As plantas sintetizam inibidores de proteinases (IPs) como um dos mecanismos de defesa contra o ataque de insetos-praga. Esses inibidores atuam ligando-se às proteinases digestivas localizadas no aparelho digestivo dos insetos fitófagos, impedindo sua atividade proteolítica. Como conseqüência, ocorre uma redução da disponibilidade de aminoácidos levando a um quadro de deficiência nutricional. Portanto, os IPs são considerados agentes anti-metabólicos. Heliothis virescens (Fabr.,1781) é um inseto-praga de polifagia acentuada, atacando várias culturas de importância econômica. Na tentativa de estudar os efeitos de IPs produzidos pelo fumo e de plantas transgênicas de fumo expressando um IP de batata sobre o desenvolvimento da lagarta desta espécie, foram realizados ensaios biológicos nos quais lagartas foram criadas em dieta artificial (sem inibidor), em plantas de fumo transgênicas (expressando o IP do tipo 2 de batata conhecido como PIN2) e em plantas fumo normais (controle). Os ensaios biológicos mostraram que as lagartas de H. virescens apresentaram crescimento e desenvolvimento normais quando em presença do PIN2. A fim de estudar a adaptação das lagartas à presença dos IPs, foram realizados ensaios bioquímicas envolvendo a caracterização das proteinases intestinais das lagartas. A combinação de técnicas de separação de proteínas pelo peso molecular via eletroforese em gradiente de poliacrilamida (SDS-PAGE) e estudos cinéticos, mostraram a expressão de quatro enzimas do tipo das tripsinas (TI- T4) nos homogeneizados do tubo digestivo de lagartas alimentadas com plantas de fumo (transgênicas ou não) com as seguintes propriedades: T1 (Km= 0,27 mM, PM= 70 kDa),T2 (Km= 0,35 mM, PM= 67 kDa), T3 (Km= 2,4 mM, PM= 29 kDa), T4 (Km= 15 mM, PM= 17 kDa). No entanto, lagartas alimentadas em dieta sem inibidor apresentaram apenas uma tripsina majoritária (Km= 2,9 mM, PM= 29 kDa), o que está de acordo com o peso molecular das tripsinas normalmente encontradas nas lagartas de lepidópteros. Além das tripsinas, foram detectadas uma quimotripsina (26 kDa) para os três tratamentos e uma elastase (35 kDa) para os homogeneizados de lagartas alimentadas à base de folhas. Eletroforese nativa em diferentes concentrações de géis de poliacrilamida mostrou que T1 e T2 ocorreram em lagartas alimentadas com folhas (selvagens ou transgênicas), ao passo que a filtração em gel, na presença ou ausência de SDS, revelou ainda que T3 e T4 podem originar TI e T2. Estes resultados sugerem que a presença de IPs nas folhas de fumo permite a expressão de novas moléculas de tripsina com uma superfície hidrofóbica, a qual favorece a formação de oligômeros. Acredita-se que os oligômeros sejam menos afetados pelos IPs por que se ligam melhor ao substrato diminuindo a afinidade dos IPs, ou ainda por hidrolisá-los. O Papel da elastase na adaptação é incerto / not available

A herança e o custo adaptativo da resistência de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) ao inseticida piretróide lambda-cialotrina foram avaliados no presente estudo. Uma intensidade de resistência de aproximadamente 13 vezes foi detectada em uma linhagem resistente de S. frugiperda selecionada no laboratório com lambda-cialotrina. Cruzamentos recíprocos entre as linhagens susceptível (S) e resistente (R) de S. frugiperda à lambda-cialotrina revelaram o caráter autossomal e incompletamente recessivo da resistência. Resultados dos retrocruzamentos da progênie F1 (heterozigota) com o parental resistente sugeriram que a resistência foi determinada por um gene principal sob a influência de genes secundários. Para avaliar o custo adaptativo dos indivíduos resistentes, uma linhagem isogênica (isogênica-R) foi criada através de uma série de cruzamentos entre as linhagens S e R para a obtenção da progênie heterozigota, e seguidos de um intercruzamento dessa progênie para o isolamento de indivíduos resistentes homozigotos, e posterior retrocruzamento desses indivíduos com a linhagem S. Avaliações de parâmetros biológicos das linhagens S, isogênica-R e F1 revelaram a inexistência de custo adaptativo da resistência de S. frugiperda à lambda-cialotrina. Implicações dos resultados obtidos para o manejo da resistência de S. frugiperda a esse inseticida foram discutidas / not available

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Vivian Boter Bergamasco / Banca: Sonia Marli Zingaretti / Banca: Odair Aprecido Fernandes / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar a toxicidade e a interação entre proteínas Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa, Cry2Ab e Vip3Aa em lagartas neonatas de Anticarsia gemmatalis, Chrysodeixis includens e Spodoptera frugiperda. Lisados das proteínas foram utilizados em bioensaios com lagartas neonatas para determinar a CL50 e CL90 das proteínas Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa, Cry2Ab e Vip3Aa e realizar experimentos histopatológicos. Ensaios de competição, entre as proteínas Cry1, Cry2 e Vip3 biotiniladas, foram realizados com as proteínas das vesículas de membrana da microvilosidade apical do intestino médio ("Brush Border Membrane Vesicles" - BBMV) das lagartas. Foi feita a purificação de receptores para toxina Cry1Ac a partir da BBMV de A. gemmatalis e C. includens por afinidade seguida da identificação das proteínas ligantes. As toxinas Cry1A e Cry2A demonstraram maior toxicidade para A. gemmatalis e C. includens que a proteína Vip3Aa, porém o inverso foi observado em S. frugiperda. As lagartas da espécie A. gemmatalis se mostraram mais suscetíveis as proteínas testadas do que as de S. frugiperda e C. includens. As espécies diferiram também quanto ao tipo de interação entre as toxinas. Enquanto para S. frugiperda e C. includens, as interações foram sinérgicas, para A. gemmatalis foram predominantemente antagônicas. As proteínas se uniram aos receptores presentes nas BBMV de S. frugiperda, A. gemmatalis e C. includens, permitindo inferir sobre a presença e ausência de comp... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work aimed to study the toxicity and interaction between Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa, Cry2Ab and Vip3Aa proteins in neonate larvae of Spodoptera frugiperda, Anticarsia gemmatalis and Chrysodeixis includens. Lysates containing proteins were used in bioassays for the determination of LC50 and LC90 of the Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa, Cry2Ab and Vip3Aa proteins. Histopathological experiments were realized with A. gemmatalis, C. includens (fed with Cry1Ac and Vip3Aa) and S frugiperda (fed with Cry1Ab and Vip3Aa). Competition assays, among biotinylated Cry1, Cry2 and Vip3 proteins, were performed with brush border membrane vesicles (BBMV) proteins from A. gemmatalis, C. includens and S. frugiperda. Purification of Cry1Ac receptors from A. gemmatalis and C. includens BBMV was performed by affinity followed by identification of binding proteins. The Cry1A and Cry2A toxins demonstrated higher toxicity to A. gemmatalis and C. includens than the Vip3Aa protein, but the inverse was observed to S. frugiperda. A. gemmatalis larvae were more susceptible as Cry and Vip proteins than as S. frugiperda and C. includens. Species differed about type of protoxins interaction. While for S. frugiperda and C. includens, the protoxins showed as synergistic interactions, for A. gemmatalis they were predominantly antagonistic. It was possible to infer about presence and absence of competition of the receptors in the BBMV from S. frugiperda, A. gemmatalis and C. includens. Histopathological changes as vacuolization and disruption were observed in the intestine from S. frugiperda larvae, fed with Cry1Ab and Vip3Aa and A. gemmatalis and C. includens, fed with Cry1Ac and Vip3Aa. Putative receptors were to identified from A. gemmatalis and C. includens to Cry1Ac toxin. The combination of Cry and Vip proteins, as well as helping to manage resistance and can increase toxicity through synergistic acti... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Submitted by JACOB CROSARIOL NETTO Crosariol Netto (jacob_netto@hotmail.com) on 2017-02-24T21:47:39Z No. of bitstreams: 1 Tese_Jacob_Crosariol_Netto.pdf: 1461716 bytes, checksum: 8e775579f98ce9756ce677febd37324b (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-06T17:33:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 crosariolnetto_j_dr_jabo.pdf: 1461716 bytes, checksum: 8e775579f98ce9756ce677febd37324b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T17:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 crosariolnetto_j_dr_jabo.pdf: 1461716 bytes, checksum: 8e775579f98ce9756ce677febd37324b (MD5) Previous issue date: 2017-01-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The fall armyworm Spodoptera frugiperda is the major pest of corn in tropical and subtropical regions in the American Continent. Among the most used methods to control this pest in Brazil, it highlights the use of genetically modified plants from the insertion of a Bacillus thuringiensis gene that confers to the plant the expression of proteins with insecticidal actions. However, after two or three years these technologies reduce the degree of suppression of larvae, mainly due to the continuous and inadequate use of the technology. The objective of this work was to study in field conditions, the behavior of Bt corn hybrids against lepidopteran attacks as S. frugiperda and Helicoverpa zea in four corn-producing regions of São Paulo State, as well as to study in laboratory conditions the comparative biology of populations of S. frugiperda collected in these regions. Field experiments were carried out during the second corn season in 2014 in the regions of Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste and Norte of São Paulo State where were used 25 corn cultivars with the expression of different insecticidal proteins. To the comparative biology study, the larvae were collected in the four regions of the state, the larvae were sent to Integrated Pest Management Laboratory of FCAV-Unesp where the experiments were carried out with leaves of corn hybrids of different technologies. The results of field experiments demonstrate that the insecticidal protein VIP3Aa20 presents a high level of suppression on the populations of S. frugiperda and H. zea, in addition, the corn hybrids that express the insecticidal protein Cry1F were the most susceptible against the attack of these two pests. Through the results obtained from the experiments of comparative biology, it was verified that the insecticidal protein VIP3Aa20 provided 100% of mortality of larvae from the four regions. The hybrid with expression of the proteins Cry1A.105 + Cry2Ab2 + Cry1F was the one that provided low viability of S. frugiperda larvae coming from the four regions of the São Paulo State. The hybrid that expresses the insecticidal protein Cry1F provided low levels of suppression as well as low adverse effects in the development of S. frugiperda coming from the four regions of the state, indicating that the populations present in these four regions are resistant to the action of this insecticidal protein. / A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda é a principal praga da cultura do milho nas regiões tropicais e subtropicais do continente americano. Dentre os métodos mais utilizados para o controle desta praga no Brasil, destaca-se o uso de plantas geneticamente modificadas a partir da inserção de um gene da bactéria Bacillus thuringiensis que confere a planta a expressão de proteínas com ações inseticidas. No entanto, durante dois ou três anos estas tecnologias reduziram o grau de supressão às lagartas, principalmente pelo uso continuo e inadequado da tecnologia. O objetivo deste trabalho foi estudar em condições de campo, o comportamento de híbridos de milho Bt frente ao ataque de lepidópteros, como a S. frugiperda e Helicoverpa zea, em quatro regiões produtoras de milho do estado de São Paulo, bem como estudar em condições de laboratório a biologia comparada de populações de S. frugiperda coletadas nestas regiões. Os experimentos de campo foram realizados no período da segunda safra de milho, no ano de 2014, nas regiões do Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste e Norte do estado de São Paulo, onde foram utilizados 25 cultivares de milho com expressão de diferentes proteínas inseticidas. Para o estudo de biologia comparada foi realizada a coleta de lagartas nas quatro regiões do estado, as lagartas foram enviadas ao laboratório de Manejo Integrado de Pragas da FCAV-Unesp onde foram realizados os experimentos com folhas de híbridos de milho de diferentes tecnologias. Os resultados dos experimentos realizados a campo demonstram que a proteína inseticida VIP3Aa20 apresenta alto nível de supressão sobre as populações de S. frugiperda e Helicoverpa zea, além disso, os híbridos de milho que expressam a proteína inseticida Cry1F foram os mais suscetíveis frente ao ataque destas duas pragas. Através dos resultados obtidos para os experimentos de biologia comparada, constatou-se que a proteína inseticida VIP3Aa20 proporcionou 100% de mortalidade das lagartas oriundas das quatro regiões. O híbrido com expressão das proteínas Cry1A.105 + Cry2Ab2 + Cry1F foi o que proporcionou menor viabilidade de lagartas de S. frugiperda oriundas das quatro regiões do estado. O híbrido que expressa a proteína inseticida Cry1F proporcionou baixos níveis de supressão além de baixos efeitos adversos no desenvolvimento de S. frugiperda oriundas das quatro regiões do estado, indicando que as populações presentes nestas quatro regiões se encontram resistentes a ação desta proteína inseticida.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-27 / The objectives of this work were: to identify lineages of Trichogramma which occur naturally in eggs of Spodoptera frugiperda, in the West of Paran?; to select, under laboratory conditions, about eggs of the alternative host Anagasta kuehniella (Zeller), the lineage with the highest potential of parasitism and to evaluate the efficency of the selected line to control S. frugiperda in field conditions. Collections were realized in commercial, conventional and organic crops in properties in the West of Paran?. The collected lineages in the field were named (E1, E3, L3) and after, identified as T. pretiosum. The biology of the collected lineages in the field and the line (L2) breeded massively under laboratory conditions in Anagasta kuehniella eggs, were realized in temperature of 25?2 ?C; 70 ? 10% R.U. and 14 h. photophase. After the line selection through the analysis of biological parameters, two liberation experiments were performed in field conditions. On experiment 1, 100 thousand parasitoids per hectare were liberated and evaluated weekly, evaluating the plants which sufferd or not, the fall armyworm attack, observing the leaf damages, as scrape and perforation. On experiment 2, 200 thousand parasitoids per hectare were liberated and evaluated weekly, observing the same damages caused by Spodoptera related on the previous experiment. L2 was selected, due to this line large number of parasited eggs and larger number of females presented, when compared to males for later use in the field. In general, the conclusion is that in both experiments (1 and 2), there was significant reduction of the number of the damaged plants by S. frugiperda in treated areas with T. pretiosum / Os objetivos deste trabalho foram: identificar linhagens de Trichogramma que ocorrem naturalmente em ovos de Spodoptera frugiperda, na região Oeste do estado do Paraná; selecionar em laboratório, sobre ovos do hospedeiro alternativo Anagasta kuehniella (Zeller), a linhagem com o maior potencial de parasitismo e avaliar a eficiência a campo da linhagem selecionada no controle de S. frugiperda. Para isso foram realizadas coletas em plantações comerciais, convencionais e orgânicas em propriedades da região Oeste do Paraná. As linhagens coletadas a campo foram denominadas de (E1, E3, L6) e posteriormente identificadas como T. pretiosum. Foi realizada a biologia das linhagens coletadas a campo e também da linhagem (L2) criada massalmente em laboratório em ovos de Anagasta kuehniella em temperatura de 25±2 ºC; 70 ± 10% U.R. e 14 h. de fotofase. Após a seleção da linhagem pela análise dos parâmetros biológicos, foram realizados dois experimentos de liberação em campo. No experimento 1, 100 mil parasitóides por hectare foram liberados e avaliados semanalmente, levando em consideração as plantas que sofreram ou não, o ataque da lagarta-do-cartucho, observando os danos foliares, como raspagem e perfuração. No experimento 2, 200 mil parasitóides por hectare foram liberados e avaliados semanalmente, levando em consideração os mesmos danos causados pela Spodoptera citado no experimento anterior. Foi selecionado a L2, devido esta linhagem apresentar maior número de ovos parasitados e maior quantidade de fêmeas em relação aos machos para posterior uso em campo. No geral, pode se concluir que em ambos os experimentos (1 e 2) houve redução significativa do número de plantas danificadas por S. frugiperda em áreas tratadas com T. pretiosum.

Orientador : Silvio Sanches Veiga / Co-orientador : Waldemiro Gremski / Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular Molecular. Defesa: Curitiba, 14/09/2004 / Inclui bibliografia / Resumo: Estudando o extrato de cerdas da lagarta Lonomia obliqua, detectamos uma atividade lítica sobre moléculas de ácido hialurônico. O extrato de cerdas também foi capaz de degradar condroitim sulfato purificado, porém, incapaz de hidrolisar moléculas de heparam sulfato e dermatam sulfato. Além disso, por meio de ensaios de cinética de degradação de ácido hialurônico, observamos que esta atividade lítica é causada por uma enzima do tipo hidrolase e não do tipo liase. Baseando-se no método colorimétrico descrito por Reissig et al (1955), concluímos que esta hidrolase atua como uma enzima do tipo ß- endohexosaminidase originando resíduos terminais de açúcares Nacetilglucosamina após a lise do ácido hialurônico, ao invés de agir como uma enzima do tipo ß-endoglucuronidase que, por sua vez, gera resíduos de ácido glucurônico. Análises do extrato de cerdas por zimografia resultaram na identificação de moléculas com atividade lítica sobre o ácido hialurônico com mobilidade eletroforética difusa de 49kDa e 53kDa. Uma avaliação da atividade destas moléculas em função do pH mostrou que estas enzimas não apresentam atividade aparente em pH abaixo de 5,0 e acima de 8,0 e indica que a faixa de pH ótimo para a atividade enzimática está entre 6,0 e 7,0. Por fim, através de reação de fluorescência e análise em microscopia confocal, pudemos comprovar a ação de clivagem do extrato de cerdas sobre o ácido hialurônico organizado na matriz extracelular de derme de coelho. Estes dados nos fornecem evidências experimentais sobre a presença de hialuronidases no extrato de cerdas de L. obliqua, que possivelmente, podem estar envolvidos com os efeitos nocivos desencadeados no envenenamento. Inúmeros constituintes moleculares diferentes têm sido estudados a partir dos produtos de secreção da lagarta L. obliqua e entre eles se destacam as serinoproteases com atividade pró-coagulante e/ou fibrinogenolítica. Com base nestes dados, consideramos a hipótese de identificar e caracterizar um inibidor de serinoprotease na hemolinfa da lagarta com possível função de proteção contra suas próprias toxinas, ou mesmo, com função tóxica durante os acidentes. Experimentos utilizando fibronectina como substrato protéico para diferentes proteases (tripsina, elastase, quimiotripsina, proteinase K, papaína, pepsina e colagenase V) foram realizados na presença de hemolinfa. O perfil de degradação da fibronectina foi avaliado por ensaios de Western Blotting utilizando anticorpos que reconhecem fibronectina. A atividade proteolítica da tripsina, elastase, quimiotripsina e proteinase K foi inibida pela hemolinfa da lagarta. Esta atividade inibitória detectada foi avaliada sob diferentes temperaturas de incubação, mostrando que o inibidor de protease presente na hemolinfa é funcional a 4, 20, e 37°C. Além disso, experimentos adicionais mostraram que esta atividade inibitória da hemolinfa também ocorre quando tripsina é incubada com diferentes substratos protéicos (fibrinogênio, laminina e vitronectina). Com o intuito de purificar a molécula do inibidor de protease, alíquotas de hemolinfa bruta de L. obliqua foram submetidas a ensaios de cromatografia de gel filtração utilizando resina Sephadex G-100 seguidos de ensaios de cromatografia de afinidade utilizando resina tripsinaagarose. As frações eluídas das cromatografias foram monitoradas para a presença de proteínas por absorbância em 280nm e submetidas à incubação com fibronectina e tripsina para detecção da atividade inibitória observada por SDS-PAGE 7,5%. Para fortalecer este resultado foi realizado um zimograma reverso, utilizando gelatina como substrato, em que as frações com atividade inibitória foram avaliadas. Sob estas condições, identificamos um inibidor de serinoprotease na hemolinfa da lagarta L. obliqua com mobilidade eletroforética na região de 21kDa. Com o objetivo de avaliar o grau de reversibilidade da inibição da atividade proteolítica pela ação do inibidor de protease, alíquotas de tripsina pré-incubada com as frações enriquecidas da cromatografia foram submetidas a experimentos de zimograma com gelatina impregnada. Com isso pudemos observar que a interação inibidor-protease é resistente ao SDS e à eletroforese gerando alteração na mobilidade da tripsina mas não inativando irreversivelmente a sua atividade. Especulando sobre uma futura aplicação biotecnológica deste inibidor, realizamos um experimento, para avaliarmos a possível inibição da ação da molécula de trombina quando na presença de fibrinogênio em solução, em que trombina foi pré-incubada com as frações enriquecidas da cromatografia de gel filtração e depois adicionada à uma solução de fibrinogênio. Pudemos observar que, respeitando uma característica importante dos inibidores de protease que possuem aplicações no campo terapêutico, o inibidor de serinoprotease da hemolinfa da lagarta L. obliqua não foi capaz de inibir a atividade da trombina, uma importante enzima da cascata de coagulação / Abstract: By studying Lonomia obliqua (caterpillar) bristles extract we were able to detect a lytic activity on purified hyaluronic acid. Also, the bristle extract hydrolyses purified chondroitin sulphate, but was unable to degrade either heparan sulphate or dermatan sulphate. Moreover, through purified hyaluronic acid-degrading kinetic assays, we observed that this lytic activity was caused by a hydrolase instead a lyase enzyme. In addition, by using the colorimetric reaction of Reissig (1955), we detected this hyaluronic acid hydrolase action as a ß-endohexosaminidase enzyme originating terminal N-acetylglucosamine residues instead a â-endoglucuronidase that might originate glucuronic acid residues. Zymogram analysis of the bristle extract detected 49kDa and 53kDa molecules with hyaluronic acid lytic activity. An examination of these hyaluronic acid degrading activities as function of pH showed that these hydrolases had no apparent activities at pH below 5.0 and higher than 8.0 and displayed their optimal activities at pH ranging from 6.0 to 7.0. Finally, through a fluorescence reaction to hyaluronic acid and confocal microscopy, we further comproved this cleaving action upon hyaluronic acid organised on the extracellular matrix of the rabbit dermis. The data provide experimental evidence of the presence of hyaluronidases in the L. obliqua bristle extract, probably involved on the harmful effects of the venom. Several different molecular constituents have been described in L. obliqua secretion products and among them serineproteases with procoagulant and fibrinogenolytic activity were identified in its bristles. Based on these results, we have considered the hypothesis of identifying a serineprotease inhibitor in caterpillar haemolymph with possible self defense function against their own toxins or even deleterious activities during accidents. Experiments using fibronectin as a protein substrate for different proteases such as trypsin, elastase, chymotrypsin, proteinase K, papain, pepsin and collagenase V were performed in the presence and absence of haemolymph. Fibronectin degradation profile was evaluated by Western Blotting assays using antibodies that recognize fibronectin. The proteolytic activities of trypsin, elastase, chymotrypsin and proteinase K were inhibited by incubation with L. obliqua haemolymph. This inhibitory activity was also evaluated at different temperatures showing that the inhibitor is functional at 4, 20, and 37°C. In addition, experiments showed that this inhibitory activity also occurs when trypsin was incubated with different substrates such as fibrinogen, laminin and vitronectin molecules. With the goal of purify the inhibitor molecule, haemolymph was submitted to a Sephadex G-100 gel filtration chromatography followed by an affinity chromatography using trypsin-agarose. Eluted fractions were monitored for the presence of proteins by absorbance at 280nm and were submitted to incubation with fibronectin and trypsin for detection of inhibitory activity that was observed by SDS-PAGE 7,5%. To ensure this result, a reverse zymography of the fractions with activity was performed using gelatin as substrate. Under these conditions, we were able to identify a trypsin inhibitor with a diffuse eletrophoretic mobility apparently at 21kDa region in L. obliqua haemolymph. Next, we studied the mechanism by which haemolymph serine protease inhibitor inactivates proteases. Trypsin was incubated with Sephadex G-100 enriched fractions and then electrophoresed by using a SDS-PAGE (experimental procedure that is able to separate protease from protease inhibitor in case of reversible inhibition), followed by a gelatin-zymogram. This assay suggest that protease inhibitor interaction with trypsin was resitent to SDS and electrophoretic separation conditions, altered trypsin mobility but did not inactivate its proteolytic activities in a unreversible manner. Then, speculating about the biotechnological applications of this protease inhibitor, we evaluated the ability of this molecule inhibit the thrombin activity upon fibrinogen. Aliquots of thrombin were pre-incubated with Sephadex G-100 enriched fractions and, then, incubated with fibrinogen solution. This result showed that the haemolymph serine protease inhibitor is unable to block fibrinogen-thrombin dependent clotting in vitro, as well as waited for all protease inhibitors use.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02Bitstream added on 2014-06-13T18:35:06Z : No. of bitstreams: 1 colmenarez_yc_me_botfca.pdf: 214314 bytes, checksum: 6e85d2098f54ae999a6fd76ac5157948 (MD5) / Este estudo teve por objetivo avaliar a eficiência do Thyrinteina arnobia vírus (TaV) e de Bacillus thuringiensis quando submetidos a diferentes condições de pH e temperatura no controle da lagarta parda Thyrinteina arnobia (Stoll, 1782) (Lepidoptera: Geometridae). Foram testadas 4 temperaturas (18, 22, 26 e 30º C) e 4 pHs diferentes (5, 6, 7 e 8). Os ovos de Thyrinteina arnobia foram provenientes de uma criação em dieta artificial, mantida em laboratório. Os entomopatógenos foram aplicados em folhas de Eucalyptus grandis, para posterior oferecimento à lagartas do 3º. e 5º. instares. O ensaio de pH foi conduzido em sala climatizada (temperatura: 25 ± 1oC ; UR: 70 ± 10 % e fotofase de 13 horas), enquanto que os ensaios de temperatura os tratamentos foram conduzidos em câmaras de BOD e fotofase de 13 horas. Os experimentos foram instalados no delineamento experimental inteiramente casualizado e a distribuição dos tratamentosem esquema fatorial 4x3, com 10 repetições de 5 lagartas cada uma, sendo avaliadas 150 lagartas para cada tratamento. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste t (LSD) ao nível de 5 % de probabilidade. A variável avaliada foi a mortalidade acumulada das lagartas. As observações foram feitas diariamente porém, para a análise estatística consideraram-se as avaliações realizadas aos 4, 6, 8, 10 e 15 dias. Os dados foram corrigidos utilizando-se a raiz quadrada de x + 1. No experimento sobre a influência da temperatura, foi verificado que quanto maior a temperatura, maior a mortalidade causadas pelo TaV e pelo B. thuringiensis, tanto para lagartas de 3o. instar quanto para lagartas de 5o. instar de T. arnobia. As temperaturas mais favoráveis para a expressão da ação de ambos os patógenos foi 26 e 30ºC. No experimento sobre o efeito do pH da calda de pulverização... . / The objective of this work was to evaluate the efficiency of Thyrinteina arnobia virus (TaV) and Bacillus thuringiensis when exposed to different conditions of pH and temperature to the eucalyptus brown looper control Thyrinteina arnobia (Stoll, 1782) (Lepidoptera: Geometridae). It was evaluated at 4 different temperatures (18, 22, 26 and 30ºC) and 4 different pHs (5, 6, 7 and 8). T. arnobia larvae were reared in an artificial diet and maintained in the laboratory. The entomopathogens were applied to Eucalyptus grandis leaves, and these were offered to larvae at the 3rd and 5th instars. The pH assay was conducted in a controlled conditions (temperature of 25 ± 1oC ; RH: 70 ± 10 % and photophase of 13 hours). The temperature assays were conducted at a controlled temperatures, in a BOD room with photophase of 13 hours. The experiments were installed in the following factorial analysis 4x3, with a experimental design completely randonized, with 10 replications with 5 larvae each one. The data obtained were submitted to ANOVA and means compared by t test (LSD) (P£ 0.05). The variable evaluated was the accumulative larvae death. The observations were made daily, but for the statistical analysis only the evaluations in 4, 6, 8, 10 and 15 days were considered. The temperature experiment showed that higher temperature caused higher mortality to both 3rd and 5th instars of T. arnobia larvae. The more favorable temperatures were 26ºC and 30ºC for the expression of both pathogens. The results of suspention pH experiment showed that pH 7,0 was the most adequated for the B. thuringiensis action for both instars of T. arnobia. However, the TaV action in T. arnobia larvae was not affected for the different pHs evaluated. In different experiments carried out, 3rd instar larvae were more susceptible than to 5th instar. Also for the different temperatures and of different pHs, B. thuringiensis... (Complete abstract, click electronic address below).

Orientador: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Marta Maria Rossi / banca: Raphael de Campos Castilho / Resumo: Este estudo teve como objetivos determinar a capacidade de dispersão do parasitoide Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Platygastridae) e armazenamento do hospedeiro visando o controle de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) na cultura de milho. Estabeleceram-se doze parcelas de 829,44 m2. Cada parcela continha quatro quadrados concêntricos cuja distância desde o centro até o ponto médio de cada lado foi de 3,6; 7,2; 10,8 e 14,4 m, marcando-se em cada quadrado 8, 16, 24 e 32 pontos (plantas). As plantas foram infestadas artificialmente com massas de ovos de S. frugiperda. A infestação foi realizada com uma massa de ovos/planta em 1,6% das plantas na parcela. Após isso, foram liberados 100.000, 150.000 e 200.000 parasitoides/ha em plantas de milho nos estádios fenológicos V4-V5 e V8-V9. Houve ainda um tratamento no qual não houve liberação de parasitoides. As massas de ovos foram recolhidas após 48 h e levadas para laboratório para avaliação de parasitismo. Adotou-se o delineamento experimental de blocos ao acaso com três repetições. Foi determinado o porcentual de parasitismo em cada ponto onde houve infestação. Avaliou-se também, a influência de diferentes temperaturas (5, 10, 15, 20°C) e períodos de armazenamento (0, 3, 6, 9, 12 e 15 dias) no parasitismo de T. remus em ovos de S. frugiperda. Após esses períodos foram colocadas fêmeas do parasitoide e mantidas em sala climatizada (25±1°C, UR de 70±10% e fotofase de 12 horas) para posterior avaliação do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to know the dispersal capacity of the parasitoid Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Platygastridae) and host storage for the control of Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) in maize. Twelve plots of 829.44 m2 each were established. Each plot contained four concentric squares whose distance from the center to the midpoint of each side was 3.6; 7.2; 10.8 and 14.4 m, being each square with 8, 16, 24 and 32 sampling points (plants). The plants were artificially infested with egg masses of S. frugiperda. The infestation was performed using one egg mass /plant in 1.6% of the plants in a plot. After that, 100,000, 150,000 and 200,000 parasitoids/ha were released in maize at the V4-V5 and V8-V9 phenological stages. There was also a treatment in which there was no release of parasitoids. The egg masses were collected after 48 h and taken to the laboratory for parasitism evaluation. A randomized complete block design with three replicates was used. The percentage of parasitism was determined at each point where infestation occurred. The influence of different temperatures (5, 10, 15, 20 °C) and storage periods (0, 3, 6, 9, 12 and 15 days) was also evaluated on T. remus parasitism in S. frugiperda eggs. After these periods, egg masses were offered to parasitoid female for oviposition and kept in an acclimatized room (25±1°C, RH 70±10% and photo phase of 12 hours). The phenological stage of maize influenced the dispersal of T. remus... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Luis Garrigós Leite / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Resumo: O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito subletal causado pelo bioinseticida Dipel em lagartas de Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae). Bacillus thuringiensis (Bt) é um entomopatógeno amplamente utilizado no controle de pragas, porém pouco se sabe sobre seus efeitos em concentrações subletais, que podem ocorrer em campo devido à diferença na distribuição da calda de aplicação ao longo do dossel das culturas ou diferenças na concentração da expressão de toxinas Bt em tecidos de plantas geneticamente modificada. Neste estudo foi utilizado o bioinseticida Dipel na formulação SC, nas concentrações de 3,67 x 106; 6,85 x 106; 6,85 x 107; 1,37 x 108 e 6,85 X 108 esporos.mL-1, além do tratamento controle, no qual recebeu aplicação de apenas água deionizada para instalação do bioensaio para estimativa das concentrações subletais. Para cada concentração foram utilizadas dezesseis lagartas e três repeticões. A análise de Probit, foi utilizada para estimar as concentrações letais; CL10, CL15, CL20 e CL25, que são consideradas concentrações subletais por apresentarem mortalidade abaixo de 25%. Posteriormente, foi instalado outro bioensaio para avaliar alguns parâmetros biológicos, tais como: período de duração da fase larval, peso de indivíduos na fase larval, peso de indivíduos na fase de pupa e razão sexual. Em todas as concentrações foi observado um aumento significativo no período larval, com destaque para CL25 que apresentou o maior período, chegando a mais de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this research was to evaluate the sublethal effect caused by Dipel bioinsecticide on Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) caterpillars. Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogen widely used in pest control, but little is known about its effects on sublethal concentrations, which may occur in the field due to the difference in distribution of the application along the canopy of the crops or differences in concentration expression of Bt toxins in genetically modified plant tissues. In this study, the Dipel bioinsecticide was used in the SC formulation, at concentrations of 3.67 x 106; 6.85 x 106; 6.85 x 107; 1.37 x 108 and 6.85 X 108 spores.mL-1, in addition to the control treatment, in which it received application of only deionized water to install the bioassay to estimate the sublethal concentrations. Sixteen caterpillars and three replicates were used for each concentration. Probit analysis was used to estimate lethal concentrations; LC10, LC15, LC20 and LC25, which are considered sublethal concentrations because they present a mortality below 25%. Later, another bioassay was installed to evaluate some biological parameters, such as: duration period of the larval phase, weight of individuals in the larval stage, weight of individuals in the pupal phase and sexual ratio. All the concentrations showed a significant increase in the larval period, with highlight to LC25 that presented the longest period, reaching more than 36 days. Ther... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-27Bitstream added on 2014-06-13T19:52:54Z : No. of bitstreams: 1 corbo_e_me_jabo.pdf: 183600 bytes, checksum: 92b9b2f8b4062ac8366cd8b8a5c3a3ad (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A soja transgênica MON 87701 × MON 89788 com Cry1Ac foi comparada com a soja isogênica não transgênica (M 8329) e soja RR (M 8360 RR) resistente ao herbicida glifosato no controle destes insetos, sob condições de casa-de-vegetação. Adotou-se o delineamento de blocos casualizados em parcelas subdividas com 4 repetições, sendo que os níveis de infestação corresponderam aos tratamentos primários, enquanto os genótipos de soja corresponderam aos tratamentos secundários. A soja foi cultivada em vasos plásticos sob gaiola telada. Os tratamentos primários para o ensaio com A. gemmatalis foram a) sem infestação; b) baixa infestação com liberação de 64,75+66,75 (fêmea+macho) adultos/parcela e c) alta infestação com liberação de 317,25+302,5 (fêmea+macho) adultos/parcela; enquanto para P. includens foram a) baixa infestação com liberação de 55,25+58,55 (fêmea+macho) adultos/parcela e b) alta infestação com liberação de 213,25+196,5 (fêmea+macho) adultos/parcela. Os tratamentos secundários foram soja MON 87701 × MON 89788; soja isogênica não transgênica; soja RR. Os resultados indicaram que a soja MON 87701 × MON 89788 foi altamente eficiente no controle da lagarta-da-soja e da falsa-medideira. A soja isogênica não transgênica (M 8329) e soja RR (M 8360 RR) não tiveram qualquer efeito nas populações de ambas as lagartas. Os adultos não discriminaram a soja geneticamente modificada e portanto não tiveram preferêncica para oviposição / The transgenic soybean MON 87701 × MON 89788 with Cry1Ac was compared to the isogenic non-transgenic soybeans (M 8329) and RR soybean (M 8360 RR) resistant to glyphosate in the control of the these pests, under greenhouse conditions. Split plot design with four randomized blocks (replications) and infestation levels corresponded to the primary treatment, together with the soybean genotypes corresponded to the secondary treatments was adopted in this study. Soybeans were planted in plastic pots under screened cage. For A. gemmatalis, the primary treatments were a) non-infested plants b) low infestation in which 64.75 +66.75 (female + male) adult/plot were releases c) high infestation in which 317.25 +302.5 (female + male) adult/plot were released; whereas, for P. includens the treatments were a) low infestation with 55.25 +58.55 (female + male) adult/plot and b) high infestation with 213.25 +196.5 (female + male) adult/plot released. The secondary treatments were soybean MON 87701 × MON 89788; isogenic non-transgenic soybean and RR soybean. The results indicated that soybean MON 87701 × MON 89788 was highly effective in controlling both velvetbean caterpillar and soybean looper. Adults of both insects were not able to discriminate the genetically modified soybean, therefore they did not show oviposition preference