O desenvolvimento de imunidade naturalmente adquirida na malária é lento e depende de fatores como o número de malárias prévias, intervalo entre cada malária, exposição a variantes antigênicas múltiplas e idade do indivíduo. Mecanismos imunes efetores dependentes de anticorpos são importantes no desenvolvimento dessa imunidade. Vários estudos têm mostrado que as subclasses IgG1 e IgG3 anti-P. falciparum, conhecidas por sua ação citofílica, são anticorpos protetores, enquanto anticorpos não citofílicos como IgG4 reconhecendo os mesmos epítopos seriam bloqueadores dos mecanismos protetores. Dados recentes sugerem que sob determinadas condições, IgG2 também pode ter ação citoíflica e participar da proteção na malária. Neste trabalho, nós estudamos pela primeira vez, a evolução das subclasses de IgG contra formas eritrocitárias de P. falciparum de pacientes com malária falciparum não complicada internados em hospital por até 42 dias, sob tratamento com mefloquina. As subclasses de IgG foram avaliadas por ELISA em 48 pacientes (7 amostras de soro de cada um colhidas nos tempos 0h, 48h, 7, 14, 28, 35 e 42 dias), quanto à quantidade (concentração, ug/ml; índices de reatividade, IR; ou em freqüência, %) e quanto à avidez dos anticorpos (índice de avidez, IA). Amostras de soro de 14 pacientes (tempos: 0, 48h, 7, 21 e 28 dias) também foram avaliadas quanto à especificidade e a avidez de reconhecimento das diferentes bandas protéicas do antígeno de P. falciparum por Immunoblotting. As subclasses IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 anti-P. falciparum, na maioria de alta avidez, estavam presentes no início do tratamento, respectivamente, em 100%, 39,5%, 80,6% e 28,4% dos pacientes e com concentrações médias de 20, 2; 3,8; 1,5 e 0,05 ?g/mL. As concentrações máximas das subclasses de IgG foram alcançadas no 7o dia, e os IAs máximos de IgG1 e IgG3 foram alcançados no 7o dia, e os de IgG2 no 14o dia e os de IgG4 no 2o dia. A concentração inicial dos anticorpos IgG3 anti-P. falciparum apresentou correlação negativa com o tempo de clareamento parasitário (TCP) e a relação das somas dos anticorpos IgG1, IgG2 e IgG3 pelos níveis de IgG4 se correlacionaram negativamente com a parasitemia inicial. No Immunoblotting, foram identificadas frações protéicas que podem estar relacionadas com o reconhecimento imune protetor, por serem reconhecidas pelas subclasses IgG1, IgG2 e IgG3 e não reconhecidas ou reconhecidas tardiamente por IgG4: 125, 96, 86, 75, 55 e 47 kDa. A resposta predominante das subclasses IgG1, IgG2 e IgG3 observada nestes pacientes, todos com malária não complicada, pode indicar que esses anticorpos estão cooperando para o controle de formas graves da doença e refletirem um certo grau de desenvolvimento de imunidade adquirida / The development of naturally acquired immunity to malaria is slow and depends of several factors as number of previous malaria, interval between each malaria attack, exposure to parasite multiple antigen variant and ageassociated maturation of the immune system. Antibody-dependent effector immune mechanisms are believed to be important to the protective immunity. A number of studies have showed that anti-P. falciparum IgG1 and IG3, named cytophilic antibodies, are protective, whereas the noncytophilic, IgG4, that recognize the same epitopes may block the protective mechanisms. Recent data have suggested that in certain situations, IgG2 can also act as cytophilic and to cooperate in protection. In this work, we have studied, for the first time, the evolution of the IgG subclasses against P. falciparum blood stages in uncomplicated falciparum malaria patients taken into hospital upon mefloquine treatment and followed up 42 days. These antibodies were determined by ELISA in 48 patients (7 serum samples from each patient collected in different times: 0h, 48h, 7, 14, 28, 35 and 42 days). The results were expressed in concentration (ug/ml), index of reactivity (IR) or frequency (%) and the avidity were expressed as index of avidity (IA). Serum samples 14 patients (time of collection: 0, 48h, 7, 21 and 42 days) were also evaluated by Immunoblotting as their specificity and avidity against different proteins of the P. falciparum blood stages The subclasses Anti-P. falciparum IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4, high avidity predominantly, were present since the beginning of the treatment, respectively, in 100%, 39,5%, 80,6% and 28,4% of the patients with the following concentrations: 20, 2; 3,8; 1,5 and 0,05 ?g/mL. The highest concentrations were reached at day 7, and IgG1 and the highest IgG3 IAs were reached at day 7, and the highest IgG2 IAs at day 14 and the highest IgG4 IAs at day 2. The initial concentration of anti-P. falciparum IgG3 showed a negative correlation with the parasitemia clearance time (PCT) and the ratio between the sum of IgG1, IgG2 and IgG3 levels to IgG4 levels was negatively correlated with the initial parasitemia. Six protein fractions were identified by the Immunoblotting that can be related to protective immune recognition, because they were recognized by IgG1, IgG2 and IgG3 antibodies and not or only later recognized by IgG4 antibodies: 125, 96, 86, 75, 55 and 47 kDa. The predominant IgG1, IgG2 and IgG3 responses observed in these uncomplicated malaria patients may suggest that these antibodies are cooperating to the control of severe disease and reflecting a certain development of protective immunity

