O câncer de mama é a principal causa de mortalidade por câncer entre as mulheres. Alguns biomarcadores e características clínicas são utilizados para avaliar o prognóstico e prever a resposta a uma série de abordagens terapêuticas. A Homocisteína é conhecida como um fator de risco para doença vascular aterosclerótica, mas sua participação na biologia do câncer ainda é incerta. Cisteína é o aminoácido sulfurado derivado da Homocisteína no ciclo da Metionina. Este ciclo metabólico origina as bases nitrogenadas e também determina o nível de metilação da molécula de DNA. É atualmente reconhecido que a hipometilação global do genoma é um evento chave na transformação maligna das células. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis séricos de homocisteína e cisteína como biomarcadores de sobrevida e de progressão da doença em câncer de mama. Também foi avaliado o efeito de um curso de curta duração (um mês) de tratamento hormonal sobre os níveis de Homocisteína, Cisteína e metilação do DNA. Amostras de sangue foram obtidos por ocasião da biópsia inicial (pré-tratamento) em todas as pacientes e, de tumor e de tecido normal adjacente, ao diagnóstico eem um mês após, para as pacientes que receberam o regime hormonal neo-adjuvante (pré-operatório). Todas as pacientes eram mulheres na pós-menopausa, com tumores de mama ressecáveis, acompanhadas em dois hospitais públicos, que consentiram em participar de outros dois protocolos de pesquisa prévios. Homocisteína e Cisteína foram analisadas por HPLC e a metilação global do DNA do tecido foi determinada por meio da técnica de MSRE (Methylation-Sensitive Restriction Enzyme). Foi observada uma diferença significativa entre os níveis pré e póstratamento de Homocisteína e Cisteína em tumores avançados, sugerindo um papel prognóstico em pacientes com características clínicas reservadas. As variações nos níveis de Homocisteína se mostraram significativamente correlacionadas com a sobrevida livre de doença. O modelo de risco proporcional de Cox demonstrou que os níveis de homocisteína e o status dos linfonodos representaram fatores prognósticos independentes em termos de sobrevida livre de doença. Embora mais estudos sejam necessários para confirmar estes resultados, nossa pesquisa sugere que a Homocisteína pode ser usada como um biomarcador de prognóstico para câncer de mama / Breast cancer is the leading cause of cancer mortality among women. Some biomarkers and clinical features are used to evaluate prognosis and to predict response to a range of therapeutic approaches. Homocysteine is well known as a risk factor in atherosclerotic vascular diseases, but its participation in cancer biology is still unclear. Cysteine is a sulfur amino acid derived from Homocysteine in the Methionine cycle. This metabolic cycle originates the nitrogenous bases and determines the methylation level of the DNA molecule as well. It is currently recognized that the global hipomethylation of the genome is a key event in the malign transformation of cells. The aim of this study was to evaluate serum Homocysteine and Cysteine as biomarkers of survival and disease progression in breast tumor, as well as the methylation status of tumor and normal tissues. The effect of a short course (one month) of hormonal treatment on Homocysteine, Cysteine and DNA methylation levels was also evaluated. Blood samples were collected during the initial biopsy (pretreatment) in all patients and, tumor samples and normal adjacent tissue, at diagnosis and one month after, for the patients that received neo-adjuvant hormonal regimen (pre-treatment). All patients were post-menopausal women, with resectable breast tumors, followed at two public hospitals, and that had consented to participate in two previous research protocols related to their disease. Serum Homocysteine and Cysteine were analyzed by HPLC and tissue global DNA methylation was determined by the MSRE (Methylation- Sensitive Restriction Enzyme) technique. A significant difference was observed between pre- and post-treatment levels of Homocysteine and Cysteine in advanced tumors, suggesting a prognostic role in patients with poor clinical characteristics. Variations in Homocysteine levels were significantly correlated with disease free survival. Cox proportional risk model demonstrated that nodal status and Homocysteine levels were independent prognostic factors for Disease Free Survival. Although more studies are needed to confirm these results, our research suggests that Homocysteine might be used as a prognostic biomarker for breast cancer

Introdução: O câncer de mama é, em sua essência, uma doença genética. O acúmulo de alterações moleculares no genoma das células somáticas é a base para a progressão do câncer. Além de ter biologia natural mais favorável, os tumores com alta expressão de receptores de estrogênio têm terapia-alvo bem estabelecida. Apesar disso, as pacientes podem apresentar resistência medicamentosa, recidiva e óbito. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. Se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) com receptores hormonais positivos e HER-2 negativo (luminal A). MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de 33 pacientes com tumores luminal A, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Analisaram-se dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, estado menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, estado linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67. Para a análise estatística utilizou-se o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que emprega o método de quantificação relativa ??Ct. RESULTADOS: A análise comparativa dos 33 casos de CDI luminal A com os 15 casos de parênquima mamário normal revelou haver microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) e. miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Apontou, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = --6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) e let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSÕES: CDI luminal A apresentou hiperexpressão de miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p e miR-7-5p. Apontou, ainda, hipoexpressão do miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, permitindo diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: Breast cancer is a genetic disease and the accumulation of molecular alterations in the genome of somatic cells is the basis for cancer progression. Besides having a more favorable natural biology, tumors with high expression of estrogen receptor have a well established targeted therapy. Nevertheless, patients may present with resistance and eventually relapse and death. MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in positive hormonal receptors, negative HER 2 (luminal A) invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 33 patients with luminal A IDC, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, were evaluated. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification ??Ct, was used. RESULTS: A comparative analysis of 33 cases of luminal A IDC with 15 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) and miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows:. miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = -6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) and let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSION: Luminal A CDI breast cancer has shown overexpression of miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p and miR-7-5p. Also has shown,downregulation of miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, allowing differentiating it from normal tissue

INTRODUÇÃO: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. A depender se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, eles podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. A imunoistoquímica triplo negativa, no câncer de mama, é, comumente, utilizada como substituto clínico para identificação dos tumores basaloides, que se caracterizam pela expressão de genes epiteliais basais, sendo associados a menores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. O câncer de mama triplo negativo faz com que seja necessária a descoberta de marcadores moleculares que possam servir de alvos terapêuticos ou, pelo menos, que sirvam como marcadores preditivos da resposta aos quimioterápicos. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) triplo negativo. MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de tumor de 31 pacientes com as seguintes características: carcinoma invasivo de mama, receptores de estrogênio e de progesterona negativos e HER 2 negativo, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Foram avaliados dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, status menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, status linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67, EFGR e CK 5/6. O seguimento das pacientes buscou verificar a ocorrência e o tempo de aparecimento de recidiva loco regional, metástase à distância e óbito. Para análise estatística foi utilizado o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que utiliza o método de quantificação relativa DeltaCt. RESULTADOS: A análise comparativa dos 31 casos de CDI triplo negativo com os 18 casos de parênquima mamário normal definiu microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation(FR) = 9,68, p = 0,000008), miR-21-5p (FR = 4,47, p = 0,00), miR-7-5p (FR = 5,8, p = 0,00137) , miR-182-5p (FR= 7,92, p = 0,000001), miR-210-3p (FR = 11,83, p = 0,000048), miR-18a-5p (FR = 9,51, p = 0,000034), miR-155-5p (FR= 4,40 , p = 0,00019) e miR-93-5p (FR= 4,15, p = 0,000023). Aponta, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (FR = -10,26, p = 0), miR-205-5p (FR= -4,07, p = 0,019822), miR-125b-5p (FR= -4,29, p=0) e let 7c-5p (FR= -4,91, p=0). CONCLUSÃO: a expressão de microRNAs no carcinoma ductal invasivo triplo negativo permite diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. The triple negative immunohistochemistry in breast cancer is commonly used as a substitute for clinical identification of basaloid tumors, which are characterized by the expression of basal epithelial genes and are associated with lower rates of disease-free survival and overall survival. The triple negative breast cancer makes necessary the discovery of molecular markers that may serve as therapeutic targets or at least as predictive markers of response to chemotherapy. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in triple negative breast invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 31 patients with the following characteristics were evaluated: invasive breast carcinoma, negative estrogen and progesterone receptor, negative HER 2, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, EFGR and CK 5/6 were evaluated. The follow-up of patients aimed to verify the occurrence and time of appearance of loco regional recurrence, distant metastasis and death. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification DeltaCt, was used. RESULTS: A comparative analysis of 31 cases of triple negative IDC with 18 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation (FR) = 9.68, p = 0.000008), miR -21-5p (FR = 4.47, p = 0.00), 5p, miR-7 (FR = 5.8, p = 0.00137), miR-182-5p (FR = 7.92, p = 0.000001), miR-210-3p (FR = 11.83, p = 0.000048), miR-18a-5p (FR = 9.51, p = 0.000034), miR-155-5p (FR = 4.40, p = 0.00019) and miR-93-5p (FR = 4.15, p = 0.000023). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows: miR-204-5p (FR = -10.26, p = 0), miR-205-5p (FR = -4.07, p = 0.019822), miR -125b-5p (FR = -4.29, p = 0) and Let-7c 5p (FR = -4.91, p = 0). CONCLUSION: the expression of microRNAs in triple negative invasive ductal carcinoma allows to differentiate it from normal tissue

INTRODUÇÃO: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. A depender se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, eles podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. A imunoistoquímica triplo negativa, no câncer de mama, é, comumente, utilizada como substituto clínico para identificação dos tumores basaloides, que se caracterizam pela expressão de genes epiteliais basais, sendo associados a menores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. O câncer de mama triplo negativo faz com que seja necessária a descoberta de marcadores moleculares que possam servir de alvos terapêuticos ou, pelo menos, que sirvam como marcadores preditivos da resposta aos quimioterápicos. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) triplo negativo. MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de tumor de 31 pacientes com as seguintes características: carcinoma invasivo de mama, receptores de estrogênio e de progesterona negativos e HER 2 negativo, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Foram avaliados dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, status menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, status linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67, EFGR e CK 5/6. O seguimento das pacientes buscou verificar a ocorrência e o tempo de aparecimento de recidiva loco regional, metástase à distância e óbito. Para análise estatística foi utilizado o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que utiliza o método de quantificação relativa DeltaCt. RESULTADOS: A análise comparativa dos 31 casos de CDI triplo negativo com os 18 casos de parênquima mamário normal definiu microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation(FR) = 9,68, p = 0,000008), miR-21-5p (FR = 4,47, p = 0,00), miR-7-5p (FR = 5,8, p = 0,00137) , miR-182-5p (FR= 7,92, p = 0,000001), miR-210-3p (FR = 11,83, p = 0,000048), miR-18a-5p (FR = 9,51, p = 0,000034), miR-155-5p (FR= 4,40 , p = 0,00019) e miR-93-5p (FR= 4,15, p = 0,000023). Aponta, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (FR = -10,26, p = 0), miR-205-5p (FR= -4,07, p = 0,019822), miR-125b-5p (FR= -4,29, p=0) e let 7c-5p (FR= -4,91, p=0). CONCLUSÃO: a expressão de microRNAs no carcinoma ductal invasivo triplo negativo permite diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. The triple negative immunohistochemistry in breast cancer is commonly used as a substitute for clinical identification of basaloid tumors, which are characterized by the expression of basal epithelial genes and are associated with lower rates of disease-free survival and overall survival. The triple negative breast cancer makes necessary the discovery of molecular markers that may serve as therapeutic targets or at least as predictive markers of response to chemotherapy. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in triple negative breast invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 31 patients with the following characteristics were evaluated: invasive breast carcinoma, negative estrogen and progesterone receptor, negative HER 2, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, EFGR and CK 5/6 were evaluated. The follow-up of patients aimed to verify the occurrence and time of appearance of loco regional recurrence, distant metastasis and death. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification DeltaCt, was used. RESULTS: A comparative analysis of 31 cases of triple negative IDC with 18 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation (FR) = 9.68, p = 0.000008), miR -21-5p (FR = 4.47, p = 0.00), 5p, miR-7 (FR = 5.8, p = 0.00137), miR-182-5p (FR = 7.92, p = 0.000001), miR-210-3p (FR = 11.83, p = 0.000048), miR-18a-5p (FR = 9.51, p = 0.000034), miR-155-5p (FR = 4.40, p = 0.00019) and miR-93-5p (FR = 4.15, p = 0.000023). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows: miR-204-5p (FR = -10.26, p = 0), miR-205-5p (FR = -4.07, p = 0.019822), miR -125b-5p (FR = -4.29, p = 0) and Let-7c 5p (FR = -4.91, p = 0). CONCLUSION: the expression of microRNAs in triple negative invasive ductal carcinoma allows to differentiate it from normal tissue