Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Introdução: A hanseníase é uma doença infecciosa sistêmica de evolução crônica, de caráter endêmico no Brasil, apresentando em 2005 coeficiente de prevalência de 1,48 casos por 10.000 habitantes e, de 30 a 50.000 casos novos diagnosticados por ano, constituindo um problema de saúde pública por causar incapacidade física permanente. A doença caracteriza-se por processo inflamatório de resposta complexa e dano tissular envolvendo várias células do sistema imune e mediadores inflamatórios diretamente relacionados ao endotélio vascular. Objetivos: Este estudo se propõe a determinar os níveis séricos do marcador de ativação endotelial ICAM-1 solúvel nas formas clínicas polares da hanseníase, comparando-a com grupo controle. Casuística e Métodos: Foi realizado estudo prospectivo e transversal no ambulatório de dermatologia do Hospital Escola Dr. José Carneiro – UNCISAL no período de agosto de 2005 a agosto de 2006. Foram incluídos 28 pacientes e classificados em tuberculóides (MHT) 12 pacientes e, lepromatosos (MHL) 16 pacientes de acordo com os critérios da Organização Mundial de Saúde e exame histopatológico conforme os critérios de Ridley-Jopling. O grupo controle foi constituído por doadores voluntários saudáveis. Na avaliação laboratorial foi utilizado kit sICAM-1 R&D Systems, Inc. utilizando a técnica de ELISA. Na análise estatística foram utilizados os testes de Análise de Variância (ANOVA), Qui-quadrado, teste de Kolmogorov-Smirnov, teste de homogeneidade de variâncias e comparações múltiplas de Tukey. Resultados: A idade dos pacientes foi de 45,9 17,3 anos e dos indivíduos do grupo controle foi de 48,3 9,3 anos. O gênero foi de 16 (57,17%) feminino e 12 (42,85%) masculino e nos indivíduos do grupo controle foi de 21 (87,5%) feminino e 03 (12,5%) masculino. A concentração de ICAM-1, segundo o modelo ANOVA, foi diferente nos três grupos de pacientes (p<0,001) Através do procedimento de comparações múltiplas de Tukey, concluiu-se que a média no grupo MHL é maior do que nos outros dois grupos (p<0,05), entretanto, não foi detectada diferença entre as médias dos grupos controle e MHT (p>0,05). Conclusões: Os níveis de ICAM-1 foram comparativamente mais elevados no grupo MHL que no grupo MHT ou controle. Não houve diferença significativa entre o grupo controle e o grupo MHT. / Introduction: Hansen’s disease is a systemic infectious disease with chronic evolution, endemic to Brazil. In 2005, there was a coefficient of prevalence of 1,48 cases per 10,000 inhabitants. Between 30 and 50,000 new cases are diagnosed per year, representing a problem for public health because of the permanent physical incapacitation. The disease presents an inflammatory process of complex response and tissue damage involving several cells of the immune system and the inflammatory mediators directly related to the vascular endothelium. Objectives: The objective of the present study is to determine the seric levels of the endothelial activation soluble marker ICAM-1 in the polar clinical forms of Hansen’s disease, in comparison to a control group. Methods: A prospective and transversal study was performed at the dermatology out-patient clinic at the Hospital Escola Dr. José Carneiro – UNICISAL, in the period between August of 2005 and August of 2006. 28 patients were included and classified under tuberculoid (MHT) and lepromatous (MHL) according to the criteria of the World Health Organization and exams based on Ridley-Jopling’s criteria. The control group was formed by healthy voluntary donors. An sICAM-1 R&D Systems, Inc. set was used in the laboratory tests, with the ELISA technique. Variance Analysis (ANOVA), Qui-square, Kolmogorov-Smirnov tests, variance homogeneity and Tukey multiple comparisons tests were used the statistical analysis. Results: The age of the patients was 45,9 ± 17,3 and for the individuals in the control group it was 48,3 ± 9,3. There were 16 women (57.17%) and 12 men (42.85%) and in the individuals in the control group 21 were women (87.5%) and 03 were men (12.5%). The concentration of ICAM-1, according to the ANOVA model, was different in the three groups of patients (p<0.001). Through the multiple comparisons Tukey procedure, we concluded that the average in the MHL group was higher than in the other two groups (p<0.05); however, no difference was detected among the averages in the control group and the MHT (p>0.05). Conclusion: The ICAM-1 levels were comparatively higher in the MHL group than in the MHT or in the control group. There was no significant difference between the control and the MHT groups. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / El fibroblasto cardíaco (FC) es la célula encargada de la homeostasis de la matriz extracelular (MEC), cumpliendo un rol estructural en el tejido cardíaco. Además, participan en el proceso inflamatorio aportando con citoquinas y quimioquinas; y también de esta forma participan en la homeostasis. El FC es capaz de expresar moléculas de adhesión celular como por ejemplo ICAM-1 y VCAM-1 lo que favorece la respuesta inflamatoria y el reclutamiento de leucocitos. Se conoce que Angiotensina II (ANG II) es un fuerte inductor de respuestas inflamatorias, pero se desconoce si en FC aumenta ICAM-1 y VCAM-1. La Resolvina E1 (RvE1) es un mediador lipídico que participa activamente en la resolución de la inflamación, y se desconoce si la RvE1 modula las respuestas inflamatorias inducidas por ANG II. El objetivo de este trabajo fue estudiar las vías transduccionales que son activadas por un estímulo proinflamatorio como la ANG II y un estímulo proresolutivo como la RvE1, determinando además su rol como moduladores de la expresión de proteínas de adhesión en el FC. Se demostró que tanto ANG II como RvE1 activan la vía transduccional ERK1/2 y que RvE1 modula la actividad