular, luteal and hormonal condition were performed to determine the effectiveness of the proposed alternatives. Despite long-term protocol with MAP perform better in synchrony of estrus and/or ovulation in the dry season than in the rainy season, the results showed that this protocol does not effectively synchronize ovulation, which could negatively affect fertility rates after TAI. Synchrony of estrus and ovulation is also impaired when using 400 UI of eCG 24 hours before removal of progesterone pessaries. The use of different sources of estradiol in combination with progesterone, helps to recruit a new wave and standardizes the ovarian follicular condition, so this approach can be used in future studies to achieve this purpose. The use of progesterone in both a long protocol as in short, results in a good synchronization of ovulation, however, the short protocol seems to have a higher efficiency in synchronizing the time of ovulation. This approach in a FTAI program with frozen semen does not improve fertility rates using superficial cervical artificial insemination, however, when insemination is performed laparoscopically it results in values close to 70% fertility rate.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:00:32Z No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-17T18:01:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_LucianaDalcin.pdf: 2588317 bytes, checksum: 8bbe50d0353dec811bc355d0696e1a41 (MD5) / A criopreservação de embriões ovinos tem sido amplamente difundida, porém seus índices de sobrevivência e prenhez têm mostrado grande variação. Neste estudo, embriões produzidos in vivo foram congelados ou vitrificados e reaquecidos para avaliação ultraestrutural e determinação do padrão de atividade mitocondrial e integridade do citoesqueleto. Os embriões foram colhidos de ovelhas superovuladas, classificados e selecionados para criopreservação. Embriões submetidos à congelação lenta (n=22) foram exposto à solução de 0,75M de etilenoglicol (EG) por 10 minutos, 1,5M de EG por 10 minutos, acondicionados em palhetas de 0,25mL e submetidos a curva de congelação programável (-1°C/min, seeding a -7°C, 0,3°C/min até -35°C) com posterior imersão em nitrogênio líquido. Embriões vitrificados (n=24) foram submetidos à solução de 10% de EG+10% de DMSO por 1 minuto e 30 segundos, passando para a solução de 20% de EG+20% de DMSO com 0,5M de sacarose por 30 segundos acondicionados em OPS e mergulhados em nitrogênio líquido. Os embriões descongelados/reaquecidos foram cultivados por 1 hora, reclassificados em estereomicroscópio e subdivididos para avaliação. Os embriões criopreservados mostraram variável grau de desorganização de citoesqueleto e ausência de marcação para atividade mitocondrial. Foi possível correlacionar os achados anteriores com a ultraestrutura e distribuição das organelas pelo citoplasma. Embriões congelados mostraram características ultraestruturais semelhantes a embriões frescos de mesma qualidade. Embriões vitrificados apresentaram maior frequência de grandes vesículas de digestão. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of sheep embryos has been widespread, but their survival rate and pregnancy have shown great variation. After in vivo production sheep embryos were frozen or vitrified and processed for ultrastructural evaluation and determining the pattern of mitochondrial activity and integrity of the cytoskeleton. Embryos were collected from superovulated ewes, classified and selected for cryopreservation. Embryos subjected to slow freezing (n = 22) were exposed to 0.75 M ethylene glycol (EG) for 10 minutes, 1.5M EG for 10 minutes, packed in 0.25mL straws and subjected to programmable freezing (-1 ° C / min, seeding at -7 ° C, 0.3 ° C / min to -35 ° C) followed by immersion in liquid nitrogen. Vitrified embryos (n = 24) were placed in 10% EG +10% DMSO solution for 1 minute and 30 seconds, then in 20% EG +20% DMSO solution with 0,5M sucrose for 30 seconds packed in OPS and dipped in liquid nitrogen. The cryopreserved embryos were warmed, cultured for 1 hour, reclassified and subdivided for evaluation. Cryopreserved embryos showed variable degree of cytoskeleton disorganization and no marker for mitochondrial activity. It was possible to correlate these findings with the ultrastructure and distribution of the organelles. Frozen embryos showed ultrastructural features similar to fresh embryos of the same quality. Vitrified embryos showed a higher frequency of large digestion vesicles.