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As actinobactérias endofíticas estão presentes nos tecidos das plantas e, por meio da produção de metabólitos ativos, às protegem e auxiliam em condições de estresse. Esses microrganismos tem sido amplamente estudados no controle de doenças fitopatogênicas, como a mancha marrom causada por Bipolaris sorokiniana. Este fungo é o agente causal da podridão comum da raiz, manchas foliares, morte de plântulas e ponto preto das sementes de trigo e cevada, causando redução significativa na produtividade. Neste contexto, os objetivos do presente estudo foram avaliar a virulência de isolados de B. sorokiniana e a atividade antifúngica de actinobactérias contra este fitopatógeno. Os antagonistas com elevada atividade contra o fitopatógeno foram caracterizados quanto à produção enzimática, fisiologia, condições de crescimento e produção de metabólitos, bem como sequenciamento do 16S rRNA para identificação dos antagonistas. A caracterização parcial dos metabólitos foi realizada por meio de sistemas de Cromatografia de Camada delgada (CCD) contendo diferentes solventes. Os resultados mostraram que os isolados de B. sorokiniana apresentaram elevada virulência às plântulas e sementes de trigo, sendo que a maior agressividade foi relatada à semente. Por outro lado, 69,6% das actinobactérias apresentaram elevada atividade antifúngica contra isolados de B. sorokiniana em meio sólido, e 17% a mantiveram em cultura submersa. A maior produção ocorreu a 30°C após 72h de incubação, para a maioria dos isolados. A detecção da produção de catalase, amilase, pectinase, lipase e esterase foi observada para a maioria das actinobactérias (100, 95,6, 91,30, 95,6, 100%, respectivamente). Enquanto que a degradação de caseína, carboximetilcelulose e gelatina foi realizada por 60,8, 34,78 e 47,82% dos isolados, respectivamente. Os isolados 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selecionados devido à elevada atividade antifúngica e enzimática, apresentaram reação positiva para produção de compostos voláteis, quitinase e glucanase, sideróforos, fixação de nitrogêno, AIA e colonização de raizes. Somente isolado R18(6) não apresentou capacidade de solubilizar fosfatos. A caracterização molecular determinou que estes isolados pertencem ao gênero Streptomyces. Os metabólitos produzidos pelo isolado R18(6) foram mais estáveis a mudanças de temperatura e pH, bem como para a ação das proteases e EDTA, quando comparado aos demais. Os solventes acetato de etila e hexano foram mais eficientes na extração de metabólitos do extrato bruto, porém a melhor separação de metabólitos em CCD foi obtida com misturas de solventes. / Endophitic actinobacterias are present in plant tissues and by means of active metabolites they protect and help them in stress conditions. These microorganisms have been widely used in the control of phytopathogenic diseases, such as the spot blotch caused by Bipolaris sorokiniana. This fungus is a causal agent of common root rot, leaf spots, death of seedlings and black point of the seeds of wheat and barley, causing significant reduction in productivity. In this context, the aim of this study was to evaluate the virulence of the B. sorokiniana isolates and the antifungal activity of actinobacterias against this phytopathogen. The antagonists with the higher activity against the phytopatogen were characterize taking in consideration their physiology, enzyme production, growth conditions and metabolites production and 16S rRNA sequencing for identification of the antagonists. Partial characterization (nós não purificamos) of the metabolites was performed using thin layer chromatography (TLC) systems containing different solvents. The results showed that the isolates of B. sorokiniana have a high virulence on wheat seed and seedlings, however the greater aggressiveness was observed to seed. On the other hand, 69.6% of actinomycetes showed high antifungal activity against of B. sorokiniana isolates on solid medium, and 17% maintained this behavior in submerged culture. The highest yield happened, for most isolates, when grown at 30°C with agitation after 72h of incubation. The detection of catalase, starch, pectin, lipase and esterase production was observed for most of the actinomycetes (100, 95.6, 91.30, 