de ésta frente al estímulo de ANG II. Igualmente se evidenció que ANG II aumentó la expresión de ICAM-1 y que el pretratamiento con RvE1 disminuye este efecto de ANG II sobre el FC, lo cual se tradujo en la disminución de la adhesión de monocitos derivados del bazo (SMC) a FC inducida por ANG II. Los resultados de este trabajo sugieren que ANG II induce la adhesión de SMC a FC a través de ICAM-1, lo cual fue prevenido por RvE1 mediante la modulación de la actividad enzimática de ERK1/2 / RESOLVINA-E1 PREVENTS THE INCREASE OF ICAM-1 INDUCED BY ANGIOTENSIN II IN CARDIAC FIBROBLASTS Cardiac fibroblast (FC) is the cell responsible for the homeostasis of the extracellular matrix (ECM), fulfilling a structural role in cardiac tissue. In addition, they participate in the inflammatory process contributing with cytokines and chemokines; and also in this way they participate in homeostasis. FC is capable of expressing cell adhesion molecules such as ICAM-1 and VCAM-1, which favors the inflammatory response and leukocyte recruitment. It is well known that Angiotensin II (ANG II) is a strong inducer of inflammatory responses, but it is unknown if in FC increases ICAM-1 and VCAM-1. Resolvin E1 (RvE1) is a lipid mediator that actively participates in the resolution of inflammation, and it is unknown whether RvE1 modulates the inflammatory responses induced by ANG II. The objective of this work was to study the transduction signalling pathways that are activated by a proinflammatory stimulus such as ANG II and by a proresolutive stimulus such as RvE1, also determining its role as modulators of the expression of cell adhesion protein in the FC. We show that both ANG II and RvE1 activate the transduction pathway ERK1/2 and that RvE1 modulates its activity against the stimulation of ANG II. We also shows that ANG II increased the expression of ICAM-1 and that pretreatment with RvE1 decreased this effect of ANG II on FC, which translated into a decrease in the adhesion of monocytes cells derived from the spleen (SMC) to FC induced by ANG II. The results of this work suggest that ANG II induces the adhesion of SMC to FC through ICAM-1, and RvE1 prevented this effect by modifying the enzymatic activity of ERK1/2

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O influxo celular (IC) à sinÃvia participa na fisiopatologia da artrite reumatÃide (AR). Hà controvÃrsias sobre o papel do Ãxido nÃtrico (NO) na modulaÃÃo do influxo de neutrÃfilos para sÃtios inflamatÃrios, seja reduzindo ou estimulando-o. Esse trabalho investigou o efeito de inibidores de Ãxido nÃtrico sintase (NOS) sobre o IC agudo em animais submetidos à artrite ou peritonite induzida por zymosan (AZy ou PZy) ou lipopolissacarÃdeo (ALPS ou PLPS), bem como a participaÃÃo de leucotrieno B4 (LTB4) e da molÃcula de adesÃo intercelular -1 (ICAM-1). Ratos Wistar receberam 10-1000 micrograma de Zy ou 1-10 micrograma de LPS intra-articular (i.a.). Outros grupos receberam 1 mg de Zy ou 10 Âg de LPS intraperitoneal (i.p.). Camundongos selvagens ou geneticamente manipulados (knock out) para ICAM-1 (ICAM-1-/-) receberam 100 Âg de Zy i.a. ou i.p. Esquema dos prÃ-tratamentos (30 minutos antes da artrite ou peritonite): na AZy, L-NAME (1-30 mg/kg; i.p. ou 0,3-1 micromol; i.a), 1400W (1 mg/kg; i.p.) ou Aminoguanidina (Amino) (50 mg/kg; i.p.) em ratos e camundongos receberam L-NAME (3-10 mg/kg;i.p.) ou NG-nitro-L-arginia (Nitro) (50 mg/kg; i.p.). Na PZy, L-NAME (10-30 mg/kg; s.c. ou i.p.) ou 1400W (1 mg/kg; s.c.) foi administrado em ratos e camundongos receberam L-NAME (30 mg/kg; s.c.) ou Nitro (50 mg/kg; s.c.). Na ALPS, ratos receberam L-NAME (10-30 mg/kg; i.p) e, na PLPS, L-NAME (30 mg/kg; s.c.). Controles receberam veÃculo (grupos NT). ApÃs o sacrifÃcio, foram quantificados o IC e LTB4 nos lavados articulares e peritoneais. Na AZy (10-100 micrograma) em ratos, L-NAME (1-3 mg) reduziu o IC (47,4 - 76,6%), quando comparado aos animais NT (p<0,05). Na AZy 1mg, L-NAME (30 mg), 1400W (1 mg) e Amino (50 mg) diminuÃram o IC (57,4%, 74,8% e 76,6%) (p<0,05). L-NAME (0,3 micromol) i.a. tambÃm reduziu o IC (85,3%) (p<0,05). Semelhante aos ratos, camundongos prÃ-tratados com L-NAME (3-10 mg) ou Nitro (50 mg) apresentaram diminuiÃÃo do IC (67,6%, 53,8% e 39,5%) (p<0,05). Contrariamente, na PZy, L-NAME (10-30 mg) e 1400W (1 mg) aumentaram o IC (566,7%, 495,1% e 470,7%) em ratos e L-NAME (30 mg), em camundongos (155,8%) (p<0,05). Nesses, Nitro aumentou o IC, mas nÃo significativamente (p>0,05). L-NAME (10 mg) i.p. tambÃm aumentou o IC (747,6%) (p<0,05). Na ALPS, L-NAME (30 mg) diminuiu o IC nas duas doses de LPS (50,3% e 52,3%) (p<0,05). Na PLPS, L-NAME (30 mg) aumentou o IC (53,4%) (p<0,05). Os inibidores de NOS nÃo alteraram os nÃveis de LTB4. Animais ICAM-1-/- artrÃticos prÃ-tratados ou nÃo com Nitro apresentaram reduÃÃo do IC (57,8% ou 32,1%)(p<0,05). Nos ICAM-1-/- com peritonite prÃ-tratados ou nÃo com Nitro, houve uma reduÃÃo do IC (9,5% e 22,3%), mas nÃo significativa (p>0,05). O NO, particularmente o produzido pela NOSi, reduz o IC agudo na articulaÃÃo, enquanto que o incrementa no peritÃneo. Esse efeito à independente do estÃmulo, da espÃcie, da via de administraÃÃo e da liberaÃÃo de LTB4, alÃm de envolver cÃlulas residentes e/ou migradas. ICAM-1 parece participar do IC nesses modelos, especialmente na artrite, com o NO modulando sua expressÃo na peritonite. / Cell influx (CI) to synovium participates in physiopathology of rheumatoid arthritis (RA). There are controversies about the nitric oxide (NO) action in modulation of neutrophil influx to inflammatory sites, with NO decreasing or increasing it. This study investigated the effect of nitric oxide synthase (NOS) inhibitors on acute CI in animals submitted to arthritis or peritonitis induced by zymosan (ZyA or ZyP) or lipopolysaccharide (LPSA or LPSP), and the participation