Numerosos estudios han demostrado a lo largo de los años, el papel fundamental que juegan las células de microglía en el funcionamiento del SNC. No sólo en condiciones normales, donde controlan la correcta homeóstasis del tejido, sino también en todas aquellas situaciones que, como consecuencia de alteraciones y procesos patológicos diversos, conllevan a una pérdida de esta homeóstasis. En respuesta a todas estas situaciones, las células de microglía son capaces de detectar rápidamente el daño y actuar de una manera específica en función del tipo de perturbación que se produzca en su entorno. Esta respuesta microglial ha sido ampliamente estudiada en daños agudos, en los que la microglía actúa como parte del sistema inmune innato, sin embargo los procesos que subyacen a la reactividad microglial ante una situación de inmunidad adquirida, así como la comunicación que se establece entre estas células microgliales y las células inmunes periféricas infiltradas permanecen en muchos aspectos sin esclarecer. En el presente trabajo hemos caracterizado el patrón de reactividad microglial y su relación con las diferentes poblaciones de linfocitos infiltrados a lo largo de las diferentes fases de la evolución que acontecen en un modelo agudo de encefalopatía autoinmune experimental (EAE). Nuestros estudios demuestran que las células de microglía se activan en respuesta a la inducción de la EAE y presentan un patrón de activación específico en cada una de las fases. Durante la fase de inducción y pico del proceso patológico, en estrecha relación con el aumento de la sintomatología clínica que se manifiesta por un progresivo deterioro de las funciones motoras, estas células microgliales experimentan cambios morfológicos y en su distribución acumulándose alrededor de los vasos sanguíneos. Además de microglía reactiva y posiblemente de macrófagos de origen sanguíneo, se observa también un gran número de linfocitos infiltrados, mayoritariamente del tipo T-cooperador y subtipo Th1 (pro-inflamatorio), si bien también se observan linfocitos T-citotóxicos y T-γδ. En estas fases, la activación microglial se caracteriza a nivel fenotípico por el aumento en la expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase I y clase II (MHC-clase I y MHC-clase II) sin expresión concomitante de moléculas co-estimuladoras B7.1 o B7.2, es decir las células de microglía activadas presentan en estas circunstancias un fenotipo característico de células dendríticas inmaduras; hecho que hemos corroborado con la demostración de la expresión del marcador CD1. En este contexto, la señal que inducen estas células de microglía a los linfocitos infiltrados, podría estar implicada en la modulación del proceso inflamatorio induciendo la apoptosis o anergia linfocitaria. Durante la fase de recuperación, a pesar de que los animales experimentan una progresiva mejora sintomatológica, las células de microglía siguen mostrando una morfología, distribución y patrón de expresión de moléculas característicos de células reactivas. Si bien, en general, las células de microglía siguen mostrando el mismo patrón fenotípico (CD1+, MHC-I+, MHC-II+, B7.1- y B7.2-), aquellas localizadas en el entorno de algunos vasos sanguíneos expresan diferencialmente la molécula B7.2. Durante esta fase, además, el número total de linfocitos T-cooperadores, T-citotóxicos y T-γδ se mantiene muy elevado con valores similares a los observados en las fases anteriores. Es interesante señalar que ya no encontramos linfocitos Th1 y la población de T-cooperadores está constituida por los subtipos Th17 y T-regs. Los linfocitos que se acumulan en las inmediaciones de los vasos sanguíneos expresan CTLA-4, uno de los co-receptores de B7.2. En este nuevo contexto, la interacción de las células de microglía B7.2+ con estos linfocitos CTLA-4+ podría ser la responsable de la resolución de la respuesta immunitaria y la inducción de la tolerancia. En su conjunto los resultados obtenidos evidencian que la microglía juega un papel clave en la evolución de la respuesta inmune adquirida modulando la activación e inactivación de las diferentes poblaciones linfocitarias implicadas tanto en la inducción del proceso inmune/inflamatorio como en su posterior resolución. La realización de este trabajo ha sido financiada por las siguientes ayudas: Beca pre-doctoral de formación de investigadores de la UAB (UAB2004-11), Fundación La Maratón de TV3, Fundación Alicia Koplowitz, Fundación Uriach y Ministerio Español de Ciencia e Innovación (BFU2005-02783, BFU2008-04407). / Over the years, numerous studies have demonstrated the fundamental role played by microglial cells in the CNS, not only in normal conditions where they control the correct tissue homeostasis, but also in all those situations in which, as a result of alterations and pathologies, homeostasis may be disturbed. Thus, when the integrity of the nervous tissue is disrupted, microglial cells are activated, showing specific activation patterns which fully depend on changes in the particular micro-environment. The microglial response has been widely studied in acute injuries in which microglia act as an intrinsic element of the innate immune system. However, the processes underlying microglial reactivity in situations of acquired immunity, as well as the relationship established between these microglial cells and infiltrating peripheral immune cells, remain poorly understood. In this study we have characterized the pattern of microglial reactivity and their relationship with the different populations of infiltrated lymphocytes, along the