Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-31T13:58:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804179 bytes, checksum: 1597177b0f14d598cb67395bf82a4ce8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-31T13:58:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804179 bytes, checksum: 1597177b0f14d598cb67395bf82a4ce8 (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de MInas Gerais / Objetivou-se com este trabalho, avaliar o potencial inseticida de quatro extratos etanólicos e hexânicos das espécies de atemóia (Annona atemoya), camomila (Matricaria chamomilla), cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) e pimenta-do-reino (Piper nigrum) em Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). O efeito de toxicidade foi testado com aplicação tópica dos extratos sobre as lagartas. A partir dos resultados do experimento de toxicidade foi escolhido um subvolume dos extratos etanólicos e hexânicos para avaliar os efeitos subletais na praga (período larval, período pupal, período da fase adulta, razão sexual e oviposição). O comportamento dos lepidópteros foi avaliado por meio da preferência alimentar e repelência à oviposição dos adultos. A alimentação foi analisada através de dois experimentos, com e sem chance de escolha em placa de Petri e arena de PVC. Para avaliar o comportamento na oviposição foi conduzido um experimento com chance de escolha (quatro plantas pulverizadas com extratos etanólicos, quatro hexânicos, uma com o solvente e outra sem aplicação com a liberação de cinco casais de mariposas de S. frugiperda). A maior porcentagens de mortalidade foi para o cravo-da-índia etanólico no quinto dia avaliado com 90% de mortalidade. O desenvolvimento larval foi reduzido por atemóia hexânico. O extrato de atemóia etanólico promoveu o menor tempo pupal. O extrato etanólico de cravo-da-índia resultou no menor peso de pupa fêmea e pimenta-do-reino o menor peso para pupas macho. O extrato hexânico de cravo-da-índia resultou no menor tempo da fase adulta e os extratos de pimenta-do-reino e atemóia foram responsáveis por prolongar a fase adulta. A razão sexual foi reduzida pelos extratos de cravo-da-índia e os extratos de atemóia e pimenta do reino reduziram a oviposição e viabilidade dos ovos de S. frugiperda. Quando houve a chance de escolha, os extratos de atemóia e pimenta-do-reino foram os menos preferidos. Atemóia, cravo-da-índia e pimenta-do-reino não foram escolhidos para postura de ovos no teste comportamental e também afetaram a eclosão de ovos no teste subletal. Atemóia, cravo-da-índia e pimenta-do-reino demostraram potencial inseticida e de repelência contra as lagartas de segundo instar de S. frugiperda. / The objective of this work was to evaluate the insecticidal potential of four ethanolic and hexane extracts of the species of atemóia (Annona atemoya), chamomile (Matricaria chamomilla), clove (Syzygium aromaticum) and black pepper (Piper nigrum) in Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). The toxicity effect was tested with topical application of the extracts on the caterpillars. From the results of the toxicity experiment, a subvolume of the ethanolic and hexane extracts was chosen to evaluate the sublethal effects in the pest (larval period, pupal period, adult period, sexual ratio and oviposition). Lepidopteran behavior was evaluated through feeding preference and oviposition repellency of adults. Feeding was analyzed through two experiments, with and without possibility of choice in Petri dish and PVC sand. To evaluate the behavior in the oviposition, an experiment with a chance of choice was conducted (four plants sprayed with ethanolic extracts, four hexanes, one with the solvent and the other without application with the liberation of five pairs of S. frugiperda butterflies). The highest percentages of mortality were for ethanolic cloves on the fifth day evaluated with 90% mortality. The larval development was reduced by hexane atemoia. The extract of ethanol ethanolic promoted the lowest pupal time. The ethanolic extract of clove resulted in the lowest weight of female pupae and black pepper the lowest weight for male pupae. The hexane clove extract resulted in the shortest time of the adult phase and the extracts of black pepper and atemóia were responsible for prolonging the adult phase. The sex ratio was reduced by the clove extracts and the extracts of atemóia and chili pepper reduced the oviposition and viability of S. frugiperda eggs. When there was a choice, the extracts of atemoia and black pepper were the least preferred. Atemoia, cloves and black pepper were not chosen for egg laying on the behavioral test and affected egg hatching in the sublethal test. Atemóia, clove and black pepper showed insecticidal and repellent potential against S. frugiperda second instar caterpillars. / O autor nao enviou a parte impressa até o momento.