of leukotriene B4 (LTB4) and intercellular adhesion molecule -1 (ICAM-1). Rats Wistar received Zy (10-1000 micrograme) or LPS (1-10 micrograme) intraarticular (i.a.). Other groups received Zy (1 mg) or LPS (10 Âg) intraperitoneal (i.p.). Wild or ICAM-1-deficient (ICAM-1-/-) mice received Zy (100 Âg) i.a. or i.p. Animals were pre-treated (30 minutes before arthritis or peritonitis): in ZyA, rats received L-NAME (1-30 mg/kg; i.p. or 0.3-1 micromol; i.a), 1400W (1 mg/kg; i.p.) or Aminoguanidine (Amino) (50 mg/kg; i.p.). Mice received L-NAME (3-10 mg/kg;i.p.) or NG-nitro-L-arginine (Nitro) (50 mg/kg; i.p.). In ZyP, L-NAME (10-30 mg/kg; s.c. or i.p.) or 1400W (1 mg/kg; s.c.) was administrated in rats and mice received L-NAME (30 mg/kg; s.c.) or Nitro (50 mg/kg; s.c.). In LPSA, rats received L-NAME (10-30 mg/kg; i.p) and, in LPSP, they received L-NAME (30 mg/kg; s.c.). Controls received vehicle (NT groups). After sacrifice, CI was counted and LTB4 was measured in articular and peritoneal exudates. In ZyA (10-100 Âg), L-NAME (1-3 mg) reduced CI (47.4 â 76.6%) as compared to NT animals (p<0.05). In ZyA (1mg), L-NAME (30 mg), 1400W (1mg) and Amino (50 mg) reduced CI (57.4%, 74.8% and 76.6%, respectively) (p<0.05). L-NAME (0.3 Âmol) i.a. also reduced CI (85.3%) (p<0.05). Similarly, L-NAME (3-10 mg) or Nitro (50 mg) pre-treated mice showed a CI reduction (67.6%, 53.8% and 39.5%) (p<0.05). In contrast, in ZyP, L-NAME (10-30 mg) and 1400W (1 mg) increased CI (566.7%, 495.1% and 470.7%, respectively) in rats and L-NAME (30 mg) in mice (155.8%) (p<0.05). In mice, Nitro increased CI, but not significantly (p>0.05). L-NAME (10 mg) i.p. also increased CI (747.6%) (p<0.05). In LPSA, L-NAME (30 mg) decreased CI in two LPS doses (50.3% and 52.3%) (p<0.05). In LPSP, L-NAME (30 mg) increased the influx (53.4%) (p<0.05). NOS inhibitors didnât change LTB4 levels. Arthritic pre-treated or not with Nitro ICAM-1-/- animals showed a CI reduction (57.8% or 32.1%)(p<0.05). In peritonitis, pre-treated or not with Nitro ICAM-1-/- showed a CI reduction (9.5% and 22.3%), but not significantly (p>0.05). NO, especially that produced by iNOS, reduces the acute CI in articulation while increases it in the peritoneum. This effect is independent of stimulus, species, route of administration and LTB4 liberation. Beyond, it involves resident and/or migrated cells. ICAM-1 appears to participate in CI in these models, especially in arthritis. Besides, NO modulates the expression of ICAM-1 in peritonitis.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Una consecuencia común de las enfermedades cardiovasculares es la remodelación cardíaca, que se caracteriza por cambios en el tamaño, forma y función del corazón. El infarto agudo al miocardio es la causa más común que desencadena un proceso de remodelado. El daño causado por el proceso isquémico conduce a la activación de receptores de reconocimiento de patrones moleculares asociados a daño (PRR), y de mediadores celulares y humorales de la respuesta inflamatoria en el tejido. En relación a esto, se ha reportado que el receptor tipo toll-4 (TLR-4), un tipo de PRR, tiene un papel clave en la función cardiaca luego de un infarto, mientras que el aumento en la expresión de las moléculas de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) y vascular 1 (VCAM-1), en el tejido cardiaco se ha asociado a una mayor adhesión e infiltración leucocitaria y a un mal pronóstico de la función cardiaca. En fibroblastos cardiacos (FC) se ha demostrado que TLR-4 reconoce patrones moleculares asociados a daño y que su activación conduce a la secreción de citoquinas proinflamatorias, sin embargo los efectos sobre la expresión de moléculas de adhesión no han sido determinados. En esta memoria se estudió el rol del TLR-4 en la expresión ICAM-1 y VCAM-1 en FC de rata adulta e indagó las vías de señalización involucradas en dicha expresión. El tratamiento con lipopolisacárido (LPS) 1 μg/mL aumentó los niveles de ICAM-1 y VCAM-1 de manera tiempo dependiente, observándose en cada caso un aumento significativo a las 24 hrs. Por otra parte, LPS aumentó de forma temprana la fosforilación de NF-κB, ERK1/2, y JNK, mientras que p-38 y Akt sólo mostraron una tendencia a aumentar a partir de los 5 min. La utilización de los inhibidores TAK-242, PD98059 y SP600125, revirtieron el aumento en los niveles de ambas proteínas, mientras que los inhibidores BAY117085, LY294002 y SB202190 no lo los revirtieron. En resumen, nuestros resultados demostraron que la activación del TLR-4 en FC, gatilla un aumento en los niveles de ICAM-1 y VCAM-1 a través de las vías de señalización ERK1/2 y JNK / The cardiac remodeling is a common consequence of the ECV, and is characterized by changes in the size, shape and function. Moreover the acute myocardial infarction is the most common cause of remodeling. The damage caused by the ischemic process leading to activation of pattern recognition receptors (PRR), and humoral and cellular mediators of the inflammatory response in the tissue. In regards to this Toll like receptor-4 (TLR-4) has been described has a key mediator of cardiac function after myocardial infarction, while the increase in intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) in cardiac tissue has been linked to increased adhesion and leukocyte infiltration and poor prognosis of cardiac function. In cardiac fibroblast TLR4 is capable to recognize danger associated molecular patterns and release pro-inflammatory cytokines, however their role in ICAM-1/VCAM-1 expression remain unknown. In this study we have determined the ability of TLR-4 to increased ICAM-1/VCAM-1 protein level in adult rat cardiac fibroblast and investigated the potential mechanisms underlying this induction. Treatment with LPS 1 μg/ml resulted in a time-dependent increased of ICAM-1 / VCAM-1 protein level. Furthermore, NF-κB, ERK1/2 and JNK were rapidly phosphorylated by LPS, while p-38 and Akt showed a tendency to increase from 5 min. We also found that inhibition of ERK1/2 and JNK pathways prevented LPS–induced ICAM-1 and VCAM-1 protein level, whereas NF-κB, p-38 and Akt inhibition did not. In summary, these findings demonstrate that the increased ICAM-1/VCAM-1 protein level by TLR-4 activation is regulated via the ERK1/2 and JNK pathways, in cultured cardiac fibroblasts / Fondecyt FONDAP ACCDiS

