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Étude structurale des constituants lipidiques de Mycobacterium leprae : comparaison avec diverses espèces de mycobactéries.Daffe, Mamadou Madani, January 1900 (has links)
Th. 3e cycle--Biol. moléculaire et cell.--Toulouse 3, 1982. N°: 2680.
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The Repetitive Element RLEP Is a Highly Specific Target for Detection of Mycobacterium lepraeBraet, S., Vandelannoote, K., Meehan, Conor J., Brum Fontes, A.N., Hasker, E., Rosa, P.S., Lucena-Silva, R.N., Rigouts, L., Suffys, P.N., de Jong, B.C. 10 September 2019 (has links)
Yes / Damien Foundation, Belgium, and R2Stop, Canada. B.C.D.J. and C.J.M. were supported by the European Research Council-INTERRUPTB starting grant 311725.
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Detecção do Mycobacterium leprae em coleções de água ambientais / Detection of Mycobacterium leprae in collections of environmental waterMacedo, Maria Luisa Bezerra de January 2013 (has links)
MACEDO, Maria Luisa Bezerra de. Detecção do Mycobacterium leprae em coleções de água ambientais. 2013. 159 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-10-30T15:50:56Z
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Previous issue date: 2013 / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo bacilo Mycobacterium leprae. No Ceará é observado o aumento do número de casos novos de hanseníase. A infecção de indivíduos suscetíveis acontece principalmente pela inalação de bacilos eliminados pelas vias aéreas superiores de pacientes multibacilares. A transmissão é influenciada por fatores genéticos do hospedeiro, estado nutricional e taxa de exposição ao M. leprae ou outras micobactérias. Acredita-se que o contato com fatores ambientais sejam possíveis fontes de infecção, como a água, o solo e alguns animais. O papel exato do ambiente na dinâmica de transmissão ainda é especulativo. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar por técnicas de biologia molecular a presença de ácidos nucleicos de M. leprae em amostras de águas ambientais coletadas em áreas endêmicas de municípios de Estado do Ceará, assim como cultivar micobactérias ambientais nestas mesmas amostras. Foram coletadas amostras de água de 24 reservatórios, sendo coletadas réplicas de cada sítio selecionado, totalizando 119 amostras. As amostras coletadas foram provenientes de açudes, riachos, rios e balneários recreativos. O DNA e RNA total foram extraídos através de kits específicos para amostras ambientais de acordo com as recomendações do fabricante, seguido de amplificação dos ácidos nucleicos por PCR e RT-PCR respectivamente, gerando produto de 187pb relativo ao gene gyrA de M. leprae. Em relação ao cultivo, as amostras de água foram descontaminadas e cultivadas em meio Lowestein-Jensen, seguido de identificação da espécie de micobactéria por método de PRA. O DNA e o RNAm do M. leprae foram detectados em todos os municípios estudados. Do total de 119 amostras de água analisadas, 76 apresentaram positividade para ácidos nucleicos de M. leprae (64%). Dentre estas, 23 foram positivas apenas para DNA (30,3%), 24 apenas para RNAm (31,5%) e 29 positivas para ambos os ácidos nucleicos (38,2%). O produto de PCR de duas amostras da região gyrA foi confirmado por sequenciamento e BLAST. Houve uma significância estatística de maior frequência de positividade de DNA e RNAm nos reservatórios de água com temperatua média de 28,4oC. O cultivo mostrou que além do bacilo M. leprae, as amostras de água continham espécies de micobactérias não tuberculosas Este estudo indica presença de DNA e RNAm de M. leprae nas amostras de águas ambientais. Demonstrando, portanto, não somente a existência do bacilo da hanseníase, mas indica fundamentalmente a presença de bacilos viáveis, os quais são geneticamente iguais à referência de M. leprae em relação ao fragmento analisado. Desta forma, os resultados obtidos contribuem para ampliar o conhecimento da dinâmica de transmissão da hanseníase.
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Detecção e quantificação de mycobacterium leprae pela técnica de pcr em tempo real em amostras ambientais de municípios do Ceará / Detection and quantification of mycobacterium leprae by real time pcr from environmental samples of Ceará municipalitiesHolanda, Maisa Viana de January 2015 (has links)
HOLANDA, Maisa Viana de. Detecção e quantificação de mycobacterium leprae pela técnica de pcr em tempo real em amostras ambientais de municípios do Ceará. 2015. 87 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T15:29:40Z
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Previous issue date: 2015 / ABSTRACT
Leprosy is a chronic
granulomatous
infectious
disease
occasioning damage in
skin and
peripheral nerves, caused by
Mycobacterium leprae
, an
intr
a
cellular
agent unable to grown in
axenic culture media.
In 2012
,
232.857
new cases were detected, and
out
of these
33.303 (14,
30%)
were
detected only in Brazil. Ceará diagnosed 2,066 new cases only in 2012, with an
overall detection ratio of 24.0 / 100,000
i
nhabitants
. Transmission is related to
the
bacilli
eliminate
from MB patients
by
the upper respira
tory
route
and consequent contamination
the
air
.
The existence of clinical cases in which patients had no previous contact with leprosy
patients and also
the finding of cases
near water source
s suggests infection of humans by
environmental sources
.
C
urrently,
it is suggested
the possible influence of environmental
factors
and wild animals
in the transmission of leprosy as soil, water, vegetation and armadillos.
