Resumo: A formação da musculatura esquelética nos membros de frango é um processo complexo, dividido em várias etapas, desde a formação do somito, progenitor da musculatura, até o músculo propriamente dito. O presente trabalho teve o objetivo de caracterizar o perfil de expressão de genes associados aos fatores miogênicos MyoD, MRF4 e Miogenina (responsáveis pela formação e manutenção da musculatura) e Miostatina. Utilizaram-se 40 animais de duas linhagens (20 de corte e 20 de postura), cujos tecidos das coxas e sobrecoxas foram coletados em duas idades (21 e 42 dias póseclosão). A técnica de PCR quantitativa foi empregada nas análises da expressão gênica e os dados obtidos foram analisados com a utilização do programa REST (Ferramenta para análise de expressão relativa - Relative Expression Software Tool) que se baseia em quantificação relativa. Devido à divergência fenotípica no padrão de crescimento das linhagens estudadas, esperava-se encontrar diferenças na expressão de miostatina, as quais não foram confirmadas. Por outro lado, foram verificadas diferenças para MRF4 nos músculos Gastrocnêmio (coxa) e Biceps (sobrecoxa) em ambas as idades, e 9 para Miogenina, em Gastrocnêmio, aos 42 dias; com maior expressão na linhagem CC. A caracterização dos genes estudados foi parcial, abrindo a possibilidade para que outros genes possam ser selecionados com intuito de compreender o desenvolvimento muscular em frangos. / Abstract: The development of the chicken limb muscles is a complex process, divided into several stages from the initial somite formation to the muscle itself. This study aimed to characterize expression profile of genes associated to myogenic factors MyoD, MRF4 and Miogenin (responsible for muscle formation and maintenance) and Miostatin. It was used 40 animals from two lines (20 broiler and 20 layer), whose thigh and drumstick tissues were collected at two ages (21 and 42 days post-hatch). Gene expression employed techniques of quantitative PCR and data were analyzed by REST program, which is based on a relative quantification. Due to phenotypic divergence in the growth pattern of the strains studied, it was expected to find differences in the expression of miostatin that were not confirmed. On the other hand, differences were found for MRF4, with highest expression in CC line. The characterization of genes studied was partial, opening the possibility that other genes may be selected in order to understand the muscle development in chickens. / Orientador: Patrícia Pasquali Parise-Maltempi / Coorientador: Helena Javiel Alves / Banca: Millor Fernandes do Rosário / Banca: Anderson Luis Alves / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-14Bitstream added on 2014-06-13T19:49:26Z : No. of bitstreams: 1 marchesin_ml_me_rcla.pdf: 512126 bytes, checksum: f1af03206b1ca9a151524c3b6960cca3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A formação da musculatura esquelética nos membros de frango é um processo complexo, dividido em várias etapas, desde a formação do somito, progenitor da musculatura, até o músculo propriamente dito. O presente trabalho teve o objetivo de caracterizar o perfil de expressão de genes associados aos fatores miogênicos MyoD, MRF4 e Miogenina (responsáveis pela formação e manutenção da musculatura) e Miostatina. Utilizaram-se 40 animais de duas linhagens (20 de corte e 20 de postura), cujos tecidos das coxas e sobrecoxas foram coletados em duas idades (21 e 42 dias póseclosão). A técnica de PCR quantitativa foi empregada nas análises da expressão gênica e os dados obtidos foram analisados com a utilização do programa REST (Ferramenta para análise de expressão relativa - Relative Expression Software Tool) que se baseia em quantificação relativa. Devido à divergência fenotípica no padrão de crescimento das linhagens estudadas, esperava-se encontrar diferenças na expressão de miostatina, as quais não foram confirmadas. Por outro lado, foram verificadas diferenças para MRF4 nos músculos Gastrocnêmio (coxa) e Biceps (sobrecoxa) em ambas as idades, e 9 para Miogenina, em Gastrocnêmio, aos 42 dias; com maior expressão na linhagem CC. A caracterização dos genes estudados foi parcial, abrindo a possibilidade para que outros genes possam ser selecionados com intuito de compreender o desenvolvimento muscular em frangos. / The development of the chicken limb muscles is a complex process, divided into several stages from the initial somite formation to the muscle itself. This study aimed to characterize expression profile of genes associated to myogenic factors MyoD, MRF4 and Miogenin (responsible for muscle formation and maintenance) and Miostatin. It was used 40 animals from two lines (20 broiler and 20 layer), whose thigh and drumstick tissues were collected at two ages (21 and 42 days post-hatch). Gene expression employed techniques of quantitative PCR and data were analyzed by REST program, which is based on a relative quantification. Due to phenotypic divergence in the growth pattern of the strains studied, it was expected to find differences in the expression of miostatin that were not confirmed. On the other hand, differences were found for MRF4, with highest expression in CC line. The characterization of genes studied was partial, opening the possibility that other genes may be selected in order to understand the muscle development in chickens.