A pesar del continuo progreso en quimioterapia, radioterapia y cirugía, las tasas de sobrevida para pacientes con tumores sólidos son aun insatisfactorias. Investigaciones recientes han mostrado áreas moleculares más específicas que son potenciales blancos para la intervención terapéutica: en particular, las señales intracelulares de los factores de crecimiento que regulan la proliferación celular. Un desequilibrio en esas vías intracelulares puede resultar en proliferación celular descontrolada llevando al desarrollo de tumores. EGFR es un excelente “target” para la terapia del cáncer debido a que es el receptor mas frecuentemente expresado en una variedad de canceres. De manera importante, en ciertos tumores, la expresión de EGFR esta asociada con enfermedad avanzada y pobre pronostico clínico. Esta asociación ha llevado al desarrollo de un número de terapias innovadoras que hacen blanco en este factor de crecimiento y sus vías intracelulares activadas.

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Introdução: a doença renal crônica é uma síndrome complexa; vários fatores contribuem para que pacientes em hemodiálise apresentem um estado inflamatório crônico e disfunção endotelial pronunciada, levando a alta prevalência de doença cardiovascular aterosclerótica prematura. A infecção pelo vírus da Hepatite C, comum nestes pacientes, poderia ser um fator de piora para este estado inflamatório. Dosagem de marcadores de lesão endotelial como ICAM-1 e VEGF, pode ser uma arma para identificar pacientes com risco elevado que necessitam de medidas efetivas que possam diminuir a mortalidade. Objetivos: comparar atividade endotelial entre pacientes renais crônicos portadores e não portadores de Hepatite C submetidos à hemodiálise. Métodos: selecionamos 18 pacientes em diálise com hepatite C e viremia positiva – grupo HCV(+), e outros 10 pacientes em diálise sem hepatite – grupo HCV(-). Os grupos foram avaliados num único momento com relação a: adequação da diálise (Kt/V); atividade endotelial – ICAM-1 e VEGF; atividade necroinflamatória e função hepática – albumina, ALT e TAP; pesquisa de crioglobulinemia; dosagem de C3, C4 e fator reumatóide; avaliação nutricional: antropométrica, laboratorial e subjetiva – IMC, %adequação PCT, %adequação GC, CMB e %adequação CMB; albumina, transferrina e linfócitos totais. Resultados: sexo masculino 68%, idade entre 20-69 (45,39 + 14,11) anos. Tempo em hemodiálise variou de 6 meses a 22 (7,45 + 6,35) anos, significativamente maior no grupo HCV(+), p=0,0149. Todos os pacientes atingiram o valor esperado de Kt/V (1,32 + 0,17). O ICAM-1 estava elevado (402 + 182,1) em 60,71% pacientes; mais alto no grupo C positivo (435,1 + 188,6 vs 342 + 161,8), porém não significante, p=0,2024. Não houve correlação entre nível de ICAM-1 com tempo em diálise ou ALT, em nenhum dos grupos (r = 0). Os níveis de VEGF foram normais (295,4 + 237,9) em 92,85% dos pacientes. Todos tinham função hepática normal (TAP 92,34 + 7,67) e não foi encontrada lesão significativa no fígado (ALT 35,23 + 24,42). Em nenhum dos pacientes foram encontradas crioglobulinas. Apenas a fração C3 do complemento estava baixa (79,38 + 19,23) em 75% dos pacientes, sem diferença entre os grupos, p=0,9293. O fator reumatóide foi normal (29,73 + 15,11) em 71,42%, também sem diferença entre os grupos, p=0,1248. A avaliação nutricional antropométrica revelou desnutrição leve a moderada, com reserva muscular diminuída (%CMB 85,20 + 10,28) em todos, e gordura corporal elevada (%GC 22,30 + 3,19) em 55,56%. A média dos valores dos parâmetros laboratoriais analisados, albumina (4,12 + 0,51), transferrina (210,6 + 104,4) e contagem de linfócitos (1398 + 562,5) encontravam-se normais nos dois grupos. Subjetivamente 92,85% classificado como desnutrição leve; 7,14% moderada e nenhum eutrófico. Conclusões: observamos que renais crônicos em hemodiálise possuem elevado grau de lesão endotelial, porém a presença de hepatite C não foi um fator agravante deste quadro. ICAM-1 é um bom marcador nesta população, já VEGF não se mostrou útil para a avaliação endotelial nestes pacientes. É possível que estes resultados advenham da amostra limitada, necessárias análises com um número maior de pacientes para estabelecer se existe maior atividade endotelial em pacientes com insuficiência renal em hemodiálise com hepatite C. / Introduction: the chronic renal disease is a complex syndrome; several factors contribute to a chronic inflammatory state and pronounced endothelial dysfunction in patients on hemodialysis, leading to high prevalence of atherosclerotic premature cardiovascular disease. The infection caused by hepatitis C virus, common in such patients, could be a worsening factor for this inflammatory state. Endothelial lesion markers dosage as ICAM-1 and VEGF, could be a tool to identify patients at high risk who need effective measures in order to reduce the mortality rate. Objectives: to compare endothelial activity between chronic renal patients with and without hepatitis C submitted to hemodialysis. Methods: 28 patients undergoing dialysis were divided in two groups: HCV(+) group – 18 patients: anti-HCV(+) and PCR(+); and HCV(-) group – 10 patients: anti-HCV(-). The groups were evaluated concerning to: dialysis efficiency (Kt/V); endothelial activity: ICAM-1 and VEGF; necroinflammatory activity and