The environment
behave
as a kind of reservoir, allowing infectious bacilli remain
viable
af
ter
long perio
ds outside the body.
This study aims to detect and quantify
M. leprae
bacillus by
qPCR environmental water samples from Ceará municipalities
.
Five samples from each
one of
the
30
water reservoir were collected, being
a
total
of
149 samples.
Total DNA was extracted
by specific environmental samples kit according to the manufacturer's recommendations.
Subsequently, was performed the amplification of
M. leprae
16S rRNA
gene by qPCR using
the SYBR Green PCR Master Mix kit.
We used a standard curv
e with known concentrations of
pIDTBlue 16SrRNAMlep
plasmid
to quantify the DNA present in environmental samples.
Environmental samples of Juazeiro do Norte municipality and clinical samples from patients
treated at CDREM were genotyped and subtyped by
PCR
-
RFLP.
M. leprae
’s
DNA was
detected in all the districts studied.
Out of
the
total of
149
w
ater samples analyzed, 81 (54.4
%)
were positive for the detection of DNA. The number of copies of
M. leprae
was in the range of
1,42
x 10
-
1
to 1,44
x 10
+ 2
. Most
clinical samples presented genotype 4 (64%) whereas 100% of
Juazeiro samples were SNP 4.
T
he SNP 4
-
N
was the most
present
both
among the
clinical l and
environmental
samples.
This study indicates the presence of
M. leprae
DNA in samples of
en
vironmental wate
r, essentially
demonstrates
the presence of bacilli
in the water analyzed
.
Thus, further studies are needed in order to
enhance
knowledge of the influence of
the
water in
the transmission of leprosy. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica e granulomatosa responsável por afetar a pele e os nervos periféricos, sendo ocasionada pelo Mycobacterium leprae, um agente intracelular obrigatório incapaz de ser cultivado em meios de cultura axênicos. No ano de 2012, foram detectados 232.857 casos novos no mundo, sendo desses 33.303 (14, 30%) detectados somente no Brasil. O Estado do Ceará diagnosticou 2.066 casos novos só no ano de 2012, com um coeficiente detecção geral de 24,0/100.000 habitantes. A transmissão da doença está relacionada com eliminação dos bacilos provenientes de pacientes multibacilares através do trato respiratório superior e, como a bactéria fica em suspensão no ar, ocorre a posterior contaminação de outra pessoa. A existência de casos clínicos da doença nos quais os pacientes não tiveram nenhum contato anterior com portadores de hanseníase e, ainda, áreas com casos próximos de fontes de água sugere infecção do ser humano com fontes ambientais. Por isso, atualmente, pesquisa-se a possível interferência de fatores ambientais e animais silvestres na transmissão da hanseníase, como solo, água, vegetação e tatus. O ambiente funcionaria como uma espécie de reservatório, permitindo que o bacilo permaneça infeccioso após longos períodos fora do corpo humano. Este estudo tem como objetivo principal detectar e quantificar bacilos de M. leprae por qPCR em amostras de águas ambientais provenientes de municípios cearenses. Foram coletadas cinco réplicas de cada um dos 30 reservatórios selecionados, totalizando 149 amostras. O DNA total foi extraído através de kit específico para amostras ambientais de acordo com as recomendações do fabricante. Posteriormente, foi realizado a amplificação do gene 16S rRNA de M. leprae através de qPCR com o uso do kit SYBR Green PCR Master Mix. Utilizou-se uma curva padrão com concentrações conhecidas de plasmídeo pIDTBlue 16SrRNAMlep para quantificar o DNA presente nas amostras ambientais. As amostras ambientais do município de Juazeiro do Norte e as amostras clínicas provenientes de pacientes atendidos no CDREM foram genotipadas e subtipadas por PCR-RFLP. O DNA de M. leprae foi detectado em todos os municípios estudados. Do total de 149 amostras de água analisadas, 81 (54,4%) foram positivas para a pesquisa de DNA. O número de cópias de M. leprae se manteve no intervalo de 1,42 x 10-1 a 1,44 x 10+2 . A maioria das amostras clínicas apresentou genótipo 4 (64%) enquanto que 100% das amostras de Juazeiro do Norte foram SNP 4. Com relação a subtipagem, o SNP 4-N foi o mais presente dentre as amostras analisadas. Este estudo indica a existência de DNA de M. leprae nas amostras de águas ambientais, mostrando fundamentalmente a presença de bacilos nas águas analisadas. Também relata que a maioria das cepas de M. leprae das fontes ambientais estudadas é do mesmo subtipo das isoladas do homem. Dessa forma, são necessários mais estudos a fim de ampliar o conhecimento da influência da água na transmissão da hanseníase.
