BASTOS, R.M. Avaliação da atividade antimicrobiana dos compostos isolados da planta Mitracarpus Baturitensis frente à Streptococcus Mutans. 2013. 79 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2013. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:57:43Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rmbastos.pdf: 1296671 bytes, checksum: 0a4cba6ccb944a555828ecd2c9b28df6 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:07:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rmbastos.pdf: 1296671 bytes, checksum: 0a4cba6ccb944a555828ecd2c9b28df6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:07:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rmbastos.pdf: 1296671 bytes, checksum: 0a4cba6ccb944a555828ecd2c9b28df6 (MD5) Previous issue date: 2013 / The Mitracapus (Rubiaceae) is a neotropical genus with three centers of diversity in Mexico, Brazil and the Caribbean. Regarding Mitracarpus baturitensis, there is still no report in literatura phytochemical and biological studies due to it being a newly discovered species. Therefore the aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of the ethanolic extract obtained composts of parts of flights Mitracarpus bauritensis against the bacteria Streptococcus mutans. Compounds ursolic acid (3β-hidroxi-urs-12-en-28-oico acid) and pomolic acid (28- O-β-D-glucopiranosil- acid pomólico ester) were isolated from the ethanolic extract by chromatographic assays, CCD and identified through the RNM. After identification were performed testing the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (CBM), curve of the time of the death, action antibiofilm, and assay attack of the biofilm. The increase inhibited bacterial growth at concentrations from 500 to 62,5 μg. mL-1 and bactericide concentration of 500 μg. mL-1. Furthermore, the AU had an effect on biofilm formation by reducing the biomass 97,37% same result is not obtained on the biofilm for 24 hours. Similar results were not obtained for the AP. Thus, AU can be analized as a candidate for biotechnological inputs impacting on research antimicrobial / A Mitracapus (Rubiacea) é um gênero neotropical, com três centros de diversidades no México, Brasil e Caribe. Em relação à Mitracarpus baturitensis, ainda não existe relatos na lieratura de estudos fitoquímicos e biológicos, devido à mesma ser uma espécie recém-descoberta. Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana dos compostos obtidos do extrato etanólico das partes aéreas de Mitracarpus baturitensis contra a bactéria Streptococcus mutans. Os triterpenos Ácido 3 β-hidroxi-urs-12-en-28-oico (ácido ursólico – AU) e o ácido 28- O-β-D-glucopiranosil-ester (ácido pomólico) foram isolados do extrato etanólico empregando técnicas cromatográficas usuais como: cromatografia gravitacional em gel de sílica, cromatografia flesh e cromatografia de camada delgada. A caracterização estrutural destes compostos foi realizado pelo uso de RNM’H e 13C, além de comparar métodos espectroscópico IV, reações com base na literatura. Após a identificação foram realizados teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Bactericida Mínima (CBM), Curva do Tempo de Morte, ação antibiofilme e ensaio de ataque ao biofilme. O ácido ursólico inibiu o crescimento bacteriano nas concentrações de 500-62,5 μg. mL-1 sendo bactericida na concentração de 500 μg. mL-1. Além disso, o mesmo teve ação sobre a morte de S. mutans em apenas 30 minutos de contato. Ácido ursólico também apresentou efeito sobre a formação do biofilme reduzindo a biomassa em 97,37%, não obtendo o mesmo resultado sobre o biofilme formado por 24 horas. Não foram obtidos resultados semelhantes para o ácido pomólico. Assim, ácido ursólico pode ser considerado como um candidato à insumo biotecnológico com impacto na pesquisa de antimicrobianos.

