Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-08T14:34:35Z No. of bitstreams: 1 2012_MaiteCevallosMijan.pdf: 2328262 bytes, checksum: c702ab2ca4a7e15057c07722b1071c5a (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-10T11:52:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_MaiteCevallosMijan.pdf: 2328262 bytes, checksum: c702ab2ca4a7e15057c07722b1071c5a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-10T11:52:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_MaiteCevallosMijan.pdf: 2328262 bytes, checksum: c702ab2ca4a7e15057c07722b1071c5a (MD5) / A Terapia Fotodinâmica (TFD), cujo princípio é a atuação simultânea de três componentes: fármaco fotossensibilizador, luz em comprimento de onda específico e oxigênio molecular, tem se mostrado uma modalidade terapêutica promissora para o tratamento de diversas neoplasias malignas, dentre as quais o câncer de mama, altamente prevalente em mulheres em todo o mundo. Atualmente, a busca por novas formulações de fármacos fotossensibilizadores que potencializem os efeitos antitumorais da TFD, principalmente pela indução de resposta imune anti-tumoral e que minimizem efeitos adversos a tecidos normais adjacentes, tem sido constante. O presente estudo teve o objetivo de avaliar os efeitos da TFD mediada por Alumínio- Cloro-Ftalocianina (AlClFc) em formulação lipossomal no tratamento de câncer de mama in vitro e in vivo, bem como avaliar o perfil de resposta imunológica por meio da expressão de citocinas inflamatórias. Como resultados, puderam ser observados que a TFD mediada por AlClFc em formulação lipossomal foi altamente eficiente na ablação de células de carcinoma mamário murino – 4T1 in vitro – com mais de 90% de morte celular, induzindo preferencialmente necrose, seguida tardiamente por apoptose celular. A alta eficiência de tratamento também foi observada no modelo tumoral em camundongos Balb/C in vivo, onde foram constatados os três diferentes mecanismos de ação da TFD comumente descritos, tais quais: ação direta por necrose celular, ablação vascular acentuada e indução de resposta inflamatória caracterizadas principalmente pela expressão de citocinas pró-inflamatórias como IL- 1β e TNF-. Pôde-se concluir que a TFD mediada por AlClFc em formulação lipossomal é altamente efetiva no tratamento de câncer de mama, fornecendo suporte científico para que essa modalidade associada à nova formulação farmacêutica seja empregada, no mínimo, como adjuvantes terapêuticos a tratamentos cirúrgicos, permitindo maior controle tumoral por longos períodos e, possivelmente, maior controle dos focos metastáticos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Photodynamic therapy (PDT),which acts by interaction of three main components: photosensitizer, light in specific wavelength and molecular oxygen, has shown to be a promising therapeutic modality applied to the treatment of various malignancies, among which breast cancer. Currently, the search for new formulations of photosensiting drugs that enhance antitumor effects of PDT, mainly by inducing antitumor immune response and by minimizing adverse effects to adjacent normal tissues has been increased. This study aimed to evaluate the effects of PDT mediated with aluminium-chlorine-phtalocyanine (AlClPc) in liposomal formulation to the treatment of breast cancer both in vitro and in vivo model, as well as to assess the profile of immune response through the expression of inflammatory citokines. As a result, it could be observed that PDT mediated with liposomal AlClPc was highly effective in the ablation of murine mammary carcinoma cells (4T1), in vitro, leading to more than 90% of cell death, mainly characterized by necrosis, followed by delayed apoptosis. The high efficiency of treatment was also observed in tumor model in Balb/C mice in vivo, where the three main mechanisms of PDT, commonly described, were achieved: direct cell harm by necrosis process, followed by vascular ablation and induction of inflammatory response mainly characterized by the expression of proinflammatory cytokines such as IL-1β and TNF-α. It was concluded, therefore, that PDT mediated with liposomal AlClPc is highly effective in treating breast cancer. This provides scientific support to perform this new formulation to be used at least as an adjuvant therapy to surgical treatments. This would allow greater tumor control for long periods and possibly greater control of metastasis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-22T15:53:16Z No. of bitstreams: 1 2012_BeatrizChiyinMa_Parcial.pdf: 679359 bytes, checksum: 745fe0d28c99a874c375aa950267b2be (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T12:09:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_BeatrizChiyinMa_Parcial.pdf: 679359 bytes, checksum: 745fe0d28c99a874c375aa950267b2be (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T12:09:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_BeatrizChiyinMa_Parcial.pdf: 679359 bytes, checksum: 745fe0d28c99a874c375aa950267b2be (MD5) / O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres e apresenta taxas crescentes de incidência e de mortalidade no mundo. Os tratamentos convencionais para esta doença consistem em técnicas não-específicas, que oferecem riscos de dano a tecidos sadios ou erradicação incompleta das células malignas. É nesse sentido que a terapia fotodinâmica, TFD, modalidade terapêutica que utiliza um fotossensibilizante, FS, sensível a luz de comprimento de onda específico capaz de induzir efeitos tóxicos a células e tecidos-alvo, tem se destacado como uma promissora abordagem tecnológica a ser utilizada no tratamento de diversos tipos de câncer. Um grande número de FS tem sido testado para aplicação na TFD, dentre eles destaca-se o Alumínio-Cloro Ftalocianina, AlClPc, mas sua elevada hidrofobicidade gera