Orientador: Gilberto Di Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T17:30:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_Renata_D.pdf: 3731269 bytes, checksum: ef00e8c346cabde2a33e5eea29d6f2c1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Desde 1986 acidentes causados pelo contato com lagartas de mariposas da espécie Lonomia obliqua vêm sendo notificados na Região Sul do Brasil. O envenenamento humano por esta espécie resulta em alterações do sistema de coagulação, caracterizando um quadro de coagulação intravascular disseminada, associado a uma síndrome fibrinolítica severa. Estudos demonstraram que o veneno da Lonomia obliqua contém um ativador de fator X e um ativador de protrombina. Uma proteína ativadora de protrombina, denominada LOPAP (¿Lonomia obliqua prothrombin activator protease¿) foi isolada e caracterizada bioquímica e fisiologicamente. Esta enzima é uma serino protease de 69 kDa. Quando testada in vivo, a LOPAP leva à formação de microcoágulos, hemorragia microvascular e pulmonar, sangue incoagulável e uma infiltração leucocitária pulmonar em ratos. Neste trabalho, através de cromatografia de exclusão, seguida por cromatografia de fase reversa (HPLC) isolou-se uma proteína de 20745.7 Da do extrato de cerdas de L. obliqua. Durante o processo, foi avaliada a atividade ativadora de fator X humano purificado in vitro, através de ensaio de cinética enzimática com o uso de substratos cromogênicos. A proteína ativa isolada apresentou imunorreatividade com o soro-antilonômico, produzido pelo Instituto Butantan. Com o uso de técnicas aplicadas a proteômica, determinou-se a seqüência de aminoácidos da proteína com atividade tipo fator Xa. Trata-se de uma proteína nova, ainda não seqüenciada, a qual apresenta grande identidade com proteínas da família das lipocalinas / Abstract: Since 1986 accidents caused by contact with caterpillars of butterflies of the Lonomia obliqua species comes being notified in the South Region of Brazil. The human envenoming for this species results in alterations of the coagulation system, characterizing a disseminated intravascular coagulation, associated to a severe fibrinolytic syndrome. Studies had demonstrated that the venom of the Lonomia obliqua contains a factor X and a prothrombin activator. An activator protein of prothrombin, called LOPAP (¿Lonomia obliqua prothrombin activator protease¿) was isolated and biochemist and physiologically characterized. This enzyme is a serine protease of 69 kDa. When tested in vivo, the LOPAP leads to thrombus formation, microvasculary and pulmonary hemorrhage, unclottable blood and leukocyte infiltration in the lungs at rats. In this work, through chromatography of exclusion, followed by phase reverse chromatography (HPLC), it was isolated a 20745.7 Da protein of the spicules extract of L. obliqua. During the process, it was evaluated the purified human factor X activator activity in vitro, through kinetic assay with the chromogenic substrate use. The isolated protein presented factor Xa like activity and presented immunorreactivity with the antilonomic serum, produced by Butantan Institute. Using techniques applied to the proteomic studies, it was determined the amino acid sequence of the protein with factor Xa like activity. It is a new protein, not yet sequenced, which has large identity with lipocalins family protein / Doutorado / Doutor em Farmacologia

As plantas sintetizam inibidores de proteinases (IPs) como um dos mecanismos de defesa contra o ataque de insetos-praga. Esses inibidores atuam ligando-se às proteinases digestivas localizadas no aparelho digestivo dos insetos fitófagos, impedindo sua atividade proteolítica. Como conseqüência, ocorre uma redução da disponibilidade de aminoácidos levando a um quadro de deficiência nutricional. Portanto, os IPs são considerados agentes anti-metabólicos. Heliothis virescens (Fabr.,1781) é um inseto-praga de polifagia acentuada, atacando várias culturas de importância econômica. Na tentativa de estudar os efeitos de IPs produzidos pelo fumo e de plantas transgênicas de fumo expressando um IP de batata sobre o desenvolvimento da lagarta desta espécie, foram realizados ensaios biológicos nos quais lagartas foram criadas em dieta artificial (sem inibidor), em plantas de fumo transgênicas (expressando o IP do tipo 2 de batata conhecido como PIN2) e em plantas fumo normais (controle). Os ensaios biológicos mostraram que as lagartas de H. virescens apresentaram crescimento e desenvolvimento normais quando em presença do PIN2. A fim de estudar a adaptação das lagartas à presença dos IPs, foram realizados ensaios bioquímicas envolvendo a caracterização das proteinases intestinais das lagartas. A combinação de técnicas de separação de proteínas pelo peso molecular via eletroforese em gradiente de poliacrilamida (SDS-PAGE) e estudos cinéticos, mostraram a expressão de quatro enzimas do tipo das tripsinas (TI- T4) nos homogeneizados do tubo digestivo de lagartas alimentadas com plantas de fumo (transgênicas ou não) com as seguintes propriedades: T1 (Km= 0,27 mM, PM= 70 kDa),T2 (Km= 0,35 mM, PM= 67 kDa), T3 (Km= 2,4 mM, PM= 29 kDa), T4 (Km= 15 mM, PM= 17 kDa). No entanto, lagartas alimentadas em dieta sem inibidor apresentaram apenas uma tripsina majoritária (Km= 2,9 mM, PM= 29 kDa), o que está de acordo com o peso molecular das tripsinas normalmente encontradas nas lagartas de lepidópteros. Além das tripsinas, foram detectadas uma quimotripsina (26 kDa) para os três tratamentos e uma elastase (35 kDa) para os homogeneizados de lagartas alimentadas à base de folhas. Eletroforese nativa em diferentes concentrações de géis de poliacrilamida mostrou que T1 e T2 ocorreram em lagartas alimentadas com folhas (selvagens ou transgênicas), ao passo que a filtração em gel, na presença ou ausência de SDS, revelou ainda que T3 e T4 podem originar TI e T2. Estes resultados sugerem que a presença de IPs nas folhas de fumo permite a expressão de novas moléculas de tripsina com uma superfície hidrofóbica, a qual favorece a formação de oligômeros. Acredita-se que os oligômeros sejam menos afetados pelos IPs por que se ligam melhor ao substrato diminuindo a afinidade dos IPs, ou ainda por hidrolisá-los. O Papel da elastase na adaptação é incerto / not available

