O timo secreta substâncias promotoras da sobrevivência de linfócitos e hormônios ligados à dinâmica do citoesqueleto. Esses agentes são produzidos em grande quantidade pelo animal recém-nato, e apresentam efeito homeostático sobre a população de linfócitos T circulantes, por toda a vida. Na sepse, a atrofia dos órgãos linfóides, o surgimento de acúmulos de actina intersticial, e a diminuição dos níveis de fibronectina plasmática guardam relação com a mortalidade. O trabalho aqui descrito procurou detectar o efeito do sobrenadante de cultura de timo de rato Wistar neonato, saudável, sobre a mortalidade e as expressões simultâneas de actina e fibronectina em timos de ratos Wistar adultos submetidos a sepse peritoneal. Foi constatada uma diminuição na expressão de actina e de fibronectina no interstício de timos de ratos Wistar adultos sépticos, tratados com a aplicação intraperitoneal do sobrenadante de explante de timo de ratos neonatos. Tal efeito provocou um aumento da sobrevivência semelhante ao tratamento com meio de cultura apenas ( sem explante), contudo houve uma notável melhora dos sinais clínicos . Não houve qualquer efeito anti-inflamatório, com o tratamento com o sobrenadante, sobre inflamação periférica em animais saudáveis submetidos a injeção intramuscular de glutaraldeído, o que afastou a hipótese de influência sobre a enzima tranglutaminase tecidual, ativada em estados inflamatórios , e responsável pela aglomeração intersticial, da actina originada de células lesadas. O autor concluiu que os efeitos observados pelo tratamento com sobrenadante de cultura de timo de animal recém-nato, podem ser atribuídos a estimulação de mecanismos promotores da integridade celular, frente aos estresses químicos vigentes no meio interno, durante a sepse. O autor sugere que a observação simultânea de actina e fibronectina no timo pode auxiliar nos estudos de tratamentos experimentais da sepse. / The response of septic adult Wistar rats submitted to treatment with supernatant from the culture of thymus of healthy newly-born Wistar rats were observed. Although there has not been significant reduction in mortality compared relation to treatment with culture medium only (without explanted) , it was possible to observe a rapid improvement in the clinical conditions and a lower agglomeration of actin and fibronectin in the thymus of treated animals. We did not observe any anti-inflammatory effect of the supernatant in animals with paw inflammation exclusively, which averted the modulation of the Tissue Transglutaminase Enzyme, agglomerator of the actin released by diseased cells. The author concludes that the treament of sepsis with supernatant stimulated survival in thymus, and suggests that the immuno-hystochemical study of actin and fibronectin in the thymus isa useful method in the analysis of experimental treatments of sepsis.

O timo secreta substâncias promotoras da sobrevivência de linfócitos e hormônios ligados à dinâmica do citoesqueleto. Esses agentes são produzidos em grande quantidade pelo animal recém-nato, e apresentam efeito homeostático sobre a população de linfócitos T circulantes, por toda a vida. Na sepse, a atrofia dos órgãos linfóides, o surgimento de acúmulos de actina intersticial, e a diminuição dos níveis de fibronectina plasmática guardam relação com a mortalidade. O trabalho aqui descrito procurou detectar o efeito do sobrenadante de cultura de timo de rato Wistar neonato, saudável, sobre a mortalidade e as expressões simultâneas de actina e fibronectina em timos de ratos Wistar adultos submetidos a sepse peritoneal. Foi constatada uma diminuição na expressão de actina e de fibronectina no interstício de timos de ratos Wistar adultos sépticos, tratados com a aplicação intraperitoneal do sobrenadante de explante de timo de ratos neonatos. Tal efeito provocou um aumento da sobrevivência semelhante ao tratamento com meio de cultura apenas ( sem