entraves que comprometem a eficácia de sua atuação. Diante disso, estratégias para contornar esse problema conduziram ao desenvolvimento de uma formulação constituída por AlClPc associado ao copolímero poli(vinil metil éter-co-anidrido maleico) PVM/MA, AlClPc-NP, com potencial para ser utilizado como FS na TFD. Nesse contexto, o presente trabalho teve como foco a avaliação da eficácia do Alumínio-Cloro Ftalocianina associado ao PVM/MA como fotossensibilizantea ser utilizado na terapia fotodinâmica, em um estudo in vitro. Para tal, utilizou-se como modelo células das linhagens murinas tumoral (4T1) e não-tumoral (NIH/3T3), e também linhagens celulares humanas tumoral (MCF-7) e não-tumoral (MCF-10A). Os resultados mostraram que células de todas essas linhagens incorporam o AlClPc-NP, e os efeitos do tratamento com o fármaco mostraram que o copolímero PVM/MA, não associado ao AlClPc, não é citotóxico para as quatro linhagens celulares estudadas. O AlClPc-NP não submetido à irradiação luminosa não se mostrou citotóxico em concentrações menores ou iguais a 2,0 µM, mas ao ser irradiado, induziu citotoxicidade em todas as linhagens celulares, sendo essa toxicidade menos pronunciada sob irradiação luminosa de baixas densidades de energia e em células não-tumorais. Além disso, as análises do perfil de morte celular mostraram que a TFD mediada pelo AlClPc-NP induz morte celular por apoptose sob irradiação luminosa de baixa densidade de energia, enquanto que em alta densidade de energia induz morte celular por necrose, sendo esses resultados corroborados pelas análises de fragmentação do DNA. Os efeitos citostáticos e citotóxicos observados no tratamento da TFD mediada pelo AlClPc-NP sobre células tumorais oferecem excelentes perspectivas do potencial desse fármaco como fotossensibilizante para utilização na terapia fotodinâmica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is the most common type of cancer among women, with increasing incidence and mortality rates worldwide. Ordinary treatments for this disease consist of non-specific techniques which offer risks of damaging healthy tissues or incomplete eradication of malignant cells. Therefore, photodynamic therapy, PDT, a therapeutic modality which uses a photosensitizer (PS) sensitive to light of specific wavelength capable of inducing toxic effects to target tissues and cells, has emerged as a promising technological approach to be used in the treatment of several types of cancer. A large number of PS has been tested for use in PDT, with emphasis to Chloroaluminum Phthalocyanine (AlClPc), however, its high hydrophobicity creates obstacles that undermine the effectiveness of its performance. For this reason, strategies to circumvent this problem led to the development of a formulation consisting of AlClPc associated with the copolymer poly(vinyl methyl ether-co-maleic anhydride), PVM/MA, (AlClPc-NP) with potential to be used as a PS in PDT. In this context, this study focused on evaluating the effectiveness of Chloroaluminum Phthalocyanine associated with PVM/MA as a photosensitizer to be used in photodynamic therapy, in vitro study. For this, murine tumor cell line (4T1) and non-tumor cell line (NIH/3T3) were used as models, as well as human tumor cell line (MCF-7) and non-tumor cell line (MCF-10A). The results showed that cells of all lineages take up the AlClPc-NP, and the effects of drug treatment showed that PVM/MA, not associated with the AlClPc, is not cytotoxic to all four cell lines studied. AlClPc-NP without light irradiation no induce cytotoxic effects in concentrations less than or equal to 2,0 µM. However, with light irradiation, was able to induce cytotoxicity in all cell lines: this toxicity was less intense in light irradiations with low energy densities in non-tumor cells. Furthermore, PDT mediated by AlClPc-NP induce cell death by apoptosis in light irradiation with low energy density, while in high energy density induce cell death by necrosis, these results were confirmed with analysis of DNA fragmentation, i.e. PDT with low energy density did not induce DNA fragmentation. Thus, the cytostatic and cytotoxic effects observed in treatment with PDT mediated by AlClPc-NP in tumor cells offer great prospects for the potential of this drug as a photosensitizer for use in photodynamic therapy.

Resumo: O câncer de mama tem sido um dos maiores problemas de saúde pública, sendo responsável por alta taxa de incidência em mortalidade e morbidade, caracterizada como a segunda causa de morte entre as mulheres, mesmo como tratamento desta doença, o procedimento cirúrgico pode desenvolver comprometimentos emocionais e/ou físicos às pacientes como a alteração de sensibilidade. A fisioterapia desempenha um papel fundamental para a paciente, a reeducação sensitiva, pode oferecer estimulação dos receptores sensoriais, aumentando o seu limiar de sensibilidade. Embora compreendamos a participação dos nervos sensitivos na manutenção da resposta sensitiva, pouco se analisa a resposta da reeducação sensitiva no trajeto do nervo intercostobraquial (NICB) em sujeitos do sexo feminino pós-cirúrgico com queixa de hipoestesia. O presente estudo teve como objetivo verificar a resposta da reeducação sensitiva em mulheres submetidas à linfadenectomia axilar, pós mastectomia, avaliando a resposta nas diferentes técnicas de reeducação sensitiva como bolas, kit com diferentes texturas e drenagem linfática manual e verificar a permanência da resposta, após 3 meses. Sujeitos e método: Este estudo foi realizado no período de Agosto de 2004 a Novembro de 2006, no hospital estadual, na cidade de Santos-SP, composto por 120 pacientes do sexo feminino, submetidas à cirurgia de mama com esvaziamento axilar pela equipe médica representada por três mastologistas do referido hospital, que utilizam o mesmo procedimento cirúrgico para a preservação do NICB, subdivididas em quatro grupos de 30 pacientes cada. O GI (Estimulação sensitiva com bolas, sensiball, fisiobol e lisa), GII (com drenagem linfática), GIII (com Kit de diferentes texturas) e o GIV (Controle). A sensibilidade superficial foi avaliada por intermédio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The breast cancer has been a major public health problem and is responsible for high rate of incidence in mortality and morbidity, characterized as the second leading cause of death among women, even as treatment of this disease, the surgical procedure can develop emotional commitments and / or physical for patients and the amendment of sensitivity. The physiotherapy plays a key role for the patient, the reeducation sensitive, can provide sensory stimulation of receptors, increasing the threshold of sensitivity. While we understand the participation of sensitive nerves in the maintenance of sensory response, little is analyzes the response in the path of reeducation sensory of the intercostobrachial nerve (NICB) in individuals female post-surgical complaint with the hypoesthesia. This study aimed to ascertain the response of sensory reeducation in women subjected to linfadenectomia axillary, post mastectomy, evaluating the response in the various techniques of sensory reeducation as balls, kit with different textures and lymphatic drainage manual and check the permanence of response, after 3 months. Individuals and method: This study was carried out from August 2004 to November 2006, the state hospital in the city of Santos-SP, composed of 120 patients were female, submitted to surgery for breast with emptying axillary represented by the medical team mastologists by three of the hospital, using the same surgical procedure for the... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Gilberto Uemura / Coorientador: José Ricardo P. Rodrigues / Banca: Eliane Aguiar P. Nahás / Banca: Paulo Traiman / Banca: Fabio Martins Laginha / Banca: Marta Helena Souza De Conti / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociências e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-10-15T15:34:23Z No. of bitstreams: 1 2014_MosarCorreaRodrigues.pdf: 5058878 bytes, checksum: ac09311e30d09952917525297a0f169f (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-17T12:35:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MosarCorreaRodrigues.pdf: 5058878 bytes, checksum: ac09311e30d09952917525297a0f169f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-17T12:35:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MosarCorreaRodrigues.pdf: 5058878 bytes, checksum: ac09311e30d09952917525297a0f169f (MD5) / O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais incidente no mundo, acometendo uma a cada oito mulheres. Os tratamentos utilizados atualmente para o câncer de mama não apresentam o índice terapêutico desejado e, diante disso, a emergente terapia fotodinâmica (TFD) vem despertando bastante atenção no tratamento de neoplasias. Fundamentada em três componentes básicos, luz no comprimento de onda específico, fotossensibilizante (FS) e oxigênio, a TFD é considerada bastante segura e eficaz. Uma das limitações da TFD está relacionada à natureza hidrofóbica apresentada pela maioria dos FS. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo analisar a utilização de dois agentes fotossensibilizantes: extrato de crajiru (ECr) e o cloreto de alumínio-ftalocianina (AlFtCl), associados em duas nanoemulsões independentes, como mediadores da TFD aplicados em ensaios celulares de tumor de mama 2D e 3D. As nanoformulações obtidas (NE-ECr/NE-AlFtCl) apresentaram diâmetro hidrodinâmico de cerca de 30 nm, foram monodispersas e com carga de superfície levemente negativa. As NE-ECr apresentou pico de absorção de λ=668 nm e emissão de fluorescência (excitação em 350 nm) de λ=676. A NE-AlFtCl apresentou pico de absorção de λ=676 nm e emissão de fluorescência (excitação em 350 nm) de λ=680. Ademais, as duas nanoformulações apresentaram excelente capacidade de produzir espécies reativas de oxigênio (ERO). Foi conferida também uma excelente estabilidade nas condições a 4 °C e a ~25°C, sendo possível preservar as propriedades fotofísicas e fisicoquímicas das nanofomulações pelo máximo tempo testado, i.e., 365 dias. Tanto a NE-ECr (0,125 mg/mL) quanto a NE-AlFtCl (0,125 μM) expostas por 15 minutos às células tumorais MCF-7, separadamente, apresentaram-se interiorizadas no citoplasma dessas células. Os efeitos citotóxicos ocasionados nas células foram exclusivamente pela ação das duas nanoformulações quando irradiadas. As células MCF-7 submetidas à TFD mediada pelas diferentes concentrações de NE-ECr apresentaram CC50 de 0,0013 mg/mL e CC100 de 0,007 mg/mL. Nas mesmas condições, foram observadas para células MCF-10A CC50 e CC100 de 0,0048 mg/mL e de 0,020 mg/mL das NE-ECr, respectivamente. Também foi observada uma recuperação mais lenta das células tumorais quando comparadas às não tumorais. As NE-ECr mediadoras da TFD também se apresentaram bastantes citotóxicas contra os esferoides das células MCF-7. Nos experimentos realizados com as NE-AlFtCl, as células MCF-7 foram submetidas à TFD mediada pelas diferentes concentrações, agora das NE-AlFtCl, apresentando CC50 de 0,0028 μM e CC100 de 0,093 μM. Nas mesmas condições, foram observadas para células MCF-10A CC50 e CC100 de 0,0058 μM e de 0,625 μM das NE-AlFtCl, respectivamente. MCF-7 apresentaram-se mais lentas quanto à recuperação por diferentes tempos após a TFD. Quando os esferoides foram expostos a diferentes concentrações das NE-AlFtCl-TFD por 60 minutos, houve uma maior citotoxicidade em relação ao tempo de 30 minutos. Conclui-se que as NE-ECr e as NE-AlFtCl são estáveis a diferentes condições por longos períodos de tempo, e que