hepatic function: albumin, ALT and TAP; cryoglobulinemia research; C3, C4 and rheumatoid factor level; nutrition assessment: anthropometric (IMC, %PCT, %GC, CMB and %CMB), laboratory (albumin, transferrin and total lymphocytes) and subjective. Results: men were 68%, women 32%. Aged between 20-69 (45,39 + 14,11) years. Time on hemodialysis varied from 6 months to 22 years (7,45 + 6,35years), significantly higher in group HCV(+), p=0,0149. The entire patients reached expected value of Kt/V (1,32 + 0,17). ICAM-1 levels were high (402 + 182,1) in 60,71%; highest levels in HCV(+) group (435,1 + 188,6 vs 342 + 161,8) however, it was not statiscally significant – p=0,2024. There was no correlation between the ICAM-1 levels and the hemodialysis time or ALT levels in any group (r = 0). The levels of VEGF (295,4 + 237,9) were normal in 92,85%; only HCV(+) patients had high levels. No group presented any correlation between the VEGF levels and the dialysis time or ALT levels. All patients had normal hepatic function (TAP 92,34 + 7,67) and no significant liver lesion was found (ALT 35,23 + 24,42). None of the patients had cryoglobulins. Just C3 fraction of complement was low (79,38 + 19,23), in 75% of the patients, without difference between the groups – p=0,9293. The rheumatoid factor was standard (29,73 + 15,11) in 71,42%; without difference between the groups as well (p=0,1248). Anthropometric nutritional assessment showed light to moderate malnutrition, with reduced muscular reservation (%CMB 85,20 + 10,28) in all of them; and high corporal fat (%GC 22,30 + 3,19) in 55,56%. Laboratory parameters values analyzed: albumin (4,12 + 0,51), transferrin (210,6 + 104,4) and lymphocytes count (1398 + 562,5) were normal in both groups. Subjectively 92,85% was classified as light malnutrition; 7,14% moderate and no eutrophic. Conclusion: Patients undergoing hemodialysis show high endothelial lesion, nevertheless, the presence of HCV did not show an aggravating factor of such state. ICAM-1 is a good marker in this population. VEGF was not useful as endothelial marker in such patients. This result may have happened due to the small number of patients. It would be necessary analysis with a larger sample for more definitive conclusions. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Objetivos: 1- Estudar a ativação endotelial em pacientes com artrite reumatóide, correlacionando os marcadores molécula de adesão intercelular-1(ICAM-1), endotelina- 1 (ET-1), fator de vonWillebrand (vWF) e fator de crescimento endotelial (VEGF) com a atividade clínica e laboratorial da doença. 2- Avaliar possíveis correlações entre os níveis destes marcadores com auto-anticorpos Fator reumatóide (FR) e anticorpo antipeptideo citrulinado cíclico (anti-CCP) e a gravidade da doença. Casuística e Métodos: Em 38 pacientes e 24 indivíduos não reumatóides foram dosados FR, antiCCP, vWF, ICAM-1, ET-1 e VEGF no soro (Nefelometria, Imunoturbidimetria e EIA). A atividade da doença foi definida pelo escore do DAS28. O HAQ (Health Assessment Questionnaire) definiu a capacidade funcional e os critérios revisados do American College of Rheumatology (ACR) a classe funcional. Radiografias de mãos e punhos quantificaram o índice de Sharp modificado. Na análise estatística foram empregados os testes qui-quadrado, teste T, teste de Kolmogorov-Smirnov, Mann-Whitney e o coeficiente de correlação de Spearman. Resultados: A idade dos pacientes foi de 52 ± 12,5 anos e dos indivíduos normais de 49 ± 9,4 anos. O tempo de doença foi de 68 ± 66,6 meses. O vWF apresentou correlação significativa com o tempo de evolução da doença, (r= 0,340; p= 0,037 ), os auto-anticorpos com o índice de Sharp, FR (r= 0,529; p= 0,001) anti-CCP (r= 0,415; p= 0,10). A correlação do vWF e da ICAM-1 foi significativa com o DAS-28 (r= 0,374*; p=0,021) e (r= 0,338; p= 0,038) respectivamente, o vWF se correlacionou com o HAQ (r= 0,355; p= 0,029) e com o Sharp (r= 0,564; p= <0,001). A ET-1 não teve correlação significante com nenhuma variável. O VEGF não se correlacionou significativamente com nenhuma variável. Conclusões: Os auto-anticorpos e os marcadores endoteliais, exceto o vWF não se correlacionaram com o tempo de doença. O FR e o anti-CCP se correlacionaram com o Índice de Sharp. O vWF apresentou correlação significativa com atividade e gravidade da doença, através da correlação com o DAS28 e com o Sharp. O ICAM-1 teve correlação significativa com o FR, mas não com o anti-CCP. No presente estudo a ET- 1 não mostrou ser um bom marcador endotelial para AR. / Objectives: 1 – To study endothelial activation in patients with rheumatoid arthritis, by establishing correlations among specific markers (intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), endotheline-1 (ET-1), von Willebrand factor (vWF) and vascular endothelial growth factor (VEGF)) with clinical and laboratorial activities of the disease; 2 – To evaluate possible correlations among the levels of those markers and rheumatoid factor (anti-RF), anti-cyclic citrullinated peptide autoantibody (anti-CCP) and the severity of the disease. Casuistic and Methods: In 38 patients and 24 non-rheumatoid individuals the following elements were dosed: RF, anti-CCP, vWF, ICAM-1, ET-1 and serum VEGF (nefelometry, imunoturbidimetry and EIA). Disease activity was determined by using the DAS28 score. HAQ (Health Assessment Questionnaire) defined the functional ability and the revised criteria of the American College of Rheumatology (ACR) defined the functional class. Hand and fist radiographs quantified the modified Sharp index. On statistical analysis tests employed were: qui-square test, T test, Kolmogorov-Smirnov test, Mann-Whitney test and Spearman’s correlation coefficient. Results: Patient age range was 52 ± 12,5 years and in normal individuals age variation was 49 ± 9,4. Disease time was 68 ± 66,6 months. Significant correlations were found between vWF and disease evolution time and also between autoantibodies and the Sharp index. Correlation of vWF and ICAM-1 were significant with DAS-28 and vWF was correlated with HAQ and with the Sharp index. ET-1 did not show significant correlations with any variable. VEGF was not found in significant correlation with any variable. Conclusions: Autoantibodies and endothelial markers, with the exception of vWF did not show correlations with disease time. RF and anti-CCP were correlated with the Sharp index. A significant correlation was found between vWF and disease activity and severity, through a correlation with DAS28 and Sharp. ICAM-1 had a significant correlation with RF but not with anti-CCP. In the present study ET-1 did not prove itself as an efficient marker for rheumatoid arthritis. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / Resolvina D1 y Resolvina E1 inhiben la activación de AKT, ERK1/2 y NF-kB dependiente de LPS y previenen la expresión de ICAM-1 y VCAM-1 en fibroblastos cardíacos Los fibroblastos cardiacos (FC) son células que tienen como función regular la matriz extracelular (MEC), pueden responder a estímulos endógenos o exógenos que alteren la homeostasis del sistema, y en caso de injuria, pueden proliferar y migrar hacia el sitio de daño. Uno de los agentes proinflamatorios más estudiados y utilizados es el lipopolisacárido (LPS) bacteriano, éste desencadena la respuesta inflamatoria activando las vías de señalización Akt, ERK1/2 y NF-κB, que conducen a la expresión de citoquinas proinflamatorias y factores de crecimiento los que, a su vez, aumentan la expresión de proteínas de adhesión como ICAM-1, VCAM-1, E-selectina, L-selectina, entre otras; permitiendo que células del sistema inmune viajen desde la circulación sanguínea hasta el sitio de injuria, para cicatrizar la herida. La inflamación puede ser terminada activamente por mediadores proresolutivos. Unos de estos mediadores son la Resolvina (Rv) D1 y E1. La RvD1 proviene del ácido docosahexaenoico y la RvE1 del ácido eicosapentaenoico. Estas se biosintetizan durante la inflamación y se les ha asociado propiedades antiinflamatorias, limitando la infiltración de neutrófilos, estimulando la fagocitosis de los macrófagos y reduciendo el nivel de dolor inflamatorio y fibrosis. Sin embargo, no existe evidencia de los efectos que podría tener en FC. El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos de RvD1 y RvE1 en FC, para así estudiar las acciones que tendría en un contexto inflamatorio inducido por LPS, evaluando la actividad en las vías de señalización Akt, ERK1/2 y NF-κB y sobre la expresión de las proteínas de adhesión ICAM-1 y VCAM-1. 12 Los resultados obtenidos muestran que RvD1 presenta una significativa disminución de la activación de Akt y ERK1/2, no así de NF-κB. RvE1 disminuye significativamente la activación de ERK1/2, sin embargo, no presenta cambios significativos respecto al control en la fosforilación de Akt y NF-κB. Además, se demostró que en FC estimulados con LPS y pretratados con RvD1, disminuyó la activación de las vías Akt, ERK1/2 y NF- κB respecto a LPS, y consecuentemente disminuyó la expresión de VCAM-1, pero no de ICAM-1. Por otro lado, RvE1 disminuyó significativamente la activación de Akt, no así la activación de ERK1/2 y NF-κB estimuladas por LPS. Además, disminuyó la expresión de ICAM-1 estimulado por LPS, pero no de VCAM-1. En conclusión, nuestros resultados sugieren que tanto RvD1 como RvE1 poseen propiedades resolutivas en un modelo de inflamación en FC, lo cual posibilitaría su uso como nuevas herramientas terapéuticas en enfermedades cardiacas / Resolvin D1 and Resolvin E1 inhibit AKT, ERK1/2 and NF-kB activation LPSdependent and prevent ICAM-1 and VCAM-1 expression in cardiac fibroblasts Cardiac fibroblasts (CF) are cells that regulate the extracellular matrix (ECM), they can respond to endogenous or exogenous stimuli that alter the homeostasis of the system, and in case of cardiac tissue injury, they can proliferate and migrate to the site of damage. One of the most studied and used proinflammatory agents is bacterial lipopolysaccharide (LPS), it triggers the inflammatory response activating the signaling pathways Akt, ERK1/2 and NF-κB, which lead to the expression of proinflammatory cytokines and growth factors that increase the expression of adhesion proteins such as ICAM-1, VCAM- 1. E-selectin, L-selectin, among others. These effects of LPS favor to the cells of the immune system extravasate to the site of injury to degrade the microorganism and heal the wound. Inflammation can be actively terminated by proresolving mediators, such as RvD1 and RvE1. RvD1 derived from docosahexaenoic acid and RvE1 from eicosapentaenoic acid. These are biosynthesized during inflammation and have been associated with anti- inflammatory properties, limiting the infiltration of neutrophils, stimulating the phagocytic activity of macrophages and reducing the level of inflammatory pain and fibrosis. However, there is no evidence respect of the effects it could have on FC. In this study, we investigated the role of RvD1 and RvE1 in FC, to study the actions that would have in an inflammatory context induced by LPS, evaluating the activity in the signaling pathways Akt, ERK1/2 and NF-κB and the expression of adhesion proteins ICAM-1 and VCAM-1. 14 The results show that RvD1 exert a significant decrease of Akt and ERK1/2 activity, but not NF-κB; RvE1 significantly decreases the activation of ERK1/2, however, it does not present significant effect in regard to the control in the phosphorylation of Akt and NF-κB. In addition, the pretreatment with RvD1, has decreased the activation of the Akt, ERK1/2 and NF-κB pathways respect to LPS, and consequently decreased the expression of VCAM-1, but not ICAM-1. On the other hand, RvE1 has significantly decreased the activation of Akt stimulated by LPS, but not of ERK1/2 nor NF-κB. Additionally, the expression of ICAM-1 stimulated by LPS has decreased, but not of VCAM-1. In conclusion, our results suggest that RvD1 and RvE1 have resolutive properties in an inflammatory model in CF, which would make possible its use as new therapeutic tool in cardiac diseases / Proyecto Fondecyt N° 1170425

Submitted by Fabiana Gonçalves Pinto (benf@ndc.uff.br) on 2017-02-23T17:18:30Z No. of bitstreams: 1 Magali Rezende de Carvalho.pdf: 3727493 bytes, checksum: cd7ca0e5fa89bc698cb1c0a9fe619926 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-23T17:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Magali Rezende de Carvalho.pdf: 3727493 bytes, checksum: cd7ca0e5fa89bc698cb1c0a9fe619926 (MD5) Previous issue date: 2016 / Mestrado Acadêmico em Ciências do Cuidado em Saúde / Contextualização: Os fatores de crescimento atuam no reparo tecidual emitindo sinais modulatórios estimulando ou inibindo os processos celulares. Objetivo: Analisar a eficácia dos fatores de crescimento no processo cicatricial de úlceras venosas através da busca de evidência na literatura científica. Método: Revisão sistemática segundo as recomendações da Colaboração Cochrane. Critérios de inclusão: Ensaios clínicos randomizados sobre o uso dos fatores de crescimento no tratamento de úlceras venosas; abordando o número total de úlceras cicatrizadas, redução da área e/ou tempo de cicatrização. Exclusão: estudos em andamento, protocolos de pesquisa; artigos que associam fatores de crescimento ao enxerto de pele e estudos que incluíram úlceras de múltiplas etiologias sem análise por subgrupo. Bases de dados consultadas: Ovid MEDLINE(R); Ovid MEDLINE(R) In-Process & Other Non-Indexed Citations; Ovid MEDLINE(R) Epub Ahead of Print; EMBASE; CINAHL Plus with Full Text, Cochrane CENTRAL, LILACS e Web of Science. Também foram consultados a Biblioteca Digital Brasileira de Teses e Dissertações e Google Acadêmico, além da busca manual através da lista de referências dos estudos incluídos. Não houve restrição temporal ou de idioma. A análise estatística foi realizada através do programa Review Manager 5.3 (Colaboração Cochrane). Para variáveis dicotômicas, foram calculados o risco relativo considerando um intervalo de confiança de 95%. A metanálise foi realizada utilizado o modelo de efeito fixo de Mantel-Haenszel quando I2 < 50% e modelo randômico para I2 > 50%. Resultados: A aplicação de fatores de crescimento para tratamento de úlceras venosas não acelerou o reparo tecidual comparado como tratamento padrão/placebo (RR 1,01 [IC 95%: 0,88-1,16]). Resultados semelhantes foram encontrados ao analisar os subgrupos PRP (RR 1,01 [IC 95%: 0,80-1,28]); KGF (RR 0,93 [IC 95%:0,78-1,11]); PDGF (RR 1,17 [IC 95%: 0,78-1,74]); EGF (RR 2,87 [IC 95%: 0,65-12,73; p=0,17]); TGF (RR 1,14 [IC 95%: 0,41-3,15]). Conclusão: Os resultados dessa revisão foram baseados em estudos classificados como moderado a alto risco de viés, portanto, precisam ser interpretados com cautela. Portanto, não há evidências para afirmar que os fatores de crescimento influenciam positivamente na cicatrização de úlceras venosas. Estudos mais robustos, com maior poder e melhor qualidade metodológica são necessários para de determinar melhores recomendações sobre o uso dos fatores de crescimento no tratamento de úlceras venosas. (Registro PROSPERO: CRD42016038390). / Background: Growth factors act in tissue repair by sending modulated signals stimulating or inhibiting cellular processes. Aim: To analyze the efficacy of growth factors in the healing process of venous ulcers by seeking evidence in the scientific literature. Method: Systematic review according to Cochrane Collaboration. Inclusion criteria: Randomized controlled trials using growth factors in the treatment of venous leg ulcers; approaching the total number of healed ulcers, wound area reduction and healing time. Exclusion: ongoing studies, research protocols; articles linking growth factors to the skin graft and studies that included ulcers of multiple etiologies without subgroup analysis. Databases consulted: Ovid MEDLINE (R); Ovid MEDLINE (R) In-Process & Other Non-Indexed Citations; Ovid MEDLINE (R) Epub Ahead of Print; EMBASE; CINAHL Plus with Full Text, Cochrane CENTRAL, LILACS and Web of Science. Also, the Brazilian Digital Library of Theses and Dissertations and Google Scholar were consulted, as well as hand search through the list of references of included studies. There was no time or language restrictions. Statistical analysis was performed using Review Manager 5.3 software (Cochrane Collaboration). For dichotomous variables, the relative risk was calculated considering a 95% confidence interval. The meta-analysis was performed using the fixed-effect model of Mantel-Haenszel when I2 <50% and a random model for I2> 50%. Results: The application of growth factors for the treatment of venous ulcers did not accelerate the healing process compared to standard treatment/placebo (RR 1.01 [95% CI: 0.88 to 1.16]). Similar results were found when analyzing the following subgroups: PRP (RR 1.01 [95% CI: 0.80 to 1.28]); KGF (RR 0.93 [95% CI: 0.78 to 1.11]); PDGF (RR 1.17 [95% CI: 0.78 to 1.74]); EGF (RR 2.87 [95% CI: 0.65 to 12.73, p = 0.17]); TGF (RR 1.14 [95% CI: 0.41 to 3.15]). Conclusion: The results of this review were based on studies classified as moderate to high risk of bias, therefore need to be interpreted with caution. So there is no evidence that the growth factors positively influence the healing of venous leg ulcers. More robust studies, more power and better methodological quality are needed to determine the best recommendations on the use of growth factors in the treatment of venous leg ulcers. (PROSPERO Registration: CRD42016038390).

Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardíacos (FC) se encargan de mantener tanto la estructura como la mecánica y la señalización del corazón. A estas células se les conoce como células centinela, pues responden de manera variada y compleja a fin de mantener la homeostasis, jugando un rol clave dentro de este proceso. Dicha respuesta se lleva a cabo mediante una maquinaria conformada por una amplia red de receptores, entre ellos los receptores tipo-toll y, en particular, el TLR4 (del inglés toll like receptor 4). Este receptor presenta patrones de reconocimiento que le permite responder a diversos ligando, los que pueden ser exógenos como el lipopolisacárido bacteriano (LPS) o endógenos como el heparan sulfato (HS). Ambos estímulos han mostrado mediar respuestas inflamatorias y fibróticas tanto en FC, como en otros tejidos. Sin embargo, en esta memoria se abordará específicamente el rol de HS como estímulo desencadenante de estas respuestas. Como modelo experimental se usaron FC de ratas neonatas y adultas (FCN y FCA). Estudios previos demuestran que, en FC, LPS modifica los niveles proteicos de la citoquina pro inflamatoria IL-1β, así como de proteínas de adhesión celular y vascular (ICAM-1 y VCAM-1, respectivamente) y de la proteína alfa actina del músculo liso (α-SMA). Esta última proteína constituye un marcador de diferenciación de fenotipo FC-MFC (miofibroblasto cardíaco), que se expresa en estados patológicos, como ocurre luego de un infarto cardíaco. Para el caso de HS existe evidencia que indica que es un agonista del TLR4, pero no se han medido las variaciones de IL-1β, ICAM-1, VCAM-1 ni de α-SMA a nivel cardíaco; siendo uno de los objetivos del presente trabajo demostrar si esto ocurre. Para despejar tal interrogante se medirán los niveles de las proteínas mencionadas. También se evaluarán las vías de señalización PI3K/Akt, Erk1/2 y NF-κB de TLR4, comparando efectos inducidos por LPS y HS, a fin de comprobar si el aumento de VCAM-1 y la disminución de α-SMA en FC, es mediada por alguna de estas vías de señalización que involucran al receptor. En conclusión, en FCN y FCA, tanto HS como LPS inducen cambios en los niveles proteicos de IL-1β, ICAM-1, VCAM-1 y α-SMA, lo que resalta las propiedades proinflamatorias y antifibróticas de ambos estímulos tras la activación de TLR4 / Heart structure, mechanism and signaling is supported by cardiac fibroblast (CF). These cells are named sentinel cells, because they respond in complex and different manner to mantein homeostasis, playing a key role in this process. This action is due to a mechanism that involves a bread spectrum of receptors, including the toll like receptors especially TLR4 (toll like receptor 4). This receptor has recognition patterns, wich allow to answer to several stimulus, like bacterian lipopolysaccharide (LPS) and heparan sulphate (HS), exogenous and endogenous stimulus respectively. Both of them has shown to mediate fibrotics and inflamatories reponses, in CF and others tissues. However, in this study we will present the HS responses in adults and neonates animal fibroblasts (ACF and NCF). According to literature, in CF, LPS changes on IL-1β levels, a proinflamatory citoquine; ICAM-1 y VCAM-1 (intercellular and vascular adhesion molecule) and finally the α-SMA protein (α-smoth muscle actin), responsible for cardiac tissue integrity and main fibroblast-myofibroblast differentiation master, expressed in pathological stage, such as heart infarct. In relation with HS, there is evidence that it is a TLR4 agonist, but IL-1β, ICAM-1, VCAM-1 and α-SMA variations has not been determinated. In this work we will perform these experiments. Besides the analysis of these proteins, we will study the PI3K/Akt, ERK1/2 and NF-κB signaling pathways implicated in the VCAM-1 increase and α-SMA decrease in ACF, via TLR4, as well as the receptor blockade in order to demostrate if these effects are mediated by this receptor, by comparing the effects of HS and LPS. In conclusion, as HS as LPS induced changes in IL-1β, ICAM-1, VCAM-1 and α-SMA protein levels, in NCF and ACF. Therefore the antifibrotics and proinflamatories properties of the two stimulus after the activation of TLR4 are demonstrated