Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-07T19:08:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T19:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycobacterium bovis e Brucella abortus são os agentes etiológicos da tuberculose e da brucelose bovinas, doenças infectocontagiosas de ocorrência mundial que geram grandes prejuízos econômicos e podem ser transmitidas aos humanos principalmente através do contato direto com animais contaminados e da ingestão de leite cru e derivados. No Brasil existe o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose, criado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, que estabelece a realização do diagnóstico e normatiza as medidas de controle dessas zoonoses. Os métodos oficiais para diagnóstico de brucelose e tuberculose no animal vivo possuem sensibilidade e especificidade variáveis, são laboriosos e demandam tempo. Para aumentar a eficácia do controle destas doenças são necessários métodos rápidos e acurados, que atuem como ferramenta auxiliar no diagnóstico in vivo dessas enfermidades sem a necessidade de procedimentos invasivos. Para garantir a credibilidade e confiabilidade de novos métodos de diagnóstico é necessário que os mesmos sejam validados. No presente estudo foram realizados ensaios para a validação de uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção do DNA de M. bovis e B. abortus em amostras de leite cru artificialmente contaminados, usando como critério o desempenho analítico (sensibilidade e especificidade analítica), repetibilidade, reprodutibilidade interna e robustez. Inicialmente cinco metodologias de extração de DNA foram testadas e as que apresentaram melhores resultados foram os kits comerciais DNeasy mericon Food Kit – Qiagen e Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega. Os limites de detecção obtidos na qPCR validada nesse estudo foram de 2,3 pg de DNA de M. bovis e 20,7 fg de DNA de B. abortus. As repetibilidades eviii reprodutibilidades aliadas à robustez apresentadas nesse trabalho indicam que os métodos avaliados podem ser utilizados de forma auxiliar ao diagnóstico in vivo oficial de tuberculose e brucelose bovinas, após ser testada em animais naturalmente infectados. / Mycobacterium bovis and Brucella abortus are the etiological agents of bovine tuberculosis and brucellosis, infectious diseases globally disseminated that cause substantial economic losses and can be transmitted to humans mainly through direct contact with contaminated animals and the intake of raw milk and milk products. In Brazil there is the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis, created by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, which establishes the diagnosis and regulates the control measures of these zoonosis. The official methods for diagnosis of brucellosis and tuberculosis in the living animal have variable sensitivity and specificity, are laborious and time consuming. In order to increase the efficacy of brucellosis and tuberculosis control, rapid and accurate methods are necessary to act as an auxiliary tool in the in vivo diagnosis of these diseases without the need of invasive procedures. To ensure the credibility and reliability of new diagnostic methods, they must be validated. In the present study, the validation of a real-time polymerase chain reaction (qPCR) for the detection of M. bovis and B. abortus in artificially contaminated raw milk samples was performed using analytical performance (analytical sensitivity and specificity), repeatability, internal reproducibility and robustness. Initially five DNA extraction methodologies were tested and the ones that presented the best results were the commercial kits “DNeasy Mericon Food Kit – Qiagen” and “Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega”. The limits of detection obtained in the qPCR validated in this study were 2.3 pg of M. bovis DNA and 20.7 fg of B. abortus DNA. The repeatability and reproducibility associated with the robustness presented in this study indicate that the evaluated methods can be used as an auxiliaryx tool to the in vivo official diagnosis of bovine tuberculosis and brucellosis, after being tested in naturally infected animals. / Nos dois impressos faltaram as últimas 12 páginas com referência bibliográfica.