explante), contudo houve uma notável melhora dos sinais clínicos . Não houve qualquer efeito anti-inflamatório, com o tratamento com o sobrenadante, sobre inflamação periférica em animais saudáveis submetidos a injeção intramuscular de glutaraldeído, o que afastou a hipótese de influência sobre a enzima tranglutaminase tecidual, ativada em estados inflamatórios , e responsável pela aglomeração intersticial, da actina originada de células lesadas. O autor concluiu que os efeitos observados pelo tratamento com sobrenadante de cultura de timo de animal recém-nato, podem ser atribuídos a estimulação de mecanismos promotores da integridade celular, frente aos estresses químicos vigentes no meio interno, durante a sepse. O autor sugere que a observação simultânea de actina e fibronectina no timo pode auxiliar nos estudos de tratamentos experimentais da sepse. / The response of septic adult Wistar rats submitted to treatment with supernatant from the culture of thymus of healthy newly-born Wistar rats were observed. Although there has not been significant reduction in mortality compared relation to treatment with culture medium only (without explanted) , it was possible to observe a rapid improvement in the clinical conditions and a lower agglomeration of actin and fibronectin in the thymus of treated animals. We did not observe any anti-inflammatory effect of the supernatant in animals with paw inflammation exclusively, which averted the modulation of the Tissue Transglutaminase Enzyme, agglomerator of the actin released by diseased cells. The author concludes that the treament of sepsis with supernatant stimulated survival in thymus, and suggests that the immuno-hystochemical study of actin and fibronectin in the thymus isa useful method in the analysis of experimental treatments of sepsis.

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Le cytosquelette se compose de microfilaments (polymères d'actine), de microtubules (polymères de tubuline) et de filaments intermédiaires (polymères de desmine, de lamines ...). Le sepsis défini par une infection associée à une réaction inflammatoire systémique est responsable de dysfonctions myocardiques de mauvais pronostique. Cette cardiomyopathie apparait dans les premières heures du sepsis et guérit en moins de deux semaines chez les survivants. Même si certaines études démontrent l'implication d'éléments du cytosquelette dans la cardiomyopathie septique, les rôles des microfilaments et des microtubules ne sont pas clairement établis.Macrophage migration inhibitory factor (MIF) est une cytokine pro-inflammatoire sécrétée en excès dans le sepsis qui serait responsable d'un ralentissement de la récupération myocardique. Dans un premier temps, notre travail a consisté à caractériser l'implication des microtubules dans la dysfonction musculaire cardiaque induite par MIF. Dans un modèle de trabécules auriculaires droites humaines nous avons démontré que MIF induit une hyperpolymérisation des microtubules responsable d'une hyperviscosité intracellulaire, d'une dysfonction mitochondriale et d'une dysfonction contractile. Nos résultats suggèrent qu'une hyperpolymérisation des microtubules induite par MIF pourrait être responsable d'un ralentissement de la récupération myocardique à la phase tardive de la myocardiopathie septique. Dans un second temps, nous avons évalué l'implication des microfilaments dans un modèle murin de dysfonction myocardique inflammatoire induite par l'injection d'une endotoxine bactérienne, le lipopolysaccharide. Nos résultats suggèrent qu'à la phase précoce de la cardiomyopathie inflammatoire il existe une hyperpolymérisation des microfilaments responsable de dysfonctions contractile et mitochondriale.Les connaissances fondamentales acquises au cours de ce travail de thèse suggèrent une implication directe des microtubules et des microfilaments dans la physiopathologie des cardiomyopathies inflammatoires.