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T19:23:03Z No. of bitstreams: 1 SARAH_RESENDE_MBCM_Final.pdf: 6553798 bytes, checksum: cb7ea34b3f0a947f3d81c20d5448938f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T19:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SARAH_RESENDE_MBCM_Final.pdf: 6553798 bytes, checksum: cb7ea34b3f0a947f3d81c20d5448938f (MD5) Previous issue date: 2013 / Cepas de Plasmodiumresistentes a diferentes drogas têm sido descritasao redor do mundo. Embora os mecanismos de desenvolvimento de resistência não sejam bem conhecidos, sabe-se que defeitos nos sistemas de reparo do DNA podem estar envolvidos. Esses defeitos estão relacionados principalmente a mutações nas enzimas do sistema de reparo de mal pareamento do DNA ou mismatch repair (MMR) e já foram descritos em populações naturais de diversos organismos. Devido ao conhecimento limitado sobre o sistema MMR de Plasmodium, faz-se necessário um amplo estudo sobre os genes que codificam as proteínas envolvidas nesse sistema. Neste trabalho, foi realizado um estudo sobre as enzimas envolvidas no sistema de reparo do mal pareamento do DNA em Plasmodium: variabilidade intra e interespecífica em Plasmodium, principalmente nos domínios funcionais, e comparação entre níveis de expressão entre cepas/isolados de P. falciparum.Os parasitos foram também avaliados quanto ao número de cópias e expressão dos genes gch-1emdr1. Foram identificadas proteínas pertencentes às classes MSH2, MSH6, MLH1 e PMS1. As sequências de proteínas mostraram-se muito conservadas, tanto entre o gênero Plasmodium, quanto em relação a outros organismos distantes evolutivamente. Foi encontradaum proteína homóloga a MutS que possui os domínios I e V, mas ainda não identificada quanto à sua classificação. O gene codificador desta proteína teve sua expressão confirmada neste e em outros trabalhos. Alguns SNPs foram encontrados em cepas/isolados depositados no PlasmoDB, no entanto, o sequenciamento da região que compreende os principais domínios funcionais apontou apenas 1 SNP na proteína PMS1. Os genes estudados, em sua maioria, apresentaram-se mais expressos entre 10 e 30 horas após a sincronização. W2 e 3D7 apresentam 2 cópias do genes gch-1e mdr1. BHZ apresentou apenas 1 cópia do mdr1. Os resultados da análise de expressão desses genes ligados à resistência concordam com os resultados encontrados para o número de cópias gênicas. Este estudo fornece uma análise ampla das principais enzimas do MMR e será importante para estudos futuros do papel funcional destas enzimas e seu envolvimento no desenvolvimento de resistência às drogas. / Drug-resistant Plasmodiumstrains have been reported world wide. The mechanisms underlying resistance development are not well understood, but failure in DNA repair could be involved in this process. This failure is mainly related to mutations in the enzymes of the DNA mismatch repair (MMR). Because of the limited knowledge about the PlasmodiumMMR system, it is necessary a comprehensive study about the genes encoding proteins involved in this system. In this work, we studied the enzymes involved in the PlasmodiumMMR, considering the intraspecific and interspecific variability in Plasmodium, especially within the functional domains and comparing the expression levels between strains/isolates of P. falciparum.Parasites were also assessed for copy number and expression of the genes pfgch-1and pfmdr1. We identified proteins related to MSH2, MSH6, MLH1 and PMS1. The protein sequences were very conserved among the genus Plasmodium, as well in relation to other evolutionarily unrelated organisms. We found a putative protein homologous to MutS showing the domains I and V, butnot classified yet. The gene encoding this protein has its expression confirmed here and in other previous studies. SNPs were found in some strains/isolates deposited in PlasmoDB, however, the sequencing of the region comprising the main functional domains showed only one SNP in PMS1. The genes studied, mostly, were more expressed between 10 and 30 hours after synchronization. W2 and 3D7 showed 2 copies of the gene gch-1 and mdr1. In BHZ, only one copy of the mdr1 were founded. The results of expression of these genes related to the resistanceagree with the findings for the gene copy number. This study provides a comprehensive analysis of the major enzymes of the MMR and will be important to further functional studies of this enzymes and their role in drug resistance development.

O desenvolvimento de imunidade naturalmente adquirida na malária é lento e depende de fatores como o número de malárias prévias, intervalo entre cada malária, exposição a variantes antigênicas múltiplas e idade do indivíduo. Mecanismos imunes efetores dependentes de anticorpos são importantes no desenvolvimento dessa imunidade. Vários estudos têm mostrado que as subclasses IgG1 e IgG3 anti-P. falciparum, conhecidas por sua ação citofílica, são anticorpos protetores, enquanto anticorpos não citofílicos como IgG4 reconhecendo os mesmos epítopos seriam bloqueadores dos mecanismos protetores. Dados recentes sugerem que sob determinadas condições, IgG2 também pode ter ação citoíflica e participar da proteção na malária. Neste trabalho, nós estudamos pela primeira vez, a evolução das subclasses de IgG contra formas eritrocitárias de P. falciparum de pacientes com malária falciparum não complicada internados em hospital por até 42 dias, sob tratamento com mefloquina. As subclasses de IgG foram avaliadas por ELISA em 48 pacientes (7 amostras de soro de cada um colhidas nos tempos 0h, 48h, 7, 14, 28, 35 e 42 dias), quanto à quantidade (concentração, ug/ml; índices de reatividade, IR; ou em freqüência, %) e quanto à avidez dos anticorpos (índice de avidez, IA). Amostras de soro de 14 pacientes (tempos: 0, 48h, 7, 21 e 28 dias) também foram avaliadas quanto à especificidade e a avidez de reconhecimento das diferentes bandas protéicas do antígeno de P. falciparum por Immunoblotting. As subclasses IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 anti-P. falciparum, na maioria de alta avidez, estavam presentes no início do tratamento, respectivamente, em 100%, 39,5%, 80,6% e 28,4% dos pacientes e com concentrações médias de 20, 2; 3,8; 1,5 e 0,05 ?g/mL. As concentrações máximas das subclasses de IgG foram alcançadas no 7o dia, e os IAs máximos de IgG1 e IgG3 foram alcançados no 7o dia, e os de IgG2 no 14o dia e os de IgG4 no 2o dia. A concentração inicial dos anticorpos IgG3 anti-P. falciparum apresentou correlação negativa com o tempo de clareamento parasitário (TCP) e a relação das somas dos anticorpos IgG1, IgG2 e IgG3 pelos níveis de IgG4 se correlacionaram negativamente com a parasitemia inicial. No Immunoblotting, foram identificadas frações protéicas que podem estar relacionadas com o reconhecimento imune protetor, por serem reconhecidas pelas subclasses IgG1, IgG2 e IgG3 e não reconhecidas ou reconhecidas tardiamente por IgG4: 125, 96, 86, 75, 55 e 47 kDa. A resposta predominante das subclasses IgG1, IgG2 e IgG3 observada nestes pacientes, todos com malária não complicada, pode indicar que esses anticorpos estão cooperando para o controle de formas graves da doença e refletirem um certo grau de desenvolvimento de imunidade adquirida / The development of naturally acquired immunity to malaria is slow and depends of several factors as number of previous malaria, interval between each malaria attack, exposure to parasite multiple antigen variant and ageassociated maturation of the immune system. Antibody-dependent effector immune mechanisms are believed to be important to the protective immunity. A number of studies have showed that anti-P. falciparum IgG1 and IG3, named cytophilic antibodies, are protective, whereas the noncytophilic, IgG4, that recognize the same epitopes may block the protective mechanisms. Recent data have suggested that in certain situations, IgG2 can also act as cytophilic and to cooperate in protection. In this work, we have studied, for the first time, the evolution of the IgG subclasses against P. falciparum blood stages in uncomplicated falciparum malaria patients taken into hospital upon mefloquine treatment and followed up 42 days. These antibodies were determined by ELISA in 48 patients (7 serum samples from each patient collected in different times: 0h, 48h, 7, 14, 28, 35 and 42 days). The results were expressed in concentration (ug/ml), index of reactivity (IR) or frequency (%) and the avidity were expressed as index of avidity (IA). Serum samples 14 patients (time of collection: 0, 48h, 7, 21 and 42 days) were also evaluated by Immunoblotting as their specificity and avidity against different proteins of the P. falciparum blood stages The subclasses Anti-P. falciparum IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4, high avidity predominantly, were present since the beginning of the treatment, respectively, in 100%, 39,5%, 80,6% and 28,4% of the patients with the following concentrations: 20, 2; 3,8; 1,5 and 0,05 ?g/mL. The highest concentrations were reached at day 7, and IgG1 and the highest IgG3 IAs were reached at day 7, and the highest IgG2 IAs at day 14 and the highest IgG4 IAs at day 2. The initial concentration of anti-P. falciparum IgG3 showed a negative correlation with the parasitemia clearance time (PCT) and the ratio between the sum of IgG1, IgG2 and IgG3 levels to IgG4 levels was negatively correlated with the initial parasitemia. Six protein fractions were identified by the Immunoblotting that can be related to protective immune recognition, because they were recognized by IgG1, IgG2 and IgG3 antibodies and not or only later recognized by IgG4 antibodies: 125, 96, 86, 75, 55 and 47 kDa. The predominant IgG1, IgG2 and IgG3 responses observed in these uncomplicated malaria patients may suggest that these antibodies are cooperating to the control of severe disease and reflecting a certain development of protective immunity

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:09:59Z No. of bitstreams: 2 Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:10:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T18:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) Nicolli.pdf: 41800532 bytes, checksum: a9af9766127bc87ea21823b743fd530e (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A resistência de Plasmodium falciparum aos antimaláricos esquizonticidas sanguíneos disponíveis, como a atovaquona e derivados de artemisinina, e a de P. vivax à cloroquina (CQ), exige a busca por alternativas quimioterápicas, objetivo deste trabalho. Como estratégia geradora de novos protótipos antimaláricos, foram feitas modificações estruturais (i) na CQ, as quais resultaram em 10 análogos de cloroquina (AnCQ), sendo quatro complexados com platina (AnCQPt), com atividade previamente descrita na malária pelo P. berghei; (ii) na atovaquona, originando oito naftoquinonas; e (iii) no lapachol, resultando em 11 compostos naftoquinoidais. Essas classes de moléculas foram avaliadas in vitro quanto a sua citotoxicidade (MCL50) e atividade antiplasmodial (IC50) contra parasitos sensíveis (S) ou resistentes (R) à CQ. Os índices de seletividade (IS), expressos pela razão entre essas duas atividades biológicas, foram obtidos. Os AnCQ foram mais ativos contra P. falciparum CQ-R in vitro e mais ativos que os AnCQPt e mostraram IS superiores ao da CQ. Para elucidar seu modo de ação, os AnCQ foram avaliados in silico quanto à ancoragem molecular na lactatodesidrogenase de P. falciparum (PfLDH) ou humana (HssLDH). O AnCQ33 apresentou melhor conformação na PfLDH; AnCQ37 apresentou especificidade em relação à enzima humana. Os AnCQ com maiores IS (AnCQ 33 e 37) e a CQ foram ainda avaliados quanto sua capacidade de inibir a formação de -hematina, sendo tão ou menos ativos que a CQ. Avaliados quanto ao potencial de causar a morte (atividade citocida) ou impedir o crescimento (atividade citostática) de P. falciparum CQ-S e CQ-R, esses análogos demonstraram potencial citocida similar, e potencial citostático maior contra parasitos CQ-R. Os AnCQ foram ativos contra parasitos CQ-S e CQ-R na malária pelo P. berghei. Duas naftoquinonas (2 e 5) apresentaram IS superiores ao da CQ e inibiram a parasitemia pelo P. berghei em camundongos, com destaque para a naftoquinona 2. Em conclusão, os melhores candidatos à produção de um antimalárico esquizonticida sanguíneo foram AnCQ33 e 37 e a naftoquinona 2. / The resistance of P. falciparum to the available blood-schizonticidal antimalarials, such as atovaquone (ATVQ) and artemisinin derivatives, and that of P. vivax to chloroquine (CQ), requires the search for new chemotherapeutic alternatives, aim of this work. As a strategy of generating new antimalarial prototypes, structural modifications were performed (i) on CQ which provided 10 chloroquine analogs (CQAn), four of which being platinum-complexed (CQAnPt), with activity previously described against P.berghei-malaria; (ii) on atovaquone, providing eight naphthoquinones; and (iii) on lapachol, providing 11 naphthoquinoidal compounds. These classes of molecules were evaluated in vitro for their cytotoxicity (MLD50) and antiplasmodial activity (IC50) against CQ-sensitive (S) or resistant (R) parasites. The selectivity indexes (SI), expressed by the ratio between these two biological activities, were obtained. The CQAn were more active against CQ-R P. falciparum in vitro and more active than the CQAnPt, and exhibited SI higher than that of CQ. To elucidate their mode of action, the CQAn were evaluated in silico for molecular docking to the lactate-dehydrogenase of P. falciparum (PfLDH) or humans (HssLDH). The CQAn33 exhibited the best conformation inside PfLDH; CQAn37 exhibited specificity in relation to the human enzyme. The CQAn having the highest SI were evaluated for their ability to inhibit -haematin formation, being so or less active than CQ. Evaluated for their potential to kill (cytocidal activity) or prevent growth (cytostatic activity) of P. falciparum CQ-R and CQ-S, these analogs demonstrated similar cytocidal potential, and higher cytostatic potential against CQ-R parasites. The CQAn were active against CQ-R and CQ-S parasites in P.berghei-malaria. Two naphthoquinones (2and 5) exhibited SI higher than that of CQ and inhibited P. berghei-parasitemia in mice, with highlight to naphthoquinone 2. In conclusion, the best candidates for the production of a blood-schizonticidal antimalarial were CQAn33, 37 and the naphthoquinone 2

A malária é uma doença tropical de grande relevância para a saúde pública no mundo. O objetivo do presente estudo foi construir a curva endêmica das espécies de Plasmodium falciparum e vivax, no período de 2003 a 2012 no Garimpo do Lourenço, verificando o efeito da periodicidade e da sazonalidade. Trata-se de um estudo ecológico, de série temporal e de caráter descritivo e exploratório, cujos dados foram obtidos do SIVEP-Malária, e o número de casos notificados ao mês foi utilizado como a variável dependente. Na amostra desta série 69% dos infectados eram do sexo masculino. As taxas cumulativas de infecção por gênero foram similares, sendo a infecção por P.vivax responsável por 75,4% das infecções em mulheres e por 72% do total de infecção em homens. As taxas por faixa etária foram de 72% entre 15 a 49 anos e de 39,6% em menores de 15 anos. Quanto à escolaridade, 66,57% não estudaram ou tinham menos de quatro anos de escolaridade. Observou-se um total de 12.357 infecções, de 12.056 casos novos e de 301 lâminas de verificação de cura (LVC). A infecção em garimpeiros foi responsável por cerca de 40% dessas infecções. Na avaliação da curva endêmica, realizada por meio do teste Augmented Dickey-Fuller, observou-se a ausência de estacionariedade das duas espécies (p > 0,05). A periodicidade, avaliada pelo teste G de Fisher, não evidenciou diferença estatisticamente significativa para os períodos da infecção no curso do ano para nenhuma das duas espécies (p > 0,05). O contexto observado nas zonas de garimpo da Amazônia Brasileira poderiam ser apoiadas por ações de controle ambiental e pesquisas, direcionados aos mosquitos transmissores, ao comportamento das espécies e aos aspectos climáticos, além do apoio à rede de serviços de saúde, de forma a interromper a cadeia de transmissão e controlar a endemia em patamares reduzidos nessa região garimpeira específica. / Malaria is a tropical disease of great relevance for the world’s public health. The objective of the present study was to construct the endemic curve of the species falciparum and vivax during the period starting from 2003 until 2012 in gold mining of Lourenço, assessing the effect of periodicity and seasonality. The present is an ecological time-series, descriptive and exploratory study, whose data were obtained from the SIVEP-Malária, using the number of cases per month as the dependent variable. 69% of those infected were male. Cumulative rates of infection by gender were similar, where vivax was responsible of 75.4% of the infections in females, and of 72% in males. Rates by age were 72% in those between 15 to 49 years old, and of 39.9% in those younger than 15 years old. Regarding literacy, 66.57% of the sample had never studied or had less than four years of schooling. It was observed a total of 12357 infections, 12056 new cases and 301 cure verification slides (CVS). Infection of gold miners was responsible of around 40% of the cases. Endemic curve assessment was performed using the Augmented Dickey-Fuller test, showing absence of seasonality of the two species (p > 0.05). Periodicity was assessed using the Fisher’s G test that did not show statistically significant difference for the infection periods along the year among the two species (p > 0.05). The context observed in the mining areas of the Brazilian Amazon could be supported by environmental control measures and research, targeted to mosquitoes, the behavior of species and climatic aspects and the support to the network of health services in order to stop the transmission chain and control endemic at low levels that specific gold mining region.

A malária é uma doença tropical de grande relevância para a saúde pública no mundo. O objetivo do presente estudo foi construir a curva endêmica das espécies de Plasmodium falciparum e vivax, no período de 2003 a 2012 no Garimpo do Lourenço, verificando o efeito da periodicidade e da sazonalidade. Trata-se de um estudo ecológico, de série temporal e de caráter descritivo e exploratório, cujos dados foram obtidos do SIVEP-Malária, e o número de casos notificados ao mês foi utilizado como a variável dependente. Na amostra desta série 69% dos infectados eram do sexo masculino. As taxas cumulativas de infecção por gênero foram similares, sendo a infecção por P.vivax responsável por 75,4% das infecções em mulheres e por 72% do total de infecção em homens. As taxas por faixa etária foram de 72% entre 15 a 49 anos e de 39,6% em menores de 15 anos. Quanto à escolaridade, 66,57% não estudaram ou tinham menos de quatro anos de escolaridade. Observou-se um total de 12.357 infecções, de 12.056 casos novos e de 301 lâminas de verificação de cura (LVC). A infecção em garimpeiros foi responsável por cerca de 40% dessas infecções. Na avaliação da curva endêmica, realizada por meio do teste Augmented Dickey-Fuller, observou-se a ausência de estacionariedade das duas espécies (p > 0,05). A periodicidade, avaliada pelo teste G de Fisher, não evidenciou diferença estatisticamente significativa para os períodos da infecção no curso do ano para nenhuma das duas espécies (p > 0,05). O contexto observado nas zonas de garimpo da Amazônia Brasileira poderiam ser apoiadas por ações de controle ambiental e pesquisas, direcionados aos mosquitos transmissores, ao comportamento das espécies e aos aspectos climáticos, além do apoio à rede de serviços de saúde, de forma a interromper a cadeia de transmissão e controlar a endemia em patamares reduzidos nessa região garimpeira específica. / Malaria is a tropical disease of great relevance for the world’s public health. The objective of the present study was to construct the endemic curve of the species falciparum and vivax during the period starting from 2003 until 2012 in gold mining of Lourenço, assessing the effect of periodicity and seasonality. The present is an ecological time-series, descriptive and exploratory study, whose data were obtained from the SIVEP-Malária, using the number of cases per month as the dependent variable. 69% of those infected were male. Cumulative rates of infection by gender were similar, where vivax was responsible of 75.4% of the infections in females, and of 72% in males. Rates by age were 72% in those between 15 to 49 years old, and of 39.9% in those younger than 15 years old. Regarding literacy, 66.57% of the sample had never studied or had less than four years of schooling. It was observed a total of 12357 infections, 12056 new cases and 301 cure verification slides (CVS). Infection of gold miners was responsible of around 40% of the cases. Endemic curve assessment was performed using the Augmented Dickey-Fuller test, showing absence of seasonality of the two species (p > 0.05). Periodicity was assessed using the Fisher’s G test that did not show statistically significant difference for the infection periods along the year among the two species (p > 0.05). The context observed in the mining areas of the Brazilian Amazon could be supported by environmental control measures and research, targeted to mosquitoes, the behavior of species and climatic aspects and the support to the network of health services in order to stop the transmission chain and control endemic at low levels that specific gold mining region.

A malária é uma doença tropical de grande relevância para a saúde pública no mundo. O objetivo do presente estudo foi construir a curva endêmica das espécies de Plasmodium falciparum e vivax, no período de 2003 a 2012 no Garimpo do Lourenço, verificando o efeito da periodicidade e da sazonalidade. Trata-se de um estudo ecológico, de série temporal e de caráter descritivo e exploratório, cujos dados foram obtidos do SIVEP-Malária, e o número de casos notificados ao mês foi utilizado como a variável dependente. Na amostra desta série 69% dos infectados eram do sexo masculino. As taxas cumulativas de infecção por gênero foram similares, sendo a infecção por P.vivax responsável por 75,4% das infecções em mulheres e por 72% do total de infecção em homens. As taxas por faixa etária foram de 72% entre 15 a 49 anos e de 39,6% em menores de 15 anos. Quanto à escolaridade, 66,57% não estudaram ou tinham menos de quatro anos de escolaridade. Observou-se um total de 12.357 infecções, de 12.056 casos novos e de 301 lâminas de verificação de cura (LVC). A infecção em garimpeiros foi responsável por cerca de 40% dessas infecções. Na avaliação da curva endêmica, realizada por meio do teste Augmented Dickey-Fuller, observou-se a ausência de estacionariedade das duas espécies (p > 0,05). A periodicidade, avaliada pelo teste G de Fisher, não evidenciou diferença estatisticamente significativa para os períodos da infecção no curso do ano para nenhuma das duas espécies (p > 0,05). O contexto observado nas zonas de garimpo da Amazônia Brasileira poderiam ser apoiadas por ações de controle ambiental e pesquisas, direcionados aos mosquitos transmissores, ao comportamento das espécies e aos aspectos climáticos, além do apoio à rede de serviços de saúde, de forma a interromper a cadeia de transmissão e controlar a endemia em patamares reduzidos nessa região garimpeira específica. / Malaria is a tropical disease of great relevance for the world’s public health. The objective of the present study was to construct the endemic curve of the species falciparum and vivax during the period starting from 2003 until 2012 in gold mining of Lourenço, assessing the effect of periodicity and seasonality. The present is an ecological time-series, descriptive and exploratory study, whose data were obtained from the SIVEP-Malária, using the number of cases per month as the dependent variable. 69% of those infected were male. Cumulative rates of infection by gender were similar, where vivax was responsible of 75.4% of the infections in females, and of 72% in males. Rates by age were 72% in those between 15 to 49 years old, and of 39.9% in those younger than 15 years old. Regarding literacy, 66.57% of the sample had never studied or had less than four years of schooling. It was observed a total of 12357 infections, 12056 new cases and 301 cure verification slides (CVS). Infection of gold miners was responsible of around 40% of the cases. Endemic curve assessment was performed using the Augmented Dickey-Fuller test, showing absence of seasonality of the two species (p > 0.05). Periodicity was assessed using the Fisher’s G test that did not show statistically significant difference for the infection periods along the year among the two species (p > 0.05). The context observed in the mining areas of the Brazilian Amazon could be supported by environmental control measures and research, targeted to mosquitoes, the behavior of species and climatic aspects and the support to the network of health services in order to stop the transmission chain and control endemic at low levels that specific gold mining region.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-03-15T22:01:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoNiveisSericos.pdf: 48252101 bytes, checksum: 6d60c3aff86212a2a89095b9b67f48bf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-03-18T12:22:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoNiveisSericos.pdf: 48252101 bytes, checksum: 6d60c3aff86212a2a89095b9b67f48bf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T12:22:17Z (GMT). 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Coletaram-se amostras diárias de sangue de 20 em 20 minutos no pré-tratamento (D0), 24 horas após o início da medicação (D1) e no 8º dia de acompanhamento (D7), quando o paciente já se encontrava assintomático. Todos os pacientes apresentavam parasitemia negativa em D7. Dosaram-se: os níveis séricos de cortisol em D0, D1 e D7; DHEA em D0 e D7; os níveis de anticorpos totais IgG anti-P. falciparum, anti-P. vivax, e anticorpos IgM anti-P. falciparum em D0. Comparam-se os níveis séricos de cortisol dos três dias, concluindo-se que os níveis de cortisol eram significativamente mais elevados em D0 do que nos outros dias. Foram correlacionados os níveis de cortisol com a parasitemia, obtendo-se como significativas as correlações entre cortisol D0 e parasitemia D1, assim como cortisol D1 com parasitemia D1, levando-se a deduzir que o cortisol pode interferir na resposta inicial à terapêutica de pacientes com malária por P. falciparum. O cortisol foi correlacionado com a temperatura, tempo de evolução da doença, níveis de anticorpos IgG anti-P. falciparum, não se obtendo resultados estatisticamente significativos, levando a inferir que a temperatura não interfere nos níveis de cortisol e o mesmo não interfere nos níveis de anticorpos, e não apresenta variações importantes com o tempo de evolução da doença. Os níveis de DHEA em D0, foram significativamente mais elevados do que em D7, apesar dos pacientes estarem sintomáticos há mais de um dia, já que um estímulo mantido do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA) leva a uma diminuição deste esteróide. O DHEA foi correlacionado com a parasitemia obtendo-se um resultado significativo na correlação DHEA D0 com parasitemia D1. A correlação entre cortisol e DHEA em D0 não foi significativa (p = 0,057), porém este resultado leva a crer que o DHEA acompanha o aumento dos níveis de cortisol. Obteve-se uma correlação negativa entre DHEA e tempo de evolução de doença, apesar destes níveis estarem aumentados no pré-tratamento. Calculou-se a correlação parcial entre cortisol, DHEA e temperatura, concluindo-se que a temperatura interfere positivamente na correlação cortisol e DHEA. Uma vez que a febre reflete o momento em que ocorre a lise das hemácias secundária a esquizogonia, provavelmente esta lise com conseqüente liberação de citocinas serve como um fator agudizador da estimulação do eixo HPA, sugerindo que a liberação dos dois hormônios apresenta mecanismo comum. A correlação entre DHEA e anticorpos não foi significativa, portanto o DHEA não deve interferir na produção de anticorpos de pacientes com malária por P. falciparum. / The main purpuse of our study was to determine the levels of both cortisol and dehydroepiandrosterone (DHEA) in serum samples from patients suffering from Plamodium falciparum malaria. Since cortisol is potentially immunesupressive, and, conversely, DHEA is inherently immunopotentiating, we sought to assess the possible association between serum levels of these steroids and patient's clinical conditions. We enrolled to participate in this study 24 patients aged 12 to 47 years, of whom 18 were male and 6 female, suffering from uncomplicated P. falciparum malaria. All patients lived in areas of the Amazon were malaria is endemic. Half of them were found to be primo-infected, whereas the others were being reinfected by P. falciparum when recruited for this investigation. Blood samples were obtained from each patients as follows: at 20-minutes intervals during the pre-treatment phase (i. e. on day 0, D0), 24 hours after starting drug therapy (D1) and at the 8th day of follow-up (D7), when patients were asymptomatic. All patients at D7 presented with negative parasitemia. Serum levels of cortisol and DHEA were measured on D0, Dl and D7 and D0 and D7, respectively. In addition, the determination of IgG antibodies to both P. falciparum and P. vivax was performed only on D0. Our results indicated that levels of cortisol in serum samples collected on D0 were significantly higher than those of D1 and D7. High levels of cortisol on D0/D1 and significant parasitemia on D1 led us to postulated that this corticosteroid may interfere with the initial response of P. falciparum-infected patients to treatment. The cortisol levels did not correlate with the intensity of fever, duration of illness and the levels of IgG antibories to P. falciparum. These findings suggest that temperature does not interfere with the cortisol levels, and these, on the other land, do not significantly ralate to either antibody response or the duration of illness. The DHEA levels were found to be significantly more elevated on D0 than on D7, even though patients were already symptomatic for more than one day when first serum samples was taken. The progressive decrease in the DHEA levels is therefore likely to be mediated by a continuous stimulus from the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis. Similarly to cortisol, the DHEA levels on D0 correlated significantly with D1 parasitemia. Thus, it is suggested that in cortisol levels paralels that for DHEA. Of interest, the DHEA serum levels seem to inversely correlate with the duration of illness, in spite of high levels of this steroid detected at the pre-treatment phase. A not significant correlation has been noted if cortisol and DHEA serum levels are compared with temperature. This clinical parameter, however, was found to directly interfere with the correlation that exist between both cortisol and DHEA levels. It is known that fever reflects the occasion when erythrocytes disrupt from the schizogony, with release of cytokines , which act as an acute stimulating factor for the HPA axis. It would therefore be proposed that liberation of both hormones has a commom mechanism. The lack of significant interrelationships between DHEA levels and IgG antibodies indicates that this hormone does not seem to interfere with the production of antibodies by P. falciparum infected patients.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-03-15T21:45:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoDoseAdequada.pdf: 56337427 bytes, checksum: d66ac37cc5f1fd1fae3a15f78c189a48 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-03-18T13:42:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoDoseAdequada.pdf: 56337427 bytes, checksum: d66ac37cc5f1fd1fae3a15f78c189a48 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T13:42:37Z (GMT). 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O estudo foi realizado em Marabá-Pará, caracterizando-se por ser aberto, prospectivo e randomizado; incluiu pacientes voluntário s, adultos, masculinos, de peso corporal até 80 kg; febris ou com outros sintomas constitucionais de malária e com gota espessa positiva para P. falciparum ( ≥ 200 e ≤ 50.000 parasitas/mm³ de sangue). Grupos de estudo: I -1.500 mg de 12/12 horas por 1 dia; II -1.500 mg de 12/12 horas por2 dias e III -1.500 mg de 12/12 horas por 3 dias. Todos os pacientes foram tratados em regime hospitalar, sendo avaliados no pré-tratamento através de: dados pessoais e biométricos, sinais e sintomas, uso de medicação concomitante, temperatura axilar, freqüência respiratória, pressão arterial, eletrocardiograma, parasitemia, exames hematológicos e bioquímicos. A partir do início da terapêutica, a avaliação destes parâmetros foi feita seguindo protocolo próprio, incluindo a anotação de efeitos colaterais. A análise de variância de Friedman foi usada para avaliar os valores obtidos nos exames hematológicos e bioquímicos. Foram selecionados 16 pacientes, sendo 5 alocados no grupo I, 6 no II e 5 no III. Idade variou de 17 a 41 anos (média: 26,6), peso corporal de 44 a 72 kg (média: 54,9), parasitemia assexuada inicial de 200 a 40.000 formas/mm³ de sangue, sendo os grupos homogêneos quanto a estas variáveis. A febre desapareceu no mínimo com 9 e no máximo com 48 horas a partir do início da terapêutica. A avaliação do traçado eletrocardiográfico e da pressão arterial não mostrou alterações significativas. O desaparecimento da parasitemia assexuada ocorreu em média com 53,6 horas, não se evidenciando diferenças estatísticas i significantes entre os grupos (p=0,7264). Houve uma diminuição significativa entre o pré-tratamento (D0) e o terceiro (D2) e oitavo (D7) dias de acompanhamento quanto os níveis de hematócrito (p=0,0046), um aumento no número de leucócitos entre D2 e D7 (p=0,0171) e plaquetas entre D0 e D7, assim como entre D2 e D7 (p< 0,0001). Entre D0 e D7 detectou-se diminuição nos níveis de bilirrubina total (p=0,0024), fosfatase alcalina (p=0,0195) e uréia (p=0,0168). Efeitos colaterais foram em geral leves ou moderados e de curta duração. Do total de pacientes, 87,5% obtiveram desaparecimento da parasitemia assexuada, porém apenas 2 (12,5%) curaram, ambos incluídos no grupo III. Nenhum dos esquemas posológicos usados foi adequado para a cura desta doença. Talvez em estudos posteriores usando a droga em maior dose ou por maior número de dias ou ainda associando-a a outros antimaláricos, possa obter-se eficácia adequada. / The increasing resistance of P. falciparum strains to the current antimalarial drugs makes the searching of new drugs an urgent task. The compound Ro 42-1611 is an antimalarial drug that arises from a chinese herb Artabotrys uncinatus. Since its synthesis, Ro 42-1611 was used in three different clinical trials to treat falciparum malaria in Africa, but how it works in the South America malaria patients is obscure. Althouh being an effective antimalarial, a proper therapeutic dose to achieve the supressive cure of falciparum malaria has not been established yet. The purpose of this study is to evaluate the tolerance, the toxicity and the efficacy of 3 different dose schedules of Ro 42-1611 in the treatment of falciparum malaria. It was an open, prospective and randomized trial carried out in Maraba/Para State in male patients with maximum 80 kg bodyweight. All patients had fever or another constitutional malaria symptom and had a positive thick blood smear to P. falciparum (≥ 200 and ≤ 50,000 parasites/mm³). In a hospital, they were assigned into 3 groups according to drug administration time: Group I - 1,500 mg twice a day for 24 hours; Group II - 1,500 mg twice a day for 48 hours and Group III - 1,500 mg twice a day for 72 hours. Before treatment, the following procedures were recorded from all patients: personal data, height and weight, malarial signs and symptoms, history of simultaneous drug intake, body temperature, vital functions (respiratory rate, blood pressure), parasite count, haematology and blood chemistry assesments and electrocardiogram. Ouring the treatment, all those parameters were followed, including adverse reactions to Ro 42-1611. Statistical analysis (Friedman variance test) were performed on laboratory tests results. Sixteen patients were enrolled in the study: 5 patients in Group I; 6 in Group II and 5 patients in Group III. Among patients, age ranged from 17 to 41 years old (mean 266). body weight from 44 to 72 kg (mean 54.9). The assexual parasite count ranged from 200 to 40,000 parasites/mm³ . Regarding those variables, there were homogeneity in 3 groups. According to the protocol, clinical and laboratory data were evaluated, with the following results: the minimum and the maximum fever clearence time was 9 to 48 hours respectively. The mean assexual parasite clearence was 53.6 hours, without any statistical significance among the groups (p=0.7264). There were statistical significative difference (p=0.0046) in the hematocrit values before treatment (00), and the third (02) and the eighth (07) day of the follow-up. It was observed an increase in the leukocyte count between 02 and 07, also of statistical significance (p=0.0171), as well in the platelets of 00 and 07/02 and 07 (p=0.0001). Between DO and 07, statistical significative reduction ocurred in the values of total bilirrubin (p=0.0024), alkaline phosphatase (p=0.0195) and urea (p=0.0168). There were no statistical significative difference nor in the evalution of electrocardiogram results neither in the blood pressure. Short adverse reactions were mild to moderate. In the end of the treatment, 87,5% of patients were completely free of parasites, but just 2 achieved a radical cure (12,5%), both included in Group III. Any of the schedule treatment showed efficacy. Perhaps such efficacy might be attained using Ro 42-1611 in a superior dose, for a longer period of time or in association with other antimalarial in further studies.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-18T19:48:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CorrelacaoConcentracoesSerica.pdf: 660562 bytes, checksum: 34550c76626622dc26d807aa54719832 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-22T15:00:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CorrelacaoConcentracoesSerica.pdf: 660562 bytes, checksum: 34550c76626622dc26d807aa54719832 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-22T15:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CorrelacaoConcentracoesSerica.pdf: 660562 bytes, checksum: 34550c76626622dc26d807aa54719832 (MD5) Previous issue date: 2007 / A correlação entre as concentrações séricas e eritrocitárias de quinina foi estudada em crianças e indivíduos adultos com malária por Plasmodium falciparum não complicada no Município de Cachoeira do Piriá, Estado do Pará. Os pacientes receberam esquema terapêutico oral de quinina (3 dias) + Doxiciclina (5 dias) + primaquina (6º dia). As concentrações de quinina nas amostras de soro e eritrócitos foram mensuradas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência no terceiro dia de tratamento. A concentração média de quinina no soro de crianças com malária falciparum não complicada foi de 0,723 ± 0,6 μg/mL, e a eritrocitária de 0,537 ± 0,38 μg/mL. A relação entre as concentrações séricas e eritrocitária de quinina no soro de crianças foi de 1,89 ± 1,25 μg/mL, não houve diferença estatisticamente significativa entre estas concentrações. A média da concentração sérica de indivíduos adultos foi de 1,27 ± 1,12 μg/mL, e a eritrocitária de 0,63 ± 0,48 μg/mL. A relação entre essas concentrações foi de 2,27 ± 1,06 μg/mL. Os resultados mostraram que não houve diferença estatística significativa entre as médias da relação dos teores de quinina no soro e nos eritrócitos das crianças e dos indivíduos adultos. / The correlation between the serum and red blood cells concentrations of quinine was studied in children and adults with falciparum malaria uncomplicated in Cachoeira of the Piriá, in the State of Pará. The patients had received the oral scheme of quinine (3 days) + doxycyclina (5 days) + primaquine (6º day). Quinine concentration in the serum and the red blood cells samples was measured by High Performance Liquid Chromatography in the third day of treatment. The average of the serum concentration of the quinine in children with uncomplicated falciparum malaria was of 0,723 ± 0,6 μg/mL, and 0,537 ± 0,38 μg/mL for the red blood cells. And the relationship between the serum and red blood cells concentration was 1,89 ± 1,25 μg/mL, had not difference statistical significant between those concentrations. The average of the serum concentration of adult individuals was of 1,27 ± 1,12 μg/mL, and 0,63 ± 0,48 μg/mL for the red blood cells. The relationship between those concentration was of 2,27 ± 1,06 μg/mL. The results had shown that it did not have significant statistical difference between the averages of the relation of quinine levels in the serum and the red blood cells of the children and the adults.