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2399.pdf: 947714 bytes, checksum: fc932998b7976eb7a836733e98ae6f38 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Universidade Federal de Minas Gerais / This work studies were aimed at samples preparation and chemical speciation levels zinc in samples of different kind of milk (milk cattle, sheep, goat, and soybean milk base). The proposal aimed to establish the differences in the zinc levels in protein samples, trying to observe the distribution and zinc bioavailability due to treatments such as pasteurization. The samples were digested in a cavity microwave oven and the total Zn, Ca and P levels in extracts were determined by inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES). An additional study was conducted for protein samples separation in different kinds of milk using the urea polyacrylamide gel electrophoresis (UREA-PAGE) methodology and posterior determination of Zn bound to protein bands. Therefore the protein bands were digested in the cavity microwave oven and the Zn levels were determined by graphite furnace atomic absorption spectrometry (GFAAS). The results displayed that Zn is mainly bound to 32 kDa (β-casein) protein in UHT whole milk and to the 24 kDa (α-casein) protein in raw sheep milk. There were not major differences between the Zn-proteins binding at the pasteurization process. After optimization experimental conditions, in vitro simulated gastric digestion was applied to Zn, Ca and P bioaccessibility in the studied samples. The results confirmed the adopted methodology efficiency. Furthermore, the pasteurization process did not affect the total proteins concentration of bovine milk. / Neste trabalho foram feitos estudos voltados ao preparo de amostras e à especiação química dos teores de zinco presentes em amostras de diferentes tipos de leite (bovinos, ovelha, cabra e origem vegetal (soja). A proposta visou estabelecer as diferentes proporções dos teores de zinco existentes em proteínas das amostras procurando-se observar a biodisponibilidade e a distribuição do Zn em função de tratamentos como a pasteurização. As amostras foram digeridas em forno de radiação microondas com cavidade e os teores totais de Zn, Ca e P presentes nos extratos foram determinados por espectrometria de emissão óptica com plasma acoplado indutivamente (ICP OES). Paralelamente, foi feito um estudo de separação de proteínas das amostras dos diferentes tipos de leite empregando eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de uréia (UREA-PAGE) e posterior determinação do Zn ligado às bandas protéicas. Para isso, as mesmas amostras (bandas protéicas) foram digeridas em forno de radiação microondas com cavidade e os teores de Zn foram determinados por espectrometria de absorção atômica com atomização eletrotérmica em forno de grafite (GFAAS). Os resultados apresentados indicam que o Zn está ligado principalmente à proteína de 32 kDa (β-caseína) nos leites bovino integral UHT e in natura e na proteína de 24 kDa (α-caseína) no leite de ovelha in natura. Não houve grandes diferenças entre a ligação de Zn-proteínas, considerando o processo de pasteurização. Após otimização das condições experimentais, digestão gástrica simulada in vitro foi aplicada para verificação da bioacessibilidade do Zn, Ca e P nas amostras estudadas. Os resultados confirmaram a eficiência do procedimento empregado. O processo de pasteurização do leite bovino não afetou a concentração total das proteínas.

A radiação solar ultravioleta (RUV) pode induzir efeitos à pele devidos a sua ação direta ou indireta, por meio da geração de radicais livres. Esses efeitos podem provocar diversas lesões na pele humana como o câncer de pele. No Brasil, segundo o Instituto Nacional do Câncer (INCA, 2012), este tipo de câncer corresponde a 25% de todos os tumores diagnosticados. Como medida profilática de proteção da pele contra os efeitos da radiação solar pode-se citar o uso de protetores solares, produtos tópicos adicionados de filtros solares UV sintéticos com propriedades de absorção e reflexão dos raios solares, e como medida preventiva é recomendado o uso de fotoquimioprotetores, produtos tópicos ou de administração oral incorporados de extratos vegetais ou substancias naturais isoladas com atividades antioxidante e/ou sequestradora de radicais livres e atividade anti-inflamatória. Os protetores solares são considerados produtos OTC, em alguns países, e por isso devem ter sua eficácia comprovada por métodos in vitro ou in vivo padronizados. Assim, o presente trabalho teve como objetivo investigar o potencial fotoprotetor e/ou fotoquimioprotetor do extrato etanólico do epicarpo de Garcinia brasiliensis usando métodos in vitro e in vivo, respectivamente. O extrato foi caracterizado quimicamente por medida dos teores de flavonoides, polifenois e lipídios e funcionalmente pela determinação da atividade antioxidante e/ou sequestradora de radicais livres por diferentes métodos in vitro. A citotoxidade e fotoestabilidade do extrato, como também, o potencial fotoprotetor do extrato e das formulações adicionadas deste em diferentes concentrações foram avaliados in vitro por medida da viabilidade celular de cultura de células de fibroblastos (L929). A eficácia fotoprotetora e/ou fotoquimioprotetora da formulação adicionada do extrato foi testada in vivo por medida das quantidades de GSH endógeno e das interleucinas IL-1? e TNF-?, como também, pela medida da atividade da