This thesis is focused on the role of host cytoskeleton, primarily microtubules and microfilaments, during tick-borne encephalitis virus infection in human neuroblastoma cell line SK-N-SH and tick cell line IRE/CTVM19. The importance of cytoskeletal integrity and dynamics to the viral replication cycle were examined using specific chemical inhibitors showing the virus utilizes studied structures in both cell lines. Immunofluorescence microscopy revealed structural changes in the actin cytoskeleton during late infection in SK-N-SH cells. Moreover, differences in expression of cytoskeleton-associated genes in both cell lines were compared. Several genes with up-regulated expression in SK-N-SH cells were identified during late infection.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2018-09-24T15:13:44Z No. of bitstreams: 1 2017 - Enely Maris da Silveira Firmiano.pdf: 12307016 bytes, checksum: d58bee7e5ddc0113fa072ab4e9aabc29 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T15:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Enely Maris da Silveira Firmiano.pdf: 12307016 bytes, checksum: d58bee7e5ddc0113fa072ab4e9aabc29 (MD5) Previous issue date: 2017-08-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Cap. I The aim of the current study is to investigate the histological and histochemical description, as well as the presence and immunohistochemical distribution of cytoskeleton proteins such as alpha smooth muscle actin, desmin and vimentin in the ovaries, testes and epididymis of Enyalius bilineatus, Enyalius perditus and Urostrophus vautieri. These species are representatives of family Leiosauridae, in order to help developing a database on the reproductive biology of these lizards, which could be compared to that of other reptile species and vertebrates. The herein studied specimens are deposited in the Herpetological Collection of Federal University of Juiz de Fora. The animals? ovaries, epididymis and testes were removed and sent to the Histology and Embryology Laboratory (UFRRJ), where they were fixed, processed and then subjected to histological, histochemical and immunohistochemical techniques. The ovaries of these leiosauridae are functionally-active paired organs filled with ovarian follicles at different follicular development stages. These organs are covered by a simple cubic epithelium, which presents an underlying connective tissue layer called tunica albuginea. The testes are covered by the tunica albuginea and hold septa forming lobes where the seminiferous tubules are located in. The epididymis of these lizards are convolute ducts internally coated by an epithelium, whose shape ranges from simple cylindrical to simple cubic with stereocilia. The immunohistochemical analysis applied to the ovaries of the herein studied lizards showed moderate to strong reaction to the alpha smooth muscle actin in the teak layer and in endothelial cells of blood vessels. With respect to the species? testes, this cytoskeleton protein showed strong reaction in the tunica albuginea, interstitial tissue, and in endothelial cells of blood vessels. As for the epididymis, the alpha-actin showed immunohistochemical reaction in the capsule and in the interstitial tissue of the lizards. The antibody ?desmin? showed strong immunostaining in the albuginea and ovarian stroma of E. perditus, only; however, the endothelial cells in the blood vessels of the three herein analyzed species showed positive reaction to this intermediate filament. Desmin showed immunoreactivity in the testicular albuginea and in the endothelial cells of the blood vessels in the herein analyzed leiosauridae testes; however, only E. bilineatus showed immunostaining in the interstitial region. Desmin showed positive immunoreaction in the epididymis of E. perditus and E. bilineatus, only. Vimentin did not show immunostaining in the ovaries, testes and epididymis of the three analyzed lizards. The consistent results found in the current study provide additional data on the reproductive biology of the investigated species. These data may be used for phylogenetic and behavioral comparisons between the herein studied species and other species belonging to family Leiosauridae or other reptiles Cap. II The aim of the current study is to investigate the histological description, as well as the presence and