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Detecção da infecção subclínica de Mycobacterium leprae em menores de quinze anos, contactantes de hansenianos, Fortaleza - Ceará / Detection of subclinical infection of Mycobacterium leprae in minors under fifteen years old, contactants of leprosy patients, Fortaleza - CearáLourenço, Delaide Sampaio Dias January 2016 (has links)
LOURENÇO, Delaide Sampaio Dias. Detecção da infecção subclínica de Mycobacterium leprae em menores de quinze anos, contactantes de hansenianos, Fortaleza - Ceará. 2016. 97 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-16T15:09:39Z
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Previous issue date: 2016 / Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae, obligate intracellular bacillus. Due to the increase in the incidence of new cases in juveniles under 15 years and the debilitating potential of the disease, especially in paucibacillary patients and neural forms, it is necessary to use detection tools of the presence of the bacillus, in order to diagnose the onset of the disease or subclinical infection detection contacts of cases. This study aimed to investigate the possibility of subclinical infection in contacts ≥5 and <15 years of new cases, detected in Dona Libania Dermatology Centre, in Fortaleza-Ceara. Participated in this study, 69 index cases and 101 contacts under 15 years. Until now, no study sought subclinical detection of contacts of new leprosy cases treated at a Reference Unit. The collected material was analyzed using three techniques: determination of bacterial index, according to the Procedural Guidelines of Bacilloscopy Technical Leprosy of the Ministry of Health-2010; molecular detection of M. leprae DNA in nasal secretion, collected with pre-humidified swabs in Tris-EDTA buffer. The DNA extraction was performed using the DNeasy Blood and Tissue Kit Qiagen, held at -20°C, for subsequent amplification. The RLEP-R1 e RLEP-R2 primers were used for the specific region RLEP. The PCR reaction occurred in a thermocycler using the kit Ilustra™ Pure Taq Ready-to-go PCR beads GE HEALTHCARE; ML-Flow analysis, immunoassay for the detection of IgM PGL-1, which was adopted collection technique of whole blood, making up a puncture on the right or left forefinger. Measuring the positivity of the three techniques used in the study, we obtained the frequencies of 16.1% for PCR DNA, 1.98% for bacterial index in nasal secretion and 33.7% for ML-Flow. The M. leprae DNA PCR combined with serology of anti-PGL-1 antibodies show how sensitive and specific tools, which can assist in monitoring contacts at greater risk of developing the disease, especially in childhood. The detection of M. leprae in the nasal mucosa reflects the presence of this site bacillus, which can become a source of infection or transmission. This information combined with the investigation of seropositivity anti-PGL-1 strengthen the diagnosis of subclinical infection, including the possibility of the presence of bacillus in other sites, for example, skin and/or nerves. / A hanseníase é uma doença infecto-contagiosa, causada pelo Mycobacterium leprae, bacilo intracelular obrigatório. Devido o aumento na incidência de casos novos em menores de 15 anos e ao potencial incapacitante da doença, principalmente em pacientes paucibacilares e com formas neurais, é necessário o emprego de ferramentas de detecção da presença do bacilo, visando ao diagnóstico no início da doença ou detecção de infecção subclínica em contactantes de casos. Este estudo teve como objetivo investigar a possibilidade de infecção subclínica nos contactantes ≥5 e <15 anos de casos novos, detectados no Centro de Dermatologia Dona Libânia, no município de Fortaleza-Ceará. Participaram deste estudo, 69 casos índices e 101 contactantes menores de 15 anos. Até o momento, nenhum estudo buscou a detecção subclínica da infecção em contatos de casos novos de hanseníase, atendidos em uma Unidade de Referência. O material coletado foi analisado através de três técnicas: determinação do Índice Baciloscópico, de acordo com o Guia de Procedimentos Técnicos de Baciloscopia em Hanseníase do Ministério da Saúde-2010; detecção molecular de DNA de M. leprae, em secreção nasal, colhidas com swabs previamente umedecidos em tampão Tris-EDTA. A extração do DNA foi realizada utilizando o Dneasy Blood and Tissue kit Qiagen, mantido a -20ºC, para posterior amplificação. Foram utilizados os iniciadores RLEP-R1e RLEP-R2 para a região específica RLEP. A reação de PCR ocorreu em termociclador utilizando o kit Ilustra™ Pure Taq Ready-to-go PCR beads GE HEALTHCARE; análise de ML-Flow, teste imunocromatográfico para a detecção da IgM para PGL-1, na qual foi adotada a técnica de coleta do sangue total, fazendo-se uma punctura no dedo indicador esquerdo ou direito. Avaliando a positividade das três técnicas usadas no estudo, obtivemos frequência de 16,1% para PCR de DNA, 1,98% para Índice Baciloscópico na secreção nasal e 33,7% para ML-Flow. A PCR de DNA de M. leprae aliada à sorologia de anticorpos anti-PGL-1 se mostram como ferramentas sensíveis e específicas, podendo auxiliar no monitoramento dos contatos com maior risco de desenvolver a doença, principalmente na infância. A detecção do M. leprae na mucosa nasal reflete a presença do bacilo neste sítio, que pode tornar-se uma fonte de infecção ou transmissão. Esta informação aliada à investigação da soropositividade ao anti-PGL-1 reforçam o diagnóstico de infecção subclínica, inclusive com a possibilidade da presença do bacilo em outros sítios, como por exemplo, pele e/ou nervos.