evolution of an acute model of experimental autoimmune encephalopathy (EAE) induced in Lewis rat. Our studies have demonstrated that microglial cells became activated in response to EAE induction, showing a specific activation pattern in each phase along disease evolution. During the inductive and peak phases, microglial cells showed changes in morphology and distribution, in close association with the increase of clinical symptoms, manifested by a progressive deterioration of motor function. These microglial cells progressively shorten their ramifications leading to amoeboid morphologies. Microglia and blood-borne macrophages increased in number and accumulated around blood vessels. In addition, a large number of infiltrated lymphocytes were also detected during the inductive and peak phases. These lymphocytes belong mostly to the T-helper phenotype (pro-inflammatory Th1 cells), although T-cytotoxic and γδ T-cells were also observed. Activated microglial cells displayed an immature dendritic cell phenotype characterized by expression of CD1 and major histocompatibility complexes class I and class II (MHC-class I and MHC-class II) without concomitant expression of B7.1 or B7.2 co-stimulatory molecules. In addition, these activated microglia expressed CD1, a marker of immature dendritic cells. In this context, the signal that these immature dendritic cell-like microglial cells induced to infiltrated lymphocytes may provoke lymphocyte apoptosis or anergy. During the recovery phase, animals experienced a gradual improvement in symptomatology, although microglial cells in this phase still showed a morphology, distribution and phenotype characteristics of reactive cells. In general, these microglial cells displayed the same immature dendritic cell phenotype (CD1+, MHC-I+, MHC-II+, B7.1- and B7.2-) observed during earlier phases. Noticeably, microglial cells located around blood vessels express B7.2. The total number of T-helper, T-cytotoxic and γδ T-cells remained very high with values close to those observed during the inductive and peak phases. Interestingly, we do not find Th1 lymphocytes during the recovery phase, and the population of T-helper cells mainly consists of Th17 and T-regs subtypes. Lymphocytes accumulated in the vicinity of blood vessels expressed CTLA-4, one of the B7.2 co¬receptors. In this new context, the interaction between B7.2+ microglial cells and CTLA-4+ lymphocytes could be responsible for the immune response resolution and the induction of subsequent tolerance. Altogether, these results show that microglia play a key role in the evolution of the acquired immune response, modulating the activation and inactivation of the different lymphocyte populations involved in both the induction of the immune/inflammatory process and its subsequent resolution. This work was supported by: UAB Pre-doctoral fellow (UAB2004-11), Fundación La Maratón de TV3, Fundación Alicia Koplowitz, Fundación Uriach y Ministerio Español de Ciencia e Innovación (BFU2005-02783, BFU2008-04407).

Objetivo: Valorar si la elevación del Índice Neutrófilo - Linfocito (INL) se asocia a un mayor riesgo de aborto espontáneo en pacientes gestantes con y sin amenaza de aborto. Diseño: Se desarrollará una revisión sistemática y meta-análisis. Se utilizará la declaración Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA) como guía metodológica de publicación de la investigación. Asimismo, se considerarán las recomendaciones estipuladas en el Manual de Cochrane para la descripción de la metodología del estudio (34). Sumado a esto, se enviará el trabajo al Registro internacional prospectivo de revisiones sistemáticas (PROSPERO) con el fin de notificar el inicio de nuestra revisión sistemátic

La diabetes de tipo 1 (T1D) es una enfermedad compleja caracterizada por la desaparición selectiva de las células beta pancreáticas, responsables de la producción de insulina, debido a un proceso autodestructivo mediado por el propio sistema inmunitario. La cepa murina NOD es el modelo animal más ampliamente utilizado en el estudio de la T1D, ya que estos animales desarrollan, de forma espontánea, una forma de diabetes autoinmunitaria similar a la que se observa en humanos. Aunque se conoce que los linfocitos T son las células responsables de la destrucción directa de la masa celular beta, otros tipos celulares del sistema inmunitario también están implicados en el origen y desarrollo de esta respuesta autoinmunitaria. Entre ellos se encuentran los linfocitos B, los cuales también migran, junto con los linfocitos T, a los islotes pancreáticos durante el desarrollo de la diabetes. Nuestra hipótesis es que la población de linfocitos B que forma parte del infiltrado leucocitario en los islotes pancreáticos puede presentar cualidades funcionales distintivas, que aporten la capacidad de regular in situ la actividad de los linfocitos T autorreactivos. El primer objetivo planteado en este estudio ha sido la caracterización fenotípica y funcional de los linfocitos B infiltrantes en islotes pancreáticos, en diferentes modelos murinos de susceptibilidad/resistencia a la diabetes. Así, se ha observado que la migración de los linfocitos B al entorno intrainsular es más destacada en hembras, especialmente en la etapa pre-diabética. Esta población de linfocitos B infiltrantes muestra un fenotipo correspondiente a células maduras, pero la disminución significativa en superfície de la molécula CD19, que forma parte del complejo correceptor del BCR, sugiere un estado funcional reprimido. Los resultados obtenidos tras la estimulación in vitro de estas células indican que dentro del ambiente del infiltrado existen unas condiciones que mantienen este fenotipo reprimido, pero que estas células son especialmente sensibles a la estimulación vía CD40. Estos datos sugieren que estos linfocitos, aunque no presentan cambio de isotipo en su BCR y por tanto no provienen de una reacción de centro germinal, parecen haber estado en contacto previamente con su antígeno. No obstante, a nivel de producción de citoquinas (IL-4, IL-10, IFN?) y de capacidad estimuladora de la proliferación de linfocitos T, no see han detectado diferencias funcionales de estos linfocitos B infiltrantes de islotes, respecto a linfocitos B de poblaciones periféricas. El segundo objerivo de este estudio ha consistido en la identificación del antígeno reconocido predominantemente por esta población de linfocitos B infiltrantes. En un estudio previo, realizado por nuestro grupo, se habían generado hibridomas productores de anticuerpos, a partir de linfocitos B infiltrantes de islotes, y se había demostrado que la mayoría de estos anticuerpos monoclonales reconocían antígenos expresados en las fibras nerviosas que inervan el páncreas. En este estudio, a partir del aislamiento y posterior identificación molecular del antígeno reconocido por 21 anticuerpos monoclonales con el mismo patrón de reconocimiento pero de diferente origen clonal, se ha demostrado que la periferina es la proteína reconocida por todos ellos. Este antígeno neuroendocrino es una proteína de citoesqueleto que se expresa mayoritariamente en las fibras nerviosas periféricas, aunque también, en niveles menores, en las células del islote pancreático. Estos datos apoyan la hipótesis de que el ataque autoinmunirario que se desarrolla en los afectados por T1D, no es exclusivamente dirigido contra las células beta pancreáticas, y que la desestabilización del sistema nervioso pancreático puede ser un factor implicado en el desarrollo de la enfermedad. / Type 1 diabetes (T1D) is a complex autoimmune disease characterized by selective destruction of pancreatic beta cells by the patient's own immune system.Currently, one of the best animal models of type 1 diabetes is the nonobese diabetic (NOD) mouse. NOD mice spontaneously develop a form of diabetes that closely resembles human type 1 diabetes.Islet-infiltrating T-cells are major effectors of beta-cell damage in T1D, however, other cellular elements of the immune system also play a critical role in the initiation and/or progression of T1D. Among these, B-cells are also recruited to pancreatic islets, during disease development. We hypothesize that islet-infiltrating B-cells may have distinctive functional traits, enabling them to regulate autoreactive T-cell activity in situ. The aim of the present study was the phenotypical and functional characterization of islet-infiltrating B cells, in T1D susceptible/resistant T1D murine models. Thus, it was observed that B-cell recruitment into pancreatic islets is higher in female mice, specially just before diabetes onset. Although they are mature B-cells, they interestingly show an abnormal down-regulation of surface CD19 expression, showing a possible hiporesponsive status of these cells, given the relevance of CD19 in regulating BCR activation. Islet-infiltrating B-cells develop a pronounced costimulator phenotype after in vitro stimulation with anti-CD40, thus revealing to be somehow repressed while in the islets. These results suggest that these B-cells, although not presenting immunoglobin class switch recombination, seem to be antigen-experienced. On the other hand, cytokine expression profile (IL-4, IFN?, IL-10) and T-cell activator quality of islet-infiltrating B-cells have been shown to be similar to that from their splenic counterparts.On the other hand, the second objective of this study was the identification of the autoantigen predominantly targeted by islet-infiltrating B-cells. In a previous study in our laboratory, antibody-producing hybridomas were generated from islet-infiltrating C-cells, and it was shown that most of them targeted peripheral nervous elements. In the present study, the isolation and subsequent molecular characterization of the antigen recognized by 21 of these monoclonal antibodies, proved that peripherin is the protein targeted by them all. This neuroendocrine autoantigen is a cytoskeleton protein mainly expressed by peripheral nervous cells, but it is also expressed, although at lower levels, by islet beta-cells. These data support the hypothesis that T1D autoimmune attack is not exclusively focused on pancreatic beta-cells, and that pancreatic nervous system damage may be involved in disease development.

NFAT5 is the main regulator of an osmoprotective gene program that is switched on by osmotic stress. Hypertonicity causes a harmful increase in the intracellular concentration of inorganic ions and NFAT5-regulated genes allow the accumulation of organic osmolytes and chaperones in order to protect the cells. However, little is known about the physiopathologic tonicity thresholds that trigger NFAT5 transcriptional activity, and which signaling pathways are involved, in primary cells. We have studied the regulation of NFAT5 transcriptional activity in several types of primary cells obtained from transgenic mice carrying the 9xNFAT-Luc reporter developed by the Molkentin laboratory. Our results indicate that NFAT5 is able to respond to pathological tonicity levels in primary cells and it requires a combination of signaling mediators, some of which are more relevant in specific cell types.