95.6, 100%, respectively). While the hydrolysis of casein, carboxymethylcellulase and gelatin was performed by 60.8, 34.78 and 47.82% of the isolates, respectively. Isolates 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selected due to the high antifungal and enzyme activity, showed a positive reaction for the production of volatile compounds, chitinase and glucanase, siderophores, nitrogen fixation, AIA and colonization of the roots. Only the isolated R18(6) showed no ability to solubilize phosphates. Molecular characterization of the isolates determined that they belong to the genus Streptomyces. The metabolites produced by isolate R18 (6) were more stable to temperature and pH changes, as well to the action of proteases and EDTA, when compared to the others. The solvents ethyl acetate and hexane were more efficient for the extraction of the metabolites from the crude extract, however a better separation of the metabolites in the TLC was obtained with mixture of solvents.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Objetivou-se com o presente estudo avaliar a biometria, parÃmetros sanguÃneos e hormonais de cordeiros Santa InÃs. Foram utilizados 30 cordeiros com peso vivo mÃdio inicial de 13,0  1,49 kg e aproximadamente 60 dias de idade para estimativa daglicose, colesterol, &#946;- hidroxibutirato, N- ureico, proteÃnas totais, albumina, globulina, cloreto, cÃlcio, fÃsforo, magnÃsio e os hormÃnios leptina, insulina e tiroxina (T4). Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 3 x 2, que consistia detrÃs nÃveis de restriÃÃo alimentar (RA) (controle, 30% e 60%), trÃs perÃodos de coleta correspondente à idade dos animais (14, 18 e 23 semanas de idade) e duas classes sexuais (castrados e nÃo castrados). O sangue foi coletado por punÃÃo da veia jugular nos trÃs perÃodos de coleta. Para as medidas biomÃtricas utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2, levando-se em consideraÃÃo os nÃveis de restriÃÃo e as classes sexuais. As medidas foram realizadas quinzenalmente durante todo perÃodo experimental.O hormÃnio Tiroxina nÃo foi influenciado pela idade, dieta ou classe sexual. Jà a leptina e a insulina aumentaram com a idade dos animais (P<0,01). As concentraÃÃes de glicose diminuÃram de acordo com o aumento do nÃvel de RA (P<0,001). As concentraÃÃes de BHB foram maiores à medida que se aumentou a restriÃÃo alimentar (P<0,001). O N-ureico foi influenciado pela idade e dieta experimental (P< 0,001) e houve interaÃÃo idade X classe sexual (P<0,01). As concentraÃÃes de colesterol total e proteÃnas totais nÃo foram influenciadas pelos tratamentos experimentais (P<0,05), entretanto a albumina e globulina foram influenciadas pela idade (P<0,001; P<0,01). As concentraÃÃes plasmÃticas de cloretos, cÃlcio, magnÃsio e fÃsforo variaram significativamente em funÃÃo da idade. Os animais submetidos à RA cresceram em ritmo mais lento, sendo que, a influencia negativa foi mais acentuada no R60 (60% de RA). No R30 (30% de RA), o ritmo de crescimento diminuÃdo foi mais perceptÃvel com 100 dias de idade no peso corporal (PC), com 130 dias no escore de condiÃÃo corporal (ECC) e perÃmetro torÃcico (PT), com 145 dias na altura de garupa (AG) e com 160 dias no comprimento de garupa (CG) e largura de peito (LP). A anÃlise da correlaÃÃo de Pearson mostra que as medidas biomÃtricas sÃo co-dependentes do nÃvel de alimentaÃÃo do animal, pois as correlaÃÃes foram altas e significativas nos animais controle (r= + 0,61 a 0,95). Conclui-se que os parÃmetros metabÃlicos foram influenciados mais pela idade do que pela dieta e que a restriÃÃo alimentar afeta o perfil metabÃlico e hormonal, em especial o &#946;-hidroxibutirato e a insulina. O escore de condiÃÃo corporal, peso corporal e largura de peito foram os parÃmetros mais sensivelmente influenciados pela RA. / The present study aimed to evaluate biometric measurements and blood and hormonal parameters of Santa Ines lambs. Thirty lambs with an average live weight of 13.0  1.49 kg and 60 days of age were used to estimate glucose, cholesterol, &#946;-hydroxybutyrate, urea N, total protein, albumin, globulin, chloride, calcium, phosphorus, magnesium, and leptin, insulin, and thyroxine (T4) hormones. Lambs were assigned to a randomized complete design in a 3 à 2 factorial arrangement consisting of