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Talglipide als Wirtsfaktoren für Mycobacterium leprae : Literaturrecherche und Entwicklung einer Methode zur Talganalyse / Sebum lipids as host factors for Mycobacterium leprae : Literature research and development of a method of sebum analysis.Philipp, Carolin January 2013 (has links) (PDF)
Trotz weltweiter kostenlos zur Verfügung stehender multi drug therapy und Eradikationsbemühungen der WHO liegt die Leprainzidenz seit fünf Jahren bei etwa 250 000 Neuerkrankungen pro Jahr. Der massive Abfall der Prävalenz seit 1985 ist zum einen rechnerisch und durch die Art der Datenerhebung bedingt (s. 5.1.1), zum anderen lässt sie keine Rückschlüsse auf die Transmissionsereignisse, also die Aktivität der Krankheit zu. Dazu dient die Inzidenz, die nur unverhältnismäßig gesunken ist (s. 2.4.1). Für eine effektive Bekämpfung der Lepra muss jedoch eine Reduktion der Neuerkrankungen erreicht werden. Bekannt ist, dass nur ein Bruchteil der mit M.leprae exponierten Individuen eine manifeste Krankheit entwickelt. Die Suche nach Wirtsfaktoren für eine Lepraerkrankung ist für gezielte Präventions- und Prophylaxe-Maßnahmen, die Neuerkrankungen verhindern sollen, demnach von großer Bedeutung. In der vorliegenden Arbeit werden die Ergebnisse einer Literaturrecherche zum Thema "Talglipide als Wirtsfaktoren für M.leprae" präsentiert und eine Methode zur Talganalyse entwickelt. Anhand wissenschaftlicher Publikationen wurde der aktuelle Stand der Forschung in den verschiedenen Bereichen dieser Hypothese reviewartig dargestellt. Der aktuelle Erkenntnisstand hinsichtlich der Lepraübertragung ist vereinbar mit mehreren Übertragungswegen, wobei die Tröpfchen- und die Hautübertragung favorisiert werden (s. 2.5.1). Die Interpretation der Genomanalysen von M.leprae hat in Kombination mit früheren biochemischen Erkenntnissen Aufschluss über die metabolischen Fähigkeiten von M.leprae gegeben. M.leprae besitzt ein reduktives "Minimalgenom", das sich an die intrazelluläre Nische, in der es lebt, außerordentlich adaptiert hat. Der Verlust wichtiger Kohlenstoffquellen und eine stark eingeschränkte Atmungskette stehen im Gegensatz zu den fast vollständig erhaltenen anabolen und katabolen Stoffwechselwegen der Lipide. Sowohl für die Zellwandsynthese als auch zur Energieproduktion ist M.leprae auf wirtsbezogene Lipide angewiesen. Freie Fettsäuren werden dabei veresterten Fettsäuren vorgezogen (s. 5.2.1.1). Epidemiologische Erkenntnisse stehen ebenfalls in Einklang mit unserer Lipidhypothese. Als Ursache für das Clustering von Leprafällen in Haushalten kommen sowohl genetische als auch zufällig verteilte Faktoren sowie ein auf den gesamten Haushalt wirkender "Haushaltsfaktor" in Frage. Als genetischer Faktor, der die Talglipidzusammensetzung beeinflusst, wären Enzymaktivitäten für die Squalen- bzw. Sapiensäuresynthese denkbar (vgl. 5.2.1.3). Einen in der Bevölkerung zufällig verteilten Suszeptibilitätsfaktor könnte die residente Keimflora der Haut darstellen, die für die Menge der im Talg vorkommenden freien Fettsäuren verantwortlich ist (s. 5.2.1.2). Als möglicher Haushaltsfaktor kommt "Armut" in Betracht, der nachgewiesenermaßen mit schlechter Körper- und Kleidungshygiene einhergeht (s. 5.2.2.3). In Kombination mit einer vermutlich ebenfalls mit Armut assoziierten häufigeren kutanen Verletzung durch Parasiten und Mücken könnte dies eine kutane Schmierinfektion mit M.leprae begünstigen. Für eine Schmierinfektion über kontaminierte Gegenstände spricht auch die gute extrakorporale Überlebensfähigkeit des Erregers und der Nachweis von M.leprae in Bodenproben (s. 5.2.2.2). Die epidemiologischen Daten zu Geschlechterverhältnis und Infektionszeitpunkt lassen ebenfalls eine Rolle der Talglipide als Wirtsfaktoren für eine Lepraerkrankung vermuten (s. 5.2.1.2). Auf Basis der Erkenntnis, dass Lipide und insbesondere Talglipide als Wirtsfaktoren für M.leprae in Betracht kommen, wurde zu diesbezüglich relevanten Talgkomponenten recherchiert. Als trophischer Wirtsfakor kommen die individuell in unterschiedlichen Mengen vorliegenden freien Fettsäuren des Sebums in Betracht. Die Menge an Squalen und Sapiensäure im Talg hat nachgewiesenermaßen erheblichen Einfluss auf die Barrierefunktion der Haut gegen bakterielle Erreger (s. 5.2.1.3). Es wurde folglich eine auf Dünnschicht- und Gaschromatografie beruhende Methode zur Quantifizierung dieser Talgbestandteile entwickelt (s. 4.6). Die Probenentnahme erfolgt mittels Sebutape, was eine bewährte, reproduzierbare und auch unter tropischen Bedingungen leicht anwendbare Methode darstellt. / Despite worldwide free available multi drug therapy and eradication efforts of the WHO, the leprosy incidence is for five years at about 250 000 new cases per year. The massive drop in prevalence since 1985 is on one hand mathematically and due to the way of data collection (see 5.1.1), on the other hand it does not allow conclusions about the transmission events, ie the activity of the disease. An appropriate marker of the disease activity would be the incidence, which is only fallen disproportionately (see 2.4.1). For an effective fight against leprosy, however, a reduction of new cases must be achieved. It is known that only a small part of individuals exposed to M.leprae develop a manifest disease. The search for host factors for leprosy is therefore of great importance for well-directed preventive and prophylactic measures. In the present work the results of a literature review on the subject "Sebum lipids as host factors for M. leprae" and the development of a method for sebum analysis are presented. Based on scientific publications the current state of research in the various areas of this hypothesis was presented review-like . The current state of knowledge regarding leprosy transmission is compatible with multiple transmission paths, wherein the droplets and the skin transmission are favored (see 2.5.1). The interpretation of genome analysis of M. leprae together with previous biochemical findings shed light on the metabolic capabilities of M. leprae. M. leprae has a reductive " minimal genome ", which has become extremely adapted to the intracellular niche