Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-15T16:27:53Z No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T16:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) Previous issue date: 2005-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this work was to establish protocols for the induction of embryogenic calluses in heliconia species. Two experiments were carried out. The first one had three assays. The first assay consisted of combinations of AIA (indole-3-acetic) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (2,4-dichlorofenoxyacetic acid) (0, 3, 4, and 5 mg.L-1) and the second essay combined BAP (6-benzylamino purine) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (0, 3, 4, and 5 mg.L-1). Sections of ovaries of H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink were used in the assays above. The third assay was established from combinations among three levels of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and five levels of 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1) within cultivars Sexy Pink and Sexy Scarlet of H.chartacea. The second experiment used explant zygotic embryos of H. bihai cv. (L.) L.Lobster Claw Two in combinations of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1). Evaluations in both experiments were carried out on days 30, 60 and 90 after innoculation. Aspects of the callus and the presence of nodules were assessed by visual observations with the help of a stereomicroscope and cytochemical, histologic and scanning electron microscopy analyses were performed. At the end of experiment 1, the index of formation of callus in explants treated with AIA+2,4-D (Assay 1) was greater than that observed with the combinations of BAP+2,4-D (Assay 2). The AIA+2.4-D assay also produced proembryonary cells. In the third assay the Sexy Pink cultivar showed a greater index of formation of callus than the Sexy Scarlet cultivar, but these calluses didn t show somatic embryos at the end of 90 days of cultivation. In the second experiment, formation of somatic proembryos occurred only in zygotic embryos from mature fruit of H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivated in the absence of growth regulators. The objective of the second work was to evaluate micropropagation processes for cultivation of zygotic embryos. Initially, an analysis of the internal structure of the embyo was carried out using immature and mature fruits. This was accomplished by embedding the fruits in paraffin and sectioning them with a microtome. Embryos from immature and mature fruits were innoculated in an MS (Murashige and Skoog) environment with different concentrations of salts (full MS and ½ MS), AG3 (0, 2.5 and 5 mg.L-1) and saccharose or glucose (30 g.L-1), and their development was evaluated. Evaluations were carried out 15, 30 and 60 days after innoculation based on visual observations, quantitative parameters, and number of roots. Then, plants were replicated and transferred to an MS environment (full MS or ½ MS), added 0 or 2.5 mg.L-1 BAP, with the objective to evaluate their development after 30 and 45 days after innoculation. The genetic variability of plants from zygotic embryos was estimated using isoenzymatic analyses (PO, EST, ACP, GOT, ADH, and MDH). The internal structure of mature embryos showed tissues in more advanced stages of differentiation than immature embryos, as expected. In the ½ MS environment with saccharose, 85% of the innoculated embryos were converted into plants, just 41% converted into plants in the glucose environment. During the multiplication phase, plants cultivated in an MS environment with a 50% concentration of salts and 2.5 mg.L-1 of BAP showed a greater number of buds. The isoenzymatic analyses showed some changes of isoenzymatic patterns, for example in intensity of coloration and migration of some bands. These results can be associated respectively with the difference of the ages among mother plant and plants obtained in vitro and/or variations in eletrophoretic phenotypes of the plants from in vitro cultivation of zygotic embryos. / Visando estabelecer protocolos para a indução de calos embriogênicos em espécies de helicônia, foram realizados dois experimentos, onde o primeiro constou de três ensaios. O primeiro ensaio consistiu de combinações de AIA (ácido 3-indolilacético) (0; 1; 1,5; 2 e 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) (0; 3; 4; e 5 mg.L-1) e o segundo ensaio combinou o BAP (6- benzilaminopurina) (0; 1; 1,5; 2; 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (0; 3; 4; e 5 mg.L-1), utilizando em ambos secções de ovários de H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink. O terceiro ensaio foi estabelecido a partir de combinações entre três níveis de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e cinco níveis de 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1), utilizando como explante, secções de ovários das cultivares Sexy Pink e Sexy Scarlet da espécie H. chartacea. No segundo experimento foi utilizado como explante, embriões zigóticos de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two em combinações de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1). As avaliações em ambos experimentos foram realizadas aos 30, 60 e 90 dias após a inoculação, considerando o aspecto dos calos e a presença de nódulos, através de observações visuais com o auxílio de estereomicroscópio, além de análises citoquímica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura. No experimento 1 o índice de formação de calos nos explantes tratados com AIA+2,4-D (Ensaio I), foi superior àquele observado com as combinações de BAP+2,4-D (Ensaio II), ao final dos 90 dias de cultivo, onde observou-se a presença de células pró-embriogênicas. No terceiro ensaio a cultivar Sexy Pink apresentou um maior índice de formação de calos do que a cultivar Sexy Scarlet , mas, esses calos não apresentaram a formação de embriões somáticos ao final dos 90 dias de cultivo. No segundo experimento, a formação de pró-embriões somáticos ocorreu apenas nos embriões zigóticos provenientes de frutos maduros de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivados na ausência de reguladores de crescimento. Objetivando avaliar o processo de micropropagação a partir do cultivo de embriões zigóticos, foi realizada inicialmente uma análise da estrutura interna do embrião proveniente de frutos imaturos e maduros. Para isto, foram incluídos em parafina e seccionados em micrótomo. Os embriões provenientes de frutos imaturos e maduros foram inoculados em meio MS (Murashige e Skoog) com diferentes concentrações de sais (MS completo e ½ MS), de GA3 (ácido giberélico) (0; 2,5 e 5,0 mg.L-1), além de sacarose ou glicose (30 g.L-1), para avaliar a conversão do embrião em planta. As avaliações considerando o desenvolvimento da parte aérea e o número de raízes foram realizadas aos 15, 30 e 60 dias após a inoculação, com base em observações visuais e parâmetros quantitativos. Em seguida, as plantas obtidas foram repicadas e transferidas para meio MS (MS completo ou ½ MS), acrescido de 0 ou 2,5 mg.L-1 BAP com o objetivo de avaliar a multiplicação aos 30 e 45 dias após a inoculação. Para avaliar a variabilidade genética das plantas provenientes de embriões zigóticos, utilizou-se sistemas isoenzimáticos (PO, EST, ACP, GOT, ADH e MDH). Avaliando a estrutura interna dos embriões, observou-se que os embriões maduros apresentam tecidos em estádios de diferenciação mais avançados do que os embriões imaturos, como já era esperado. Na fase de conversão dos embriões em plantas, observou-se que 85% dos embriões provenientes de frutos maduros converteram-se em plantas normais em meio MS reduzido à metade da concentração dos sais, utilizando a sacarose como fonte de carboidrato, enquanto que os embriões cultivados em meios com glicose, apenas 41% converteram-se em plantas. Na fase de multiplicação, as plantas cultivadas em meio MS com 50% da concentração dos sais acrescido de 2,5 mg.L-1 de BAP, apresentaram maior número de gemas aos 45 dias de cultivo. Quanto a análise isoenzimática foi observado algumas alterações nos padrões isoenzimáticos no que se refere a intensidade de coloração e a migração de algumas bandas. Esses comportamentos podem estar associados respectivamente, a diferença de idade entre a planta matriz e as plantas obtidas in vitro e/ou alguma variação no fenótipo eletroforético das plantas provenientes do cultivo in vitro de embrião zigótico.

Orientadores: Vera Nisaka Solferini, Fernando Roberto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T23:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiasFilho_ClaudemirRodrigues_M.pdf: 558956 bytes, checksum: 66a246482fad979ca72a590d4371a593 (MD5) Previous issue date: 2006 / Não informado / Not informed / Mestrado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Mestre em Genética e Biologia Molecular