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Resumo: A lagarta do algodão, Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) é uma das mais importantes pragas da agricultura mundial. Os danos causados por essa espécie ocorrem desde a emergência da planta. O uso desordenado de produtos químicos para controlar essas lagartas acelerou o desenvolvimento de resistência e têm causado efeitos adversos aos inimigos naturais, tornando-se uma grande preocupação ambiental. Diante disso, a busca por medidas alternativas que visam diminuir esses impactos aumenta. Agente de controle microbiano é considerada uma alternativa eficiente e segura, especialmente o uso de fungos entomopatogênicos. As principais espécies de fungos entomopatogênicos utilizadas são Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, essas têm sido utilizadas para controlar insetos pragas de várias ordens, e a variabilidade genética presente nesses microrganismos é muito alta, possibilitando estudos de seleção de isolados fúngicos para o desenvolvimento de formulações eficientes em condições de laboratório e campo. Assim, o objetivo desse trabalho foi selecionar isolados dos fungos entomopatogênicos B. bassiana e M. anisopliae para controle de H. armigera em condições de laboratório e campo (persistência) considerando os efeitos letais e subletais. Nos primeiros bioensaios utilizou-se 23 isolados, sendo 10 isolados de M. anisopliae e 13 de B. bassiana avaliando a interação das lagartas e os isolados fúngicos. Para isso foram confeccionadas tabelas de vida e realizados te... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cotton caterpillar, Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) is one of the most important pests in world agriculture for attacking several species of plants of economic importance. The damage caused by this species occurs since the emergence of the plant. The disordered use of chemicals to control these caterpillars has accelerated the development of resistance and has caused adverse effects to natural enemies, becoming a major environmental concern. Therefore, the search for alternative measures to reduce these impacts increases. Microbial control agent is considered an efficient and safe alternative, especially the use of entomopathogenic fungi. The main species of entomopathogenic fungi used are Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, these have been used to control insect pests of various orders, and the genetic variability present in these microorganisms is very high, enabling studies on the selection of fungal isolates for the development of efficient formulations under laboratory and field conditions. Thus, the objective of this work was to select isolates of the entomopathogenic fungi B. bassiana and M. anisopliae to control H. armigera in laboratory and field conditions (persistence) considering the lethal and sublethal effects. In the first bioassays, 23 isolates were used, 10 of which were M. anisopliae and 13 of B. bassiana, evaluating the interaction of caterpillars and fungal isolates. For that, life tables were made and tests of mortali... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:05:01Z : No. of bitstreams: 1 sarro_fb_dr_botfca.pdf: 1093284 bytes, checksum: dcd90300b399288fd6ce61deb6cb28ee (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Considerando que ao longo de muitos anos o algodão foi cultivado nos estados de São Paulo e Paraná e a lagarta do cartucho do milho Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) nunca foi considerada uma praga importante para essa cultura, apesar da proximidade com a cultura do milho. É provável que os cultivares tradicionalmente utilizados nessa região sejam desfavoráveis ao desenvolvimento dessa espécie. Partindo-se desta hipótese este trabalho foi realizado com o objetivo de comparar o desenvolvimento biológico e a utilização do alimento pelas lagartas de S. frugiperda, nos cultivares de algodão atualmente utilizados na região centro-oeste, onde esse inseto vem sendo relatado como uma praga do algodoeiro. Os cultivares de algodão DELTAOPAL, FIBERMAX 966, DP 4049, CNPA ITA 90 foram comparados com os cultivares tradicionalmente utilizados em São Paulo: IAC 23 e IAC 24 e com o cultivar de milho AL 25. Foram realizados três experimentos seguindo o delineamento inteiramente casualizado com 3 tratamentos e 5 repetições, com 10 lagartas individualizadas por repetição, provenientes de uma criação de laboratório em dieta artificial. O primeiro experimento comparou os cultivares de algodão DELTAOPAL e DP 4049, o segundo os cultivares FIBERMAX 966 e CNPA ITA 90 e o terceiro IAC 23 e IAC 24. Em todos os 2 experimentos o milho foi utilizado como padrão de comparação. Os dados referentes ao desenvolvimento biológico e aos índices de utilização dos cultivares foram submetidos à análise de variância conjunta e as médias comparadas pelo teste Tukey à 5 % de probabilidade. A análise dos dados confirmou a hipótese inicial, visto que os cultivares tradicionalmente utilizados em São Paulo e Paraná, IAC 23 e IAC 24, são mais desfavoráveis para o desenvolvimento dessa espécie, tanto em relação ao milho quanto aos outros cultivares de algodão. Os... . / Considering that cotton crops have been harvested in the States of São Paulo and Paraná, Brazil, for a long period the fall armyworm Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1707) (Lepidoptera: Noctuidae) was never considered an important cotton pest, despite its presence next to maize crops. It is possible that traditional cultivars from these areas are less favorable to the development of S. frugiperda. So this research was carried out aiming to compare the biological development and food utilization by fall armyworm larvae on the cotton cultivars harvested in the middle-west region of Brazil, were this species is referred as an important pest. The DELTAOPAL, FIBERMAX 966, DP 4049, CNPA ITA 90 cotton cultivars were compared to the traditional cultivars used in São Paulo: IAC23 and IAC24 and with the maize cultivar AL25. Three experiment were established following randomized design with 3 treatment and 5 replications, with 10 larvae individualized per each replication. The larvae were obtained from the mass rearing kept in artificial diet in the laboratory conditions. The first experiment compared the cotton cultivars DELTAOPAL and DP 4049, the second compared the cultivars FIBERMAX 966 and CNPA ITA 90 and the third IAC23 and IAC24. In all experiments the maize cultivar was used as comparison pattern. The data from the biological development and the food utilization indexes of cultivars were submitted to combined variance analyses and the mean values were compared by Tukey test at 5% of probability. The data analyses confirmed the initial hypotheses, because the cotton cultivars traditionally used in São Paulo and Paraná, IAC23 and IAC24, are less favorable to the development of fall armyworm, as in relation to the maize as in relation the others cotton cultivars. The DELTAOPAL and DP 4049 cotton 4 cultivars are similar hosts at maize. The FIBERMAX 966 and CNPA ITA 90 cultivars are more... (Complete abstract, click electronic address below).

Submitted by Leticia Serpa Dos Santos (leserpa15@hotmail.com) on 2018-06-12T19:49:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_Leticia_Serpa_dos_Santos.pdf: 1204964 bytes, checksum: 50ea21a5746571da15672c9df3679bda (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-06-13T17:14:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ls_dr_jabo.pdf: 1204964 bytes, checksum: 50ea21a5746571da15672c9df3679bda (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T17:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ls_dr_jabo.pdf: 1204964 bytes, checksum: 50ea21a5746571da15672c9df3679bda (MD5) Previous issue date: 2018-04-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Dentre as lagartas desfolhadoras mais importantes nos cultivos da soja no Brasil estão a Anticarsia gemmatalis e a Chrysodeixis includens. O objetivo deste trabalho foi determinar a flutuação populacional e a relação com fatores meteorológicos e a distribuição espacial de A. gemmatalis e de C. includens em cultivares de soja com diferentes ciclos de desenvolvimento, visando gerar informações sobre o comportamento dessas lagartas na cultura da soja e elaborar um plano de amostragem sequencial para a cultura da soja. Os experimentos foram conduzidos nos anos agrícolas 2013/14 e 2014/15 na FCAV/UNESP, Jaboticabal, SP. Foram selecionados três campos, e em cada um foi demarcada uma área de 8.000 m2, sendo cada área subdividida em 80 parcelas de 100 m2 (10 m x 10 m). As cultivares de soja utilizadas foram: SYN 1365 RR (precoce), M 7908 RR (média) e BRS Valiosa RR (tardia). As amostragens foram realizadas semanalmente pelo método da batida de pano, em 2 m de linha de plantas, registrando-se o número total de lagartas maiores que 1,5 cm de A. gemmatalis e C. includens. Para o estudo da flutuação populacional das espécies de lagartas da soja os resultados foram submetidos à analise estatística, efetuando-se correlação de Pearson, entre o número de espécies de lagartas e as variáveis meteorológicas, precipitação e temperatura. Para o estudo da dispersão foram utilizados os seguintes índices: razão variância/média, índice de Morisita, coeficiente de Green e o expoente k da distribuição binomial negativa. Para os estudos dos modelos de distribuição espacial foram testados os ajustes das distribuições de Poisson e binomial negativa. O plano de amostragem sequencial foi elaborado para os dados de lagartas maiores que 1,5 cm com base no Teste Sequencial da Razão da Máxima Verossimilhança, e foi utilizado o nível de controle de 40 lagartas maiores que 1,5 cm por pano de batida na cultura da soja. De acordo com os resultados da flutuação populacional, as maiores densidades populacionais de A. gemmatalis e C. includens foram observadas no estádio fenológico R1 da soja. A temperatura influenciou a variação da densidade populacional de C. includens no primeiro ano agrícola e a precipitação influenciou a população de ambas as lagartas nos dois anos agrícolas. A distribuição espacial de lagartas maiores que 1,5 cm foi agregada para todas as cultivares no ano agrícola com baixa incidência de lagartas e aleatória no ano agrícola com alta incidência de lagartas, com melhor ajuste à distribuição binomial negativa. No plano de amostragem sequencial, verificou-se um máximo de dez unidades amostrais para tomada de decisão de controle. / The most frequent leafhopper caterpillars on soybean crops in Brazil are Anticarsia gemmatalis and Chrysodeixis includens. The objective of this work was to study the population fluctuation and spatial distribution of A. gemmatalis and C. includens in soybean cultivars of different maturing cycles in order to help the development of a sequential sampling plan. The experiments were carried out in seasons 2013/14 and 2014/15 at FCAV / UNESP, Jaboticabal, SP. Three fields were selected, and on each one an area of 8.000 m² was marked and divided into 80 splits of 100 m² (10 m x 10 m). The soybean cultivars of different maturing cycles were: SYN 1365 RR (early), M 7908 RR (middle) and BRS Valiosa RR (late). Samples were taken weekly using the ground-shake method, in two m line of plants, where it was recorded the number of caterpillars A. gemmatalis and C. includens higher than 1.5 cm. The figures were plotted to demonstrate the population fluctuation between the mean data of insect pest infestation and the phenological stage of culture, and the influence of meteorological factors analyzed using correlation analysis. Insect dispersion in the area was evaluated using the following indexes: variance/mean ratio, Morisita’s index, Green’s coefficient, and the k exponent of negative binomial distribution. For studies of spatial distribution models of A. gemmatalis and C. includens, adjustments of Poisson distribution and negative binomial distribution were tested. The sequential sampling plan was developed for caterpillars higher than 1.5 cm based on the ratio of the Sequential Test Maximum Likelihood, and it was used the threshold levels of 40 and 20 caterpillars higher than 1.5 cm in soybean. According to the results of population fluctuation, the highest population densities of A. gemmatalis and C. includens were observed at the R1 soybean phenological stage. The temperature influenced the variation of population density of C. includens in the first agricultural year and the precipitation influenced the population of both caterpillars in the two agricultural years. The spatial distribution of caterpillars larger than 1.5 cm was aggregated for all cultivars in the agricultural year with low incidence of caterpillars and random in the agricultural year with high incidence of caterpillars, with better adjustment to the negative binomial distribution.In the sequential sampling plan, the maximum number of sample units expected for control of decision-making is around ten samples. / 870397/1997-4