in which it lives. The loss of important carbon sources and a severely impaired respiratory chain are in contrast to the almost perfectly preserved anabolic and catabolic pathways of lipids. For both the cell wall synthesis and for energy production M.leprae is dependent on host related lipids. Free fatty acids are thereby preferred to esterified fatty acids (see 5.2.1.1 ). Epidemiological findings are also in line with our lipid hypothesis. Concerning the causes for the clustering of leprosy cases in households, genetic factors as well as randomly distributed factors as well as a “household factor” must be considered. Enzyme activities for squalene- or sapienic acid-synthesis are conceivable as a genetic factor that influences the sebum lipid composition (see 5.2.1.3 ). A randomly distributed susceptibility factor could be the resident bacterial flora of the skin, which is responsible for the amount of free fatty acids occurring in the sebum (see 5.2.1.2 ). The household factor might be "poverty" which has been shown to correlate with poor body and clothing hygiene (see 5.2.2.3 ) . In combination with poverty-related frequent cutaneous injury caused by parasites and mosquitoes, this could favor a cutaneous infection with M. leprae. A smear infection via contaminated objects would be in accord with the good extracorporeal survival of the pathogen and the detection of M. leprae in soil samples (see 5.2.2.2 ) . The epidemiological data on sex ratio and age of infection also point to the fact that sebum lipids might be host factors for leprosy (see 5.2.1.2 ). Based on the recognition that lipids, and in particular sebum lipids must be taken into consideration as host factors for M.leprae, research has been done to identify possibly relevant sebum components. Individually different amounts of free fatty acids in the sebum must be considered as a trophic host factor. The amount of squalene and sapienic acid in the sebum has been shown to have significant influence on the barrier function of the skin against bacterial pathogens (see 5.2.1.3 ). We thus developed a method based on thin-layer and gas chromatography to quantifiy these sebum components (see 4.6). The sampling is done with “Sebutape”, which is a proven, reproducible and easily applicable method, even under tropical conditions.
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Participação do CD163 na via anti-inflamatória do polo lepromatoso da hanseníaseMoura, Danielle Fonseca de January 2011 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T11:35:25Z
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Previous issue date: 2011-08-31 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos anteriores demonstraram que macrófagos de pacientes lepromatosos
possuem um fenótipo regulador que contribui para a imunossupressão observada na
hanseníase. IDO, CD86 e HLA-DR são moléculas altamente expressas por
macrófagos de pacientes lepromatosos, como também o receptor “scavenger”
CD163, regulado pela IL-10. Este trabalho foi realizado com o intuito de analisar a
expressão de CD163 nas lesões cutâneas de pacientes polares da hanseníase e em
monócitos infectados pelo Mycobacterium leprae (ML). Observamos um aumento de
macrófagos CD163+IDO+ nas lesões e nas células isoladas do infiltrado inflamatório
de pacientes LL. Ademais, durante o período de cultura de 6 dias dos macrófagos
isolados das lesões lepromatosas, houve uma gradativa redução da expressão
gênica de CD163, IDO e IL-10, assim como dos receptores de superfície CD163,
CD209, HLA-DR, CD86 e CD14 observada por citometria de fluxo, fato que ocorreu
concomitantemente com a saída de ML destas células. A expressão de células
CD163+IDO+CD209+ aumentou em monócitos de indivíduos saudáveis, estimulados
com ML irradiado obtido de extratos de lesão. Adição de citocalasina B na cultura de
monócitos reduziu a expressão de CD163 nessas células, e, na presença de anti-
CD163, a entrada de bactérias nos monócitos também foi reduzida. A adição da anti-
IL-10 em cultura de monócitos de indivíduos sadios reduziu a expressão de CD163
até mesmo na presença do ML. Além disso, os níveis séricos de sCD163, IL-10 e
heme estavam aumentados nos pacientes lepromatosos, em comparação com
pacientes tuberculóides e indivíduos sadios, assim como os depósitos intracelulares
de ferro. Estes resultados sugerem que o perfil de expressão de CD163 é importante
na endocitose e sobrevivência do ML no polo lepromatoso da hanseníase. / According to prior studies, macrophages from lepromatous patients present a
regulatory phenotype that contributes to the immunosuppression observed in the
disease. IDO, CD86, and HLA-DR molecules are highly expressed by macrophages
from lepromatous patients, as well the scavenger receptor CD163, regulated by IL-
10. The purpose of this study was to analyze CD163 expression on polar leprosy
skin lesions and monocytes infected by Mycobacterium leprae. We observed an
increased number of CD163+IDO+ in the lesions and cells isolated from
the inflammatory infiltrate of LL patients. Moreover, during the 6-day culture of
macrophages isolated from lepromatous lesions, the gene expression
of CD163, IDO and IL-10 and the surface receptors CD163, CD209, HLA-DR, CD86,
CD14 presented a gradual decrease, as shown by flow cytometry,
simultaneously with the output of ML from these cells. The expression of
IDO+CD163+CD209+ cells was augmented in monocytes from healthy individuals,
stimulated with irradiated ML, obtained from extracts of lesion. The addition
of cytochalasin B to monocyte culture reduced the expression of CD163 in these
cells, and, in presence of anti-CD163, the bacterial input into monocytes was also
reduced. The addition of anti-IL-10 in monocyte culture from healthy individuals led to
a decrease at the expression of CD163, even in presence of ML. Besides, serum
levels of sCD163, IL-10 and heme were increased in lepromatous patients, when
compared to tuberculoid patients and healthy controls, while
intracellular iron deposits were also augmented. These results suggest the relevance
of CD163 expression profile for endocytosis and also for the survival of ML itself in
lepromatous patients.