three levels of food restriction (FR) (control, 30%, and 60%), three collection periods corresponding the age of the animals (14, 18, and 23 weeks of age), and two sex categories (castrated and uncastrated). Blood was collected by jugular venipuncture in the three collection periods. For biometric measurements, a randomized complete design in a 3 à 2 factorial arrangement was adopted, taking into account restriction levels and sex categories. Measurements were taken every two weeks throughout the experimental period. The hormone thyroxine was not influenced by age, diet, or sex category. Leptin and insulin increased with the animal age (P <0.01). Glucose concentrations decreased as the FR level were increased (P <0.001). &#946;-hydroxybutyrate concentrations increased as the food restriction was increased (P <0.001). Urea nitrogen was influenced by age and experimental diet (P <0.001), and there was an age à sex category interaction effect (P <0.01). Concentrations of total cholesterol and total proteins were not influenced by experimental treatments (P <0.05), but albumin and globulin were influenced by age (P <0.001, P <0.01). Plasma concentrations of chloride, calcium, magnesium, and phosphorus varied significantly according to age. Animals subjected to FR grew at a slower rate, and the negative influence was more pronounced at 60% FR. At 30% FR, the growth rate decline was more noticeable at 100 days of age for body weight (BW); at 130 days for body condition score (BCS) and chest girth (CG); at 145 days for rump height (RH); and at 160 days for rump length (RL) and breast width (BW). Pearson's correlation analysis showed biometric measurements are co-dependent on the feeding level because correlations were high and significant in control animals (r = 0.61 to 0.95). It is concluded that the metabolic parameters were more influenced by age than by diet, and food restriction affects the metabolic and hormonal profiles, in particular &#946;-hydroxybutyrate and insulin. Body condition score, body weight, and breast width were the most significantly affected by FR parameters.

As actinobactérias endofíticas estão presentes nos tecidos das plantas e, por meio da produção de metabólitos ativos, às protegem e auxiliam em condições de estresse. Esses microrganismos tem sido amplamente estudados no controle de doenças fitopatogênicas, como a mancha marrom causada por Bipolaris sorokiniana. Este fungo é o agente causal da podridão comum da raiz, manchas foliares, morte de plântulas e ponto preto das sementes de trigo e cevada, causando redução significativa na produtividade. Neste contexto, os objetivos do presente estudo foram avaliar a virulência de isolados de B. sorokiniana e a atividade antifúngica de actinobactérias contra este fitopatógeno. Os antagonistas com elevada atividade contra o fitopatógeno foram caracterizados quanto à produção enzimática, fisiologia, condições de crescimento e produção de metabólitos, bem como sequenciamento do 16S rRNA para identificação dos antagonistas. A caracterização parcial dos metabólitos foi realizada por meio de sistemas de Cromatografia de Camada delgada (CCD) contendo diferentes solventes. Os resultados mostraram que os isolados de B. sorokiniana apresentaram elevada virulência às plântulas e sementes de trigo, sendo que a maior agressividade foi relatada à semente. Por outro lado, 69,6% das actinobactérias apresentaram elevada atividade antifúngica contra isolados de B. sorokiniana em meio sólido, e 17% a mantiveram em cultura submersa. A maior produção ocorreu a 30°C após 72h de incubação, para a maioria dos isolados. A detecção da produção de catalase, amilase, pectinase, lipase e esterase foi observada para a maioria das actinobactérias (100, 95,6, 91,30, 95,6, 100%, respectivamente). Enquanto que a degradação de caseína, carboximetilcelulose e gelatina foi realizada por 60,8, 34,78 e 47,82% dos isolados, respectivamente. Os isolados 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selecionados devido à elevada atividade antifúngica e enzimática, apresentaram reação positiva para produção de compostos voláteis, quitinase e glucanase, sideróforos, fixação de nitrogêno, AIA e colonização de raizes. Somente isolado R18(6) não apresentou capacidade de solubilizar fosfatos. A caracterização molecular determinou que estes isolados pertencem ao gênero Streptomyces. Os metabólitos produzidos pelo isolado R18(6) foram mais estáveis a mudanças de temperatura e pH, bem como para a ação das proteases e EDTA, quando comparado aos demais. Os solventes acetato de etila e hexano foram mais eficientes na extração de metabólitos do extrato bruto, porém a melhor separação de metabólitos em CCD foi obtida com misturas de solventes. / Endophitic actinobacterias are present in plant tissues and by means of active metabolites they protect and help them in stress conditions. These microorganisms have been widely used in the control of phytopathogenic diseases, such as the spot blotch caused by Bipolaris sorokiniana. This fungus is a causal agent of common root rot, leaf spots, death of seedlings and black point of the seeds of wheat and barley, causing significant reduction in productivity. In this context, the aim of this study was to evaluate the virulence of the B. sorokiniana isolates and the antifungal activity of actinobacterias against this phytopathogen. The antagonists with the higher activity against the phytopatogen were characterize taking in consideration their physiology, enzyme production, growth conditions and metabolites production and 16S rRNA sequencing for identification of the antagonists. Partial characterization (nós não purificamos) of the metabolites was performed using thin layer chromatography (TLC) systems containing different solvents. The results showed that the isolates of B. sorokiniana have a high virulence on wheat seed and seedlings, however the greater aggressiveness was observed to seed. On the other hand, 69.6% of actinomycetes showed high antifungal activity against of B. sorokiniana isolates on solid medium, and 17% maintained this behavior in submerged culture. The highest yield happened, for most isolates, when grown at 30°C with agitation after 72h of incubation. The detection of catalase, starch, pectin, lipase and esterase production was observed for most of the actinomycetes (100, 95.6, 91.30, 95.6, 100%, respectively). While the hydrolysis of casein, carboxymethylcellulase and gelatin was performed by 60.8, 34.78 and 47.82% of the isolates, respectively. Isolates 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selected due to the high antifungal and enzyme activity, showed a positive reaction for the production of volatile compounds, chitinase and glucanase, siderophores, nitrogen fixation, AIA and colonization of the roots. Only the isolated R18(6) showed no ability to solubilize phosphates. Molecular characterization of the isolates determined that they belong to the genus Streptomyces. The metabolites produced by isolate R18 (6) were more stable to temperature and pH changes, as well to the action of proteases and EDTA, when compared to the others. The solvents ethyl acetate and hexane were more efficient for the extraction of the metabolites from the crude extract, however a better separation of the metabolites in the TLC was obtained with mixture of solvents.

Tesis para optar el Grado de Magíster en Ciencias Químicas / Colombia y Chile son países que cuentan con una amplia biodiversidad de líquenes debido a la enorme variedad de ecosistemas que presentan, por lo que surge la necesidad de contribuir y extender el conocimiento de compuestos de líquenes nativos de los mismos; de ahí el presente trabajo se enfocó en el estudio químico de 5 especies liquénicas conocidas como Punctelia rudecta, 2 especies de Ramalina celastri (Chile y Colombia), Sticta lineariloba (Mont.) Nyl y Sticta leucoblepharis. El estudio fue realizado al extracto metanólico de cada una de las especies liquénicas: primero, con el aislamiento y purificación de los extractos de los líquenes empleando técnicas cromatográficas clásicas como Sephadex LH-20, cromatografía en columna (CC), cromatografía en capa fina (CCF), cromatografía en capa preparativa (CCP) y HPLC preparativo, la caracterización e identificación de los metabolitos aislados a partir de métodos espectroscópicos mono y bidimensionales como son 1H-RMN, 13C-RMN, COSY, HMQC y HMBC y; segundo, un estudio basado en UHPLC-Q/Orbitrap/ESI/MS/MS para la caracterizacion e identificación completa de los metabolitos secundarios conocidos y desconocidos de las especies mencionadas. En conjunto, se incorporaron las siguientes especies del género Sticta colectadas en Colombia: S. pseudosylvatica-Co, S. impressula (Nyl.) Zahlbr-Co, S.luteocyphellata-Co, S.ocaniensis-Co) con el propósito de contribuir al escaso conocimiento de los perfiles metabolómicos del género Sticta, Punctelia y Ramalina. El perfil metabolómico fue desarrollado con la comparación de las masas moleculares exactas (obtenidas del espectro de masas de alta resolución (orbitrap MS/MS), tiempos de retención y patrones de fragmentación característicos experimentales con datos reportados en literatura. A partir de los extractos metanólicos fueron aislados e identificados los siguientes metabolitos secundarios: metil orselinato, ácido orselinico y ácido isolecanórico para P.rudecta; ácido isousnico (un dibenzofurano) en R.celastri-Co; para S.leucoblepharis, peróxido de ergosterol; y en S.lineariloba, ácido 8-metil estictico (depsidona), metil orselinato, derivado del ácido retigérico y ácido 6-hidroxi norstictico. Por otra parte, usando la técnica de espectrometría de masas en tándem se identificaron por primera vez, 125 metabolitos pertenecientes a las siguientes clases de compuestos: depsidos, depsidonas, depsonas, fenólicos, polisacáridos, ácidos grasos, difenileter, derivado de ácido pulvinico y dibenzofuranos. Los compuestos conocidos incluyen 46 en R. celastri (Co-Ch),7 en P. rudecta, 72 en los extractos metanólicos de Sticta-Ch y Co, además de un total de 51 metabolitos que no fueron identificados ni informados hasta el momento, y podrían ser nuevos según el análisis de los datos. Este estudio demostró que la técnica fue efectiva y precisa para el análisis de los perfiles metabolómicos de los líquenes estudiados y los datos recopilados fueron útiles para el analisis quimiotaxonómico.

Durante esta tesis se trabajó con seis especies vegetales entre quince recolectadas en la zona del Salitral de la Vidriera, con pocos o ningún antecedente de estudios fitoquímicos o de actividad biológica. Los extractos etanólicos de estas especies presentaron actividad inhibitoria de las enzimas acetilcolinesterasa (ACE) y/o butirilcolinesterasa (BuCE) de muy buena a moderada. Llevando a cabo un fraccionamiento bioguiado fue posible el aislamiento e identificación de los metabolitos secundarios responsables de la actividad. A partir de los extractos de H. jamesonii y H. tubispathus (Amaryllidaceae), fue posible la identificación de quince alcaloides mediante CG-EM. De H. tubispathus se logró además, el aislamiento de tres alcaloides mayoritarios: hippeastidina (6), licorina (8), y 3-O-demetilhippeastidina (16), constituyendo el primer reporte de datos espectroscópicos completo de los compuestos 6 y 16. El alcaloide aislado, hippeastidina, resultó ser el componente más activo de H. tubispathus. De las quenopodiáceas estudiadas, H. olivascens y A. patagonica, se aislaron ácidos grasos en grandes cantidades de los subextractos menos polares, siendo el ácido palmítico (17) el mayoritario. De H. olivascens también fue posible el aislamiento del alcaloide salsolina (20), de la fracción diclorometánica, y del osmolito glicinbetaína (21) de la fracción más polar. Por otra parte, la fracción más activa de A. patagónica resultó contener fosfatidilcolinas, compuestos con antecedentes de actividades relacionadas con la patología de la EA. De la especie endémica F. bidentis (Asteraceae) se obtuvo 3-sulfato de 6- metoxikaempferol (22) a partir del subextracto acuoso que había mostrado la mejor inhibición de ACE. Este flavonoide sulfatado, cuya caracterización espectroscópica se presenta en este trabajo por primera vez, fue sometido a modificaciones químicas sencillas obteniendo los derivados 23-25. Si bien no se obtuvo una mejora en la actividad de 22, se determinó la importancia del grupo sulfato en la inhibición de la enzima. Por último, los flavonoides activos luteolina (26) y apigenina (27) fueron aislados de la especie L. salsa (Verbenaceae) mediante fraccionamiento bioguiado de su extracto etanólico. Su presencia en esta especie es reportada en este trabajo por primera vez. / Six species, from fifteen collected in Salitral de la Vidriera area, were selected and studied in this thesis. All of them, with few or none previous phytochemical or biological activity records in the literature. Ethanolic extracts from this species showed high to moderate acetyl- (AChE) and/or butyryl-cholinesterase (BuChE) inhibitory activity. The isolation and identification of the active metabolites were achieved by bioassay-guided fractionation. From ethanolic extracts of H. jamesonii and H. tubispathus (Amaryllidaceae) fifteen alkaloids were identified using GC-MS. In addition, major alkaloids from H. tubispathus were isolated: hippeastidine (6), lycorine (8) and 3-Odemethylhippeastidine (16). Alkaloids 6 and 16 were completely characterized by spectroscopic methods for the first time. Hippeastidine (6), was found to be the most active constituent in H. tubispathus. From the studied chenopodiaceaes, H. olivascens and A. patagonica, fatty acids were isolated in large quantities, with palmitic acid (17) as the major one. In addition, from H. olivascens, salsoline (20), an alkaloid, was obtained from its dichloromethane subextract and glycinbetaine (21), an osmolyte, from its more polar fraction. Moreover, the most active fraction from A. patagonica contained phosphatidylcholines, compounds with history in AD pathology related activities. From the endemic species F. bidentis (Asteraceae), the flavonoid 6- methoxykaempherol-3-sulfate (22) was obtained from aqueous sub-extract. This sulfated flavonoid, whose spectroscopic data is presented here for the first time, was subjected to simple chemical modifications leading to derivatives 23-25. Even though this modification did not improve the activity elicited by 22, the importance of sulfate group in the enzyme inhibition was determined. Finally, active flavonoids luteolin (26) and apigenin (27) were isolated from Lippia salsa (Verbenaceae) by bioassay-guided fractionation of its ethanolic extract. Its presence in this species is reported in this work for the first time.

Las plantas de uso medicinal son una respuesta del conocimiento ancestral para el tratamiento y/o cura de diversas enfermedades, que debe ser contrastado científicamente. Dicha investigación debe partir de la identificación botánica de los ejemplares utilizados por la población; asimismo, el conocimiento de sus metabolitos nos ayuda a explicar el o los principios activos implicados en la actividad atribuida a la planta. El material empleado en este estudio son tres helechos comercializados bajo el nombre común de “cuti cuti” en el mercado de plantas medicinales del distrito de La Victoria en Lima-Perú, cuya identidad taxonómica corresponde a las especies: Argyrochosma nivea (Poir.) Windham “cuti cuti hembra”, Cheilanthes pruinata Kaulf. “cuti cuti macho” y Cheilanthes scariosa (Sw.) C. Presl “cuti cuti”, los cuales son empleados en la medicina tradicional para tratar la diabetes. Se ha podido establecer características descriptivas que conlleva a la presentación de una clave que permite diferenciarlos. Se demuestra que los helechos llamados “cuti cuti” son de tres especies distintas. Se procedió a realizar ensayos de colorimetría y precipitación, a partir de extractos hidroalcohólicos resolubilizados en agua al 2%, encontrándose similitudes en los tres helechos respecto a la presencia de metabolitos.

Las plantas de uso medicinal son una respuesta del conocimiento ancestral para el tratamiento y/o cura de diversas enfermedades, que debe ser contrastado científicamente. Dicha investigación debe partir de la identificación botánica de los ejemplares utilizados por la población; asimismo, el conocimiento de sus metabolitos nos ayuda a explicar el o los principios activos implicados en la actividad atribuida a la planta. El material empleado en este estudio son tres helechos comercializados bajo el nombre común de “cuti cuti” en el mercado de plantas medicinales del distrito de La Victoria en Lima-Perú, cuya identidad taxonómica corresponde a las especies: Argyrochosma nivea (Poir.) Windham “cuti cuti hembra”, Cheilanthes pruinata Kaulf. “cuti cuti macho” y Cheilanthes scariosa (Sw.) C. Presl “cuti cuti”, los cuales son empleados en la medicina tradicional para tratar la diabetes. Se ha podido establecer características descriptivas que conlleva a la presentación de una clave que permite diferenciarlos. Se demuestra que los helechos llamados “cuti cuti” son de tres especies distintas. Se procedió a realizar ensayos de colorimetría y precipitación, a partir de extractos hidroalcohólicos resolubilizados en agua al 2%, encontrándose similitudes en los tres helechos respecto a la presencia de metabolitos.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En general los procesos de biotransformación originan metabolitos inocuos para el organismo y mayoritariamente excretables por la orina. Nitrofurantoína y Nifurtimox son compuestos lipofílicos, por lo cual deben ser oxidados para transformarse en compuestos hidrosolubles y así excretables por la orina. Al respecto, no existen antecedentes de la existencia de vías metabólicas que provoquen modificaciones oxidativas de estos fármacos y así puedan adquirir la polaridad suficiente para ser excretados por la orina. Sin embargo, la reducción enzimática de Nitrofurantoína y Nifurtimox genera un nitro anión radical (NO2.-) intermediario que en presencia de O2, es capaz de sufrir reciclaje redox y generar especies reactivas del oxígeno (ROS), responsables de la inducción de estrés oxidativo celular. En este trabajo se estudió la nitrorreducción y el posible metabolismo oxidativo de Nitrofurantoína y Nifurtimox, ambos fenómenos catalizados por el sistema citocromo P450. Para ello utilizamos una preparación enriquecida en retículo endoplásmico hepático de rata (microsomas). La incubación de los microsomas con ambos fármacos y NADPH indujo lipoperoxidación microsómica, fenómeno que fue inhibido por GSH y un extracto hidroalcohólico de Buddleja globosa (matico). Por otra parte, al aumentar la concentración tanto de Nitrofurantoína como de Nifurtimox, la lipoperoxidación disminuyó de una forma bimodal; así, a concentraciones µM la pendiente de disminución fue 20 y 10 veces mayor que a concentraciones mM de Nitrofurantoína y Nifurtimox, respectivamente. Más aún, ambos fármacos se unieron a la monooxigenasa citocromo P450 de una forma concentración-respuesta e inhibieron competitivamente la hidroxilación de naftaleno, reacción catalizada por el sistema citocromo P450. Los resultados demuestran que tanto Nitrofurantoína como Nifurtimox podrían ser nitrorreducidos y además oxidados por el sistema oxidativo del citocromo P450. Por otra parte, dado que el estrés oxidativo fue inhibido por antioxidantes, una terapia asociada podría disminuir los efectos adversos asociados a la nitrorreducción de estos fármacos; sin embargo se necesitan nuevos experimentos que confirmen este postulado, entre ellos la identificación de metabolitos polares resultantes de la biotransformación oxidativa de estos fármacos

Evalúa el potencial antibacteriano de los metabolitos producidos por el actinomiceto marino M10-77. La evaluación preliminar mediante la prueba de “doble capa” mostró gran capacidad inhibitoria de la cepa en estudio, generando halos de inhibición cercanos a 70 mm de diámetro contra patógenos Gram positivos y halos de tamaño reducido contra Gram negativos. Estos datos se vieron reflejados en el ensayo de Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del extracto diclorometánico, donde los resultados más notorios fueron contra una cepa de S. aureus resistente a meticilina, S. saprophyticus 7694 y Streptococcus sp. 7751 (1,9; 1,9 y 0,9 µg/mL, respectivamente) todas de origen clínico. El extracto activo fue fraccionado y parcialmente purificado por cromatografía en columna, obteniéndose cuatro fracciones orgánicas. Estas mostraron poseer actividad antimicrobiana moderada y menor a la del extracto original, hecho que se interpreta como un fenómeno de sinergismo, lo que motivó la realización del bioensayo de sinergismo aplicado a antibióticos. Los resultados mostraron la capacidad sinergística de la fracción II con antibióticos beta lactámicos y aminoglucósidos frente a S. aureus ATCC 43300 (MRSA), potenciando la actividad de la bencilpenicilina, cefotaxima y ceftriaxona hasta por 128 veces, y mejorando la actividad de la estreptomicina y gentamicina hasta por 8 veces. Finalmente, la cepa M10-77 fue clasificada dentro del género Streptomyces en base a características morfológicas y a información brindada sobre su identificación molecular. Se concluye que la cepa Streptomyces M10-77 es una cepa multi-productora de metabolitos antibacterianos de potente actividad y a su vez de metabolitos con capacidad sinergística sobre antibióticos de referencia. / Tesis