NHE3 reabsorve a maior parte de Na+ em túbulos proximais e é agudamente modulado por Ang II de forma bimodal. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos crônicos da Ang II sobre a atividade, expressão e atividade promotora de NHE3. A atividade de NHE3 foi avaliada na presença de veículo, inibidor de NHE1, 2 e 3 e H+ ATPase. Houve redução da recuperação do pHi na presença do inibidor de NHE3. Células foram expostas por 24h a Ang II de 10-7M a 10-12 M e houve aumento de atividade com Ang II 10-11 M. Houve aumento na expressão de NHE3 e no seu RNAm. Actinomicina D não mostrou diferença entre os tempos de ½ vida do RNAm. Transfecções transitórias de fragmentos do promotor de NHE3 de rato mostraram que a atividade do fragmento -65/+31 aumentou na presença de Ang II. Mutações em sítios para a ligação de Sp1/Egr-1 e AP2 mostraram que o sítio Sp1/Egr-1 é fundamental para esse efeito. As vias que envolvem o citocromo P450, PI3K, PKA e MAPK são ativadas, porém, as vias da PLC e JAK/STAT não. Losartan aboliu os efeitos observados. Conclui-se que a exposição crônica à baixa concentração de Ang II promoveu aumento na atividade, expressão, nível de RNAm e atividade promotora do gene NHE3 via AT1R. O sítio de ligação para os fatores de transcrição Sp1/Egr-1 está envolvido nessa resposta. / NHE3 is the major responsible for the sodium reabsorption in proximal tubules and it is Ang II acutely modulated in a bimodal fashion. The aim of this study was to evaluate the chronic effects of Ang II on NHE3 activity, transcription and expression. The NHE3 activity was evaluated in the presence of vehicle, NHE1, 2 and 3 and H+ ATPase inhibitors. Presence of NHE3 inhibitor reduced the rate of pHi recovery. Cells were treated with Ang II 10-7M to 10-12 M for 24h and Ang II 10-11 M increased the pHi recovery rate. NHE3 protein and mRNA were increased in Ang II presence. NHE3 mRNA ½ life in Actinomycin D incubated cells was not affected by Ang II treatment. Transient transfections of fragments of rat NHE3 promoter showed that the activity of -65/+31 was increased in Ang II presence. Mutation at Sp1/Egr-1 and AP2 sites in the -60/+31 fragment showed that Sp1/Egr-1 integrity is required. Cytochrome P450, PI3K, PKA and MAPK signaling pathways are related with this effect, while PLC and JAK/STAT are not. Losartan abolished the observed effects. In conclusion, chronic treatment with low concentration of Ang II resulted in increase of NHE3 activity, protein expression, mRNA levels and promoter activity of NHE3 gene through AT1R. Sp1/Egr-1 site seems to be involved in this effect.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Leucaena is a tree specie that it is able to improve the soil and can give food for animals. It is an alternative to farmer in dry periods in Northest. Seeds of leucaena (Leucaena leucocephala Lam) from two populations (Reserva Florestal Ibura and Campus da Universidade Federal de Sergipe), were collected and storage for different periods as goal their utilization as alternative culture aiming agroecosystem sustainability. The objective of this work was to evaluate the physiological and sanitary seed quality and fungi infection to seedlings obtained of seeds storage for 2, 28 and 48 months. The seeds were storage in paper bags inside a refrigerated chamber with 40% of humidity at 10 ± 1° C and the experiments carried out in Phytosanitary Clinical, Tissues Culture and Vegetal Breeding Laboratory and Seeds Laboratory of Universidade Federal de Sergipe from February through December, 2005. It was used a statistical totally randomized design with four replications. It was detected in batches of 48 and 28 months fungi from Aspergillus and Penicillium genus. For seeds storage for 2 months it was detected Pestalotiopsis, Fusarium and Curvularia genus. In concerned to infection of the fungi it was verified the Aspergillus was able to cause hypocotyls necrosis on seedlings. For seeds physiological analysis tests as Germination Speed Index (IVG), Emergence Speed Index (IVE), Electrical Conductivity (CE), Accelerate Ageing (EA), Humidity (%U) and isozymes were carried out. It was verified the seeds storage for two months presented higher values of IVG. In the CE test the seeds storage for two months and submitted to accelerate ageing during 24 hours presented the higher values of CE. The isozyme markers showed alteration in patterns of bands intensity and absence of alteration in protein subunit which permit to infer the batches besides from different provenances, probably were not genetically divergent. This fact corroborates to justify the comparison made in this work. It was observed a decreasing in values of germination with increasing storage periods which suggest vigor lost. It was recommended the storage the leucaena seeds for a period maximum of two years for the conditions of present work. / A leucena (Leucaena leucocephala Lam.) é uma espécie arbórea, capaz de contribuir para o melhoramento do solo, além de servir de forragem para o gado, possibilitando ao agricultor uma alternativa para as regiões áridas do Nordeste. É uma espécie bem adaptada às regiões secas, conseguindo se manter verde por grande parte do ano. Sementes de leucena provenientes de duas populações (Reserva Florestal Ibura e Campus da Universidade Federal de Sergipe) foram coletadas e armazenadas em