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Análise da produção do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) e seu efeito na geração de óxido nítrico em macrófagos estimulados com micobactériasSilva, Leonardo Ribeiro Batista January 2009 (has links)
Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-12-27T18:20:32Z
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Previous issue date: 2009 / Fagócitos mononucleares são células alvo para micobactérias patogênicas
como M. tuberculosise M. leprae. Essas micobactérias têm a capacidade de
modular os mecanismos microbicidas dos macrófagos, sobreviver e replicar
nessas células. Contudo o mecanismo molecular envolvido nesta desativação não
é totalmente compreendido. Dados do nosso laboratório têm demonstrado que o
M. lepraeé capaz de induzir a expressão do fator de crescimento semelhante a
insulina I um hormônio com efeito anti-apoptotico ecom atividade de proliferação –
em Células de Schwann humanas. Recentemente, foi relatado que IGF-I é capaz
de inibir a expressão da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e
conseqüentemente a produção de óxido nítrico em macrófagos induzido por
Leshimania amazonensis. Baseado nestes dados, nós temos investigado o
envolvimento do IGF-I na desativação dos macrófagosobservada na infecção
micobacteriana. Com este propósito, macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7
foram estimulados ou não com M. lepraee a expressão de IGF-I foi monitorada
através de RT-PCR quantitativo e ensaio imunoenzimático específico, ELISA.
Duas outras espécies de micobactérias, M. bovisBCG e M. smegmatis,
respectivamente, uma cepa atenuada de M. bovise uma micobactéria não-patogênica, foram testadas para comparação. O estímulo com M. lepraeou BCG,
em contraste com M. smegmatis, regulou positivamente a expressão de RNAm
para IGF-I e aumento significantemente os níveis daproteína quando comparado
com a cultura controle. Além disso, nós também investigamos o efeito do IGF-I na
produção de NO e na expressão de iNOS induzida por micobactérias em
macrófagos RAW 264.7. A produção de NO foi monitorada pela determinação da
concentração de nitrito no sobrenadante em meio de cultura, utilizando reagente
de Griess e a expressão de iNOS monitorada por Western Blot. M. lepraefoi um
fraco estimulo para indução de iNOS. Em contraste, BCG e M. smegmatis
induziram a expressão e, como conseqüência, uma significantiva produção de NO
em macrófagos RAW. Interessantemente, células pré-tratadas com IGF-I
mostraram uma significantiva redução na produção denitrito após a estímulo com
micobactérias, o que correlacionou com uma regulação negativa da expressão de
iNOS. Além disso, IGF-I foi capaz de reduzir parcialmente a produção de NO
induzida por IFN-γrecombinante. Esses resultados sugerem que o IGF-Ipode
contribuir para a persistência micobacteriana no hospedeiro, modulando
negativamente a resposta imune inata durante a infecção. / Mononuclear phagocytes are target cells for pathogenic mycobacteria such as
Mycobacterium tuberculosisand Mycobacterium leprae. These bacteria are able to
subvert macrophage microbicidal mechanisms and survive and replicate within
these cells. However, the molecular mechanisms involved in this deactivation
remain incompletely understood. We have previously described that M. leprae
induces the expression of insulin-like growth factor I (IGF-I) – an hormone with
anti- apoptotic and proliferation activities– in human Schwann cells. Recently it has
been reported that IGF-I can inhibit inducible nitric oxide synthase (iNOS)
expression and consequently nitric oxide (NO) production in macrophages infected
with Leishmania amazonensis. Based on these data, we have investigated the
potential involvement of IGF-I on macrophage deactivation observed during
mycobacterial infection. For this purpose, RAW 264.7 murine macrophages were
treated or not with M. lepraeand the expression of IGF-I was monitored by
quantitative RT-PCR and specific sandwich ELISA. Two other species of
mycobacteria, M. bovisBCG and M. smegmatis, respectively, an attenuated strain
of M. bovisand a nonpathogenic mycobacterium, were tested forcomparison. M.
lepraeor BCG treatment, in contrast to M. smegmatis, positively regulated the
expression of IGF-I by RAW cells when compared withcontrol cultures.
Furthermore, we also investigated the effect of IGF-I on mycobacterium-induced
iNOS expression and NO production in RAW 264.7 macrophages. NO production
was evaluated by determination of nitrite concentration in the culture media using
the Griess reagent and iNOS expression was monitored by Western Blot. M. leprae
was a weak stimulus for iNOS induction. In contrast, BCG and M. smegmatis
induced iNOS expression and, as a consequence, significan levels of NO
production in RAW macrophages. Interestingly, IGF-Ipre-treated cells showed a
significant reduction in nitrite production after infection with mycobacteria that
correlated with the down regulation of iNOS expression. Moreover, IGF-I was able
to partially reduce NO production induced by recombinant interferon-gamma.
Taken together, these results suggest that IGF-I may contribute to mycobacterium
persistent in the host by down modulating host innate response during infection.
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Interação de Mycobacterium leprae com células epiteliais humanas das vias aéreasaderência, entrada, sobrevivência e identificação das potenciais adesinas através da análise do proteoma de superfícieSilva, Carlos Adriano de Matos e January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / As vias aéreas são consideradas a principal porta de entrada para Mycobacterium leprae, o agente etiológico da hanseníase. Portanto, estudos sobre a interação do M. leprae com as células epiteliais são de grande relevância para a compreensão dos eventos iniciais que ocorrem durante a interação de M. leprae com o ser humano. Nesse contexto investigamos a interação in vitro de M. leprae com as células epiteliais alveolares (linhagem A549) e nasais humanas (linhagem RPMI2650). Nossos resultados mostram que M. leprae é capaz de aderir, entrar e também de sobreviver nas células epiteliais nasais e alveolares. Entretanto, M. leprae possui uma maior capacidade de aderir e invadir as células A549. Ademais, a habilidade de M. leprae de entrar em células epiteliais nasais foi confirmada através do isolamento e infecção de células epiteliais nasais primárias humanas advindas de pacientes com polipose nasal. Também demonstramos que o processo de entrada do bacilo nas células epiteliais é um processo passivo dependente de microfilamentos de actina e também de tubulina. Visto que a adesão é um evento crucial no estabelecimento da infecção, torna-se relevante a identificação de proteínas de superfície expostas em M. leprae
Para atingir este objetivo, M. leprae isolado do coxim plantar de camundongo nude foi pré-incubado com biotina e em seguida as proteínas biotiniladas foram purificadas com microesferas magnéticas recobertas com estreptavidina e finalmente os peptídeos digeridos foram submetidos a LC/MS-MS. Com esta metodologia, identificamos 279 proteínas na superfície de M. leprae. Dentre este conjunto de proteínas, identificamos 12 potenciais adesinas previamente descritas e ainda confirmamos a presença da proteína semelhante à histona (Hlp) e da hemaglutinina ligante de heparina (HBHA) na superfície de M. leprae. Estudos com a Hlp e a HBHA recombinante de M. leprae mostraram que ambas proteínas são capazes de interagir com as células epiteliais alveolares. No entanto, apenas a Hlp foi capaz de se ligar às células epiteliais nasais. A inoculação de M. leprae no septo nasal de camundongos resultou na infecção de macrófagos e também de células epiteliais pulmonares. Além disso, M. leprae induziu a expressão de IL-8 nas células A549 e nas células epiteliais primárias humanas. Ainda, M. leprae foi capaz de induzir a produção de MCP-1 nas células A549. A bactéria também foi capaz de aumentar os níveis da subunidade p65 de NF-kB no extrato nuclear das células alveolares. Concluindo, nossos dados reforçam a importância da interação do M. leprae com o epitélio respiratório durante eventos iniciais da infecção / Abstract: The airways are considered the major port of entry of Mycobacterium leprae, the causative agent of leprosy. Therefore, studies on the M. leprae interaction with epithelial cells are of great relevance to shed light on earlier events in M. leprae-host interaction. We examined the in vitro interaction between M. leprae and human alveolar and nasal epithelial cells. It was observed that M. leprae can enter both cell types and that epithelial cells can sustain bacterial survival. However, M. leprae had a higher capacity to bind and invade alveolar epithelial cells. Additionally, bacterial ability to interact with nasal epithelial cells was confirmed through the isolation and infection of nasal primary epithelial cells. Moreover, M. leprae entry in epithelial cells is a passive process and actin/tubulin-dependent. Since a critical aspect for understanding the mechanisms of infection is the identification and characterization of the adhesins involved in pathogen-host cell interactions, we studied the surface proteome of nude mouse-derived M. leprae to uncover potential adhesin candidates relevant in M. lepraeepithelial cell interaction Two hundred and seventy-nine cell surface-exposed proteins were identified based on selective biotinylation, streptavidin-affinity purification and shotgun mass spectrometry. Among these proteins, the histone-like protein (Hlp) and hemaglutinin binding heparin (HBHA), two major mycobacterial adhesins, were shown to be exposed on the M. leprae surface and to mediate bacterial attachment to epithelial cells. Delivery of M. leprae to the nasal septum of mice resulted in infection of macrophages and also epithelial cells in the lung tissue. Additionally, M. leprae induces IL-8 in A549 cells but not in RPMI cells. However, human primary nasal epithelial cells secrete IL-8 during M. leprae infection. Also, alveolar epithelial cells produce monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) during M. leprae infection. Moreover, p65 NF-kB subunit levels in A549 nuclear extracts increase in response to M. leprae. Altogether, our data point to the potential of the epithelial airway mucosa as a primary site of M. leprae infection in humans
