The glutamate-gated chloride (GluCl) channel family of receptors are members of the ligand-gated ion channel (LGIC) family. In addition to being essential for physiological and behavioural aspects of an organism, they are also exploited as a target for the drug ivermectin. A novel GluCl subunit in C. elegans, GLC-4, was characterized in order to further understand the diversity of GluCls and their implications in biological and behavioural processes. Sequencing of cDNAs generated by RT-PCR indicate that GLC-4 possesses the typical features of a GluCl subunit. In addition, they also suggest possible alternative splicing of glc-4 resulting in a slightly truncated transcript. A glc-4 mutant, glc-4(ok212), was used to investigate the role of GLC-4 in C. elegans ivermectin sensitivity and behaviour. Glc-4(ok212) worms were found to be hypersensitive to low concentrations of ivermectin and experienced a slight hyperreversal behaviour. Genetic, molecular, and electrophysiological evidence is also provided suggesting an interaction between GLC-4 and AVR-14, another GluCl subunit in C. elegans. We hypothesize a direct association between GLC-4 and AVR-14 which together form a heteromeric channel in vivo .

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2005. / Härtill 5 uppsatser.

Submitted by DIEGO FARIA COLA null (coladf@gmail.com) on 2016-03-02T22:46:11Z No. of bitstreams: 1 dissertacao.pdf: 1500429 bytes, checksum: 0915c0a782a07bc716f94ac8d6e25db8 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: Por favor verifique a numeração do arquivo submetido. O número de páginas está inconsistente com o sumário. A versão submetida é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração após a aprovação. Caso a troca do arquivo no Repositório seja imprescindível, o aluno deverá entrar em contato com a Seção Técnica de Pós-Graduação de sua unidade e verificar quais os procedimentos necessários devem ser realizados para a substituição. Agradecemos a compreensão. on 2016-03-04T13:53:10Z (GMT) / Submitted by DIEGO FARIA COLA null (coladf@gmail.com) on 2016-03-04T14:12:33Z No. of bitstreams: 1 dissertacao.pdf: 1500361 bytes, checksum: bff7d0721d385321109c2e58dfa5697a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-04T14:43:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cola_df_me_soro.pdf: 1500361 bytes, checksum: bff7d0721d385321109c2e58dfa5697a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T14:43:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cola_df_me_soro.pdf: 1500361 bytes, checksum: bff7d0721d385321109c2e58dfa5697a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo de características e aplicações de estruturas em escala nanométrica passou a ter um grande interesse de pesquisadores das áreas médicas (humana e animal), ambiental e agrícola. Entre essas estruturas, destacam-se os nanocarreadores, que permitiram a melhoraria da biodisponibilidade de muitos compostos bioativos e a diminuição de possíveis efeitos toxicológicos. Além disso, evitar a ocorrência de altos prejuízos na agropecuária com o desenvolvimento de novos nanocarreadores voltados ao combate de endo e ectoparasitas causadores de grandes prejuízos aos pecuaristas. Fármacos como a Ivermectina e o Metopreno são utilizados no combate de ectoparasitas, no entanto, estes compostos possuem problemas relacionados à biodisponibilidade. Este trabalho teve como objetivo preparar e caracterizar sistemas carreadores lipídicos, como as Nanopartículas Lipídicas Sólidas e os Carreadores Lipídicos Nanoestruturados a fim de melhorar e produzir alternativas para o uso destes compostos visando aplicações em veterinária. Na primeira etapa do trabalho foram preparadas e caracterizadas as nanopartículas lipídicas sólidas e os carreadores lipídicos nanoestruturados contendo os fármacos ivermectina e metopreno. As propriedades físico-químicas das suspensões coloidais, como, diâmetro, polidispersão, potencial zeta, pH e eficiência de encapsulação foram avaliadas em função do tempo. A eficiência de encapsulação alcançada foi acima de 99% para ambos os fármacos, sendo que as suspensões coloidais apresentaram estabilidade durante o período investigado. Os resultados do ensaio de citotoxicidade e genotoxicidade demonstram que as nanopartículas testadas para a encapsulação possibilitaram um aumento na viabilidade celular das células testadas, onde as nanopartículas lipídicas sólidas apresentaram menor toxicidade do que os carreadores lipídicos nanoestruturados. As nanopartículas lipídicas sólidas apresentaram tamanho médio de 285,6 ± 15,8 nm e os carreadores lipídicos nanoestruturados de 257,5 ± 7,4 nm. Todas os carreadores apresentaram morfologia esférica, sem formação de agregados e sem alterações morfológicas após a encapsulação. Portanto, os resultados deste trabalho demostraram que as nanopartículas apresentaram boas características coloidais e a presença ou ausência de drogas não provocam alterações nas características das nanopartículas, possibilitando o desenvolvimento de sistemas carreadores para estas drogas visando aplicações veterinárias. / The study characteristics and structures of applications in nanoscale have a great interest of researchers in medical areas (human and animal), environment and agriculture. Among these, the nanocarriers stand out, that allowed improve the bioavailability of many bioactive compounds and the reduction of potential toxicological effects, and prevent the occurrence of high losses in agriculture with the development of new nanocarriers aimed at fighting and endo ectoparasites causing great harm to farmers. Drugs such as Ivermectin and Methoprene are used to combat ectoparasites, however, these compounds possess bioavailability problems related. This study aimed to prepare and characterize lipid carrier systems, such as Solid Lipid Nanoparticles and Nanostructured Lipid carriers to improve and produce alternatives to the use of these compounds targeting applications in veterinary. In the first stage of the work we have been prepared and characterized the solid lipid nanoparticles and nanostructured lipid carriers containing the drug ivermectin or methoprene. The physico-chemical properties of colloidal suspensions such as, diameter, polydispersity, Zeta potential, pH and encapsulation efficiency were measured as a function of time. The encapsulation efficiency was achieved above 99% for both drugs, and colloidal suspensions were stable during the period investigated. The results of the cytotoxicity and genotoxicity test demonstrate that the tested nanoparticles for encapsulating allowed an increase in cell viability of test cells, where the solid lipid nanoparticles had lower toxicity than the nanostructured lipid carriers. The solid lipid nanoparticles have an average size of 285,6 ± 15,8 nm and nanostructured lipid carriers 257,5 ± 7,4 nm. All the carriers had spherical morphology without forming aggregates and without morphological changes after encapsulation. Therefore, the results of this study demonstrated that the colloidal nanoparticles showed good characteristics and the presence or absence of drug do not cause changes in the characteristics of the nanoparticles, allowing the development of carrier systems for drug targeting these veterinary applications. / FAPESP: 2013/24788-6