diferentes épocas do ano visando a sua utilização como alternativa para a sustentabilidade de agroecossistemas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade fisiológica e sanitária e a transmissão de fungos associados às sementes armazenadas por 2, 28 e 48 meses em sacos de papel dentro de câmara fria com 40% de umidade a 10 ± 1° C. Os experimentos foram realizados na Clínica Fitossanitária, no Laboratório de Biotecnologia e Cultura de tecidos e no Laboratório de Sementes da Universidade Federal de Sergipe, no período compreendido entre fevereiro e dezembro de 2005. Para a análise fisiológica das sementes, empregou-se o delineamento inteiramente casualizado com 4 repetições e as sementes testadas foram previamente submetidas ao envelhecimento acelerado. Testes como Índice de Velocidade de Germinação (IVG), Índice de Velocidade de Emergência (IVE), Condutividade Elétrica (CE), Envelhecimento Acelerado (EA), Grau de Umidade (%U) e isoenzimas foram realizados. No teste de sanidade, nos lotes de 28 e 48 meses de armazenamento, fungos dos gêneros Aspergillus e Penicillium foram detectados Já nas sementes do lote de 2 meses de armazenamento, gêneros como Pestalotiopsis, Fusarium e Curvularia foram detectados e observou-se uma maior diversidade de gêneros fúngicos neste lote do que nos demais. Não foi verificada transmissão de fungos das sementes para as plântulas. Na análise fisiológica, verificou-se para as sementes armazenadas por 2 meses os maiores valores de IVG. No teste de CE as sementes com 2 meses de armazenamento submetidas ao EA por 24 horas apresentaram maiores valores. As análises usando marcadores isoenzimáticos mostraram alterações na intensidade de bandas dos perfis eletroforéticos e ausência de alterações nas subunidades protéicas, o que permite inferir que os lotes, apesar de serem de procedências diferentes, provavelmente não são geneticamente divergentes, o que pode justificar as comparações realizadas no presente trabalho. Observou-se, ainda, uma queda nos valores de germinação com o aumento nos períodos de armazenamento, sugerindo uma perda no vigor.

NHE3 reabsorve a maior parte de Na+ em túbulos proximais e é agudamente modulado por Ang II de forma bimodal. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos crônicos da Ang II sobre a atividade, expressão e atividade promotora de NHE3. A atividade de NHE3 foi avaliada na presença de veículo, inibidor de NHE1, 2 e 3 e H+ ATPase. Houve redução da recuperação do pHi na presença do inibidor de NHE3. Células foram expostas por 24h a Ang II de 10-7M a 10-12 M e houve aumento de atividade com Ang II 10-11 M. Houve aumento na expressão de NHE3 e no seu RNAm. Actinomicina D não mostrou diferença entre os tempos de ½ vida do RNAm. Transfecções transitórias de fragmentos do promotor de NHE3 de rato mostraram que a atividade do fragmento -65/+31 aumentou na presença de Ang II. Mutações em sítios para a ligação de Sp1/Egr-1 e AP2 mostraram que o sítio Sp1/Egr-1 é fundamental para esse efeito. As vias que envolvem o citocromo P450, PI3K, PKA e MAPK são ativadas, porém, as vias da PLC e JAK/STAT não. Losartan aboliu os efeitos observados. Conclui-se que a exposição crônica à baixa concentração de Ang II promoveu aumento na atividade, expressão, nível de RNAm e atividade promotora do gene NHE3 via AT1R. O sítio de ligação para os fatores de transcrição Sp1/Egr-1 está envolvido nessa resposta. / NHE3 is the major responsible for the sodium reabsorption in proximal tubules and it is Ang II acutely modulated in a bimodal fashion. The aim of this study was to evaluate the chronic effects of Ang II on NHE3 activity, transcription and expression. The NHE3 activity was evaluated in the presence of vehicle, NHE1, 2 and 3 and H+ ATPase inhibitors. Presence of NHE3 inhibitor reduced the rate of pHi recovery. Cells were treated with Ang II 10-7M to 10-12 M for 24h and Ang II 10-11 M increased the pHi recovery rate. NHE3 protein and mRNA were increased in Ang II presence. NHE3 mRNA ½ life in Actinomycin D incubated cells was not affected by Ang II treatment. Transient transfections of fragments of rat NHE3 promoter showed that the activity of -65/+31 was increased in Ang II presence. Mutation at Sp1/Egr-1 and AP2 sites in the -60/+31 fragment showed that Sp1/Egr-1 integrity is required. Cytochrome P450, PI3K, PKA and MAPK signaling pathways are related with this effect, while PLC and JAK/STAT are not. Losartan abolished the observed effects. In conclusion, chronic treatment with low concentration of Ang II resulted in increase of NHE3 activity, protein expression, mRNA levels and promoter activity of NHE3 gene through AT1R. Sp1/Egr-1 site seems to be involved in this effect.

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