A Mitracapus (Rubiacea) à um gÃnero neotropical, com trÃs centros de diversidades no MÃxico, Brasil e Caribe. Em relaÃÃo à Mitracarpus baturitensis, ainda nÃo existe relatos na lieratura de estudos fitoquÃmicos e biolÃgicos, devido à mesma ser uma espÃcie recÃm-descoberta. Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana dos compostos obtidos do extrato etanÃlico das partes aÃreas de Mitracarpus baturitensis contra a bactÃria Streptococcus mutans. Os triterpenos Ãcido 3β-hidroxi-urs-12-en-28-oico (Ãcido ursÃlico â AU) e o Ãcido 28- O-β-D-glucopiranosil-ester (Ãcido pomÃlico) foram isolados do extrato etanÃlico empregando tÃcnicas cromatogrÃficas usuais como: cromatografia gravitacional em gel de sÃlica, cromatografia flesh e cromatogrÃfia de camada delgada. A caracterizaÃÃo estrutural destes compostos foi realizado pelo uso de RNMâH e 13C, alÃm de comparar mÃtodos espectroscÃpico IV, reaÃÃes com base na literatura. ApÃs a identificaÃÃo foram realizados teste de ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM), ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM), Curva do Tempo de Morte, aÃÃo antibiofilme e ensaio de ataque ao biofilme. O Ãcido ursÃlico inibiu o crescimento bacteriano nas concentraÃÃes de 500-62,5 μg. mL-1 sendo bactericida na concentraÃÃo de 500 μg. mL-1. AlÃm disso, o mesmo teve aÃÃo sobre a morte de S. mutans em apenas 30 minutos de contato. Ãcido ursÃlico tambÃm apresentou efeito sobre a formaÃÃo do biofilme reduzindo a biomassa em 97,37%, nÃo obtendo o mesmo resultado sobre o biofilme formado por 24 horas. NÃo foram obtidos resultados semelhantes para o Ãcido pomÃlico. Assim, Ãcido ursÃlico pode ser considerado como um candidato à insumo biotecnolÃgico com impacto na pesquisa de antimicrobianos. / The Mitracapus (Rubiaceae) is a neotropical genus with three centers of diversity in Mexico, Brazil and the Caribbean. Regarding Mitracarpus baturitensis, there is still no report in lieratura phytochemical and biological studies due to it being a newly discovered species. Therefore the aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of the ethanolic extract obtained composts of parts of flights Mitracarpus bauritensis against the bacteria Streptococcus mutans. Compounds ursolic acid (3β-hidroxi-urs-12-en-28-oico acid) and pomolic acid (28- O-β-D-glucopiranosil- Ãcido pomÃlico ester) were isolated from the ethanolic extract by chromatographic assays, CCD and identified through the RNM. After identification were performed testing the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (CBM), curve of the time of the death, action antibiofilm, assay attack of the biofilm. The increase inhibited bacterial growth at concentrations from 500 to 62,5 Âg. mL-1 and bactericide concentration of 500 Âg. mL-1. Furthermore, the AU had an effect on biofilm formation by reducing the biomass 97,37% same result is not obtained on the biofilm for 24 hours. Similar results were not obtained for the AP. Thus, AU can be analized as a candidate for biotechnological inputs impacting on research antimicrobial

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-24T11:33:53Z No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-24T12:55:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T12:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) Previous issue date: 2008-02-13 / O extrato metanólico das partes aéreas de Mitracarpus frigidus (Willd. ex Reem Schult.) K. Schum. (Rubiaceae) e suas partições foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana frente a onze cepas de bactéria (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica sorovar tythimurium, Shigella sonnei, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Streptococcus pyogenes e Bacillus cereus) e duas de levedura (Candida albicans e Cryptococcus neoformans). A atividade leishmanicida foi testada para as formas promastigotas de Leishmania (L. chagasi e L. amazonensis) e a citotoxidade avaliada pelo teste de letalidade frente a Artemia salina. A atividade antioxidante (ensaio com DPPH e poder de redução), a análise fitoquímica e os conteúdos de compostos fenólicos e flavonóides também foram investigados. Atividade citotóxica mais significativa foi observada para a partição hexânica (CL50 = 61 µg/ml); as partições AcOEt e n-BuOH apresentaram excelente atividade antioxidante (CI50 = 7 e 9 µg/ml, respectivamente, pelo método do DPPH e CE50 = 35 e 40 µg/ml, respectivamente, pelo método de avaliação do poder de redução). A atividade antioxidante que foi correlacionada positivamente com conteúdos de compostos fenólicos e de flavonóides. A partição hidrometanólica apresentou atividade expressiva para formas promastigostas de L. amazonensis (CI50 = 9 µg/ml). A partição CH2Cl2 mostrou intensa atividade antimicrobiana, principalmente contra C. neoformans e B. cereus com CIM = 0,010 e 0,020 µg/ml, respectivamente e também atividade leishmanicida com CI50 = 7 µg/ml para L. chagasi. A partição em CH2Cl2 foi fracionada e forneceu frações com atividade citotóxica, antimicrobiana e leishmanicida significativas. A bioautografia mostrou que triterpenos e alcalóides foram os responsáveis pela atividade antifúngica das frações. Os alcalóides extraídos apresentaram atividade antimicrobiana para B. cereus, P. aeruginosa e C. neoformans com CIM = 0,039 mg/ml. O óleo essencial apresentou linalol e acetato de eugenol como componentes majoritários e excelente atividade antifúngica com CIM de 0,063 mg/ml para C. albicans e de 0,008 mg/ml para C. neoformans. Este estudo é o primeiro relato de caracterização químicobiológica de M. frigidus. / The methanolic extract of the aerial parts of Mitracarpus frigidus (Willd. ex Reem Schult.) K. Schum. (Rubiaceae) and their partitions were evaluated for antimicrobial activity against eleven strains of bacteria (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica sorovar tythimurium, Shigella sonnei, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Streptococcus pyogenes e Bacillus cereus) and two yeasts (Candida albicans e Cryptococcus neoformans). Antileishmanial activity was tested for promastigotes forms of Leishmania (L. chagasi e L. amazonensis) and cytotoxicity was analysed by brine shrimp (Artemia salina) lethality assay. Antioxidant activity (assay with DPPH and reduction power), phytochemical screening and the contents of phenolics and flavonoids were also investigated. The most significative cytotoxic activity were found for hexane partition (LC50 = 61 µg/ml); the EtOAc and n-BuOH partitions presented excellent antioxidant activity (IC50 = 7 and 9 µg/ml, respectively, by the DPPH assay and EC50 = 35 and 40 µg/ml, respectively, by reduction power assay) which was positively correlated with the contents of phenolics and flavonoids. Hydromethanolic partition showed expressive activity against the promastigotes forms of L. amazonensis (IC50 = 9 µg/ml). CH2Cl2 partition present an intense antimicrobial activity, mainly against C. neoformans e B. cereus with MIC = 0,010 e 0,020 µg/ml, respectively and also antileishmanial with IC50 = 7 µg/ml for L. chagasi. The CH2Cl2 partition was fractionated and gave several fractions with cytotoxic, antimicrobial and antileishmanial activity. Bioauthography showed that triterpenes and alkaloids were responsible for antifungal activity of the fractions. The extracted alkaloids presented antimicrobial activity against B. cereus, P. aeruginosa and C. neoformans with MIC = 0,039 mg/ml. The essential oil presented linalol and eugenol acetate as the major components and an excellent antifungal activity with MIC of 0,063 mg/ml for C. albicans and of 0,008 mg/ml for C. neoformans. This study is the first report of the chemical-biological characterization of M. frigidus.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-06-21T15:09:18Z No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 7094274 bytes, checksum: 484f776d7feb93bcc95fb361ef5dc745 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-07T19:10:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 7094274 bytes, checksum: 484f776d7feb93bcc95fb361ef5dc745 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T19:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 7094274 bytes, checksum: 484f776d7feb93bcc95fb361ef5dc745 (MD5) Previous issue date: 2013-03-01 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mitracarpus frigidus (Willd. ex Reem Schult.) K. Schum. (Rubiaceae) é uma espécie nativa, amplamente distribuída por todo território brasileiro, com poucos relatos na literatura sobre seu potencial químico-biológico. Estudos preliminares relataram que a planta apresenta atividade antimicrobiana, leishmanicida e antioxidante, e tem como principais constituintes alcaloides, quinonas, flavonoides, terpenos e esteroides. Com o intuito de dar continuidade aos estudos envolvendo esta espécie, este trabalho teve como objetivos avaliar sua toxidade e seu potencial farmacológico, bem como e isolar e caracterizar suas substâncias bioativas. Do extrato metanólico das partes aéreas de M. frigidus (MFM) foram isolados os triterpenos ácido ursólico e ursolato de metila, e a naftoquinona psicorubrina. Os flavonoides rutina e campferol também foram identificados. Utilizando essas substâncias como marcadores, MFM foi padronizado e avaliado para as atividades esquistossomicida, anti-inflamatória, laxativa e citotóxica. Além disso, sua toxidade aguda (DL50) e subcrônica foram avaliadas. O potencial biológico e a composição química do extrato em hexano e do óleo essencial da espécie também foram analisados. MFM apresentou atividade esquistossomicida tanto in vitro quanto in vivo com considerável redução da carga parasitária. Também foi observada atividade anti-inflamatória aguda e crônica para os modelos testados, sendo a resposta aguda mais expressiva. MFM inibiu o processo de migração celular mediado pela inflamação e também diminuiu o processo oxidativo do organismo, evidenciado pela baixa concentração de MDA, catalase e mieloperoxidase. Em relação à expressão de ciclooxigenases, MFM inibiu COX-2. Atividade citotóxica contra células leucêmicas, HL60 e Jurkat, sem indução de apoptose também foi observada. Além disso, MFM induziu aumento do peristaltismo intestinal e da produção de fezes, o que pode estar relacionado com a presença de antraquinonas identificadas em MFM. A partir do estudo toxicológico agudo e subcrônico de MFM foi possível verificar que a planta tem baixa toxidade (DL50 > 2000 mg/Kg) e que não provocou alterações bioquímicas e hematológicas durante 42 dias de experimento. As substâncias ácido ursólico, ursolato de metila e psicorubrina, isoladas de MFM, apresentaram atividade citotóxica para células tumorais e para diferentes espécies de Leishmania. Da mesma forma, o extrato em hexano apresentou atividade antimicrobiana e leishmanicida, com especificidade e seletividade para formas intracelulares (amastigotas). O óleo essencial apresentou atividade antifúngica e leishmanicida. Linalol e acetato de eugenol foram identificados como as substâncias majoritárias. A partir deste trabalho, foi possível concluir que a espécie M. frigidus, que não possui relatos de uso na medicina popular, pode ser uma fonte alternativa de estudos para o tratamento de diversas doenças, como as provocadas por fungos, bactérias e parasitas, além de patologias relacionadas a processos inflamatórios. / Mitracarpus frigidus (Willd. ex Schult Reem.) K. Schum. (Rubiaceae) is a native species, widely distributed throughout the Brazilian territory, with few reports in the literature on its chemical-biological potential. Previous studies reported that the plant has antimicrobial, antioxidant and leishmanicidal, and that its main constituents are alkaloids, quinones, flavonoids, terpenes and steroids. In order to continue the studies involving this species, this work aimed to evaluate its toxicity and pharmacological potential, as well as to isolate and characterize its bioactive compounds. From the methanolic extract of the aerial parts of M. frigidus (MFM) the triterpenes ursolic acid and methyl ursolate, and the naphthoquinone psycorubrin were isolated. The flavonoids rutin and kaempferol were also identified. Using these compounds as markers, MFM was standardized and evaluated for schistosomicidal, anti-inflammatory, laxative and cytotoxic activity. Moreover, its acute (LD50) and subchronic toxicity were evaluated. The biological potential and chemical composition of the hexane extract and the essential oil of this species were also analyzed. MFM showed both in vitro and in vivo schistosomicidal activity with considerable reduction in parasite burden. Antiinflammatory activity was also observed for the acute and chronic models tested, with a more proeminent acute response. Those results demonstrated that MFM inhibited the inflammation cell mediated migration and also decreased the oxidative process of the organism, as evidenced by the observed low concentration of MDA, catalase and myeloperoxidase. Regarding the expression of cyclooxygenase, MFM inhibited COX 2. Cytotoxic activity against leukemia cells, HL60 and Jurkat, without apoptosis induction was also observed. Furthermore, MFM induced increase of intestinal peristalsis and production of faeces, which can be related to the presence of the anthraquinones identified in MFM. From the acute and subchronic toxicity study of MFM it was possible to verify that the plant has low toxicity (LD50 > 2000 mg/kg) and caused no hematological and biochemical changes during 42 days of experiment. The compounds ursolic acid, methyl ursolate and psycorubrin, isolated from MFM, showed cytotoxicity against different tumor cells and species of Leishmania. Likewise, the hexane extract showed antibacterial and antileishmanial properties, with specificity and selectivity for intracellular forms (amastigotes). The essential oil showed antifungal and leishmanicidal activity. Linalool and eugenol acetate were identified as its major compounds. In conclusion, the species M. frigidus, which has no reports on its use in traditional medicine, could be an alternative source of study for the treatment of various diseases such as those caused by fungi, bacteria and parasites, and pathologies related to inflammatory processes.

Les médicaments traditionnels à base de plantes (tradimédicaments) sont très utilisés par les populations africaines. Mais leur qualité est difficile à maîtriser, car ce sont des mélanges complexes de plusieurs drogues végétales ou des préparations à base de drogues végétales d’origine souvent inconnue et/ou très variable. Le profil chromatographique des métabolites phytochimiques constitue un outil important pour l’évaluation de la qualité de ces produits.L'objectif de ce travail est de proposer un protocole de préparation des échantillons et d’établissement de profil par chromatographie liquide et chromatographie en phase gazeuse des métabolites apolaires, pour l’évaluation de la qualité des médicaments traditionnels à base de plantes.La méthodologie est basée sur le traitement chimiométrique des profils chromatographiques des métabolites apolaires issus de différents lots de feuilles de Combretum micranthum et Mitracarpus scaber.Le profilage métabolique s’est effectué par chromatographie liquide sur Carbone Graphite Poreux en milieu non-aqueux et par chromatographie en phase gazeuse à haute température, couplées à la spectrométrie de masse, après extraction au dichlorométhane et élimination de la chlorophylle adsorbée sur charbon actif.L'analyse chimiométrique des données utilisant l’analyse PLS-discriminante avec ou sans correction orthogonale du signal, appliquée aux profils chromatographiques des feuilles de Combretum micranthum et Mitracarpus scaber, a montré de faibles différences entre les lots de chaque drogue végétale, et une différenciation claire des deux drogues végétales.Les deux méthodes d'analyse par chromatographie liquide et chromatographie en phase gazeuse permettent de détecter la plupart des métabolites secondaires apolaires bioactifs ou non déjà identifiés dans les feuilles des deux espèces. / The traditional herbal medicines are widely used by African people. But their quality control is difficult, because they are complex mixtures of several herbal drugs or herbal drugs preparations. Their origin is often unknown and/or highly variable. The chromatographic profile of phytochemical metabolites is an important tool for quality assessment of these products.The objective of this work is to propose a protocol for sample preparation and liquid chromatographic and gas chromatographic profiling of non-polar metabolites for quality assessment of africain traditional herbal medicinal products.The methodology is based on the chemometric treatment of chromatographic profiles of non-polar metabolites from different batches of leaves of Combretum micranthum and Mitracarpus scaber.Metabolic profiling is carried out by non-aqueous liquid chromatography on Porous Graphitic Carbon and by high temperature gas chromatography, coupled with mass spectrometry, after extraction with dichloromethane and removal of chlorophyll adsorbed on activated charcoal.The chemometric data analysis using PLS-discriminant analysis with or without orthogonal signal correction applied to the chromatographic profiles of leaves of Combretum micranthum and Mitracarpus scaber showed small differences between batches of each herbal drug, and a clear differentiation two herbal drugs.Both analyses by liquid chromatography and gas chromatography methods detect most non-polar metabolites bioactive or/not already identified in the leaves of both species.

Les médicaments traditionnels à base de plantes (tradimédicaments) sont très utilisés par les populations africaines. Mais leur qualité est difficile à maîtriser, car ce sont des mélanges complexes de plusieurs drogues végétales ou des préparations à base de drogues végétales d'origine souvent inconnue et/ou très variable. Le profil chromatographique des métabolites phytochimiques constitue un outil important pour l'évaluation de la qualité de ces produits.L'objectif de ce travail est de proposer un protocole de préparation des échantillons et d'établissement de profil par chromatographie liquide et chromatographie en phase gazeuse des métabolites apolaires, pour l'évaluation de la qualité des médicaments traditionnels à base de plantes.La méthodologie est basée sur le traitement chimiométrique des profils chromatographiques des métabolites apolaires issus de différents lots de feuilles de Combretum micranthum et Mitracarpus scaber.Le profilage métabolique s'est effectué par chromatographie liquide sur Carbone Graphite Poreux en milieu non-aqueux et par chromatographie en phase gazeuse à haute température, couplées à la spectrométrie de masse, après extraction au dichlorométhane et élimination de la chlorophylle adsorbée sur charbon actif.L'analyse chimiométrique des données utilisant l'analyse PLS-discriminante avec ou sans correction orthogonale du signal, appliquée aux profils chromatographiques des feuilles de Combretum micranthum et Mitracarpus scaber, a montré de faibles différences entre les lots de chaque drogue végétale, et une différenciation claire des deux drogues végétales.Les deux méthodes d'analyse par chromatographie liquide et chromatographie en phase gazeuse permettent de détecter la plupart des métabolites secondaires apolaires bioactifs ou non déjà identifiés dans les feuilles des deux espèces.