immunohistochemical distribution of alpha smooth muscle actin, desmin and vimentin in the testes and epididymis of Enyalius bilineatus, Enyalius perditus and Urostrophus vautieri, which are representatives of family Leiosauridae, in order to help developing a database on the reproductive biology of these lizards, which could be compared to that of other reptile species and vertebrates. The herein studied specimens are deposited in the Herpetological Collection of Federal University of Juiz de Fora. The animals? epididymis and testes were removed and sent to the Histology and Embryology Laboratory (UFRRJ), where they were fixed, processed and then subjected to histological and immunohistochemical techniques. The shape of the testes varies reasonably among the studied leiosauridae. These organs are covered by the tunica albuginea and hold septa forming lobes, where the seminiferous tubules are located in. The epididymis of these lizards are convolute ducts internally coated by an epithelium, whose shape ranges from simple cylindrical to simple cubic with stereocilia. The immunohistochemical analysis applied to the testes of the herein studied lizards showed strong positive reaction to the alpha smooth muscle actin in the tunica albuginea, interstitial tissue, and in endothelial cells of blood vessels. Desmin showed strong immunoreactivity in the testicular albuginea of E. bilineatus and moderate immunoreactivity in E. perditus and U. vautieri; however, only E. bilineatus showed immunostaining in the interstitial tissue region. The endothelial cells of blood vessels showed positive immunoreaction to desmin in the three herein analyzed species. The epididymis showed moderate immunohistochemical reaction to alpha smooth muscle actin in the capsule and in the interstitial tissue, whereas desmin showed positive immunoreaction in the epididymis of E. perditus and E. bilineatus, only. Vimentin did not show immunostaining in the testes and epididymis of the three analyzed lizards. The consistent results found in the current study provide additional data on the reproductive biology of the investigated species. These data may be used for phylogenetic and behavioral comparisons between the herein studied species and other species belonging to family Leiosauridae or other reptiles. / Cap. I Este trabalho investiga, al?m da descri??o histol?gica e histoqu?mica, a presen?a e distribui??o imuno-histoqu?mica de alfa-actina de m?sculo liso, desmina e vimentina nos ov?rios, test?culos e epid?dimos de Enyalius bilineatus, Enyalius perditus e Urostrophus vautieri, representantes da fam?lia Leiosauridae, para ajudar a formar uma base de dados sobre a biologia reprodutiva destes lagartos que possam ser comparados com outras esp?cies de r?pteis, bem como com outros vertebrados. Os esp?cimes estudados encontram-se depositados na Cole??o Herpetol?gica da UFJF. Os ov?rios, epid?dimos e test?culos dos animais foram removidos e encaminhados ao Laborat?rio de Histologia e Embriologia (UFRRJ), onde foram fixados, processados e ent?o submetidos ?s t?cnicas histol?gicas, histoqu?micas e imuno-histoqu?micas. Os ov?rios destes leiosaur?deos s?o ?rg?os pareados, repletos de fol?culos ovarianos, em distintos est?gios de desenvolvimento folicular. Estes s?o revestidos por epit?lio c?bico simples, com uma camada de tecido conjuntivo subjacente, a t?nica albug?nea. Os test?culos encontram-se envolvidos pela t?nica albug?nea e em seu interior cont?m septos que formam l?bulos, nos quais se localizam os t?bulos semin?feros. Os epid?dimos destes lagartos s?o ductos convolutos, revestidos internamente por um epit?lio que varia de cil?ndrico simples a c?bico simples com estereoc?lios. A imuno-histoqu?mica, nos ov?rios dos lagartos estudados, mostra uma rea??o moderada a acentuada para alfa-actina de m?sculo liso na camada da teca e em c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos, enquanto nos test?culos destas esp?cies nota-se uma acentuada rea??o para esta prote?na do citoesqueleto, na t?nica albug?nea, no tecido intersticial e nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos. Nos epid?dimos observa-se imunomarca??o para alfa-actina na c?psula e no tecido intersticial destes lagartos. Quanto ao anticorpo desmina, apenas em E. perditus, foi poss?vel imunorrea??o na albug?nea e no estroma ovariano, no entanto, nas tr?s esp?cies analisadas, as c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos demonstraram rea??o positiva a este filamento intermedi?rio. Nos test?culos dos leiosaur?deos estudados, a desmina foi imunolocalizada na albug?nea testicular e nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos, entretanto, apenas em E. bilineatus ocorreu imunomarca??o, na regi?o do interst?cio. Nos epid?dimos, a desmina demonstrou imunorrea??o positiva apenas em E. perditus e E. bilineatus. N?o houve rea??o imuno-histoqu?mica para vimentina nos ov?rios, test?culos e epid?dimos dos tr?s lagartos analisados. Este estudo obteve resultados consistentes, fornecendo assim mais dados sobre a biologia reprodutiva das esp?cies aqui investigadas, que poder?o ser utilizados para compara??es filogen?ticas e comportamentais com outras esp?cies da fam?lia Leiosauridae e outros r?pteis. Cap. II Este trabalho investiga, al?m da descri??o histol?gica, a presen?a e distribui??o imuno-histoqu?mica de alfa-actina de m?sculo liso, desmina e vimentina nos test?culos e epid?dimos de Enyalius bilineatus, Enyalius perditus e Urostrophus vautieri, representantes da fam?lia Leiosauridae, para ajudar a formar uma base de dados sobre a biologia reprodutiva destes lagartos que possam ser comparados com outras esp?cies de r?pteis, bem como com outros vertebrados. Os esp?cimes estudados encontram-se depositados na Cole??o Herpetol?gica da Universidade Federal de Juiz de Fora. Os epid?dimos e test?culos dos animais foram removidos e encaminhados ao Laborat?rio de Histologia e Embriologia (UFRRJ), onde foram fixados, processados e ent?o submetidos ?s t?cnicas histol?gicas e imuno-histoqu?micas. O formato dos test?culos varia razoavelmente entre os leiosaur?deos estudados. Estes ?rg?os encontram-se envoltos pela t?nica albug?nea e no seu interior cont?m septos que formam l?bulos incompletos, nos quais se localizam os t?bulos semin?feros. Os epid?dimos destes lagartos s?o ductos convolutos. Estes ductos s?o revestidos internamente por um epit?lio que varia de cil?ndrico simples a c?bico simples com estereoc?lios. A imuno-histoqu?mica revela uma acentuada rea??o positiva para alfa-actina de m?sculo liso nos test?culos dos leiosaur?deos analisados, na t?nica albug?nea e no tecido intersticial, assim como, nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos. A desmina apresentou acentuada imunorreatividade na albug?nea testicular em E. bilineatus e moderada em E. perditus e U. vautieri, entretanto, na regi?o do tecido intersticial, apenas em E. bilineatus ocorreu imunomarca??o. Nas tr?s esp?cies analisadas, as c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos demostraram imunorrea??o positiva para desmina. Nos epid?dimos observou-se rea??o imuno-histoqu?mica moderada para alfa-actina de m?sculo liso na c?psula e no tecido intersticial, enquanto a desmina demonstrou imunorrea??o positiva apenas em E. perditus e E. bilineatus. N?o houve imunomarca??o para vimentina nos test?culos e epid?dimos dos tr?s lagartos analisados. Este estudo obteve resultados consistentes, fornecendo assim mais dados sobre a biologia reprodutiva das esp?cies aqui investigadas, que poder?o ser utilizados para compara??es filogen?ticas e comportamentais com outras esp?cies da fam?lia Leiosauridae e outros r?pteis.

Orientador: Jose Francisco Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:40:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertels_IvoneMedeirosVieira_D.pdf: 6733194 bytes, checksum: c8a7c3bcca8ad5732334627b49957dcc (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A qualidade da conservação obtida em um órgão e a duração do armazenamento seguro são dependentes do tipo de solução e tempo de conservação, estando sujeitas a intercorrências imprevisíveis. Em virtude disso, o parênquima renal e, particularmente, o túbulo contornado proximal (TCP), local onde ocorre necrose tubular aguda (NTA), são susceptíveis às mudanças na homeostase funcional do órgão, durante a conservação e durante a reperfusão pós-implante. O TCP reabsorve cerca de 70% de Na+ e H2O filtrados; sua membrana apical tem células especializadas com microvilosidades para aumentar a área de transporte unidirecional de solutos do lúmen para o sangue. O principal componente estrutural da bordadura em escova, filamentos de F-actina, interage com uma variedade de proteínas transmembranas, inclusive moléculas transportadoras de íons. Esta função é regulada por parâmetros fisiológicos e hormonais, sendo a Angiotensina II (AII) uma das principais envolvidas com o citoesqueleto de actina e proteínas associadas, mediada principalmente por seus receptores AT1. Métodos: Neste trabalho, túbulos isolados de fragmentos frescos e de fragmentos conservados por períodos de 1 e 24h nas soluções de Euro - Collins (ECO) e de Belzer (UW) foram tratados com AII, losartan e AII+losartan, para medida do volume de absorção de fluido (Jv=nl. min_1. mm-1 (microperfusão in vitro), e medida da intensidade (média) de pixel da fluorescência dos receptores AT1 e do citoesqueleto de actina (imunoistoquímica). Resultados: a) Demonstrou-se que AII (10-12M) estimula absorção fluida (Jv), que é diminuída com losartan (10-6M) em TCP frescos e também em TCP conservados em soluções de ECO 1h e UW 1-24h. Em túbulos conservados 24h em ECO, não houve absorção de fluidos. b) A média da intensidade de pixel de fluorescência dos receptores AT1 em túbulos frescos (sem conservação) apresentou discreta variação entre os grupos não estatisticamente significante. Em túbulos conservados 1h com ECO e UW, a média da intensidade de pixel de receptores AT1 estava aumentada no grupo sem drogas, quando comparados aos tratados com AII, losartan e AII+losartan. Entretanto, em túbulos conservados 24h, ambas as soluções, houve aumento na média de intensidade do pixel de receptores AT1, no grupo tratado com AII, quando comparados aos demais grupos. c) O citoesqueleto de actina em túbulos frescos (sem conservação) não mostrou variação estatisticamente significante na média de intensidade de pixel entre os grupos (AII, losartan ou AII+losartan). No entanto, verificamos uma maior coesão entre os filamentos de actina de túbulos tratados com AII. A distribuição dos filamentos de actina em túbulos conservados em ECO 1h e UW 1 e 24h, mostrou-se uniforme, sem diferenças entre os grupos. Entretanto, em túbulos conservados em ECO 24h (tratamentos AII, losartan, AII+losartan) foi verificada alteração do citoesqueleto de actina. Conclusão: Baseados nestes dados, verificamos que, na conservação do TCP realizada por tempo reduzido, as diferenças na composição das soluções escolhidas não acarretaram alterações estatisticamente significantes na capacidade de absorção de fluidos, na distribuição dos receptores AT1 e no citoesqueleto de actina. Porém, quando o tempo de conservação é estendido, a composição da solução utilizada no processo, interfere na qualidade da conservação, acarretando alterações no citoesqueleto de actina, determinando alterações que poderiam implicar em mudanças na função absortiva, sendo que a solução de UW mostrou o melhor desempenho nestas condições experimentais / Abstract: Introduction: Depending on the preservation quality and duration, considering the solution composition and the preservation method, unexpected intercurrences may occur. In consequence, the renal parenchyma and particularly the proximal convoluted tubule (PCT), site where the acute tubular necrosis (NTA) occurs, are susceptible to changes in the organ functional homeostasis during preservation in the post implantation reperfusion period. The PCT reabsorbs approximately 70% of filtered Na+ and H2O, and its apical membrane has specialized cells with microvilli to increase the area of unidirectional solute transport from the lumen to the blood. The major structural component of brush border microvilli is the filamentous F-actin, which has been shown to interact with a variety of transmembrane proteins, including ion transport molecules. This function is regulated by physiological and hormonal parameters, such as angiotensin II (AII) interacting with actin cytoskeleton and associated proteins, mediated mainly through type I receptors (AT1R). After via different signaling pathways having been triggered, the varied functions are started, including fluid absorption (Jv), which is directly related to the actin cytoskeleton. Methods: Fresh (no preserved) and tubules preserved for 1h and 24hrs in Euro-Collins (EC) and Belzer (UW) solutions, treated with AII, losartan and AII+losartan, evaluated by "in vitro" microperfusion technique (fluid absorption (Jv=nl. min-1. mm-1), and by immunohistochemical technique (AT1 receptor measurement and actin cytoskeleton). Results: a) Our results showed that AII (10-12M) (physiological concentration) stimulates fluid absorption (Jv), which is reduced with losartan (10-6M) in fresh PCT, such as PCT preserved for 1h in EC and for 1-24hrs in UW solutions. There was no fluid absorption (Jv?0) in tubules preserved for 24hrs in EC solution. b) The mean fluorescence intensity of pixel of AT1 receptors in fresh tubules (no preserved) showed discreet changes while using drug treatments; however, these differences were not statistically significant. In tubules preserved for 1h in EC and UW, the mean fluorescence intensity of pixel of AT1 receptors increased in the group with no drug treatment, when compared with tubules treated with AII, losartan and AII+losartan. However, the mean pixel intensity of AT1 receptors in tubules preserved for 24hrs in both solutions increased in those treated with AII, when compared with other groups, control group, losartan and AII+losartan. c) When we examined actin cytoskeleton of fresh tubules (no preserved), comparing groups with no drug treatment and those treated with AII, losartan or AII+losartan, we verified that the variation in the mean pixel intensity of actin cytoskeleton, there was no difference statistically significant. However, we verified a greater cohesion in the actin filaments in tubules treated with AII. In tubules preserved in EC for 1h and UW for 1-24hrs there was a uniform distribution of actin filaments. However, it was verified disorganization in all groups (AII, losartan, AII+losartan) in tubules preserved for 24hrs in EC solution, showing that the organ preservation in this solution was not adjusted. Conclusion: Based on these data, we verified that when PCT preservation was carried out for a reduced time (1h), the differences in the composition of the chosen solutions were not significant; however, when the preservation time was extended, the composition of the solution used in the process affected the preservation quality and altered the actin cytoskeleton, determining alterations that could imply in changes in its absorptive functions. The UW solution showed better performance in these experimental conditions / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 (EHEC) and enteropathogenic E. coli O127:H7 (EPEC) induce characteristic F-actin rich pedestals on infected mammalian cells. Each pathogen delivers its own translocated intimin receptor (Tir) to the host cell to act as a receptor for the bacterial outer membrane adhesin, intimin. Interaction of translocated Tir with intimin is essential for mammalian cell binding and host colonization, as well as to induce actin pedestal formation in vitro. In spite of these parallels, EHEC and EPEC Tir appear to generate actin pedestals by distinct mechanisms. Further, while the ability to form actin pedestals is a striking phenotype, the function of pedestals during infection remains unclear. To address these issues, a systematic and quantitative analysis of Tir-mediated actin assembly was conducted. We identified a three-residue Tir sequence involved in actin pedestal formation for both EHEC and EPEC, and developed evidence that the two pathogens trigger a common pathway for actin assembly. Further, the ability of these bacteria to promote actin assembly appears to promote both intimin-mediated bacterial binding in vitro and optimal colonization during experimental animal infection.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal. / Lors de leur différenciation, les neurones développent deux types de prolongements cytoplasmiques, dendrites et axones. L'élaboration de ces prolongements est médiée par les éléments du cytosquelette, plus particulièrement, les microtubules et les microfilaments d'actine (actine-F). L'expression de la protéine associée aux microtubules-2 (MAP-2) est nécessaire au développement des neurites mineures, les premiers prolongements cytoplasmiques émis par un neurone. Ceux-ci n'ont pas une identité dendritique ou axonale. Par la suite, l'expression de MAP2 est nécessaire au développement et au maintien des dendrites. L'expression de MAP2 est régulée par épissage alternatif au cours de la différenciation neuronale. Il existe quatre isoformes de la protéine MAP2, MAP2a, MAP2b, MAP2c et MAP2d. MAP2b et MAP2c sont les isoformes les mieux caractérisées. Elles peuvent être subdivisées en deux domaines: un domaine de liaison aux microtubules situé en C-terminal et un domaine de projection en N-terminal. Le domaine de liaison aux microtubules est responsable de l'interaction de MAP2 avec les microtubules alors que le rôle du domaine de projection n1est toujours pas clairement défini. MAP2c est exprimée dans les neurones immatures alors que MAP2b est présente dans les neurones immatures et matures. Dans les neurones immatures, ces deux isoformes se retrouvent dans les neurites mineures et elles sont ciblées préférentiellement dans les dendrites au cours de la différenciation neuronale. Le rôle respectif de MAP2b et MAP2c dans l'élaboration de prolongements cytoplasmiques par un neurone demeure inconnu. MAP2b et MAP2c diffèrent par la présence d'une séquence additionnelle de 1372 acides aminés dans le domaine de projection de MAP2b. L'insertion d'une séquence aussi importante dans le domaine de projection de MAP2b indique que ce domaine joue un rôle important. Le but de la présente étude consiste à mieux comprendre le rôle de cette séquence dans la fotmation de prolongements cytoplasmiques. Pour cette analyse fonctionnelle, nous avons produit six formes tronquées de MAP2b qui contiennent des délétions dans le domaine de projection de MAP2b. Ces formes tronquées de MAP2b ont été exprimées dans les cellules ovariennes Spodoptera frugiperda (Sf9). En effet, ce système cellulaire est très intéressant puisque nous avons démontré que l'expression de MAP2b et MAP2c dans ces cellules résulte en la formation de prolongements cytoplasmiques. Cependant, ces deux isoformes de MAP2 induisent des patterns distincts de formation de prolongements cytoplasmiques. 60% des cellules qui expriment MAP2c développent des prolongements alors que 14% des cellules qui expriment MAP2b ont des prolongements. De plus, les cellules qui expriment MAP2c ont la tendance à développer des prolongements multiples alors que celles qui expriment MAP2b présentent un seul prolongement. Nos présents résultats démontrent que le domaine de projection de MAP2b a un effet inhibiteur sur la capacité du domaine de liaison aux microtubules à induire la formation de prolongements cytoplasmiques. En effet, 53% des cellules qui n'expriment que le domaine de liaison aux microtubules ont des prolongements en comparaison à 14% des cellules qui expriment MAP2b. De plus, l'expression de trois formes tronquées de MAP2b qui ont une délétion partielle de la séquence additionnelle de 1372 acides aminés induit un plus grand pourcentage de cellules avec prolongements (27%, 31 % et 41 % ). Toutefois, la séquence commune à MAP2c et MAP2b qui est située à l'extrémité 5' du domaine de projection semble favoriser la formation de plusieurs prolongements puisque sa délétion résulte en un plus faible pourcentage de cellules avec des prolongements multiples. Nos résultats suggèrent donc que l'insertion de la séquence additionnelle de 1372 acides aminés dans le domaine de projection de MAP2b diminue sa capacité à induire la formation de prolongements cytoplasmiques. Étant donné que MAP2b et MAP2c sont capables de se lier à l'actine-F et aux microtubules, nous avons examiné la distribution de ces deux éléments du cytosquelette dans les cellules Sf9 qui expriment les différentes formes tronquées de MAP2b. Toutes les formes tronquées de MAP2b induisent la formation de faisceaux de microtubules à l'exception des formes tronquées qui correspondent aux domaines de projection de MAP2c et de MAP2b. Dans les cellules qui présentent des prolongements, on note une réorganisation de l'actine-F. Dans les cellules qui expriment la forme mutante correspondant au domaine de projection de MAP2b, l'actine-F est distribuée sous forme d'un anneau sous la membrane plasmique. De plus, le domaine de projection a une distribution similaire. Ceci suggère que le domaine de projection de MAP2b interagit avec l'actine-F. Donc la séquence additionnelle de 13 72 acides aminés pourrait contenir un domaine de liaison à l'actine. En conclusion, nos résultats indiquent que MAP2b aurait une moins grande capacité que MAP2c à promouvoir la formation de neurites mais elle pourrait contribuer à leur stabilisation au cours de la différenciation neuronale par le fait qu'elle contient des domaines additionnels de liaison à l'actine.