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Estudo epidemiológico molecular da hanseníase em Fortaleza, Ceará / Molecular epidemiological study of leprosy in Fortaleza, CearáLima, Luana Nepomuceno Gondim Costa January 2014 (has links)
LIMA, Luana Nepomuceno Gondim Costa. Estudo Epidemiológico Molecular da Hanseníase em Fortaleza, Ceará. 2014. 95 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-30T11:15:20Z
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Previous issue date: 2014 / The study of detection of M. leprae DNA in nasal secretions from patients and healthy subjects in addition to the methodologies for genotyping of M. leprae has complemented the leprosy’s epidemiology. This study evaluated the positivity of M. leprae DNA in nasal secretion (NS) of leprosy patients and healthy individuals; and genetic variability among strains of M. leprae, studying the relationship with clinical and epidemiological factors. NS samples were collected from 185 patients (group C), 136 individuals without leprosy (Co) attending the National Reference Center for Sanitary Dermatology Dona Libânia in Fortaleza, Ceará and 121 students from the Faculty Christus in Fortaleza (GE group). Skin biopsies (SB) were collected from 38 individuals in group C. All samples NS were subjected to DNA extraction and amplification of RLEP region by nested PCR. To assess the genetic diversity of M. leprae among individuals, 48 strains of SN positive patients RLEP system were analyzed using the four loci of variable number tandem repeats (VNTRs): AC8b, AC9, and AC8a GT9. To study the variability of the strain in the same individual were compared BP and SN samples of 38 positive patients RLEP system using the fifteen loci VNTRs: AT17, GGT5, GTA9, AC8b, AC8a, AT15, AC9, 21-3, GAA21, TA18, 6-7, 27-5, TA10, 23-3, 12-5. 69.2% of the cases, 66.9% of Co and 28.1% of group GE were positive RLEP. The fact that the individual is male, belonging to socioeconomic class D/E and every year-old age increases the chance in 6,266, 3,083 and 1,046, respectively, be it positive PCR. In the analysis of geographical distribution of individuals positive RLEP, the Co was the group of intersection between C and GE groups and the group C, the smear-positive and positive RLEP were more clustered than smear-positive and negative RLEP. The AC8b, AC9, and AC8a GTA9 loci showed allelic diversity considered moderately discriminating. There was a formation of four groups with strains of identical genotypes. The most common genotypes were AC8b: 8, AC9: 7, AC8a: 8, GTA9: 10 and AC8b: 7, AC9: 8, AC8a: 9, GTA9: 9. Strains of unique genotypes were detected in patients aged greater and in patients in whom there was more time between symptoms and diagnosis. The existence of different strains circulating in the city under study and different subpopulations of bacilli between BP and SN samples of the same individual was observed. / O estudo da detecção de DNA do M. leprae em secreção nasal de indivíduos e as metodologias de genotipagem do M. leprae têm complementado a epidemiologia da hanseníase. Este estudo avaliou a positividade de DNA de M. leprae na secreção nasal (SN) de pacientes com hanseníase e de indivíduos sadios; e a variabilidade genética entre cepas de M. leprae, estudando a relação com fatores clínico-epidemiológicos. Foram coletadas amostras de SN de 185 pacientes (grupo C), de 136 indivíduos sem hanseníase (grupo Co) que frequentavam o Centro de Referência Nacional em Dermatologia Sanitária Dona Libânia em Fortaleza, Ceará e 121 alunos da Faculdade Christus em Fortaleza (grupo GE). Foram coletadas biópsias de pele (BP) de 38 indivíduos do grupo C. Todas as amostras de SN foram submetidas à amplificação da região RLEP por meio de PCR NESTED. Para avaliação da diversidade genética do M. leprae entre indivíduos, foram analisadas cepas de SN de 48 pacientes positivos do sistema RLEP, utilizando os quatro loci de repetições em tandem de número variável (VNTRs): AC8b, AC9, AC8a e GT9. Para o estudo da variabilidade da cepa no mesmo indivíduo foram comparadas amostras de BP e SN de 38 pacientes positivos do sistema RLEP, utilizando os quinze loci de VNTRs: AT17, GGT5, GTA9, AC8b, AC8a, AT15, AC9, 21-3, GAA21, TA18, 6-7, 27-5, TA10, 23-3, 12-5. Foram RLEP positivo 69,2% dos casos, 66,9% do grupo Co e 28,1% do grupo GE. O fato de o indivíduo ser homem, pertencer à classe socioeconômica D/E e a cada ano de idade que envelhece, aumenta a chance em 6,266, 3,083 e 1,046, respectivamente, dele ser PCR positivo. Na análise de distribuição geográfica dos indivíduos RLEP positivos, o grupo Co foi o grupo de interseção entre os grupos C e GE e em relação ao grupo C, os com baciloscopia positiva e RLEP positivo estiveram mais agrupados do que os com baciloscopia positiva e RLEP negativo. Os loci AC8b, AC9, AC8a e GTA9 apresentaram uma diversidade alélica considerada moderadamente discriminante. Houve a formação de quatro grupos com cepas de genótipos idênticos. Os genótipos mais frequentes foram o AC8b: 8, AC9: 7, AC8a: 8, GTA9: 10 e o AC8b: 7, AC9: 8, AC8a: 9, GTA9: 9. As cepas de genótipos únicos foram detectadas em pacientes com idade menor e em pacientes nos quais ocorreu maior tempo entre sintomas e diagnóstico. Foi constatada a existência de diferentes cepas circulando no Município em estudo e diferenças de subpopulações do bacilo entre as amostras de BP e SN de um mesmo indivíduo.
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