Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alaor Aparecido Almeida / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Banca: Vera Maria Villamil Martins / Resumo: Dos tumores diagnosticados nas cadelas as neoplasias mamárias apresentam a maior incidência. Essas neoplasias podem ser influenciadas por fatores internos e externos como os contaminantes ambientais. Apesar das evidências da toxicidade dos piretróides, seu potencial cancerígeno ainda não foi suficientemente esclarecido, havendo a necessidade de investigação de sua participação no câncer de mama. Este estudo teve por objetivo investigar possíveis relações entre resíduos de piretróides e carcinoma de mama espontâneo de cadelas correlacionando-os com o grau de agressividade da neoplasia. Foram selecionadas 50 cadelas divididas em cinco grupos com 10 animais cada. O Grupo Controle foi formado por cadelas que apresentavam diagnóstico negativo para neoplasia em mama; os grupos Luminal A, Luminal B, Superexpressão de HER-2 e Basal foram formados por cadelas que apresentaram carcinoma em mama classificado pela imunoistoquimica como Luminal A, Luminal B, Superexpressão de HER-2 e Basal, respectivamente. O grau de agressividade dos carcinomas foi avaliado por imunoistoquímica mediante a expressão de HER-2, p63 e receptor de Estrógeno. A determinação da concentração de resíduos piretróides aletrina, cipermetrina, deltametrina e tetrametrina da mama e do tecido adiposo adjacente à mama foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. A intensidade de dano no DNA foi avaliada pelo Teste do Cometa. Das 50 cadelas, seis apresentaram resíduos de um ou mais piretróides nas amostras das mamas avaliadas e 10 apresentaram resíduos desse inseticida nas amostras de tecido adiposo. O piretróide mais frequente foi a deltametrina. A distribuição de cada resíduo investigado entre os grupos avaliados e entre as amostras de mama e de tecido adiposo em um mesmo animal foi heterogênea. Não há evidência estatística de que os piretróides estejam envolvidos na ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: From all tumors that are diagnosed in female dog, the mammary neoplasia is the one that has the highest incidence. This sort of neoplasia may be influenced by both internal and external factors. Good examples of external factors are the environment contaminants. In spite of knowing the evidences of pyrethroid toxicity, it is not sufficiently clarified yet its cancer potential, thus leaving room for further investigation regarding its participation in the mammary tumor formation. This study aims at investigating not only the possible relationships between pyrethroid residue and spontaneous mammary carcinoma in female dog, but also correlating the degree of aggressiveness of such neoplasia. 50 female dog were selected and divided into five groups containing 10 animals each. Control group contained female dog that presented negative results for mammary neoplasia; female dog that presented mammary carcinoma and were immunohistochemically diagnosed as Luminal A, Luminal B, HER-2 Super-expression and Basal, were divided into groups bearing their respective tumor name. Carcinoma aggressiveness degree was immunohistochemically assessed concerning its expression of HER-2, p63 and Estrogen receptor. In order to define pyrethroid residue concentration for alethrin, cypermethrin, deltamethrin, and tetramethrin on mammary and mammary adjacent adipose tissue it was performed High-Performance Liquid Chromatography. The intensity of DNA damage was assessed via Comet Assay. From the 50 female dog, six have presented residue of one or more pyrethroids in mammary samples, and 10 presented residue of this insecticide in adipose tissue samples. The most frequently found pyrethroid residue was deltamethrin. Residue distribution among groups, and both mammary and adipose tissue of the same individual presented heterogeneous results. There is no statistical evidence showing that pyrethroids may be involved in ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-13Bitstream added on 2014-06-13T20:22:03Z : No. of bitstreams: 1 colodel_mm_dr_botfmvz.pdf: 2872859 bytes, checksum: e38e46863de7b5075ae5aa7ad99cbf0f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dos tumores diagnosticados nas cadelas as neoplasias mamárias apresentam a maior incidência. Essas neoplasias podem ser influenciadas por fatores internos e externos como os contaminantes ambientais. Apesar das evidências da toxicidade dos piretróides, seu potencial cancerígeno ainda não foi suficientemente esclarecido, havendo a necessidade de investigação de sua participação no câncer de mama. Este estudo teve por objetivo investigar possíveis relações entre resíduos de piretróides e carcinoma de mama espontâneo de cadelas correlacionando-os com o grau de agressividade da neoplasia. Foram selecionadas 50 cadelas divididas em cinco grupos com 10 animais cada. O Grupo Controle foi formado por cadelas que apresentavam diagnóstico negativo para neoplasia em mama; os grupos Luminal A, Luminal B, Superexpressão de HER-2 e Basal foram formados por cadelas que apresentaram carcinoma em mama classificado pela imunoistoquimica como Luminal A, Luminal B, Superexpressão de HER-2 e Basal, respectivamente. O grau de agressividade dos carcinomas foi avaliado por imunoistoquímica mediante a expressão de HER-2, p63 e receptor de Estrógeno. A determinação da concentração de resíduos piretróides aletrina, cipermetrina, deltametrina e tetrametrina da mama e do tecido adiposo adjacente à mama foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. A intensidade de dano no DNA foi avaliada pelo Teste do Cometa. Das 50 cadelas, seis apresentaram resíduos de um ou mais piretróides nas amostras das mamas avaliadas e 10 apresentaram resíduos desse inseticida nas amostras de tecido adiposo. O piretróide mais frequente foi a deltametrina. A distribuição de cada resíduo investigado entre os grupos avaliados e entre as amostras de mama e de tecido adiposo em um mesmo animal foi heterogênea. Não há evidência estatística de que os piretróides estejam envolvidos na... / From all tumors that are diagnosed in female dog, the mammary neoplasia is the one that has the highest incidence. This sort of neoplasia may be influenced by both internal and external factors. Good examples of external factors are the environment contaminants. In spite of knowing the evidences of pyrethroid toxicity, it is not sufficiently clarified yet its cancer potential, thus leaving room for further investigation regarding its participation in the mammary tumor formation. This study aims at investigating not only the possible relationships between pyrethroid residue and spontaneous mammary carcinoma in female dog, but also correlating the degree of aggressiveness of such neoplasia. 50 female dog were selected and divided into five groups containing 10 animals each. Control group contained female dog that presented negative results for mammary neoplasia; female dog that presented mammary carcinoma and were immunohistochemically diagnosed as Luminal A, Luminal B, HER-2 Super-expression and Basal, were divided into groups bearing their respective tumor name. Carcinoma aggressiveness degree was immunohistochemically assessed concerning its expression of HER-2, p63 and Estrogen receptor. In order to define pyrethroid residue concentration for alethrin, cypermethrin, deltamethrin, and tetramethrin on mammary and mammary adjacent adipose tissue it was performed High-Performance Liquid Chromatography. The intensity of DNA damage was assessed via Comet Assay. From the 50 female dog, six have presented residue of one or more pyrethroids in mammary samples, and 10 presented residue of this insecticide in adipose tissue samples. The most frequently found pyrethroid residue was deltamethrin. Residue distribution among groups, and both mammary and adipose tissue of the same individual presented heterogeneous results. There is no statistical evidence showing that pyrethroids may be involved in ... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: Os tumores mamários da espécie canina prestam-se como modelos apropriados, e válidos, ao estudo da biologia do câncer. O estudo de marcadores prognósticos e preditivos no câncer tem se mostrado efetivo na pesquisa e rotina diagnóstica. Dentre esses marcadores, destacam-se os envolvidos no estresse oxidativo e alterações na capacidade antioxidante celular, que desempenham papel fundamental na patogênese do câncer. A glutationa (GSH) é um dos agentes mais importantes do sistema de defesa antioxidante da célula, pois em conjugação com as enzimas glutationa peroxidase (GSH-Px) e glutationa S transferase pi (GSTpi) desempenha um papel central na biotransformação e detoxificação de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da proteína GSH e das enzimas GSTpi e GSH-Px por imunohistoquímica em tumores de mama em cadelas, a fim de inferir o seu valor prognóstico, e validar por análise molecular, verificando a resistência das células neoplásicas ao quimioterápico, bem como o nível de estresse oxidativo avaliado bioquimicamente pelo malondialdeído (MDA), e a avaliação da atividade antioxidante total em equivalência ao Trolox (TEAC) . As proteínas foram detectadas no tecido tumoral de 30 cadelas por imunohistoquímica e quantificadas pela técnica de densitometria óptica. As médias relacionadas à expressão das proteínas foram estatisticamente comparadas com as características clínico-patológicas das cadelas. A expressão dos genes glutamato cisteina ligase (GCLC) e glutationa sintetase (GSS) que sintetizam a GSH e do gene GSH-Px foi verificada por qPCR em células neoplásicas de mama cultivadas e submetidas ao tratamento com doxorrubicina. A dosagem sérica do MDA e TEAC foi realizada em cadelas no momento da cirurgia, um, seis e 18 meses após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mammary tumors of canine species lend themselves as models appropriate, and valid, to study of cancer biology. The study of prognostic and predictive markers in cancer have been proven effective in research and diagnostic routine. Among these markers include those involved in oxidative stress and changes in antioxidant capacity, which play a fundamental role in the pathogenesis of cancer. Glutathione (GSH) is one of the most important agents of the antioxidant defense system of the cell because in conjunction with glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione S transferase pi (GSTpi) plays a central role in the biotransformation and detoxification of drugs chemotherapy. The objective of this study was to evaluate the protein expression of GSH and the enzymes GSH-Px and GSTpi by immunohistochemistry in breast tumors of dogs in order to infer its prognostic value, and prospective study to evaluate them by molecular analysis, verifying the resistance of cancer cells to chemotherapy, as well as the level of oxidative stress assessed biochemically by malondealdehyde (MDA), and the evaluating the total antioxidant activity equivalent to Trolox (TEAC). The proteins were detected in tumor tissue of 30 female dogs by immunohistochemistry and quantified by optical densitometry technique. The mean expression of related proteins were statistically compared with the clinical- pathologic of the bitches. The expression of genes glutamate cysteine ligase (GCLC) and glutathione synthetase (GSS) that synthesize GSH and of GSH-Px gene was verified by qPCR in breast cancer cells grown and subjected to treatment with doxorubicin. The serum dosage of MDA and TEAC was performed in betches at the time of surgery, one, 6 and 18 months after surgery and compared with dogs in the control group. The results showed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A indoleamina - 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta se baseia no catabolismo do triptofano, cuja depleção induz uma interrupção do ciclo celular em linfócitos T, tornando-os mais sensíveis a apoptose aliado à ação de metabólitos provenientes desta reação os derivados da quinurenina que potencializariam a atividade da IDO. A presença e ativação de IDO em alguns tipos tumorais representam um dos mecanismos pelo qual as células tumorais podem se evadir do sistema imune, facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil epidemiológico e anatomopatológico de 21 animais portadores de neoplasias mamárias, além de verificar, pelas técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo, o número de células neoplásicas e inflamatórias que expressam IDO em cultivo celular na presença de fatores como seu substrato L- triptofano e seu inibidor competitivo 1-metil-DL-triptofano (1MT). As neoplasias malignas corresponderam a 86% dos casos e o principal diagnóstico histopatológico encontrado foi o carcinoma simples. No que concerne à idade, todos os animais apresentaram idade média igual a 10,3 ± 3,3 anos. Na análise imuno-histoquímica os resultados mostraram que todas as amostras apresentaram imunomarcação citoplasmática para IDO confinado principalmente nas células localizadas nos ductos mamários. Os resultados in vitro indicam que, após 24 horas, o grupo suplementado com L - triptofano apresentou aumento significativo da expressão de IDO nas células de carcinoma simples (49,5 ± 2,5 ) ( p ≤ 0,01 ), enquanto o grupo tratado 1 metil DL- triptofano exibiu uma diminuição significativa na expressão de IDO ( 33,8 ± 4,0) ( p ≤ 0,01). Os macrófagos e células dendríticas na área tumoral também expressaram IDO e foram susceptíveis ao efeito de 1MT. Atualmente, na medicina veterinária procura de novas estratégias e compostos para a modulação da resposta antitumoral em pequenos animais e o 1 - metil - DL - triptofano representaria um candidato potencial para uma abordagem complementar no tratamento de neoplasias mamárias / The indoleamine - 2, 3 - dioxygenase (IDO) is an enzyme expressed on many cells and among its functions acts mainly in regulation of the immune system. It relies on the tryptophan catabolism, whose depletion induces cell cycle arrest of T lymphocytes turning these cells more sensitive to apoptosis, in addition to some down-stream tryptophan-derived metabolites that would increase IDO activity. The presence and activation of IDO in some tumor types represents a mechanism by which tumor cells can evade the immune system, thus facilitating the induction and progression of tumor growth. Our aim was to evaluate 21 animals with mammary tumors and to verify, by immunohistochemistry and flow cytometry, whether these cells express IDO, and to quantify its in vitro expression on neoplastic cells under influence of IDO substrate tryptophan and IDO competitive inhibitor 1-methyl-DL-tryptophan. Malignant neoplasms accounted for 86% of the cases and the most common diagnosis was carcinoma simple. All animals were adult females, with mean age of 10.3 ±.3 years. Immunohistochemistry results showed that all samples presented cytoplasmic immunostaining for IDO confined mainly in cells located in the mammary ducts. In vitro results indicate that, after 24 hours, the group supplemented with L - tryptophan showed significant increased expression of IDO in carcinoma cells (49.5 ± 2.5) (p ≤ 0.05), while the 1MT treated group displayed an significant decreased on IDO expression (33.8 ± 4.0) (p ≤ 0.05). Macrophages and dendritic cells at the tumour site also expressed IDO and were susceptible to the effect of 1MT. Currently, veterinary medicine seeks new strategies and compounds for modulating the antitumor response in small animals and 1-methyl DLtryptophan would represent a potential candidate as a complementary approach for the treatment of mammary neoplasms

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-08Bitstream added on 2014-06-13T20:54:03Z : No. of bitstreams: 1 silva_cl_me_sjrp.pdf: 1181592 bytes, checksum: 04dbaddabd010ef67a9783ca97045cdc (MD5) / Os tumores mamários da espécie canina prestam-se como modelos apropriados, e válidos, ao estudo da biologia do câncer. O estudo de marcadores prognósticos e preditivos no câncer tem se mostrado efetivo na pesquisa e rotina diagnóstica. Dentre esses marcadores, destacam-se os envolvidos no estresse oxidativo e alterações na capacidade antioxidante celular, que desempenham papel fundamental na patogênese do câncer. A glutationa (GSH) é um dos agentes mais importantes do sistema de defesa antioxidante da célula, pois em conjugação com as enzimas glutationa peroxidase (GSH-Px) e glutationa S transferase pi (GSTpi) desempenha um papel central na biotransformação e detoxificação de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da proteína GSH e das enzimas GSTpi e GSH-Px por imunohistoquímica em tumores de mama em cadelas, a fim de inferir o seu valor prognóstico, e validar por análise molecular, verificando a resistência das células neoplásicas ao quimioterápico, bem como o nível de estresse oxidativo avaliado bioquimicamente pelo malondialdeído (MDA), e a avaliação da atividade antioxidante total em equivalência ao Trolox (TEAC) . As proteínas foram detectadas no tecido tumoral de 30 cadelas por imunohistoquímica e quantificadas pela técnica de densitometria óptica. As médias relacionadas à expressão das proteínas foram estatisticamente comparadas com as características clínico-patológicas das cadelas. A expressão dos genes glutamato cisteina ligase (GCLC) e glutationa sintetase (GSS) que sintetizam a GSH e do gene GSH-Px foi verificada por qPCR em células neoplásicas de mama cultivadas e submetidas ao tratamento com doxorrubicina. A dosagem sérica do MDA e TEAC foi realizada em cadelas no momento da cirurgia, um, seis e 18 meses após... / The mammary tumors of canine species lend themselves as models appropriate, and valid, to study of cancer biology. The study of prognostic and predictive markers in cancer have been proven effective in research and diagnostic routine. Among these markers include those involved in oxidative stress and changes in antioxidant capacity, which play a fundamental role in the pathogenesis of cancer. Glutathione (GSH) is one of the most important agents of the antioxidant defense system of the cell because in conjunction with glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione S transferase pi (GSTpi) plays a central role in the biotransformation and detoxification of drugs chemotherapy. The objective of this study was to evaluate the protein expression of GSH and the enzymes GSH-Px and GSTpi by immunohistochemistry in breast tumors of dogs in order to infer its prognostic value, and prospective study to evaluate them by molecular analysis, verifying the resistance of cancer cells to chemotherapy, as well as the level of oxidative stress assessed biochemically by malondealdehyde (MDA), and the evaluating the total antioxidant activity equivalent to Trolox (TEAC). The proteins were detected in tumor tissue of 30 female dogs by immunohistochemistry and quantified by optical densitometry technique. The mean expression of related proteins were statistically compared with the clinical- pathologic of the bitches. The expression of genes glutamate cysteine ligase (GCLC) and glutathione synthetase (GSS) that synthesize GSH and of GSH-Px gene was verified by qPCR in breast cancer cells grown and subjected to treatment with doxorubicin. The serum dosage of MDA and TEAC was performed in betches at the time of surgery, one, 6 and 18 months after surgery and compared with dogs in the control group. The results showed... (Complete abstract click electronic access below)

A indoleamina - 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta se baseia no catabolismo do triptofano, cuja depleção induz uma interrupção do ciclo celular em linfócitos T, tornando-os mais sensíveis a apoptose aliado à ação de metabólitos provenientes desta reação os derivados da quinurenina que potencializariam a atividade da IDO. A presença e ativação de IDO em alguns tipos tumorais representam um dos mecanismos pelo qual as células tumorais podem se evadir do sistema imune, facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil epidemiológico e anatomopatológico de 21 animais portadores de neoplasias mamárias, além de verificar, pelas técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo, o número de células neoplásicas e inflamatórias que expressam IDO em cultivo celular na presença de fatores como seu substrato L- triptofano e seu inibidor competitivo 1-metil-DL-triptofano (1MT). As neoplasias malignas corresponderam a 86% dos casos e o principal diagnóstico histopatológico encontrado foi o carcinoma simples. No que concerne à idade, todos os animais apresentaram idade média igual a 10,3 ± 3,3 anos. Na análise imuno-histoquímica os resultados mostraram que todas as amostras apresentaram imunomarcação citoplasmática para IDO confinado principalmente nas células localizadas nos ductos mamários. Os resultados in vitro indicam que, após 24 horas, o grupo suplementado com L - triptofano apresentou aumento significativo da expressão de IDO nas células de carcinoma simples (49,5 ± 2,5 ) ( p ≤ 0,01 ), enquanto o grupo tratado 1 metil DL- triptofano exibiu uma diminuição significativa na expressão de IDO ( 33,8 ± 4,0) ( p ≤ 0,01). Os macrófagos e células dendríticas na área tumoral também expressaram IDO e foram susceptíveis ao efeito de 1MT. Atualmente, na medicina veterinária procura de novas estratégias e compostos para a modulação da resposta antitumoral em pequenos animais e o 1 - metil - DL - triptofano representaria um candidato potencial para uma abordagem complementar no tratamento de neoplasias mamárias / The indoleamine - 2, 3 - dioxygenase (IDO) is an enzyme expressed on many cells and among its functions acts mainly in regulation of the immune system. It relies on the tryptophan catabolism, whose depletion induces cell cycle arrest of T lymphocytes turning these cells more sensitive to apoptosis, in addition to some down-stream tryptophan-derived metabolites that would increase IDO activity. The presence and activation of IDO in some tumor types represents a mechanism by which tumor cells can evade the immune system, thus facilitating the induction and progression of tumor growth. Our aim was to evaluate 21 animals with mammary tumors and to verify, by immunohistochemistry and flow cytometry, whether these cells express IDO, and to quantify its in vitro expression on neoplastic cells under influence of IDO substrate tryptophan and IDO competitive inhibitor 1-methyl-DL-tryptophan. Malignant neoplasms accounted for 86% of the cases and the most common diagnosis was carcinoma simple. All animals were adult females, with mean age of 10.3 ±.3 years. Immunohistochemistry results showed that all samples presented cytoplasmic immunostaining for IDO confined mainly in cells located in the mammary ducts. In vitro results indicate that, after 24 hours, the group supplemented with L - tryptophan showed significant increased expression of IDO in carcinoma cells (49.5 ± 2.5) (p ≤ 0.05), while the 1MT treated group displayed an significant decreased on IDO expression (33.8 ± 4.0) (p ≤ 0.05). Macrophages and dendritic cells at the tumour site also expressed IDO and were susceptible to the effect of 1MT. Currently, veterinary medicine seeks new strategies and compounds for modulating the antitumor response in small animals and 1-methyl DLtryptophan would represent a potential candidate as a complementary approach for the treatment of mammary neoplasms

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-30T11:41:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Vilma Ferreira de Oliveira - 2014.pdf: 1400510 bytes, checksum: 4e1a043e0e504c7215955ca226053318 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-30T14:40:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Vilma Ferreira de Oliveira - 2014.pdf: 1400510 bytes, checksum: 4e1a043e0e504c7215955ca226053318 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T14:40:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Vilma Ferreira de Oliveira - 2014.pdf: 1400510 bytes, checksum: 4e1a043e0e504c7215955ca226053318 (MD5) Previous issue date: 2014-09-15 / (Sem resumo em outra língua) / (Sem resumo)

A amplificação gênica mais freqüente em câncer de mama é a do oncogene ERBB-2, observada em aproximadamente 30% dos tumores de mama e que está relacionada com menor intervalo livre de doença e sobrevida total das pacientes com câncer de mama. O ERBB-2 ativa importantes vias de sinalização celular, incluindo as vias MAPK e PI3K. Utilizando PCR em tempo real analisou-se o efeito do EGF e da HRG na regulação da expressão dos genes ANP32B, MATR3, ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, TPM1 e CENPH, nas células HB4a, C5.2 e SKBr3, que expressam diferentes níveis de ERBB2. Avaliou-se também o perfil de expressão destes transcritos após a supressão do ERBB2 pela técnica de siRNA nas células C5.2. O tratamento com EGF modulou de forma diferente a expressão dos genes estudados nas células HB4a, C5.2 e SKBr3. Nas células HB4a e SKBr3 a HRG também regulou a expressão dos genes acima. Após a transfecção das células C5.2 com siERBB2 houve alteração na expressão dos genes ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, MATR3, CENPH e TPM1. / The more frequent genic amplification observed in breast cancer is that of the ERBB2 oncogene, which occurs in approximately 30% of the breast cancers, and is associated with lower disease-free interval and survival of all patients with breast cancer. The ERBB-2 protein activates important cell signaling pathways such as MAPK and PI3K. Using real time PCR, it was investigated the effect of EGF and HRG on ANP32B, MATR3, ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, TPM1 and CENPH transcripts regulation in the HB4a, C5.2 and SKBr3 cell, that express different levels of ERBB2. It was also evaluated the expression profile of these transcripts in the C5.2 cell line after the suppression of ERBB2 expression by the siRNA technique. The treatments with EGF modulate differently the expression of the analysed transcripts in HB4a, C5.2 and SKBr3 cells. In HB4a and SKBr3 cells the treatments with HRG also modulate the expression of the transcripts above. The C5.2 cells transfected with siERBB2 showed alteration in the expression of ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, MATR3, CENPH and TPM1 transcripts.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao HUGO CAB.pdf: 2501194 bytes, checksum: 09df95fb673afe9494354f6ab1e4d5bd (MD5) Previous issue date: 2012-08-03 / In bitchs, mammary glands are the most common sites for the occurrence of neoplasms. To evaluate the biological behavior of these lesions is routinely employ descriptive histological methods that, combined with histological grading, help predict prognosis of these diseases. The imbalance between the amount of tissue matrix metalloproteinases (MMPs), proteolytic enzymes involved in physiological and pathological processes, and their inhibitors (TIMP), plays an important role in development and tumor invasion. To evaluate the biological behavior of some common types of breast tumor bitches this research was divided in two steps. The first one was correlating histological classification and degree of mammary neoplasms in bitches, and to correlating the degree of malignancy and tumor size. For this, 119 samples were evaluated in canine mammary tumors, all tumors were considered disorders of the growth of canine mammary gland, including neoplastic (benign and malignant) and non-neoplastic (hyperplastic changes). All tumors were classified and only the malignant were graded histologically and correlated with tumor size. It was concluded that the complex carcinoma is the most common cancer histological type and which has the lowest histological grade compared to other malignant tumor types. Further, neoplasms larger than five centimeters were predominantly malignant (92,3% or 12/13) and no correlation was observed between tumor size and histologic grade. The relation between histological classification and graduation helped in microscopic description of malignant mammary tumors in bitches. The second step was to evaluate the expression of MMP-9, MMP-2 TIMP-1 and TIMP-2 in normal and neoplastic canine mammary tissue. For this purpose it was selected 48 samples of canine mammary tissue, 14 complex carcinomas (CC), 13 tubulopapillary carcinoma (TC), six simple mammary adenoma (MA) and 15 normal breast (MN), and submitted to technical immunohistochemistry for the evaluation of the intensity staining and the number of epithelial and stromal cells selected. Differences were observed in the expression of MMP-9 and TIMP-1 and TIMP-2 according to the mammary histomorphology. The MMP-9 showed higher expression in epithelial and stromal cells of the CC and CT compared to MN. It was found a lower expression of TIMP-1 in stromal cells of the CC and overexpression of TIMP-2 in epithelial cells of the CT. Also a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 and the intensity staining and number of epithelial and stromal cells marked in MN and between MMP-9 and TIMP-2 on TC neoplastic epithelial cells. It was concluded that there is variation between expression of MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 among the tumor types, and a positive correlation between TIMP-1 and MMP-9 in normal mammary gland and between MMP-9 and TIMP-2 in tubulopapilar carcinoma. The balanced expression of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 is essential for the homeostasis of canine normal mammary gland, while the overexpression of MMP-9 and TIMP-2, and the reduced expression of TIMP-1 in carcinomas represents an appropriate condition to the tumor development. / Nas fêmeas caninas, as glândulas mamárias são os locais mais comuns para a ocorrência de neoplasias. Para avaliar o comportamento biológico dessas lesões empregam-se rotineiramente métodos histológicos descritivos que, associados à graduação histológica, auxiliam na predição prognóstica dessas enfermidades. Ainda, o desequilíbrio entre a quantidade tissular de metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas implicadas em processos fisiológicos e patológicos, e seus inibidores (TIMP), desempenha papel importante na evolução e invasão tumoral. Para avaliar o comportamento biológico de alguns tipos tumorais frequentes da mama das cadelas esta pesquisa foi dividida em duas etapas. A primeira teve como objetivo relacionar a classificação e a graduação histológicas das neoplasias mamárias de cadelas, bem como correlacionar a graduação dos tumores malignos com o tamanho tumoral. Para isso, avaliaram-se 119 amostras de tumores mamários caninos, sendo considerados tumores todos os distúrbios do crescimento da glândula mamária canina, incluindo os neoplásicos (benignos e malignos) e os não neoplásicos (alterações hiperplásicas). Todos os tumores foram classificados e apenas os malignos graduados histologicamente e correlacionados ao tamanho tumoral. Concluiu-se que o carcinoma complexo é o tipo histológico mais comum e que possui menor grau histológico em relação aos demais tipos tumorais de classificação maligna. Ainda, neoplasias maiores que cinco centímetros foram predominantemente malignas (92,3% ou 12/13) e não foi observada correlação entre tamanho tumoral e grau histológico. A relação entre a classificação e a graduação histológica compreendeu instrumento auxiliar na descrição microscópica dos tumores mamários malignos das cadelas. A segunda etapa teve como objetivo avaliar a expressão de MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 no tecido mamário canino normal e neoplásico. Para isso, foram selecionadas 48 amostras de glândula mamária canina, sendo 14 de carcinoma complexo (CC), 13 de carcinoma tubulopapilar (CT), seis de adenoma mamário simples (AM) e 15 de mama normal (MN), submetidas à técnica de imuno-histoquímica para a avaliação da intensidade de marcação e do número de células epiteliais e estromais marcadas. Houve diferença na expressão de MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária. A MMP-9 apresentou maior expressão nas células epiteliais e estromais dos CC e CT em relação às MN. Constatou-se menor expressão de TIMP-1 nas células estromais do CC e superexpressão de TIMP-2 nas células epiteliais do CT. Ainda, houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 quanto a intensidade de marcação e número de células epiteliais e estromais marcadas na MN, e entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais neoplásicas do CT. Concluiu-se que há variação na expressão da MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 entre os tipos tumorais, além de correlação positiva entre TIMP-1 e MMP-9 nas mamas normais e entre MMP-9 e TIMP-2 no carcinoma tubulopapilar. A atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 é fundamental à homeostase da glândula mamária canina normal enquanto a superexpressão de MMP-9 e TIMP-2, e a expressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas pode representar condição adequada à evolução tumoral.

A amplificação gênica mais freqüente em câncer de mama é a do oncogene ERBB-2, observada em aproximadamente 30% dos tumores de mama e que está relacionada com menor intervalo livre de doença e sobrevida total das pacientes com câncer de mama. O ERBB-2 ativa importantes vias de sinalização celular, incluindo as vias MAPK e PI3K. Utilizando PCR em tempo real analisou-se o efeito do EGF e da HRG na regulação da expressão dos genes ANP32B, MATR3, ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, TPM1 e CENPH, nas células HB4a, C5.2 e SKBr3, que expressam diferentes níveis de ERBB2. Avaliou-se também o perfil de expressão destes transcritos após a supressão do ERBB2 pela técnica de siRNA nas células C5.2. O tratamento com EGF modulou de forma diferente a expressão dos genes estudados nas células HB4a, C5.2 e SKBr3. Nas células HB4a e SKBr3 a HRG também regulou a expressão dos genes acima. Após a transfecção das células C5.2 com siERBB2 houve alteração na expressão dos genes ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, MATR3, CENPH e TPM1. / The more frequent genic amplification observed in breast cancer is that of the ERBB2 oncogene, which occurs in approximately 30% of the breast cancers, and is associated with lower disease-free interval and survival of all patients with breast cancer. The ERBB-2 protein activates important cell signaling pathways such as MAPK and PI3K. Using real time PCR, it was investigated the effect of EGF and HRG on ANP32B, MATR3, ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, TPM1 and CENPH transcripts regulation in the HB4a, C5.2 and SKBr3 cell, that express different levels of ERBB2. It was also evaluated the expression profile of these transcripts in the C5.2 cell line after the suppression of ERBB2 expression by the siRNA technique. The treatments with EGF modulate differently the expression of the analysed transcripts in HB4a, C5.2 and SKBr3 cells. In HB4a and SKBr3 cells the treatments with HRG also modulate the expression of the transcripts above. The C5.2 cells transfected with siERBB2 showed alteration in the expression of ATAD4, NDRG1, ACTN1, SPARC, MATR3, CENPH and TPM1 transcripts.