as duas nanoemulsões, quando utilizadas como mediadoras da TFD, independentemente, foram citotóxicas contra células tumorais com maior intensidade do que a exercida sobre células não tumorais. A TFD mediada pelas NE-ECr ou NE-AlFtCl também apresentou efeito citotóxico contra esferoides de células MCF-7. _________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is the second most frequent type of cancer in the world, affecting one in eight women. Current treatments for breast cancer do not present the desired therapeutic index binging attention, therefore, to the emerging photodynamic therapy (PDT), which has been attracting much attention for the treatment of neoplasies. Based on three basic components, light in specific wavelength, photosensitizer (PS) and oxygen, PDT is considered very safe and effective. One of the limitations of PDT is related to the hydrophobic nature presented by the majority of the PS. In this sense, the present study aimed at analyzing the use of two photosensitizing agents: crajiru extract (ECr) and aluminum phthalocyanine chloride (AlFtCl), associated in two independent nanoemulsions, as PDT mediators applied in cellular assays of 2D and 3D breast tumors. The nanoformulations obtained (NE-ECr/NE-AlFtCl) had a hydrodynamic diameter of about 30 nm, were monodisperse and had a slightly negative surface charge. The NE-ECr showed absorption peak of λ = 668 nm and fluorescence emission (excitation at 350 nm) of λ = 676. The NE- AlFtCl showed absorption peak of λ = 676 nm and fluorescence emission (excitation at 350 nm) of λ = 680. Moreover, both nanoformulations showed excellent capacity to produce reactive oxygen species (ROS). We also observed excellent stability conditions at 4 °C and ~ 25 °C, which showed that it is possible to preserve the physicochemical and photophysical properties of the nanoformulations during the maximum tested period, i.e. 365 days. Both NE-ECr (0.125 mg/mL) and NE-AlFtCl (0.125 μM) separately exposed for 15 minutes to the MCF-7 tumor cells presented themselves internalized into the cytoplasm of these tumor cells. The cytotoxic effects on cells were caused solely by the action of both nanoformulations when irradiated. MCF-7 cells undergoing PDT mediated by different concentrations of NE-ECr showed CC50 of 0,0013 mg/mL and CC100 of 0,007 mg/mL. Under the same conditions, we observed for MCF-10A CC50 and CC100 of 0,0048 mg/mL e of 0,020 mg/mL of NE-ECr, respectively. Slower recovery of tumor cells was also observed when compared to that of non-tumor cells. NE-ECr as PDT mediators also presented significant cytotoxicicity against spheroids of MCF-7 cells. In the experiments with NE-AlFtCl, MCF-7 cells were subjected to PDT mediated by different concentrations mediated of NE-AlFtCl, this time presenting CC50 of 0,0028 μM and CC100 of 0,093 μM. Under the same conditions, we observed for MCF-10A CC50 and CC100 of 0,0058 μM and of 0,625 μM of NE-AlFtCl, respectively. Recovery of MCF-7 was slower for different periods after PDT. When spheroids were exposed to different concentrations of NE-AlFtCl-PDT for 60 minutes, there was higher cytotoxicity when compared to those exposed for 30 minutes. We conclude that the NE-ECr and the NE-AlFtCl are stable under different conditions for long periods of time, and that both nanoemulsions, when used as mediators of PDT, independently, presented cytotoxicicity to tumor cells in a stronger intensity than that exerted on non-tumor cells . PDT mediated by NE-ECr or NE-AlFtCl also showed cytotoxic effect against spheroids of MCF-7 cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-10-24T15:21:06Z No. of bitstreams: 1 2014_RubensSantosSamuelAlmeida.pdf: 2610665 bytes, checksum: 27c9282e87024c46e2e4d9b9fff37dbe (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-24T15:50:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RubensSantosSamuelAlmeida.pdf: 2610665 bytes, checksum: 27c9282e87024c46e2e4d9b9fff37dbe (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-24T15:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RubensSantosSamuelAlmeida.pdf: 2610665 bytes, checksum: 27c9282e87024c46e2e4d9b9fff37dbe (MD5) / Muitos fatores são caracterizados como desencadeadores do câncer como os fatores genéticos e a desregulação nos processos de sinalização celular. O acúmulo de mutações em células normais está nos fatores genéticos ligados a carcinogênese e a localização dessas mutações no genoma possui um papel fundamental. Até o momento, diversas mutações têm sido descritas em genes importantes relacionados à carcinogênese mamária. Desregulação nos processos de sinalização celular levam por vezes ao amento da proliferação celular característica fundamental para o desenvolvimento do câncer. Genes da família MYLK (Miosin Light Chain Kinase) codificam proteínas do tipo serina/treonina quinase inicialmente identificados como responsáveis pela fosforilação da cadeia leve da miosina. Estudos anteriores identificaram mutações no gene MYLK4 como de grande importância no câncer de mama. Estudos mostram que um aumento da expressão dos genes MYLK1 e MYLK2 estão relacionados com a carcinogênese mamária. Os membros desta família não foram totalmente caracterizados. Este estudo buscou investigar uma possível relação entre o MYLK4 e o câncer de mama. Foi constatado que a frequência de mutações no gene MYLK4 é baixa tanto em linhagens celulares quanto em amostras clínicas de câncer de mama. Ainda, observamos uma superexpressão do gene em linhagens celulares de câncer de mama e uma maior expressão em mama quando comparado com outros tipos de tecidos normais. A análise por imunohistoquímica em amostras clínicas parafinizadas demonstrou uma maior expressão do MYLK4 no tecido tumoral e presença em tecido normal. Analisando sua expressão em um número maior de amostras