Níveis não aceitáveis de resíduos de ivermectina (IVM), uma droga anti-parasitária amplamente utilizada no Brasil para controle de endectoparasitas, pode estar presente no leite para consumo humano se administrada incorretamente. O nível máximo de resíduos no leite para este composto é de 10 ng mL-1 e sua presença tem sido comprovada em pesquisas realizadas por orgãos reguladores. Com o conhecimento deste problema, um método para a detecção de ivermectina em amostras de leite foi desenvolvido utilizando a extração líquido-líquido com base em acetonitrila e hexano, seguida por derivatização com 1-metilimidazol (MI), trietilamina (TEA), ácido anidro trifluoroacético (TFAA) e ácido trifluoroacético (TFA) e cromatografia líquida com detecção fluorescente (LC-FL) para a análise. Além disso, o método proposto foi testado de acordo com parâmetros de validação estabelecidos pela ANVISA. Parâmetros, tais como seletividade, linearidade (R² 0,98), precisão (coeficiente de variação entre 0,6-19%), recuperação (90-95%) e robustez foram avaliados durante o processo de validação. Subsequentemente, foi testado em amostras de leite de vacas tratadas com uma formulação comercial de ivermectina a 1%. O método aplicado em amostras de campo, provou possuir um perfil de quantificação e de confirmação para o método concebido no presente estudo. / Non-acceptable residue levels of ivermectin (IVM), an anti-parasitic drug widely employed in Brazil for control of endectoparasites, could be present in milk for human consumption if improperly administered. The maximum residue level in milk for this compound is 10 ng mL-1 and its presence has been proved from previous government surveys. With this rising subject, a method for the detection of ivermectin in milk samples was developed using liquid-liquid extraction based in acetonitrile and hexane, followed by derivatization with 1-methylimidazole (MI), triethylamine (TEA), anhydrous trifluoacetic acid (TFAA) and trifluoracetic acid (TFA) and liquid chromatography coupled to fluorescent detection (LC-FL) for the analysis. Moreover, the proposed method was tested according to validation parameters estabilished by ANVISA. Parameters, such as selectivity, linearity (R² 0.98), precision (RSD values between 0.6 19%), recovery (90-95%) and robustness were evaluated during the validation process. Subsequently it was tested in milk samples from cows treated with a commercial ivermectin formulation at 1%. The method applied to field samples, proved a quantifiable and confirmatory profile for the method designed in this study.

Orientador: Susanne Rath / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_JoelFernandoMagri_M.pdf: 2000946 bytes, checksum: 776f3525265b262b985b62608957a362 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A ivermectina (IVM) e um antiparasitário da classe das avermectinas mundialmente utilizado na produção animal. Quando os fármacos apresentam teores fora das especificações, estes podem comprometer a saúde animal e/ou deixar resíduos no produto animal destinado ao consumo humano. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar um método analítico usando a cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de fotodiodos (HPLC-DAD) e avaliar um método alternativo, espectroscopia no infravermelho próximo (NIR) associada a quimiometria, para a quantificação de IVM em medicamentos veterinários. Os parâmetros cromatográficos foram estabelecidos seguindo as especificações da Farmacopéia Britânica e a validação foi baseada na Resolução n° 899 de 29/05/03 da ANVISA. A separação da IVM de seu homólogo foi realizada em uma coluna cromatográfica C18 Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), fase móvel metanol:água (83:17, v/v), vazão de 1,0 mL min, temperatura de 30 °C e comprimento de onda de detecção de 245 nm. O método foi seletivo com os seguintes parâmetros de validação: linearidade (r = 0,9995), intervalo de linearidade: 40 a 60 mg mL, exatidão: 96 - 104 %, precisão intra-dia: 0,5 a 4,8% e precisão inter-dia: 2,7%. Trinta e uma amostras (formulações injetáveis) foram analisadas e 45,2% estavam fora das especificações (valor declarado). Os estudos empregando a NIR foram executados na faixa espectral de 4000 a 14000 cm. Os espectros obtidos (média de 100 espectros) foram tratados com a ferramenta quimiométrica PCA (Principal Component Analysis) para a análise exploratória dos dados e um modelo de calibração foi construído por PLS (Partial Least Squares). O modelo de calibração baseou-se em validação cruzada usando 66 variáveis (4104,2 a 4354,9 cm), 5 componentes principais e 25 amostras. Embora o método NIR tenha mostrado algumas vantagens sobre o metodo cromatográfico, o emprego da HPLC ainda é necessário para confirmação de identidade / Abstract: Ivermectin (IVM) is an antiparasitic compound of the class of avermectins worldwide used in livestock production. When veterinary drugs present levels outside their specifications, they may compromise animal health and/or leave residues in animal products destined for human consumption. The aims of this work were the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography with photodiode array detection (HPLC-DAD) and evaluation of an alternative method, near infrared spectroscopy (NIR) associated to chemometry, to the quantification of IVM in veterinary drugs. The chromatographic parameters were established according to the specifications of the British Pharmacopoeia and the validation was based on the Resolution n° 899 of 29/05/03 of ANVISA. The separation of IVM from his homologue was achieved using a C18 column Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), mobile phase of methanol:water (83:17, v/v), flow rate of 1.0 mL min, temperature of 30 °C and detection wavelength of 245 nm. The method was selective with the following validation parameters: linearity (r= 0.9995), linear range: 40 a 60 mg mL, accuracy: 96 - 104%, intra-day precision: 0.5 to 4.8 % and inter-day precision: 2.7%. Thirty one samples (injectable formulations) were analyzed and 45.2% were outside their specifications (declared value). Near infrared studies were carried out in the spectral range of 4000 to 14000 cm. The NIR spectra obtained (average of 100 spectra) were treated with a chemometric tool Principal Component Analysis (PCA) for exploratory data analysis and a calibration model by Partial Least Square (PLS) was built. For this purpose, cross validation with 66 variables (4104.2 a 4354.9 cm), 5 principal components and 25 samples were employed. Even though, the NIR method had shown some advantages regarding to the chromatographic method, HPLC is still required for identity confirmation / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

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