mieloperoxidase, usando os camundongos hairless, como modelo animal. Os teores de flavonoides e polifenois de 3,4 mg EQ/g e 69,84 mg EAG/g, respectivamente, foram menores àqueles de outros extratos vegetais. Os menores teores de flavonoides e polifenois refletiram na menor atividade antioxidante desse extrato que apresentou valores de IC50 de 47,47 ?g/mL e 425,06 ?g/mL para atividade antioxidante determinada pelos métodos de DPPHo e peroxidação lipídica, respectivamente. O teor de lipídio encontrado foi de 45%, isto sugere que esse extrato deve ser armazenado em condições controladas para minimizar a sua instabilidade por meio da oxidação dos lipídios por reações oxidativas. Os estudos de citotoxidade mostraram que o extrato na concentração de 25 ?g/mL diminuiu em 40% a viabilidade das células L929. A citotoxidade do extrato foi maior quando exposto à radiação UVA que à UVB, sugerindo que este extrato pode ser mais fotoinstável à radiação UVA. Nos testes de fotoproteção empregando culturas de células, o extrato na concentração de 100 mg/mL e formulação adicionada de 20% de extrato aumentaram a viabilidade das células L929 expostas à radiação UVB na mesma proporção àquela do protetor solar comercial com FPS 15. Nos testes in vivo, a formulação adicionada de 20% de extrato mostrou eficácia fotoprotetora, protegeu o GSH da depleção, não permitiu o aumento da atividade da mieloperoxidase e das quantidades das citocinas, IL-1? e TNF- ?, na pele exposta à radiação UVB. / The solar ultraviolet radiation (UVR) can induce harmfull effects to the skin by direct action or through the generation of free radicals. These effects can cause various skin lesions such as skin cancer. According to the National Institute of Cancer (INCA, 2012) this type of cancer accounts for 25% of all tumors diagnosed in Brazil. In order to protect the skin against the effects of solar radiation it is recommended the use of sunscreens and topical products added to synthetic sunscreens with properties of absorption and reflection of solar rays. Moreover it is increasing the interest in the use of photochemoprotectors including topical or oral products incorporated with plant extracts or natural substances isolated with antioxidant and/or free radical scavenging and anti-inflammatory activity. Sunscreens are considered OTC products, in some countries, and therefore must have proven effective for in vitro or in vivo standardized. Thus, the present study aimed to investigate the photochemical/photoprotective potential of the ethanolic extract of the Garcinia brasiliensis epicarp using in vitro and in vivo methods, respectively. The extract was chemically characterized by measuring the levels of flavonoids, polyphenols and lipids and functionally by determining the antioxidant activity and/or free radical scavenging using different methods in vitro. The cytotoxicity and photostability of the extract and the photoprotective potential of the extract and formulations added extract with different concentrations of the extract were assessed in vitro by measurement of cell viability using cell culture of fibroblasts (L929). The photochemical/protoprotective effect of the formulation added with the extract was tested in vivo by measuring the amounts of endogenous GSH and interleukins IL-1? and TNF-?, besides by measuring myeloperoxidase activity using hairless mice as an animal model. The determined levels of flavonoids and polyphenols of 3.4 mg EQ/g and 69.84 mg GAE/g, respectively, were considered lower than those observed in other plant extracts. The lower levels of flavonoids and polyphenols reflected in lower antioxidant potential of the extract which showed IC50 values of 47.47 and 425.06 mg/mL for antioxidant activity determined by DPPHo and lipid peroxidation methods, respectively. The lipid content was found to be 45%, which suggests that this extract must be stored under controlled conditions to minimize their instability by oxidation of the lipids by oxidative reactions. Cytotoxicity studies showed that the extract at a concentration of 25 mg/mL decreased in 40% the viability of L929 cells. The cytotoxicity of the extract was higher when exposed to UVA than to UVB, suggesting that this extract might be more photoinstable to UVA radiation. In photoprotection tests employing cell culture the extract (100 mg/mL) and the formulation added with 20% of the extract increased the viability of L929 cells exposed to UVB radiation at the same rate to that observed when it was used a commercial sunscreen with an SPF of 15. In vivo results showed that the formulation added with 20% of the extract showed a photoprotective effect when observed the reduction of GSH depletion in treated mice as such as the reduction of myeloperoxidase activity and amounts of cytokines IL-1? and TNF-? in treated skin exposed to radiation UVB in comparison to the non-treated irradiated control.

O cultivo do camarão-rosa Farfantepenaeus paulensis pode ser viabilizado com alimentos de boa digestibilidade proteica, por melhorar o rendimento e reduzir a liberação de resíduos no meio ambiente. Um método in vitro que utiliza o titulador pHstat e enzimas digestivas da espécie estudada para avaliar a digestibilidade proteica, obteve resultados comparáveis aos alcançados pelo cultivo de salmonídeos e camarões (Litopenaeus vannamei). No presente trabalho de suporte nutricional ao camarão autóctone F. paulensis, analisou-se a performance de cultivo dessa espécie em relação a três rações comerciais, verificou-se a previsibilidade do método in vitro de digestibilidade proteica e complementou-se os conhecimentos metodólogicos dessa técnica. Nos resultados, a performance de cultivo diferiu conforme a ração empregada e houve correlação (R2=0,55) entre os dados in vivo e in vitro de digestibilidade proteica para duas rações, sendo uma terceira ração excluída da análise devido às suas propriedades físicas, que possivelmente afetaram apenas a digestibilidade proteica in vivo. Os resultados obtidos com as enzimas empregadas no método in vitro diferiram pouco conforme a ontogênese, fonte alimentar e estado nutricional dos camarões. Os presentes resultados indicam que o método in vitro ainda não substitui o cultivo experimental, mas pode auxiliar na busca por alimentos adequados. / Culture of pink shrimp Farfantepenaeus paulensis can be achieved by digestible feeds that may result in higher yields and reduced residual nutrient release into the environment. An in vitro method to assess protein digestibility in a pH-stat reaction involving enzyme extracts of the target species was previously found to preview in vivo apparent protein digestibility in salmonids and shrimp Litopenaeus vannamei. The present survey explored culture performance of F. paulensis fed three commercial shrimp feeds and checked the potential of the pH-stat method to preview apparent protein digestibility. Moreover, the suitability of using hepatopancreas enzyme extracts was assessed in terms of shrimp ontogenesis, nutritional status (fed/unfed) and diet history. Culture performance differed among feeds and a correlation (R2=0.55) was found between in vivo and in vitro protein digestibility in two of the tested feeds. The remaining feed was excluded from analysis due to technical constraints that possibly affected apparent in vivo protein digestibility and culture performance. Shrimp hepatopancreas enzyme extracts employed for in vitro assays were not affected by ontogenesis, nutritional status and diet history. Though the in vitro method still cannot replace experimental rearing trials it can further assist in the search for adequate feedstuffs for shrimp rearing.

A radiação solar ultravioleta (RUV) pode induzir efeitos à pele devidos a sua ação direta ou indireta, por meio da geração de radicais livres. Esses efeitos podem provocar diversas lesões na pele humana como o câncer de pele. No Brasil, segundo o Instituto Nacional do Câncer (INCA, 2012), este tipo de câncer corresponde a 25% de todos os tumores diagnosticados. Como medida profilática de proteção da pele contra os efeitos da radiação solar pode-se citar o uso de protetores solares, produtos tópicos adicionados de filtros solares UV sintéticos com propriedades de absorção e reflexão dos raios solares, e como medida preventiva é recomendado o uso de fotoquimioprotetores, produtos tópicos ou de administração oral incorporados de extratos vegetais ou substancias naturais isoladas com atividades antioxidante e/ou sequestradora de radicais livres e atividade anti-inflamatória. Os protetores solares são considerados produtos OTC, em alguns países, e por isso devem ter sua eficácia comprovada por métodos in vitro ou in vivo padronizados. Assim, o presente trabalho teve como objetivo investigar o potencial fotoprotetor e/ou fotoquimioprotetor do extrato etanólico do epicarpo de Garcinia brasiliensis usando métodos in vitro e in vivo, respectivamente. O extrato foi caracterizado quimicamente por medida dos teores de flavonoides, polifenois e lipídios e funcionalmente pela determinação da atividade antioxidante e/ou sequestradora de radicais livres por diferentes métodos in vitro. A citotoxidade e fotoestabilidade do extrato, como também, o potencial fotoprotetor do extrato e das formulações adicionadas deste em diferentes concentrações foram avaliados in vitro por medida da viabilidade celular de cultura de células de fibroblastos (L929). A eficácia fotoprotetora e/ou fotoquimioprotetora da formulação adicionada do extrato foi testada in vivo por medida das quantidades de GSH endógeno e das interleucinas IL-1? e TNF-?, como também, pela medida da atividade da mieloperoxidase, usando os camundongos hairless, como modelo animal. Os teores de flavonoides e polifenois de 3,4 mg EQ/g e 69,84 mg EAG/g, respectivamente, foram menores àqueles de outros extratos vegetais. Os menores teores de flavonoides e polifenois refletiram na menor atividade antioxidante desse extrato que apresentou valores de IC50 de 47,47 ?g/mL e 425,06 ?g/mL para atividade antioxidante determinada pelos métodos de DPPHo e peroxidação lipídica, respectivamente. O teor de lipídio encontrado foi de 45%, isto sugere que esse extrato deve ser armazenado em condições controladas para minimizar a sua instabilidade por meio da oxidação dos lipídios por reações oxidativas. Os estudos de citotoxidade mostraram que o extrato na concentração de 25 ?g/mL diminuiu em 40% a viabilidade das células L929. A citotoxidade do extrato foi maior quando exposto à radiação UVA que à UVB, sugerindo que este extrato pode ser mais fotoinstável à radiação UVA. Nos testes de fotoproteção empregando culturas de células, o extrato na concentração de 100 mg/mL e formulação adicionada de 20% de extrato aumentaram a viabilidade das células L929 expostas à radiação UVB na mesma proporção àquela do protetor solar comercial com FPS 15. Nos testes in vivo, a formulação adicionada de 20% de extrato mostrou eficácia fotoprotetora, protegeu o GSH da depleção, não permitiu o aumento da atividade da mieloperoxidase e das quantidades das citocinas, IL-1? e TNF- ?, na pele exposta à radiação UVB. / The solar ultraviolet radiation (UVR) can induce harmfull effects to the skin by direct action or through the generation of free radicals. These effects can cause various skin lesions such as skin cancer. According to the National Institute of Cancer (INCA, 2012) this type of cancer accounts for 25% of all tumors diagnosed in Brazil. In order to protect the skin against the effects of solar radiation it is recommended the use of sunscreens and topical products added to synthetic sunscreens with properties of absorption and reflection of solar rays. Moreover it is increasing the interest in the use of photochemoprotectors including topical or oral products incorporated with plant extracts or natural substances isolated with antioxidant and/or free radical scavenging and anti-inflammatory activity. Sunscreens are considered OTC products, in some countries, and therefore must have proven effective for in vitro or in vivo standardized. Thus, the present study aimed to investigate the photochemical/photoprotective potential of the ethanolic extract of the Garcinia brasiliensis epicarp using in vitro and in vivo methods, respectively. The extract was chemically characterized by measuring the levels of flavonoids, polyphenols and lipids and functionally by determining the antioxidant activity and/or free radical scavenging using different methods in vitro. The cytotoxicity and photostability of the extract and the photoprotective potential of the extract and formulations added extract with different concentrations of the extract were assessed in vitro by measurement of cell viability using cell culture of fibroblasts (L929). The photochemical/protoprotective effect of the formulation added with the extract was tested in vivo by measuring the amounts of endogenous GSH and interleukins IL-1? and TNF-?, besides by measuring myeloperoxidase activity using hairless mice as an animal model. The determined levels of flavonoids and polyphenols of 3.4 mg EQ/g and 69.84 mg GAE/g, respectively, were considered lower than those observed in other plant extracts. The lower levels of flavonoids and polyphenols reflected in lower antioxidant potential of the extract which showed IC50 values of 47.47 and 425.06 mg/mL for antioxidant activity determined by DPPHo and lipid peroxidation methods, respectively. The lipid content was found to be 45%, which suggests that this extract must be stored under controlled conditions to minimize their instability by oxidation of the lipids by oxidative reactions. Cytotoxicity studies showed that the extract at a concentration of 25 mg/mL decreased in 40% the viability of L929 cells. The cytotoxicity of the extract was higher when exposed to UVA than to UVB, suggesting that this extract might be more photoinstable to UVA radiation. In photoprotection tests employing cell culture the extract (100 mg/mL) and the formulation added with 20% of the extract increased the viability of L929 cells exposed to UVB radiation at the same rate to that observed when it was used a commercial sunscreen with an SPF of 15. In vivo results showed that the formulation added with 20% of the extract showed a photoprotective effect when observed the reduction of GSH depletion in treated mice as such as the reduction of myeloperoxidase activity and amounts of cytokines IL-1? and TNF-? in treated skin exposed to radiation UVB in comparison to the non-treated irradiated control.

O cultivo do camarão-rosa Farfantepenaeus paulensis pode ser viabilizado com alimentos de boa digestibilidade proteica, por melhorar o rendimento e reduzir a liberação de resíduos no meio ambiente. Um método in vitro que utiliza o titulador pHstat e enzimas digestivas da espécie estudada para avaliar a digestibilidade proteica, obteve resultados comparáveis aos alcançados pelo cultivo de salmonídeos e camarões (Litopenaeus vannamei). No presente trabalho de suporte nutricional ao camarão autóctone F. paulensis, analisou-se a performance de cultivo dessa espécie em relação a três rações comerciais, verificou-se a previsibilidade do método in vitro de digestibilidade proteica e complementou-se os conhecimentos metodólogicos dessa técnica. Nos resultados, a performance de cultivo diferiu conforme a ração empregada e houve correlação (R2=0,55) entre os dados in vivo e in vitro de digestibilidade proteica para duas rações, sendo uma terceira ração excluída da análise devido às suas propriedades físicas, que possivelmente afetaram apenas a digestibilidade proteica in vivo. Os resultados obtidos com as enzimas empregadas no método in vitro diferiram pouco conforme a ontogênese, fonte alimentar e estado nutricional dos camarões. Os presentes resultados indicam que o método in vitro ainda não substitui o cultivo experimental, mas pode auxiliar na busca por alimentos adequados. / Culture of pink shrimp Farfantepenaeus paulensis can be achieved by digestible feeds that may result in higher yields and reduced residual nutrient release into the environment. An in vitro method to assess protein digestibility in a pH-stat reaction involving enzyme extracts of the target species was previously found to preview in vivo apparent protein digestibility in salmonids and shrimp Litopenaeus vannamei. The present survey explored culture performance of F. paulensis fed three commercial shrimp feeds and checked the potential of the pH-stat method to preview apparent protein digestibility. Moreover, the suitability of using hepatopancreas enzyme extracts was assessed in terms of shrimp ontogenesis, nutritional status (fed/unfed) and diet history. Culture performance differed among feeds and a correlation (R2=0.55) was found between in vivo and in vitro protein digestibility in two of the tested feeds. The remaining feed was excluded from analysis due to technical constraints that possibly affected apparent in vivo protein digestibility and culture performance. Shrimp hepatopancreas enzyme extracts employed for in vitro assays were not affected by ontogenesis, nutritional status and diet history. Though the in vitro method still cannot replace experimental rearing trials it can further assist in the search for adequate feedstuffs for shrimp rearing.