clínicas tumorais pareadas com sua contra parte normal ou não, não foram observadas alterações significativas na expressão do MYLK4 apenas uma grande variância em sua expressão. Ensaio de superexpressão do MYLK4 em linhagem celular normal demonstrou um aumento na proliferação celular in vitro. Os dados em conjunto apontam para um possível envolvimento do MYLK4 no crescimento celular em tumores que apresentem superexpressão deste gene. _________________________________________________________________________ ABSTRACT / Many factors are characterized as causes of cancer such as genetic factors and deregulation of cellular signaling processes. The accumulation of mutations in normal cells is linked to genetic factors in carcinogenesis and the location of these mutations in the genome plays a key role. To date, several mutations have been described in important genes related to mammary carcinogenesis. Disruption in cellular signaling process sometimes leads to increased cell proliferation, critical to the development of cancer. The MYLK (Light Chain Kinase Miosin) gene family encodes proteins of the serine / threonine kinase family originally identified as responsible for the phosphorylation of myosin light chain. Previous studies have identified mutations in the gene MYLK4 to be important in breast cancer. Studies have shown that increased expression of genes MYLK1 and MYLK2 are related to mammary carcinogenesis. Members of this family have not been fully characterized. This study sought to investigate a possible relationship between MYLK4 and breast cancer. It has been found that the frequency of mutations in the gene MYLK4 is low in both cell lines and clinical samples of breast cancer. Also, we observed a gene overexpression in cell lines of breast cancer and increased expression in normal cells of breast cancer when compared with other types of normal tissues. Analysis by immunohistochemistry in paraffin embedded clinical samples showed an increased expression of MYLK4 in tumor tissue and its presence in normal tissue. Analyzing its expression in a larger number of clinical tumor samples paired with its counterpart normal part or not, no significant changes were observed in the expression of MYLK4 just a great variance in their expression. Assay overexpressing MYLK4 normal cell line showed increase on cell proliferation in vitro. This data together suggest a possible involvement of MYLK4 in cell growth in tumors that exhibit overexpression of this gene.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-03-05T12:24:08Z No. of bitstreams: 1 2012_MairaAzevedoFeitosaAraujo.pdf: 2203133 bytes, checksum: 14d6393d76f3384bb0d2ce1953a8eebd (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2013-03-05T15:35:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_MairaAzevedoFeitosaAraujo.pdf: 2203133 bytes, checksum: 14d6393d76f3384bb0d2ce1953a8eebd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T15:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_MairaAzevedoFeitosaAraujo.pdf: 2203133 bytes, checksum: 14d6393d76f3384bb0d2ce1953a8eebd (MD5) / O câncer é descrito como uma doença que é desencadeada por fatores genéticos e epigenéticos. Dentre as manifestações epigenéticas ligadas à carcinogênese a desregulação nas modificações pós-traducionais que ocorrem nas caudas das histonas tem um papel de grande importância. Vários são os tipos de modificações que podem ocorrer e vários são os sítios a serem modificados, entre eles a metilação em resíduos de lisina. As metiltransferases de lisina são um grupo de enzimas que contem um domínio SET, o qual catalisa a adição de grupos metila em resíduos de lisina. Inicialmente, as metiltransferases de lisina foram identificadas como específicas para substratos de histonas, mas estudos posteriores mostraram que estas enzimas também metilam outras proteínas que não-histonas. A família SMYD de metiltransferases consiste no agrupamento de cinco proteínas que apresentam em sua estrutura ambos os domínios SET e MYND. Ainda que os membros desta família (SMYD1 a SMYD5) ainda não tenham sido completamente caracterizados, já foi descrito que expressões aberrantes de algumas destas proteínas estão ligadas à progressão tumoral de diversos tecidos como colorretal, fígado e mama. O SMYD5 foi recentemente descrito como fator importante na atividade inflamatória de macrófagos, mas seu papel na tumorigênese não foi investigado. Seguindo o perfil de outros membros da família SMYD, no presente trabalho investigamos uma possível relação do SMYD5 como o câncer de mama. Foi constatado que o SMYD5 está downregulado em todas as linhagens de células de câncer de mama estudadas. Ainda, obervamos que ele se encontra frequentemente hipoexpresso em amostras de câncer de mama. Entretanto, experimentos de knockdown ou superexpressão do SMYD5 não mostraram efeito significativo na proliferação celular in vitro. Revelamos que o SMYD5 está localizado em ambos núcleo e citoplasma e apresenta-se progressivamente menos presente em tecidos tumorais, quando comparado com tecido normal de mama. Os resultados sugerem uma forte ligação entre a baixa expressão do SMYD5 e o estado maligno da mama e o apontam como um potencial supressor tumoral no contexto mamário. Estudos posteriores ajudarão na compreensão dos mecanismos envolvidos na relação do SMYD5 com o câncer de mama. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is described as a disease triggered by genetic and epigenetic factors. Within epigenetic manifestations linked to carcinogenesis there are the post translational modifications that occur at histone tails. Several modification types may occur and several sites can be modified, amongst them there is the methylation at lysine residues. Lysine methyltransferases are a group of enzymes containing a SET domain, responsible for catalysing the addition of methyl groups at lysine residues. Early on, lysine methyltranferases were thought to be histone substrate specific, but further studies have shown these enzymes to be capable of methylating other non- histone proteins. The SMYD family of methyltransferases consists in five proteins that present both the SET and MYND domains within their structure. Even if members of this family (SMYD 1-5) are yet to be completely characterized, it has been described that aberrant expressions of some of these family members are linked to tumor progression in various tissues, such as colorectal, liver and breast. SMYD 5 has recently been described as an important factor in inflammatory activity mediated by macrophages, but its part in tumorigenesis had not been investigated thus far. Following the profile for other members of the SMYD family, in the present study a possible relation between SMYD5 and breast cancer has been sought. It was found that SMYD5 is downregulated in all breast cancer cell lines studied. In adition, it is also frequently hipoexpressed in clinical breast cancer samples. However, its knockdown or super expression has had no effect on in vitro cellular proliferation. We showed that SMYD5 is located in both the nucleus and cytoplasm and it is also progressive less present in carcinogenic tissues, if compared to regular breast tissue. The results suggest a strong link between SMYD5 low expression states and malignant breast and points it towards to a potential tumor suppressor role in breast context. Further studies will help in understanding the mechanisms involved in the relationship between SMYD5 and breast cancer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-03-14T10:55:33Z No. of bitstreams: 1 2012_DiegoJuscelinoSantosDias.pdf: 1894976 bytes, checksum: 7aecd85cf7d7607c1680b1c4e54c6cc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-03-15T11:57:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DiegoJuscelinoSantosDias.pdf: 1894976 bytes, checksum: 7aecd85cf7d7607c1680b1c4e54c6cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T11:57:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DiegoJuscelinoSantosDias.pdf: 1894976 bytes, checksum: 7aecd85cf7d7607c1680b1c4e54c6cc5 (MD5) / Sendo uma doença de alta incidência no mundo e no Brasil, o câncer de mama causa temor e morte entre as mulheres. Visando uma melhoria da qualidade de vida do paciente e uma maior eficiência dos tratamentos, há uma busca constante por novos medicamentos e formas para transporta-los até os tumores. Neste trabalho, através dos procedimentos de simples e de dupla emulsificação foram sintetizadas nanopartículas poliméricas biodegradáveis de ácido poli(D,L-láctico-co-glicólico) contendo o agente antitumoral clorambucil (CHB). Através do processo de nanoencapsulamento espera-se evitar a precipitação sistêmica do fármaco, efeitos adversos indesejados além de aumentar a seletividade e eficiência da quimioterapia. Após o preparo das nanopartículas, foram avaliados parâmetros físico-químicos, morfológicos e citotóxicos, onde se destacam as análises de: distribuição de tamanho, potencial zeta, perfil de liberação in vitro, eficiência de encapsulamento, análises térmicas diferencias e termogravimétricas simultâneas, análises espectroscópicas de absorção eletrônica na região UV-vis, no infravermelho com transformada de Fourier e de fluorescência do clorambucil e fluoresceína, em solução e quando encapsulados na matriz polimérica. As técnicas de microscopia eletrônica de varredura e de espalhamento dinâmico da luz mostraram que as partículas apresentam forma esférica, não porosa, com distribuição de tamanho entre 235,0 e 345,0 nm. As estruturas produzidas apresentaram baixa tendência a se agregarem devido ao valor de potencial zeta (entre -23,0 e -5,90 mV). A eficiência de encapsulamento foi de até 92,0%. A citotoxidade celular in vitro para células tumorais de mama (MCF-7) e para a linhagem de fibroblastos NIH-3T3 foi avaliada através de ensaios de viabilidade com MTT, sendo que, o sistema de liberação se apresentou mais eficiente do que o fármaco na forma livre em diversas concentrações para ambas as linhagens. Dessa forma, os sistemas de liberação produzidos apresentaram-se promissores DDS e poderão contribuir para o aumento da eficiência terapêutica, biodisponibilidade e redução de efeitos adversos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Being a high incidence of disease in the world and in Brazil, breast cancer causes fear and death among women. With an aim of improving the live quality of patients and greater efficiency of the treatments there is a constant search for new drugs and ways to transport them to the tumor cells. Through the procedures single and double emulsification followed by solvent evaporation were synthesized biodegradable polymeric nanoparticles of poly(D,L-lactic-o-glycolic) acid containing chlorambucil. This technique has been widely adopted to obtain particles containing hydrophobic drugs and its purpose is to prevent systemic precipitation of the drug, undesirable side effects, increase the selectivity and efficiency of chemotherapy. Were determined physicochemical parameters such as size, morphology and regularity of particles, zeta potential, in vitro release profile, encapsulation efficiency. simultaneous differential thermal and thermogravimetric analysis, differential scanning calorimetry, and electronic absorption spectra in the UV-vis region, FTIR spectroscopy and fluorescence of chlorambucil, fluorescein, polymeric matrix and nanoparticles containing these encapsulated compounds were obtained. Scanning electron microscopy which together with the technique of dynamic light scattering showed that the particles showed up spherical, non-porous, with homogeneous distribution in size and diameter up to 235.0-345.0 nm. The structures produced showed no tendency to aggregate due to their negative zeta potential (below -5.90 mV) and the encapsulation efficiency was up to 92.0%. The in vitro cell cytotoxicity to breast tumor cells (MCF-7) and the fibroblast line NIH-3T3 cells was evaluated by MTT viability assays, where the release system is made more effective than the free drug for both tumor and fibroblasts cells in several concentrations. Thus, the delivery systems manufactured as showed promising DDS which can contribute to increasing the therapeutic efficacy, bioavailability and reduced adverse effects of chlorambucil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-04-17T16:32:00Z No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-07T11:29:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-07T11:29:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Modificações epigenéticas estão relacionadas a padrões de expressão gênicas diferentes. A desregulação nos processos epigenéticos, incluindo metilação nas caudas de histona, tem sido associada à biologia das lesões cancerosas e seus resultados clínicos. Até agora, diversos genes codificadores de metiltransferases tem sido descritos e associados à carcinogênese mamária. Os genes codificadores de metiltransferases de lisina de histonas apresentam um domínio SET o qual é capaz de metilar resíduos de lisina nas caudas das histonas. A desregulação neste processo de metilação pode mudar a conformação da cromatina e permitir a transcrição de genes que agem na carcinogênese. Proteínas que contêm os domínios SET e MYND (SMYDs) constituem uma família de cinco proteínas altamente conservadas desde leveduras até vertebrados, e nem todas foram completamente caracterizadas. O gene SMYD4 humano está localizado no cromossomo 17 (17p13.3), em uma região que perde comumente a heterozigosidade em cânceres de mama. No presente estudo, investigou-se o perfil de expressão do gene SMYD4 em tumores de mama e seus tecidos não tumorais adjacentes, em sete diferentes linhagens celulares de câncer de mama e em treze diferentes tecidos humanos não cancerosos. Além disso, foram utilizadas células estáveis com SMYD4 superexpresso na investigação da localização subcelular de sua proteína e na análise da proliferação celular em consequência desta superexpressão. Ademais, analisou-se a consequência da inibição de expressão deste gene em linhagem celular de câncer de mama. Diante desses objetivos, descobriu-se que SMYD4 está frequentemente hipoexpresso em cânceres de mama, comparado às contrapartes não tumorais, e diminuídos em todas as linhagens celulares de câncer de mama. Interessantemente, há uma maior expressão nos tecidos mamários em comparação a todos os outros analisados. Além disso, observou-se maior proliferação em células com expressão do SMYD4 silenciada. Os resultados demonstram novos caminhos na elucidação do papel de SMYD4, evidenciando a importância de sua hipoexpressão na progressão do câncer de mama. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Epigenetic modifications are related to different gene expression patterns. Misregulation of epigenetic processes, including methylation in histone tails, has been associated to the biology of cancer and their clinical outcome. Up to date, several methyltransferase genes have been described to be involved in breast carcinogenesis. Histone lysine methyltransferase genes encode proteins containing a SET domain with the ability to methylate lysine residues in histone tails. Misregulation on this methylation process can change the chromatin conformation and allow transcription of genes that operate in carcinogenesis. SET and MYND domain proteins (SMYDs) are a family of five proteins highly conserved from yeast to vertebrates, which have not yet been fully characterized. Human SMYD4 gene is located at chromosome 17 (17p13.3) which is a region commonly exhibiting loss of heterozygosity in breast cancers. In the present study it was investigated the expression profile of SMYD4 in breast tumors and its adjacent non-tumor tissues, in seven different breast cancer cell lines and in thirteen human normal tissues. In addition it was used stable cell lines overexpressing SMYD4 to investigate its subcellular localization, as well as its impact on cellular growth behavior before SMYD4 overexpression. It was also analyzed the effects of SMYD4 inhibition on the proliferation of a breast cancer cell line. It was found that SMYD4 is frequently downregulated in breast cancers compared to its non-cancerous counter-parts and frequently decreased in all breast cancer cell lines. Interestingly, it showed a higher expression in breast tissues comparing to all normal tissues analyzed. In addition it was found an increased proliferation in cells with silenced expression of SMYD4. These results shed new lights on the role of SMYD4, evidencing the importance of its downregulation for breast cancer progression.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Convênio Rede Centro - Oeste (UnB, UFG, UFMS), 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-06-07T15:57:20Z No. of bitstreams: 1 2010_LuizFernandoJubeRibeiro.pdf: 1212987 bytes, checksum: b7a758acf5d2007ef8f76223130c3656 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2011-06-09T18:53:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_LuizFernandoJubeRibeiro.pdf: 1212987 bytes, checksum: b7a758acf5d2007ef8f76223130c3656 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-09T18:53:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_LuizFernandoJubeRibeiro.pdf: 1212987 bytes, checksum: b7a758acf5d2007ef8f76223130c3656 (MD5) / Introdução: A drenagem após linfadenectomia axilar reduz o número de punções evacuadoras para o seroma; não obstante, gera desconforto e ansiedade para a paciente. Objetivo: Avaliar a possibilidade de não se drenar a axila após linfadenectomia axilar em pacientes com câncer de mama. Métodos: Estudo randomizado incluindo 240 pacientes, portadoras de câncer de mama, submetidas à linfadenectomia axilar, alocadas em dois grupos: drenagem e não drenagem do leito operatório, como parte do tratamento de conservação mamária. Resultados: As características demográficas das pacientes foram semelhantes em ambos os grupos. Quanto às complicações, houve dois casos (2,4%) de deiscência no grupo com dreno, enquanto no grupo sem dreno, foram 13 (13,5%) casos (p=0,007, OR=3,70, IC95%= 1,31 – 13,59). As taxas de infecção, necrose e hematoma foram semelhantes entre os dois grupos. A mediana de volume aspirado foi de 0,00ml (0,00 – 270,00) no grupo drenado e de 522,50ml (130,00 – 1148,75) (p<0,001) no grupo sem dreno. A mediana de aspirações realizadas foi de 0,5 (0,0 – 4,0) e 5,0 (3,0 – 7,0), para os grupos de dreno e sem dreno, respectivamente (p<0,001). O volume de fluido seroso total foi semelhante nos dois grupos. Conclusão: É factível a realização da linfadenectomia sem a drenagem axilar, uma vez que a taxa de segurança (número total de pacientes sem complicações) foi similar nos dois grupos estudados, porém com possibilidade do aumento do número de punções evacuadoras e de deiscência da ferida operatória. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Drainage following axillary lymphadenectomy reduces the number of evacuating punctures for seroma. Nonetheless, it causes discomfort and anxiety for patients. Objective: To evaluate the possibility of not draining the axilla following axillary lymphadenectomy for breast cancer patients. Methods: This randomized study included 240 breast cancer patients who underwent axillary lymphadenectomy as part of the breast conservation treatment. They were divided between two groups: with or without drainage of the operative bed. Results: The patients’ demographic characteristics were similar in the two groups. Regarding complications, there were two cases (2.4%) of dehiscence in the group with drainage, while there were 13 cases (13.5%) in the group without drainage (p = 0.007, OR = 3.70, 95% CI = 1.31 – 13.59). The infection, necrosis and hematoma rates were similar between the two groups. The median aspirated volume was 0.00 ml (0.00 – 270.00) in the drained group and 522.50 ml (130.00 – 1148.75) (p < 0.001) in the group without drainage. The median number of aspirations performed as part of the breast conservation treatment was 0.5 (0.0 – 4.0) and 5.0 (3.0 – 7.0), for the groups with and without drainage, respectively (p < 0.001). The volume of serous fluid was similar in the two groups. Conclusion: It is feasible to perform lymphadenectomy without axillary drainage, since the safety rate (total number of patients without complications) was similar in the two groups studied; however a greater numbers of evacuating punctures and occurrences of dehiscence of the operative wound might be expected.

Orientadores: Marcelo Alvarenga, Cesar Cabello dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T14:34:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchessi_SusanaTrigo_M.pdf: 5977471 bytes, checksum: 691416790e0a9f01b1b82619e5b6e1f3 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: A correta avaliação da extensão local do câncer de mama é necessária para a escolha do tratamento local entre cirurgia conservadora e mastectomia. Objetivo: Avaliar se a ressonância magnética (RM) é um bom preditor do tamanho tumoral, multifocalidade e multicentricidade. Sujeitos e Métodos: Vinte mulheres com carcinoma mamário unilateral e unifocal, agendadas para mastectomia, realizaram RM. As medidas dos três diâmetros tumorais foram realizadas em milímetros e outros focos de captação do contraste foram avaliados. O resultado anatomopatológico da peça de mastectomia incluiu os três diâmetros tumorais em milímetros (mm) e descrição de outros focos tumorais, quando presentes. Resultados: Os três diâmetros do tumor foram avaliados e os índices de concordância entre o AP e a RM foram de 95% para o diâmetro longitudinal e 85% para os diâmetros anteroposterior e transversal. A sensibilidade e a especificidade da RM no diagnóstico de doença multifocal foi de 78% e 82%, no diagnóstico de doença multicêntrica foi de 81% e 100% e sua acurácia foi de 80% e 85%. O Índice Kappa em relação a multifocalidade e a multicentricidade foi de 0,6 e 0,63, respectivamente. Conclusão: A RM pode ser usada como método complementar para auxiliar o planejamento cirúrgico / Abstract: Introduction: Predicting the extent of local breast cancer is essential for making the choice between breast-conservation treatment and mastectomy. Aim: To determine whether preoperative breast magnetic resonance (MR) could predict size of index tumor, multifocality and multicentricity. Patients and methods: Twenty women with unilateral end unifocal breast cancer scheduled for mastectomy underwent breast MR. Measurements in the three diameters were taken in millimeters (mm) and other foci of contrast uptake were evaluated. The anatomopathologic (AP) result of the mastectomy specimen included measurements in the three diameters of the index tumor, taken in millimeters, and other foci of tumor. Results: The concordance index was calculated for each diameter and was 95% for longitudinal diameter and 85% for antero-posterior and transversal diameters. The MR sensitivity and specificity for multifocal disease was 78% and 82% and for multicentric disease was 81% and 100%, respectively. The Kappa index was 0,6 for multifocality and 0.63 for multicentricity. Conclusion: MR can be used as a complementary method for surgical planning / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia