Orientador: Júlio Lopes Sequeira / Resumo: As neoplasias mamárias das gatas frequentemente são malignas e agressivas, sendo os tipos mais comuns classificados como carcinomas tubulopapilíferos, sólidos e cribriformes. O grau histológico tem relação com o comportamento biológico desses tumores. No entanto poucos estudos tem abordado a cinética celular, a expressão de marcadores epiteliais e mioepiteliais, ou mesmo de moléculas de adesão e suas relações com a agressividade tumoral. Assim, o objetivo deste trabalho foi relacionar o tipo histológico dos carcinomas mamários das gatas e seus graus histológicos com os índices proliferativos e apoptóticos, e a expressão imuno-histoquímica de CK14, alfa-SMA, E-caderina e P-caderina. Foram utilizadas 31 amostras de carcinomas mamários de gatas. Submetidas a técnica imuno-histoquímica indireta com os anticorpos Ki-67, caspase-3-clivada, CK14, alfa-SMA, E-caderina e P-caderina. Predominaram as gatas SRD, com média de idade de 12 anos. Em frequência, o percentual dos tipos histológicos foi: 42%, 45,50% e 12,50% para os carcinomas tubulopapilíferos, sólidos e cribriforme; e foi de 9,65%, 41,95% e 48,80%, para os graus I, II e III, respectivamente. Os carcinomas tubulopapilíferos mostraram índice mitótico inferior aos carcinomas sólidos, assim como os carcinomas de grau I em relação aos de grau II e III. A característica basal (CK14 +) foi frequente nesses carcinomas. O subtipo complexo (alfa-SMA + ou alfa-SMA/CK14 +/-) é raro. Houve perda da expressão de E-caderina a medida que se ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mammary tumors of the cats are often malignant and aggressive, the most common types classified as tubulopapillary, solid and cribriform carcinomas. The histological grade is related to the biological behavior of these tumors. However few studies have addressed the cell kinetics, the expression of epithelial and myoepithelial markers, or adhesion molecules and their relationship with tumor aggressiveness. The objective of this study was to correlate the histologic type of breast carcinomas of the cats and their histological grades with proliferative and apoptotic indices, and immunohistochemical expression of CK14, alpha-SMA, E-cadherin and Pcadherin. 31 samples of breast carcinomas cats were used. Subjected to indirect immunohistochemical technique with antibodies Ki-67, caspase-3, cleaved CK14, alpha-SMA, E-cadherin and P-cadherin. Predominated SRD cats, with a mean age of 12 years. In frequency, the percentage of histological types was 42%, 45.50% and 12.50% for tubulopapillary, solid and cribriform carcinomas; and it was 9.65%, 41.95% and 48.80% for grades I, II and III, respectively. The tubulopapillary carcinomas showed mitotic index lower than the solid carcinomas, as well as grade I carcinomas compared to levels II and III. The basal feature (CK14 +) was common in these carcinomas. The complex subtype (alpha-SMA + or alpha-SMA / CK14 +/-) is rare. There was a loss of Ecadherin expression as it becomes more aggressive. The P-cadherin was expressed high regardless of hi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Psidium cattleianum Sabine, also known as strawberry guava, is a Brazilian native species whose fruits are valued for a high level of vitamin C, which are consumed in natura. Besides, it is also a species used for medicinal purposes. The use of plants as a therapeutic resource is a widely spread practice in popular medicine worldwide, although there have been few studies about their chemical composition as well as their potential risks to human health. Besides, the germplasm characterization of a species, as the pollen viability determination for instance, is important in maintaining a database that may be useful for future research. Considering that some plants cause adverse effects, the purpose of the present study was to analyze the antiproliferative and genotoxic effect of strawberry guava juice and strawberry guava leaf aqueous extracts by Allium cepa test system. This study also aimed at analyzing strawberry guava pollen grains through different colorimetric techniques so as to assess their viability. Fruits from three accessions were used for preparing juice at the concentration of 125 g.L-1, and dried leaves from four accessions were used for preparing aqueous extracts at the concentrations of 15 g.L-1 and 75 g.L-1. Distilled water was used as negative control, whereas glyphosate served as positive control. Inhibition of cell division as well as the occurrence of chromosomal abnormalities in the meristematic cells of Allium cepa roots were also analyzed. In order to identify the phenolic compounds, juice and aqueous extract samples were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). The pollen viability of twenty accessions was determined by two colorimetric methods. The statistical analysis was carried out using Chi-square and Scott-Knott tests (p < 0,05). The analysis of genotoxicity showed that the strawberry guava juice induced cell proliferation and chromosomal abnormalities, besides inhibiting the formation of the mitotic spindle. The extracts prepared with leaves from four strawberry guava accessions caused a decrease in cell proliferation, however, only the extracts prepared with leaves collected in Cerro Largo (CL) induced chromosomal alterations. The following phenolic compounds were identified in the composition of the strawberry guava juice and the leaf aqueous extracts: gallic acid, catechin, chrologenic acid, caffeic acid, ellagic acid, epicatechin, rutin, quercitrin, isoquercitrin, quercetin and kaempferol. The pollen viability determined through 2% acetic orcein was higher than 97,9%, and between 43% and 97% when determined through Alexander s stain. One concluded that the strawberry guava juice has proliferative, genotoxic and anti-mitotic action upon Allium cepa. Moreover, the leaf aqueous extracts produce an antiproliferative effect, whereas the accession collected in Cerro Largo is genotoxic, which may be valid to other types of eukaryotic cells. The most predominant phenolic compounds identified in the strawberry guava juice were epicatechin (two accessions) and isoquercitrin (one accession). Quercitrin was the most predominant compound in the leaf aqueous extracts from one accession, and quercetin was the most predominant one in the remaining accessions. One also concluded that the Alexander s stain was more accurate in regard to the actual pollen viability mainly due to its two stains (green malachite and fuchsine). / Psidium cattleianum Sabine, também conhecido como araçá, é uma espécie nativa do Brasil, valorizada pelo alto teor de vitamina C em seus frutos, que são consumidos in natura. Além disso, também é uma espécie utilizada com fins medicinais. O uso de plantas como recurso terapêutico é uma prática bastante difundida na medicina popular mundial e, apesar dessa generalidade da fitoterapia, são poucos os estudos sobre a composição química das plantas, bem como sobre os seus potenciais riscos à saúde da população. Além disso, a caracterização de germoplasma de uma espécie, a exemplo da determinação da viabilidade polínica, é importante na manutenção de um banco de informações que podem ser úteis em trabalhos futuros. Tendo em vista que algumas plantas apresentam efeitos adversos, o presente trabalho objetivou analisar o efeito antiproliferativo e genotóxico do suco dos frutos de P. cattleianum e do extrato aquoso de suas folhas usando o sistema-teste de Allium cepa L. (cebola). Ademais, o presente também objetivou realizar a análise de seus grãos de pólen e estimar sua viabilidade através de diferentes técnicas de coloração. Frutos de três acessos foram utilizados no preparo dos sucos na concentração de 125 g.L-1, e folhas secas de quatro acessos foram utilizadas na preparação dos extratos aquosos em duas concentrações diferentes: 15 g.L-1 e 75 g.L-1, sendo utilizada a água destilada como controle negativo e o glifosato como controle positivo. Foi analisada a inibição da divisão celular e também a presença de danos cromossômicos nas células meristemáticas de raízes de A. cepa. Para a determinação dos compostos fenólicos, as amostras dos sucos e dos extratos aquosos foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A viabilidade polínica de vinte acessos de P. cattleianum foi determinada usando dois métodos de coloração. A análise estatística foi realizada pelos testes Qui-quadrado e Scott-Knott (p < 0,05). A análise da genotoxicidade mostrou que o suco de araçá induziu a proliferação celular e alterações cromossômicas, além de inibir a formação do fuso mitótico em A. cepa. Os extratos preparados com as folhas dos quatro acessos reduziram a proliferação celular, no entanto, apenas o extrato das folhas coletadas no município de Cerro Largo (CL) induziu alterações cromossômicas. Os sucos e os extratos aquosos das folhas apresentaram na sua constituição os compostos fenólicos: ácido gálico, catequina, ácido clorogênico, ácido cafeico, ácido elágico, epicatequina, rutina, quercitrina, isoquercitrina, quercetina e canferol. A viabilidade polínica determinada pela orceína acética 2% foi superior a 97,9%, enquanto que com o reativo de Alexander variou entre 43% e 97%. Conclui-se que o suco de araçá possui efeito proliferativo, genotóxico e antimitótico em A. cepa, enquanto que os extratos aquosos são antiproliferativos e o acesso CL é genotóxico, o que pode ser extrapolado para outros tipos celulares eucarióticos. Os compostos fenólicos majoritários no suco são de epicatequina (dois acessos) e isoquercitrina (um acesso). Quercitrina é o composto fenólico predominante no extrato aquoso das folhas de um acesso e quercitina nos demais. Conclui-se também que o reativo de Alexander foi mais fiel à viabilidade real, principalmente devido à dupla coloração oferecida por esse corante (verde de malaquita e fucsina ácida).

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Cordia trichotoma (Vell.) Arráb. ex Steud., known as louro-pardo, belongs to the Boraginaceae family and is widely distributed in Brazil. In Rio Grande do Sul (RS), is found in the Alto Uruguai and Depressão Central. This is a large species, reaching 35 meters in height. It is appreciated for the quality of its wood, which has scenic value, and can be employed in the recovery of degraded areas; its leaves have medicinal value, which are used to prepare teas. These, in turn, are used to treat kidney diseases, rheumatism, arthritis and rickets. The Allium cepa test is used as a bioindicator of genotoxic and antiproliferative capacity of aqueous extracts (teas) prepared with different plant materials such as leaves, flowers, fruit and bark. This study aimed to evaluate the antiproliferative potential of infusions of four populations of C. trichotoma on the cell cycle of A. cepa, as well as to analyze the phenolic compounds in infusions. The leaves and fruits of louro-pardo, used in the assembly of the experiments, were collected in three municipalities in the RS. For experiment 1, teas (infusions ) leaves were used , and for the experiment 2, the fruits were used. Six groups of four onion bulbs rooting in water were used, which consisted of six treatments and four replications for each of the populations of C. trichotoma in both experiments. The treatments were: T1 - negative control in distilled water ; T2- infusion of 5 g.L-1 ; T3- infusion of 20 g.L-1 ; T4- infusion of 5 g.L-1 ; T5- infusion of 20 g.L-1 ; T6- positive control in glyphosate 2% . After treatments, the roots of A. cepa were fixed, conserved and then slides prepared by squashing technique, stained with 2% acetic orcein. Therefore, it were subsequently analyzed under a microscope 40x. It were counted 500 cells by bulb, totaling 2000 cells for each treatment and for each of the populations. The mitotic index was calculated as well as the verification of possible irregularities in the cell cycle. Phenolic compounds were determined by the technique of high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed a statistically significant difference for the increased inhibition of cell division as the concentration of infusions of louro-pardo in both experiments, no genotoxicity was observed in extracts. Compounds that appeared in larger quantities were caffeic acid, rosmarinic acid and ellagic acid. C. trichotoma infusions prepared in different concentrations exhibit antiproliferative potential and have no genotoxic activity on the cell cycle of A. cepa. The results obtained in the area of genotoxicity as well as the phenolic found in C. trichotoma infusions constitute new information for this species. / Cordia trichotoma (Vell.) Arráb. ex Steud., conhecida como louro-pardo, pertence à família Boraginaceae e é de ampla distribuição geográfica no Brasil. No Rio Grande do Sul (RS), é encontrada nas regiões do Alto Uruguai e Depressão Central. Trata-se de uma espécie de grande porte, podendo chegar a 35 metros de altura. É apreciada pela qualidade de sua madeira, a qual possui valor paisagístico, e pode ser empregada na recuperação de áreas degradadas; suas folhas têm valor medicinal, as quais são utilizadas para o preparo de chás. Estes, por sua vez, são empregados no tratamento de doenças renais, reumatismo, artrite e raquitismo. O teste de Allium cepa é utilizado como bioindicador da capacidade antiproliferativa e genotóxica de extratos aquosos (chás) preparados com materiais vegetais diversos como folhas, flores, frutos e cascas. Este estudo teve como objetivos verificar o potencial antiproliferativo das infusões de quatro populações de C. trichotoma sobre o ciclo celular de A. cepa, bem como analisar os compostos fenólicos presentes nas infusões. As folhas e frutos de louro-pardo, utilizados na montagem dos experimentos, foram coletados em três municípios do RS. Para o experimento 1, foram usados chás (infusões) das folhas, e para o experimento 2, utilizaram-se os frutos. Foram usados seis grupos de quatro bulbos de cebola enraizando em água, os quais constituíram seis tratamentos com quatro repetições para cada uma das populações de C. trichotoma, em ambos os experimentos. Os tratamentos foram: T1- controle negativo em água destilada; T2- infusão de 5 g.L-1; T3- infusão de 20 g.L-1; T4- infusão de 5 g.L-1; T5- infusão de 20 g.L-1; T6- controle positivo em glifosato 2%. Após os tratamentos, as raízes de A. cepa foram fixadas, conservadas e então preparadas lâminas pela técnica de esmagamento, coradas com orceína acética 2%. Posteriormente, foram analisadas no microscópio com aumento de 40x. Foi realizada a contagem de 500 células por bulbo, totalizando 2000 células para cada um dos tratamentos e para cada uma das populações. Foi realizado o cálculo do índice mitótico, bem como a verificação de possíveis irregularidades no ciclo celular. Os compostos fenólicos foram determinados por meio da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os resultados mostraram diferença estatística significativa para o aumento da inibição da divisão celular conforme o aumento da concentração das infusões de louro-pardo em ambos os experimentos, não tendo sido observada genotoxicidade nos extratos. Os compostos que apareceram em maior quantidade foram o ácido cafeico, o ácido rosmarínico e o ácido elágico. As infusões de C. trichotoma preparadas nas diferentes concentrações apresentam potencial antiproliferativo e não possuem atividade genotóxica sobre o ciclo celular de A. cepa. Os resultados obtidos na área de genotoxicidade, bem como os fenólicos encontrados nas infusões de C. trichotoma configuram informações inéditas para esta espécie.

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / Paspalum notatum, native grass biome Pampa, Rio Grande do Sul, has high forage value, but has difficulty germinating seeds with low viability. Inserted in this context are the promoters of germination and biomass, biostimulants stimulate® and bioagent Trichoderma spp. by mechanisms that influence the metabolism of action of the species. The present study investigated the promotion of seed germination and development of P. notatum. Through the Allium cepa test in ten treatments (four replicates per treatment), eight with metabolites of Trichoderma spp. and two controls in the absence of metabolites were selected isolates of trichoderma biological agent. The test of sanity, the identification of fungi associated with seeds used the methods of filter paper and plating on solid agar PDA (potato dextrose agar). With the in vitro technique of direct confrontation of the antagonist action on three fungal contaminants of highest incidence was observed. In a preliminary test, pre-treatment is selected to germination of P. notatum. Seed germination in greenhouse consisted of 16 treatments with four replicates, the control treatments, the three isolates, the stimulate®, the combination of each of the three isolates stimulate®, all with and without pretreatment, analysis of the data was through the Genes program. For reviews of morphogenesis, four were randomly chosen tillers per treatment, they monitored for the appearance and elongation and leaf senescence. This monitoring was performed two times per week. The top three trichoderma isolates selected in test A. cepa strain were 2B2, C1, 2B12. The removal of the seed coat structures of P. notatum was the pre-treatment showed the best performance with 34.5% twinned seeds. In the test of sanity the fungal genera Aspergillus, Curvularia, and Fusarium Geniculosporium were identified, isolated and 2B2 of Trichoderma spp. efficient for direct to these fungal genera confrontation. For the IVE (index emergency speed), the combination treatments of biological powder 2B12 isolated from trichoderma and biostimulating Stimulate® and only Stimulate® biostimulating with pretreatment and without pretreatment combination of biological powder isolated 2B2 Trichoderma with biostimulating Stimulate®, achieved the best results, with 14.48, 13.93 and 12.75, respectively. The biostimulating stimulate® promotes the rate of speed of emergence of seeds of P. notatum and the production of dry matter, the initial rate of elongation of the sheet (TAIF) positively interfere in the dry weight of shoots. / Paspalum notatum, gramínea nativa do bioma Pampa, Rio Grande do Sul, possui alto valor forrageiro, porém apresenta dificuldade de germinação de sementes, com baixa viabilidade. Inseridos neste contexto estão os promotores de germinação e biomassa, bioestimulante Stimulate® e o bioagente Trichoderma spp. que através de mecanismos de ação influenciam no metabolismo da espécie. O presente trabalho objetivou estudar a promoção da germinação das sementes e desenvolvimento de P. notatum. Através do teste de Allium cepa em dez tratamentos (quatro repetições por tratamento), oito com metabólitos de isolados de Trichoderma spp. e dois controles na ausência de metabólitos foram selecionados isolados do agente biológico trichoderma. O teste da sanidade, a identificação dos fungos associados às sementes utilizaram-se os métodos do papel de filtro e do plaqueamento em meio ágar sólido BDA (batata dextrose ágar). Com a técnica in vitro de confrontação direta foi observada a ação do antagonista sobre três fungos contaminantes de maior incidência. Em teste preliminar, selecionou-se o pré-tratamento para a germinação das sementes de P. notatum. A germinação das sementes em casa de vegetação constou de 16 tratamentos, com quatro repetições, os tratamentos controle, os três isolados, o stimulate®, a combinação de cada um dos três isolados mais stimulate®, todos com e sem o pré-tratamento, análise dos dados foi através do programa Genes. Para as avaliações das características morfogênicas, foram escolhidos aleatoriamente quatro perfilhos por tratamento, sendo os mesmos monitorados quanto ao aparecimento e alongamento de folhas e senescência. Este monitoramento era realizado duas vez por semana. Os três melhores isolados de trichoderma selecionado no teste de A. cepa foram o 2B2, C1, 2B12. A retirada das estruturas de revestimento das sementes de P. notatum foi o pré-tratamento que apresentou o melhor desempenho com 34,5% das sementes geminadas. No teste da sanidade foram identificados os gêneros de fungos Aspergillus, Curvularia, Geniculosporium e Fusarium, e o isolado 2B2 de Trichoderma spp. mostrou eficiente na confrontação direta a estes gêneros de fungos. Para o IVE (índice de velocidade emergência), os tratamentos da combinação do pó biológico do isolado 2B12 de trichoderma e o bioestimulante Stimulate® e somente o bioestimulante Stimulate® com pré-tratamento, e sem pré-tratamento a combinação do pó biológico do isolado 2B2 de trichoderma com bioestimulante Stimulate®, obtiveram os melhores resultados, com 14.48, 13.93 e 12.75, respectivamente. O bioestimulante stimulate®, promove o índice de velocidade de emergência das sementes de P. notatum e a produção de massa seca, a taxa de alongamento inicial da folha (TAIF) interfere positivamente, na massa seca da parte aérea.

ABSTRACT Triticum sphaerococcum (AABBDD, 2n = 6x = 42) is a land race of wheat known from the Indian subcontinent. It has several favourable characters including short and strong culms, hemispherical grains with a shallow crease (that may increase the yield of white flour), higher protein content compared to bread wheat (T. aestivum), and resistance to drought, and yellow rust caused by Puccinia striiformis. However, an unfavourable characteristic of T. sphaerococcum is its lower yield compared to bread wheat. Being a land race, the sphaerococcum wheat is poorly studied. This study was undertaken to increase knowledge of the physiology and genetics of this land race and determine if it may be possible to separate the favourable characters of T. sphaerococcum from its unfavourable characters. Plant height in bread wheat is controlled by many genes. ‘Reduced Height’ (Rht) genes which differ in their response to externally applied gibberellic acid (GA3) are responsible for the short stature of modern bread wheat varieties. Therefore, GA3 was used to probe the relationship between the semidwarf sphaerococcum phenotype and the Rht gene. T. sphaerococcum variety Sp5 showed a unique “seedling response” to externally applied GA3 when compared with T. aestivum varieties harbouring Rht1, Rht2, Rht8, Rht12, Rht13 or Rht18 alleles. A mapping population of doubled haploids was generated through wide hybridisation of F1 (Sp5 x Otane) with Zea mays. A genome-wide scan of Sp5 and Otane (parents) using 348 microsatellite (SSR) markers showed that only 169 of these markers (49%) were polymorphic between the parents. A DArT profiling yielded 348 markers that were polymorphic between the parents. Microsatellite markers and DArT markers were used to create a genetic map. The mapping population was phenotyped and a quantitative trait loci (QTL) analysis was performed for component traits of the complex sphaerococcum trait including plant height, spike length, awn length, yield, grain shape and crease size. Results of the QTL analysis indicated that it may be difficult to separate the favourable characters of T. sphaerococcum from its unfavourable characters through mutation because the component traits of the complex sphaerococcum trait may be under pleiotropic control of the Sp gene. The hypothesis that T. sphaerococcum originated through a mutation in T. aestivum was tested through induced mutation using gamma rays. Mutants from sphaerococcum-type to aestivum-type were isolated and phenotyped. Sphaerococcum-type mutants also were isolated and characterised from mutated aestivum-type wheat suggesting a possible origin of T. sphaerococcum through a mutation in T. aestivum.

ABSTRACT Triticum sphaerococcum (AABBDD, 2n = 6x = 42) is a land race of wheat known from the Indian subcontinent. It has several favourable characters including short and strong culms, hemispherical grains with a shallow crease (that may increase the yield of white flour), higher protein content compared to bread wheat (T. aestivum), and resistance to drought, and yellow rust caused by Puccinia striiformis. However, an unfavourable characteristic of T. sphaerococcum is its lower yield compared to bread wheat. Being a land race, the sphaerococcum wheat is poorly studied. This study was undertaken to increase knowledge of the physiology and genetics of this land race and determine if it may be possible to separate the favourable characters of T. sphaerococcum from its unfavourable characters. Plant height in bread wheat is controlled by many genes. ‘Reduced Height’ (Rht) genes which differ in their response to externally applied gibberellic acid (GA3) are responsible for the short stature of modern bread wheat varieties. Therefore, GA3 was used to probe the relationship between the semidwarf sphaerococcum phenotype and the Rht gene. T. sphaerococcum variety Sp5 showed a unique “seedling response” to externally applied GA3 when compared with T. aestivum varieties harbouring Rht1, Rht2, Rht8, Rht12, Rht13 or Rht18 alleles. A mapping population of doubled haploids was generated through wide hybridisation of F1 (Sp5 x Otane) with Zea mays. A genome-wide scan of Sp5 and Otane (parents) using 348 microsatellite (SSR) markers showed that only 169 of these markers (49%) were polymorphic between the parents. A DArT profiling yielded 348 markers that were polymorphic between the parents. Microsatellite markers and DArT markers were used to create a genetic map. The mapping population was phenotyped and a quantitative trait loci (QTL) analysis was performed for component traits of the complex sphaerococcum trait including plant height, spike length, awn length, yield, grain shape and crease size. Results of the QTL analysis indicated that it may be difficult to separate the favourable characters of T. sphaerococcum from its unfavourable characters through mutation because the component traits of the complex sphaerococcum trait may be under pleiotropic control of the Sp gene. The hypothesis that T. sphaerococcum originated through a mutation in T. aestivum was tested through induced mutation using gamma rays. Mutants from sphaerococcum-type to aestivum-type were isolated and phenotyped. Sphaerococcum-type mutants also were isolated and characterised from mutated aestivum-type wheat suggesting a possible origin of T. sphaerococcum through a mutation in T. aestivum.

INTRODUÇÃO: o padrão-ouro para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais (TCAs) e sua diferenciação entre adenomas e carcinomas é o sistema de Weiss, cuja aplicação é limitada pela baixa reprodutibilidade de alguns dos critérios que o compõe. Recentemente foi proposto e validado um algoritmo diagnóstico para os TCAs baseado na integridade do arcabouço de reticulina e da membrana basal. Os carcinomas adrenais são tumores raros e apresentam prognóstico reservado, mesmo nos pacientes com doença aparentemente localizada. Além do estadiamento e da extensão da ressecção cirúrgica, outros dados foram reportados na literatura como tendo importância prognóstica, tais como idade ao diagnóstico, padrão funcional, tamanho tumoral, extensão local do tumor primário e alguns achados histológicos e imuno-histoquímicos, com destaque à taxa mitótica e ao índice de Ki-67. O sistema de Weiss, embora permita o diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas, não foi testado completamente como uma ferramenta para distinguir os carcinomas com boa evolução clínica daqueles com desfecho desfavorável. OBJETIVOS: o presente estudo teve como objetivo primário construir um nomograma para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinoma adrenal, a partir de dados clínico-patológicos. O objetivo secundário foi avaliar o desempenho do algoritmo da reticulina no diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas do córtex adrenal. MÉTODOS: para a construção do nomograma, foram analisados dados clínico-patológicos de 129 portadores de carcinomas adrenais atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo entre 1976 e 2010. A avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina para o diagnóstico histológico dos TCAs foi feita a partir do exame de 89 lâminas (45 adenomas e 44 carcinomas adrenais), que foram classificadas de acordo com o sistema de Weiss e pelo algoritmo da reticulina, pelo mesmo patologista e de forma cega. RESULTADOS: utilizando a análise de regressão logística binária, foi proposto um escore prognóstico com cinco covariáveis: padrão funcional outro que não o hiperandrogenismo isolado, tamanho tumoral > 7,5 cm, tumor primário classificado como T3 ou T4, presença de invasão venosa microscópica e índice mitótico > 5/50 campos de grande aumento. O escore prognóstico estava calibrado de acordo com o teste de aderência de Hosmer-Lemeshow (P =0,9329) e apresentou excelente desempenho global (escore de Brier =0,0738). Finalmente, a capacidade discriminatória do modelo, determinada pela área sob a curva ROC (AROC), foi considerada quase perfeita (AROC, 0,9611; IC95%, 0,92676-0,99552). O modelo preditivo foi validado internamente com 200 reamostragens por bootstrap. A partir destes resultados, desenvolvemos um aplicativo para iOS7 para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinomas adrenais (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). O aplicativo está disponível para download gratuito na App Store. Em relação à avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina, o mesmo apresentou sensibilidade =84,1% e especificidade =95,6% para o diagnóstico de carcinoma adrenal. Não se observou diferença estatisticamente significante entre os diagnósticos obtidos pelo escore de Weiss e pelo algoritmo da reticulina (P =0,1797; Teste exato de McNemar). A concordância dos dois sistemas, avaliada pelo coeficiente k, foi considerada substancial (k =0,7975; IC95%, 0,6728-0,9221). CONCLUSÕES: propusemos e validamos internamente um escore prognóstico baseado em informações clínicopatológicas que estão facilmente disponíveis ao clínico. O modelo proposto está disponível para uso como um aplicativo gratuito para iOS7 e é capaz de estimar o risco de desfechos desfavoráveis nos pacientes com carcinoma cortical adrenal. O escore pode ter grande utilidade na determinação do tipo e frequência do acompanhamento clínico-radiológico e na decisão de um tratamento profilático, após a retirada cirúrgica completa do carcinoma adrenal. O algoritmo da reticulina teve desempenho equivalente ao sistema de Weiss para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais, mas oferece a vantagem de ter aplicação mais fácil / INTRODUCTION: The gold standard for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors (ACTs) and for the differentiation between adenomas and carcinomas is the Weiss system, whose application is limited by poor reproducibility of some of its criteria. Recently, a diagnostic algorithm for ACT diagnosis based on the integrity of the reticulin network and the basal membrane has been proposed and validated. Adrenal carcinomas are rare tumors and have a poor prognosis, even in patients with apparently localized disease. Besides tumor staging and extent of surgical resection, other data have been reported in the literature as having prognostic importance, such as age at diagnosis, the functional pattern, tumor size, local extension of the primary tumor and some histological and immunohistochemical findings, such as the mitotic rate and the Ki-67 index. The Weiss system, while allowing the differential diagnosis between adrenal cortical adenomas and carcinomas, has not been fully tested as a tool for distinguishing carcinomas with favorable clinical outcome from those with unfavorable outcome. OBJECTIVES: The primary objective of this study was to construct a nomogram for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal cortical carcinoma, based on clinical and pathological data. The secondary objective was to evaluate the performance of the reticulina algorithm in the differential diagnosis between adenomas and carcinomas of the adrenal cortex. METHODS: For the construction of the nomogram, clinical and pathological data from 129 patients with adrenal cortical carcinomas treated at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo between 1976 and 2010 were analyzed. The evaluation of the performance of the reticulin algorithm for the histological diagnosis of ACTs was made from the examination of 89 slides (45 adenomas and 44 adrenal carcinomas), which were classified according to the Weiss system and the reticulin algorithm by the same pathologist in a blinded fashion. RESULTS: Using binary logistic regression analysis, we proposed a prognostic score with five covariates: a functional pattern other than isolated hyperandrogenism, a tumor size > 7.5 cm, a primary tumor classified as T3 or T4, the presence of microscopic venous invasion and a mitotic index > 5/50 high-power fields. The prognostic score was calibrated according to the Hosmer-Lemeshow goodness-of-fit test (P =0.9329) and showed excellent overall performance (Brier score =0.0738). Finally, the discriminatory ability of the model, as determined by the area under the ROC curve (AROC), was considered near-perfect (AROC, 0.9611; 95%CI, 0.92676 to 0.99552). The predictive model was internally validated with 200 bootstrap resamples. Based on these results, we develop an app for iOS7 for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal carcinomas (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). The app is available for free download on the App Store. Regarding the assessment of the performance of the reticulin algorithm, it had a sensitivity of 84.1% and specificity of 95.6% for the diagnosis of adrenal cortical carcinoma. No statistically significant difference between the diagnoses obtained by Weiss score and the reticulin algorithm was observed (P =0.1797, McNemar\'s exact test). The concordance between the two systems, assessed by the k coefficient, was considered substantial (k =0.7975; 95%CI, 0.6728 to 0.9221). CONCLUSIONS: we proposed and internally validated a prognostic score based on clinical and pathological information that are readily available to the attending physician. The proposed model is available as a free app for iOS7 and can estimate the risk of adverse outcomes in patients with adrenal cortical carcinoma. The score may be useful in determining the type and frequency of clinical and radiological evaluation and the decision of adjuvant treatment after complete surgical removal of the adrenal carcinoma. The reticulin algorithm was equivalent to the Weiss system for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors, but offers the advantage of an easier application

INTRODUÇÃO: o padrão-ouro para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais (TCAs) e sua diferenciação entre adenomas e carcinomas é o sistema de Weiss, cuja aplicação é limitada pela baixa reprodutibilidade de alguns dos critérios que o compõe. Recentemente foi proposto e validado um algoritmo diagnóstico para os TCAs baseado na integridade do arcabouço de reticulina e da membrana basal. Os carcinomas adrenais são tumores raros e apresentam prognóstico reservado, mesmo nos pacientes com doença aparentemente localizada. Além do estadiamento e da extensão da ressecção cirúrgica, outros dados foram reportados na literatura como tendo importância prognóstica, tais como idade ao diagnóstico, padrão funcional, tamanho tumoral, extensão local do tumor primário e alguns achados histológicos e imuno-histoquímicos, com destaque à taxa mitótica e ao índice de Ki-67. O sistema de Weiss, embora permita o diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas, não foi testado completamente como uma ferramenta para distinguir os carcinomas com boa evolução clínica daqueles com desfecho desfavorável. OBJETIVOS: o presente estudo teve como objetivo primário construir um nomograma para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinoma adrenal, a partir de dados clínico-patológicos. O objetivo secundário foi avaliar o desempenho do algoritmo da reticulina no diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas do córtex adrenal. MÉTODOS: para a construção do nomograma, foram analisados dados clínico-patológicos de 129 portadores de carcinomas adrenais atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo entre 1976 e 2010. A avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina para o diagnóstico histológico dos TCAs foi feita a partir do exame de 89 lâminas (45 adenomas e 44 carcinomas adrenais), que foram classificadas de acordo com o sistema de Weiss e pelo algoritmo da reticulina, pelo mesmo patologista e de forma cega. RESULTADOS: utilizando a análise de regressão logística binária, foi proposto um escore prognóstico com cinco covariáveis: padrão funcional outro que não o hiperandrogenismo isolado, tamanho tumoral > 7,5 cm, tumor primário classificado como T3 ou T4, presença de invasão venosa microscópica e índice mitótico > 5/50 campos de grande aumento. O escore prognóstico estava calibrado de acordo com o teste de aderência de Hosmer-Lemeshow (P =0,9329) e apresentou excelente desempenho global (escore de Brier =0,0738). Finalmente, a capacidade discriminatória do modelo, determinada pela área sob a curva ROC (AROC), foi considerada quase perfeita (AROC, 0,9611; IC95%, 0,92676-0,99552). O modelo preditivo foi validado internamente com 200 reamostragens por bootstrap. A partir destes resultados, desenvolvemos um aplicativo para iOS7 para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinomas adrenais (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). O aplicativo está disponível para download gratuito na App Store. Em relação à avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina, o mesmo apresentou sensibilidade =84,1% e especificidade =95,6% para o diagnóstico de carcinoma adrenal. Não se observou diferença estatisticamente significante entre os diagnósticos obtidos pelo escore de Weiss e pelo algoritmo da reticulina (P =0,1797; Teste exato de McNemar). A concordância dos dois sistemas, avaliada pelo coeficiente k, foi considerada substancial (k =0,7975; IC95%, 0,6728-0,9221). CONCLUSÕES: propusemos e validamos internamente um escore prognóstico baseado em informações clínicopatológicas que estão facilmente disponíveis ao clínico. O modelo proposto está disponível para uso como um aplicativo gratuito para iOS7 e é capaz de estimar o risco de desfechos desfavoráveis nos pacientes com carcinoma cortical adrenal. O escore pode ter grande utilidade na determinação do tipo e frequência do acompanhamento clínico-radiológico e na decisão de um tratamento profilático, após a retirada cirúrgica completa do carcinoma adrenal. O algoritmo da reticulina teve desempenho equivalente ao sistema de Weiss para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais, mas oferece a vantagem de ter aplicação mais fácil / INTRODUCTION: The gold standard for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors (ACTs) and for the differentiation between adenomas and carcinomas is the Weiss system, whose application is limited by poor reproducibility of some of its criteria. Recently, a diagnostic algorithm for ACT diagnosis based on the integrity of the reticulin network and the basal membrane has been proposed and validated. Adrenal carcinomas are rare tumors and have a poor prognosis, even in patients with apparently localized disease. Besides tumor staging and extent of surgical resection, other data have been reported in the literature as having prognostic importance, such as age at diagnosis, the functional pattern, tumor size, local extension of the primary tumor and some histological and immunohistochemical findings, such as the mitotic rate and the Ki-67 index. The Weiss system, while allowing the differential diagnosis between adrenal cortical adenomas and carcinomas, has not been fully tested as a tool for distinguishing carcinomas with favorable clinical outcome from those with unfavorable outcome. OBJECTIVES: The primary objective of this study was to construct a nomogram for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal cortical carcinoma, based on clinical and pathological data. The secondary objective was to evaluate the performance of the reticulina algorithm in the differential diagnosis between adenomas and carcinomas of the adrenal cortex. METHODS: For the construction of the nomogram, clinical and pathological data from 129 patients with adrenal cortical carcinomas treated at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo between 1976 and 2010 were analyzed. The evaluation of the performance of the reticulin algorithm for the histological diagnosis of ACTs was made from the examination of 89 slides (45 adenomas and 44 adrenal carcinomas), which were classified according to the Weiss system and the reticulin algorithm by the same pathologist in a blinded fashion. RESULTS: Using binary logistic regression analysis, we proposed a prognostic score with five covariates: a functional pattern other than isolated hyperandrogenism, a tumor size > 7.5 cm, a primary tumor classified as T3 or T4, the presence of microscopic venous invasion and a mitotic index > 5/50 high-power fields. The prognostic score was calibrated according to the Hosmer-Lemeshow goodness-of-fit test (P =0.9329) and showed excellent overall performance (Brier score =0.0738). Finally, the discriminatory ability of the model, as determined by the area under the ROC curve (AROC), was considered near-perfect (AROC, 0.9611; 95%CI, 0.92676 to 0.99552). The predictive model was internally validated with 200 bootstrap resamples. Based on these results, we develop an app for iOS7 for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal carcinomas (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). The app is available for free download on the App Store. Regarding the assessment of the performance of the reticulin algorithm, it had a sensitivity of 84.1% and specificity of 95.6% for the diagnosis of adrenal cortical carcinoma. No statistically significant difference between the diagnoses obtained by Weiss score and the reticulin algorithm was observed (P =0.1797, McNemar\'s exact test). The concordance between the two systems, assessed by the k coefficient, was considered substantial (k =0.7975; 95%CI, 0.6728 to 0.9221). CONCLUSIONS: we proposed and internally validated a prognostic score based on clinical and pathological information that are readily available to the attending physician. The proposed model is available as a free app for iOS7 and can estimate the risk of adverse outcomes in patients with adrenal cortical carcinoma. The score may be useful in determining the type and frequency of clinical and radiological evaluation and the decision of adjuvant treatment after complete surgical removal of the adrenal carcinoma. The reticulin algorithm was equivalent to the Weiss system for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors, but offers the advantage of an easier application

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MANUELA da rocha.pdf: 1137336 bytes, checksum: 8f429c6f06f0af7ebb98f1fc1b0badbe (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Chemotherapy agents are increasingly being utilized due to their promising effects in cancer treatment. The desired actions of these drugs are obtained at the cost of frequent and severe side effects. It is essential that drugs utilized for cancer treatment are tested in relation to not only their cytotoxic, but also their clastogenic and genotoxic potentials to establish their clinical risk. Thus, there is increased interest in searching for new metallic compounds presenting antitumor activity with therapeutic potential and reduced side effects, such as those containing platinum (Pt), iron (Fe), titanium (Ti), rhodium (Rh), gold (Au) and ruthenium (Ru). In this work, the cytotoxic, clastogenic and genotoxic properties of cis-tetraamine(oxalato)ruthenium(III) dithionite, cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6), were evaluated in peripheral human blood lymphocytes in vitro. Mitotic index (MI), chromosomal aberrations (CA) and DNA damage were analyzed by comet assay. The MI values of human peripheral blood lymphocyte cultures treated with 0.0075, 0.075, 0.75 and 7.5 &#956;M cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6) were 6.1, 3.9, 3.2 and 0.2%, respectively. The lowest concentration 0.0075 did not show cytotoxic activity compared to negative control. The CA values obtained for the 0.0075, 0.075 and 0.75 &#956;M concentrations presenting low frequency (1.5, 1.6 and 2.3%, respectively) not expressing clastogenic activity compared to negative control and only at the highest concentration 7.5 &#956;M, showed clastogenic activity, predominantly chromatid breaks and gaps. The data obtained by the comet assay, using cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6), suggest that this compound does not show genotoxic activity at concentrations lower than 0.0075 &#956;M. The results of these studies show that cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6) has no potential cytotoxic, clastogenic and genotoxic in vitro at concentrations less than or equal to 0.0075 &#956;M. / Estudos de citoxicidade e genotoxicidade têm sido realizados para o desenvolvimento de novos agentes anticâncer com maior seletividade e menores efeitos colaterais de agentes antitumorais convencionais. Neste trabalho, foram avaliadas as propriedades citotóxicas, clastogênicas e genotóxicas do composto ditionato de cis-tetraamino(oxalato)rutênio(III), {cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)}, em cultura de linfócitos de sangue periférico humano in vitro. Foram analisados os parâmetros índice mitótico (IM), aberrações cromossômicas (ACs) e danos induzidos no DNA detectados pelo ensaio cometa. O IM de cultura de linfócitos de sangue periférico humano tratados com 0,0075; 0,075; 0,75 e 7,5&#956;M de {cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} foram 6,1; 3,9; 3,2 e 0,2%, respectivamente. A menor concentração 0,0075 não apresentou atividade citotóxica comparada ao controle negativo. As ACs derivadas das concentrações 0,0075; 0,075 e 0,75, apresentaram frequência de 1,5; 1,6 e 2,3 %, respectivamente, não manifestando atividade clastogênica comparadas ao contole negativo e somente na concentração de 7,5&#956;M, demonstrou atividade clastogênica, predominando quebras e falhas cromatídicas. Os dados obtidos por meio do ensaio cometa, utilizando {cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)}, sugerem que este composto não apresenta atividade genotóxica em concentrações menores que 0,0075 &#956;M. Os resultados desses estudos demonstram que {cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} não possui potencial citotóxico, clastogênico e genotóxica in vitro em concentrações menor ou igual a 0,0075 &#956;M.