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-17Bitstream added on 2014-06-13T18:56:06Z : No. of bitstreams: 1 davolos_cc_me_jabo.pdf: 358910 bytes, checksum: 020446e7d045944b95dfcb371b8ab71e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bacillus thuringiensis é entomopatogênica muito utilizada no controle de insetos-praga e a predição de sua atividade tóxica é realizada por PCR na identificação de genes cry. Assim sendo, este trabalho objetivou elaborar novos oligonucleotídeos iniciadores para a detecção das subclasses cry1Ab, cry1Ac, cry1Ca, cry1Ea e cry1Fa, estudar o potencial de controle de 31 isolados de B. thuringiensis à duas populações de Spodoptera frugiperda por meio de bioensaios e analisar a taxa de expressão dos genes presentes nos isolados por qPCR em tempo real. Um par de oligonucleotídeo iniciador foi elaborado para cada subclasse e dentre os isolados testados 6,5% e 48,5% apresentaram os genes cry1Ab e cry1Ac, respectivamente, nenhum dos isolados apresentou os genes cry1Ca, cry1Ea e cry1Fa. Dentre os 31 isolados, 13 apresentaram mortalidade acima de 75% para as larvas da população de campo e apenas nove para a população de laboratório, mostrando que os isolados controlaram com maior eficiência as larvas da população de campo. A presença dos genes cry1Ab e cry1Ac conjuntamente foi associada à elevado potencial de controle às larvas da população de campo e baixo às larvas da população de laboratório. A expressão do gene cry1Ab, não foi constatada em nenhum dos isolados nas condições analisadas e, para o gene cry1Ac, todos os isolados apresentaram taxa de expressão. Os resultados de expressão foram associados ao potencial de controle das larvas de S. frugiperda das populações testadas, sendo que os elevados níveis de expressão do gene cry1Ac foram associados diretamente a elevado potencial de controle da população de laboratório. / Bacillus thuringiensis is entomopathogenic used for insect control and the prediction of the toxic activity is performed by PCR on the identification of cry genes. Thus, the aim of this research was develop news primers for detection the subclasses cry1Ab, cry1Ac, cry1Ca, cry1Ea and cry1Fa, study the potential control of 31 isolates of B. thuringiensis against two Spodoptera frugiperda populations by bioassays and analyze the rate of gene expression present on the isolates by real-time qPCR. A pair of primer was prepared for each subclass, the genes cry1Ab and cry1Ac were found in 6.5% and 48.5% of the isolates, respectively, and the genes cry1Ca, cry1Ea and cry1Fa were not detected on the isolates. Among the 31 isolates, 13 showed over 75% mortality for the larvae of field population and only nine isolates to the laboratory population, showing that the isolates controlled more efficiently the larvae of the field population. The presence of cry1Ab and cry1Ac genes were correlated to high levels of insecticidal activity for the larvae of field population and low levels control to the laboratory population. The expression of cry1Ab was not found in any of the isolates analyzed and the rates expression of cry1Ac gene was detected in all isolates. The results of gene expression were associated with the potential control to S. frugiperda, and the high levels of cry1Ac gene expression were linked directly to high levels of insecticidal activity for the laboratory population.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-13T13:56:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 353935 bytes, checksum: 88d19234c6373988a473eeec24e5ab38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T13:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 353935 bytes, checksum: 88d19234c6373988a473eeec24e5ab38 (MD5) Previous issue date: 2001-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) é uma praga polífaga de grande importância para várias culturas. Atualmente, vem sendo controlada principalmente através da utilização de inseticidas, entretanto alguns agentes de controle biológico apresentam potencial para reduzir o tamanho das suas populações, entre eles Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Scelionidae) e Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), que são parasitóides de ovos de S. frugiperda. O entendimento de como os inimigos naturais de determinada praga interagem entre si e com os outros componentes do sistema é fundamental para o manejo de pragas. Dessa forma, foram realizados testes em olfatômetro de 4 braços, com o objetivo de esclarecer como T. remus e T. atopovirilia se relacionam entre si e com diferentes plantas hospedeiras. Teste 1: Avaliou os sinais que as fêmeas das duas espécies de parasitóides utilizam para localizar S. frugiperda, qual a influência de diferentes plantas hospedeiras sobre a busca dos parasitóides e se, através da detecção de diferentes sinais, há separação das guildas dos parasitóides. As fontes de odor utilizadas foram: milho, sorgo, algodão, milho + ovos de S. frugiperda, sorgo + ovos de S. frugiperda, algodão + ovos de S. frugiperda, ovos de S. frugiperda, e ovos de S. frugiperda lavados com hexano. Teste 2: Avaliou se fêmeas de T. remus e T. atopovirilia criadas massalmente, que emergem num ambiente com estímulos provenientes da