A produção de aves no Brasil vem crescendo na ordem de 10% a cada ano, o que se explica pela atualização constante da tecnologia do setor (http://www.abef.com.br). Sendo a carne de frango a fonte de proteína animal mais barata e acessível ao consumidor, há necessidade de se produzir cada vez mais animais com maior acúmulo de massa muscular. Para isso, o entendimento dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na formação da musculatura esquelética é de extrema relevância. Os fatores miogênicos, genes responsáveis pela determinação e diferenciação de células musculares, foram clonados e progressos significativos foram desenvolvidos quanto ao controle da expressão dos mesmos. A utilização da técnica de seqüenciamento de DNA possibilita a identificação e caracterização de novos genes envolvidos na complexa rede de fatores que regulam a formação da musculatura esquelética em aves. Neste estudo, foram construídas duas bibliotecas de cDNA (fase embrionária e pós-eclosão) de músculo peitoral de uma linhagem de corte (TT) e uma biblioteca da fase embrionária de uma linhagem de postura (CC). A análise das seqüências EST (Expressed Sequence Tags) foi utilizada para identificar possíveis novos genes envolvidos no processo de formação da musculatura esquelética. As seqüências EST identificadas possibilitaram a construção de um banco com 6247 ESTs da musculatura peitoral das linhagens de corte e postura nas duas fases de desenvolvimento. Com o intuito de estabelecer uma relação entre o perfil de expressão dos fatores miogênicos: MyoD, MRF4 e miogenina; e dos genes Pax-3 e miostatina e a formação e maturação das fibras musculares, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real. Em geral, a expressão dos fatores miogênicos foi maior na linhagem de corte em relação à de postura nas idades estudadas. Este estudo deverá contribuir para as áreas celular e molecular de desenvolvimento, além de fornecer recursos úteis aos programas de melhoramento genético de aves que visam obter animais com maior acúmulo de massa muscular. / Brazilian’s chicken production is increasing annually around 10%, which can be explained by the current technology applied to this sector (http://www.abef.com.br). Being chicken’s meat the cheapest animal protein source for consumers, there is a need to produce even more animals with increased muscular mass. For this purpose, understanding the molecular and cellular mechanisms involved with the skeletal muscle development is of great relevance. The myogenic factors, genes responsible for the determination and differentiation of muscle cells, were cloned and significant progress was made on the control of their expression. The use of DNA sequencing technique allows the identification and characterization of new genes involved in the complex chain of factors signalling systems that regulates the expression of avian skeletal muscles. In this study, two cDNA libraries (embryonic and post-hatching phases) were constructed from the breast muscle of a chicken broiler line (TT) and one library, from the embryonic phase, from a chicken layer line (CC). The EST (Expressed Sequencing Tags) analysis was used to identify probable new genes involved in the skeletal muscle development. The identified ESTs were used to generate a database containing 6247 breast muscle ESTs from two chicken lines in two development phases. Real time PCR was employed with the aim of establishing a relationship among the expression profile of myogenic factors (MyoD, MFR4, and myogenin), Pax-3 and myostatin genes with the formation and maturation of muscle fibers. In general, the expression of myogenic factors was greater in the broiler than in the layer chicken line in the phases under study. These results should contribute to other cellular and molecular development studies besides providing useful resources for chicken breeding programs whose objective is the deposition of skeletal muscle mass.

A produção de aves no Brasil vem crescendo na ordem de 10% a cada ano, o que se explica pela atualização constante da tecnologia do setor (http://www.abef.com.br). Sendo a carne de frango a fonte de proteína animal mais barata e acessível ao consumidor, há necessidade de se produzir cada vez mais animais com maior acúmulo de massa muscular. Para isso, o entendimento dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na formação da musculatura esquelética é de extrema relevância. Os fatores miogênicos, genes responsáveis pela determinação e diferenciação de células musculares, foram clonados e progressos significativos foram desenvolvidos quanto ao controle da expressão dos mesmos. A utilização da técnica de seqüenciamento de DNA possibilita a identificação e caracterização de novos genes envolvidos na complexa rede de fatores que regulam a formação da musculatura esquelética em aves. Neste estudo, foram construídas duas bibliotecas de cDNA (fase embrionária e pós-eclosão) de músculo peitoral de uma linhagem de corte (TT) e uma biblioteca da fase embrionária de uma linhagem de postura (CC). A análise das seqüências EST (Expressed Sequence Tags) foi utilizada para identificar possíveis novos genes envolvidos no processo de formação da musculatura esquelética. As seqüências EST identificadas possibilitaram a construção de um banco com 6247 ESTs da musculatura peitoral das linhagens de corte e postura nas duas fases de desenvolvimento. Com o intuito de estabelecer uma relação entre o perfil de expressão dos fatores miogênicos: MyoD, MRF4 e miogenina; e dos genes Pax-3 e miostatina e a formação e maturação das fibras musculares, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real. Em geral, a expressão dos fatores miogênicos foi maior na linhagem de corte em relação à de postura nas idades estudadas. Este estudo deverá contribuir para as áreas celular e molecular de desenvolvimento, além de fornecer recursos úteis aos programas de melhoramento genético de aves que visam obter animais com maior acúmulo de massa muscular. / Brazilian’s chicken production is increasing annually around 10%, which can be explained by the current technology applied to this sector (http://www.abef.com.br). Being chicken’s meat the cheapest animal protein source for consumers, there is a need to produce even more animals with increased muscular mass. For this purpose, understanding the molecular and cellular mechanisms involved with the skeletal muscle development is of great relevance. The myogenic factors, genes responsible for the determination and differentiation of muscle cells, were cloned and significant progress was made on the control of their expression. The use of DNA sequencing technique allows the identification and characterization of new genes involved in the complex chain of factors signalling systems that regulates the expression of avian skeletal muscles. In this study, two cDNA libraries (embryonic and post-hatching phases) were constructed from the breast muscle of a chicken broiler line (TT) and one library, from the embryonic phase, from a chicken layer line (CC). The EST (Expressed Sequencing Tags) analysis was used to identify probable new genes involved in the skeletal muscle development. The identified ESTs were used to generate a database containing 6247 breast muscle ESTs from two chicken lines in two development phases. Real time PCR was employed with the aim of establishing a relationship among the expression profile of myogenic factors (MyoD, MFR4, and myogenin), Pax-3 and myostatin genes with the formation and maturation of muscle fibers. In general, the expression of myogenic factors was greater in the broiler than in the layer chicken line in the phases under study. These results should contribute to other cellular and molecular development studies besides providing useful resources for chicken breeding programs whose objective is the deposition of skeletal muscle mass.