cultura-alvo (milho) e do hospedeiro (fêmeas experientes), buscam o hospedeiro mais eficientemente e são mais capazes de discriminar entre plantas com e sem hospedeiros do que fêmeas que emergem em condições normais de criação massal (fêmeas inexperientes). Teste 3: Avaliou se T. remus e T. atopovirilia são arrestados da mesma forma por ovos de S. frugiperda parasitados por coespecíficos, por heteroespecíficos e não-parasitados, e se os parasitóides são capazes de discriminar entre ovos parasitados por co ou heteroespecíficos e não-parasitados. Em todos os testes, o parâmetro avaliado foi o tempo que as fêmeas gastaram em cada um dos braços do olfatômetro, sendo os resultados obtidos analisados pelos testes de Wilcoxon ou Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de comparações múltiplas (P< 0,05). As fêmeas das duas espécies foram arrestadas por voláteis provenientes das plantas hospedeiras, plantas hospedeiras + ovos, e ovos de S. frugiperda, não sendo arrestadas pelos ovos de S. frugiperda lavados com hexano. Isso indica que as fêmeas utilizam voláteis provenientes de várias plantas hospedeiras e do hospedeiro para sua localização. O fato das fêmeas não terem sido arrestadas por ovos lavados com hexano significa que o(s) composto(s) presente(s) na superfície dos ovos e que são responsáveis pelo arrestamento dos parasitóides, são solúveis nessa substância. Comparando-se as respostas das fêmeas das duas espécies, é possível perceber que não houve diferenças de arrestamento das fontes milho, sorgo, algodão, ovos e ovos lavados, entre elas. Entretanto as fêmeas de T. remus foram significativamente mais arrestadas pelas fontes milho+ovos, sorgo+ovos e algodão+ovos do que as fêmeas de T. atopovirilia, o que indica que semioquímicos do complexo planta+hospedeiro são usados mais eficientemente por T. remus. Quando as fêmeas de T. remus e T. atopovirilia tiveram a chance de escolher entre plantas com e sem posturas, ambas preferiram plantas com postura, exceto T. atopovirilia em sorgo. Isso indica que os parasitóides são capazes de discriminar, utilizando voláteis, áreas com e sem hospedeiros, dessa forma otimizando a busca. Quando tiveram a oportunidade de escolher entre voláteis provenientes de milho, sorgo e algodão, as duas espécies apresentaram respostas semelhantes, indicando que pequenas diferenças interespecíficas na resposta a voláteis de diferentes plantas hospedeiras podem fazer com que haja redução na sobreposição das guildas das duas espécies. Nos testes de aprendizagem foi observado que fêmeas experientes e não-experientes respondem da mesma forma à planta de milho com ovos. Entretanto, quando têm a possibilidade de escolher entre plantas com e sem ovos, as fêmeas de T. remus, ao contrário das fêmeas de T. atopovirilia experientes, são significativamente mais arrestadas para plantas de milho com ovos do que fêmeas inexperientes, indicando que ocorre aprendizagem em T. remus no momento da emergência. O fato de que esse mecanismo torna a busca pelo hospedeiro mais eficiente faz com que seja um método potencial para melhorar o controle promovido por essa espécie de parasitóide. Com relação ao reconhecimento à distância de ovos parasitados intra e interespecificamente, fêmeas das duas espécies foram arrestadas da mesma forma por ovos parasitados por co ou heteroespecíficos e ovos não-parasitados. Além disso, quando estavam na presença de voláteis provenientes de ovos parasitados intra ou interespecificamente e ovos não-parasitados, não houve diferença no arrestamento dos dois tipos de ovos. Isso indica que as substâncias utilizadas para marcar ovos parasitados só atuam à curta distância, o que pode ser explicado pelo fato de que os marcadores que atuam à longa distância podem tornar os hospedeiros marcados mais conspícuos para hiperparasitóides e predadores, sendo dessa forma detrimentais para a espécie. / The fall armyworm Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) is an important pest for many crops and has been controlled by the use of pesticides. However it can be potentially controlled by the use of natural enemies like Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Scelionidae) and Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), egg parasitoids of S. frugiperda. Nowadays it is known that the understanding of how the natural enemies of a pest interact among each other and with the other components of the system, have main importance to the pest management. Hence experiments to discover how T. remus and T. atopovirilia interact between each other and with different host plants were performed in a 4 way olfactometer. Test 1: Assessed which cues the females of the two parasitoid species use to find S. frugiperda, how different host plants influenced the parasitoid search and if the parasitoid guilds are separated through the detection of different cues. The odour sources used were: corn, sorghum, cotton, corn + S. frugiperda eggs, sorghum + S. frugiperda eggs, cotton + S. frugiperda eggs, S. frugiperda eggs, and S. frugiperda eggs washed with hexane. Test 2: Assessed if massal raised females of T. remus and T. atopovirilia that emerge in an environment with stimuli from the target pest and crop (experienced females) search for the host more efficiently and are more able to distinguish between plants with and without the host than females that emerge in normal conditions of massal raising (inexperienced females). Test 3: Assessed if T. remus and T. atopovirilia are attracted by eggs parasitized by conspecific, heterospecific and non parasitized; and if the females are able to distinguish between eggs parasitized by con or heterospecifics and non parasitized. For all the tests the parameter evaluated was the time spent in each arm of the olfactometer. The results were analysed by the Wilcoxon test or Kruskal-Wallis test followed by the multiple comparison test (P< 0.05). The females of both species were attracted by volatiles from the host plants, host plants+eggs and S. frugiperda eggs; and were not attracted by the S. frugiperda eggs washed with hexane. It indicates that the parasitoid females use volatiles from many host plants and from the host in the search process. The fact that the females were not attracted by eggs washed with hexane means that the compound(s) on the egg surface that are responsible for the parasitoid attraction are soluble in this substance. By comparing the responses of the females of the two species it is possible to notice that the attractivity of corn, sorghum, cotton, eggs, and eggs washed with hexane were the same for both species. However the females of T. remus were more attracted by corn+eggs, sorgum+eggs and cotton+eggs than T. atopovirilia. It means that the cue plant+host is more efficiently used by T. remus. When the females of T. remus and T. atopovirilia had the chance to choose between plants with and without eggs, both preferred plants with eggs except T. atopovirilia on sorghum. It means that the parasitoids are able to distinguish, through volatiles, areas with and without host, hence optimising the search. When they had the chance to choose among volatiles from corn, sorghum and cotton, the two species showed a slightly different behaviour, indicating that interespecific differences in the responses to volatiles from host plants may cause a reduction of the superposition of the two parasitoids guilds. On the learning tests it was observed that experienced and inexperienced females show the same responses to corn plants with eggs. However when they can choose between plants with and without eggs, experienced T. remus females (but not experienced T. atopovirilia females) are more attracted to plants with eggs than inexperienced females, indicating that a learning process occurs in emergence in T. remus, and as this mechanism makes the T. remus search more efficient, it can be used to increase the level of control promoted by this parasitoid in the field. Concerning the ability to recognise at long range eggs parasitized intra and interespecifically, the females of both species were attracted in the same way by eggs parasitized by con or heterospecifics and non parasitized. Moreover, they could not distinguish between the odour of eggs parasitized intra or interespecifically and nonparasitized eggs, when they were in presence of both types. It means that the substances used to mark parasitized eggs are only perceived at short range or by contact. It can be explained by the fact that marks that could be perceived at long range would make the parasitized hosts more conspicuous to hyperparasitoids and predators, thus being detrimental to the parasitoid. X / Dissertação importada do Alexandria

As principais táticas de controle de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) têm sido o uso de inseticidas e cultivos Bt no Brasil. Devido à intensa pressão de seleção, a evolução da resistência de S. frugiperda aos principais inseticidas de diferentes grupos químicos e a proteínas Bt já foram documentados no Brasil. Sendo assim, estudos para preservar a vida útil de inseticidas com novos mecanismos de ação como a de chlorfenapyr (desacoplador da fosforilação oxidativa mediante a disrupção do gradiente de prótons) são fundamentais em programas de Manejo da Resistência de Insetos (MRI). Para a implementação de programas proativos de manejo da resistência de S. frugiperda a chlorfenapyr, foram conduzidos estudos para caracterizar e monitorar a suscetibilidade de populações de campo de S. frugiperda a chlorfenapyr, estimar a frequência do alelo da resistência a chlorfenapyr pelo método de F2 screen e avaliar a resistência cruzada entre chlorfenapyr e outros inseticidas e proteínas Bt. O método de bioensaio utilizado foi o de tratamento superficial da dieta. Os dados das linhas-básicas de suscetibilidade das populações de campo a chlorfenapyr demonstraram uma variação da CL50 de 13,87 a 25,07 &#181;g/mL. A concentração diagnóstica de 56 &#181;g/mL foi estimada mediante análise conjunta dos dados de linha-básica de suscetibilidade baseada na CL99. A suscetibilidade foi monitorada a partir de populações de campo de S. frugiperda coletadas nas principais regiões produtoras de milho no Brasil entre 2016 e 2018. A taxa de sobrevivência na concentração diagnóstica variou de 0 a 8,4%. Pelo método de F2 screen a frequência alélica estimada nas safras para a 2ª safra 2016 e a 1ª safra 2017 foi de 0,0008 e a frequência para a entressafra 2016-2017 foi de 0,0012. Não foi verificada resistência cruzada entre chlorfenapyr e os inseticidas: lambda-cyhalothrin, chlorpyrifos, lufenuron, teflubenzuron, spinosad e chlorantraniliprole e as proteínas Bt: Cry1F, Cry1A.105/Cry2Ab2, Cry1A.105/Cry2Ab2/Cry1F e Vip3Aa20 expressas em milho geneticamente modificado. Os resultados demonstraram uma alta suscetibilidade das populações de campo a chlorfenapyr, uma baixa frequência do alelo da resistência e ausência de resistência cruzada aos principais inseticidas e proteínas Bt. Portanto, o inseticida chlorfenapyr pode ser utilizado como uma ferramenta em programas de MRI em S. frugiperda no Brasil. / Chemical control and Bt crops are the major control tactics to control Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) in Brazil. Due to intense selection pressure, the evolution of S. frugiperda resistance to major insecticides from different chemical groups and to Bt proteins has already been documented in Brazil. Therefore, studies to preserve the lifetime of insecticides with new mode of action such as chlorfenapyr (uncouplers of oxidative phosphorylation via disruption of the proton gradient) are important in Insect Resistance Management (IRM) programs. For implementing a proactive resistance management program of S. frugiperda to chlorfenapyr, studies were conducted to characterize and monitor the susceptibility of field populations of S. frugiperda to chlorfenapyr, to estimate the frequency of resistance alleles to chlorfenapyr using F2 screen method and to evaluate the cross-resistance patterns of chlorfenapyr and other insecticides and Bt proteins. Diet overlay bioassays was used to characterize the baseline susceptibility data of field population of S. frugiperda to chlorfenapyr. The LC50 ranged from 13.87 a 25.07 &#181;g/mL. A diagnostic concentration of 56 &#181;g/mL was estimated from the joint analysis of the baseline susceptibility data, based on LC99. Susceptibility was monitored from field populations of S. frugiperda collected from major corn growing regions in Brazil from 2016 to 2018. The survival rate at the diagnostic concentration ranged from 0 to 8.4%. Using the F2 screen method, the estimated allele frequency for the 2nd crop season 2016 and 1st crop season 2017 was 0.0008 and the frequency for the offseason 2016-2017 was 0.0012. No cross-resistance was verified between chlorfenapyr and the insecticides: lambda-cyhalothrin, chlorpyrifos, lufenuron, teflubenzuron, spinosad and chlorantraniliprole and to Bt proteins: Cry1F, Cry1A.105/Cry2Ab2, Cry1A.105/Cry2Ab2/Cry1F and Vip3Aa20 expressed in genetically modified maize. The results demonstrated a high susceptibility of field populations of S. frugiperda to chlorfenapyr, a low resistance allele frequency and lack of cross-resistance to major insecticides and Bt proteins. Therefore, chlorfenapyr can be used as an important tool in IRM programs of S. frugiperda in Brazil.

Orientador: Arlindo Leal Boiça Junior / Banca: Marina Robles Angelini / Banca: Nilza Maria Martinelli / Resumo: No Brasil, o feijão é uma importante cultura de subsistência, porem podem haver grandes reduções na sua produção devido o ataque de diversas pragas, das quais, Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) pode utilizar a cultura como hospedeiro alternativo e causar danos significativos. Diante do exposto, esse trabalho teve como objetivo avaliar a resistência de genótipos de feijoeiro através da atratividade e consumo, em testes de não preferência para alimentação, com e sem chance de escolha, e os aspectos biológicos de S. frugiperda, através de teste de antibiose, em diferentes genótipos de feijão. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Resistência de Plantas a Insetos do Departamento de Fitossanidade da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" - FCAV/UNESP, câmpus Jaboticabal, sob condições controladas de temperatura de 26 ± 1 °C, umidade relativa de 60 ± 10 % e fotofase de 12 horas. Foram utilizados 10 genótipos para os testes de não preferência para alimentação, onde foram utilizadas arenas cilíndricas naqueles com chance de escolha e placas de Petri para os testes sem chance de escolha. Ambas foram forradas com papel filtro umedecido sendo dispostos os discos foliares da fase vegetativa da cultura, liberando uma lagarta de terceiro instar por genótipo. A atratividade foi avaliada registando o número de lagartas atraídas para o disco nos tempos 5, 15, 30 minutos, 1, 3, 6, 12 e 24 horas após sua liberação e o consumo foi feito por avaliação visual... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In Brazil, beans are an important subsistence crop, but there may be large reductions in their production due to the attack of various pests, of which Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) can use the crop as an alternative host and cause significant damage. In view of the above, this work had as objective to evaluate the resistance of bean genotypes through attractiveness and consumption, in nonpreference tests for feeding, with and without chance of choice, and the biological aspects of S. frugiperda, by means of a test of antibiosis in different genotypes of beans. The experiments were conducted at the Laboratory of Plant Resistance to Insects of the Department of Phytosanitary Studies of the Paulista State University "Júlio de Mesquita Filho" - FCAV / UNESP, Jaboticabal Campus, under controlled temperature conditions of 26 ± 1 ° C, relative humidity of 60 ± 10% and 12-hour photophase. Ten genotypes were used for the non-preference tests for feeding, where cylindrical arenas were used in those with choice and Petri dishes for the tests with no chance of choice. Both were lined with moist filter paper and the leaf discs of the vegetative phase of the culture were arranged, releasing a third instar caterpillar per genotype. The attractiveness was evaluated by recording the number of caterpillars attracted to the disc at 5, 15, 30 minutes, 1, 3, 6, 12 and 24 hours after their release and the consumption was done by visual evaluation of three evaluators. The experimental d... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre