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Caracterização expressional do gene lacase 2 em Aedes aegypti / Expressional characterization of laccase 2 in Aedes aegypti

Mendes, Caroline Louise Garcia 22 May 2017 (has links)
Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.
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Manejo reprodutivo pós-parto de vacas primíparas e desenvolvimento de terneiros / Post-partum reproductive management of primiparous cows and growth of their calves

Pötter, Bernardo Augusto Albornoz January 2002 (has links)
O trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de cargas animais de 240 e 320 kg PV/ha em campo nativo (T1 e T2, respectivamente), de 400 kg PV/ha em pastagem melhorada com azevém (Lolium multiflorum L.) por 80 dias pós-parto e, após, carga animal igual a T2 em campo nativo (T3), e do desmame dos terneiros aos 100 dias (DP) ou aos 180 dias (DC) de idade sobre o desempenho reprodutivo de vacas de corte primíparas Hereford e Braford, e sobre o desenvolvimento de seus terneiros. A taxa de prenhez (TP) não foi influenciada (P>0,05) pelos tratamentos (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), nem pela idade de desmame (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Houve efeito significativo dos tratamentos (P<0,05) sobre a TP aos 21 dias (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) e aos 42 dias (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) após iniciada a estação de acasalamento. O intervalo entre partos (IEP) e o intervalo parto-concepção (IPC) foram influenciados (P<0,01) pelos tratamentos. O IEP e o IPC para T1, T2 e T3 foram 390,9; 399,0 e 386,8 dias e 105,9; 114,0 e 101,8 dias, respectivamente Terneiros filhos de vacas Braford no T2 foram mais pesados ao desmame (P<0,05) do que terneiros filhos de vacas da mesma raça no T1 e filhos de vacas Hereford no T2. Os terneiros do DP tiveram pesos ajustados aos 180 dias menores (P<0,01) do que os do DC (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectivamente). Não houve efeito (P>0,05) dos tratamentos, nem da idade de desmame sobre o peso dos terneiros aos 365 dias de idade. Os novilhos do DP tiveram pesos de abate e de carcaça, aos 14 meses, inferiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Entretanto, o ganho de peso e o rendimento de carcaça dos novilhos do DP foram superiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Não houve efeito (P>0,05) da idade de desmame sobre a espessura de gordura subcutânea. / The experiment was conducted to evaluate the effects of stocking rates of 240 and 320 kg LW/ha on natural pasture (T1 and T2, respectively), of 400 kg LW/ha on improved pasture with ryegrass (Lolium multiflorum L.), during 80 days postpartum and, after, the same stocking rate of T2 on natural pasture (T3), and the effects of weaning calves at 100 (EW) or 180 (NW) days of age on the reproductive performance of primiparous beef Hereford and Braford cows and growth of their calves. The pregnancy rate (PR) was not affected (P>0,05) by treatments (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), neither by the weaning age (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Significant effect (P<0,05) was detected on the PR at first 21 days (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) and 42 days (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) of the mating season. The calving interval (CI) and the calving-conception interval (CCI) were affected (P<0,01) by the treatments. The CI and the CCI for T1, T2 and T3 were 390,9; 399,0 and 386,8 days and 105,9; 114,0 e 101,8 days, respectively. Calves born of Braford cows on T2 had higher weaning weights (P<0,05) than the calves born of cows of the same breed on T2 and Hereford cows on T2. Calves of EW had adjusted weights at 180 days lower (P<0,01) than the calves of NW (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectively). The treatments and the weaning age did not affetc (P>0,05) the weight of calves at 365 days of age. The steers of EW had carcass and slaughter weights, at 14 months, lower (P<0,01) than the steers of NW. However, the average daily gain and the dressing percentage of the steers of EW were higher (P<0,01) than the steers of NW. Weaning age did not affect (P>0,05) the subcutaneous fat thickness.
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Manejo reprodutivo pós-parto de vacas primíparas e desenvolvimento de terneiros / Post-partum reproductive management of primiparous cows and growth of their calves

Pötter, Bernardo Augusto Albornoz January 2002 (has links)
O trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de cargas animais de 240 e 320 kg PV/ha em campo nativo (T1 e T2, respectivamente), de 400 kg PV/ha em pastagem melhorada com azevém (Lolium multiflorum L.) por 80 dias pós-parto e, após, carga animal igual a T2 em campo nativo (T3), e do desmame dos terneiros aos 100 dias (DP) ou aos 180 dias (DC) de idade sobre o desempenho reprodutivo de vacas de corte primíparas Hereford e Braford, e sobre o desenvolvimento de seus terneiros. A taxa de prenhez (TP) não foi influenciada (P>0,05) pelos tratamentos (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), nem pela idade de desmame (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Houve efeito significativo dos tratamentos (P<0,05) sobre a TP aos 21 dias (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) e aos 42 dias (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) após iniciada a estação de acasalamento. O intervalo entre partos (IEP) e o intervalo parto-concepção (IPC) foram influenciados (P<0,01) pelos tratamentos. O IEP e o IPC para T1, T2 e T3 foram 390,9; 399,0 e 386,8 dias e 105,9; 114,0 e 101,8 dias, respectivamente Terneiros filhos de vacas Braford no T2 foram mais pesados ao desmame (P<0,05) do que terneiros filhos de vacas da mesma raça no T1 e filhos de vacas Hereford no T2. Os terneiros do DP tiveram pesos ajustados aos 180 dias menores (P<0,01) do que os do DC (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectivamente). Não houve efeito (P>0,05) dos tratamentos, nem da idade de desmame sobre o peso dos terneiros aos 365 dias de idade. Os novilhos do DP tiveram pesos de abate e de carcaça, aos 14 meses, inferiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Entretanto, o ganho de peso e o rendimento de carcaça dos novilhos do DP foram superiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Não houve efeito (P>0,05) da idade de desmame sobre a espessura de gordura subcutânea. / The experiment was conducted to evaluate the effects of stocking rates of 240 and 320 kg LW/ha on natural pasture (T1 and T2, respectively), of 400 kg LW/ha on improved pasture with ryegrass (Lolium multiflorum L.), during 80 days postpartum and, after, the same stocking rate of T2 on natural pasture (T3), and the effects of weaning calves at 100 (EW) or 180 (NW) days of age on the reproductive performance of primiparous beef Hereford and Braford cows and growth of their calves. The pregnancy rate (PR) was not affected (P>0,05) by treatments (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), neither by the weaning age (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Significant effect (P<0,05) was detected on the PR at first 21 days (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) and 42 days (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) of the mating season. The calving interval (CI) and the calving-conception interval (CCI) were affected (P<0,01) by the treatments. The CI and the CCI for T1, T2 and T3 were 390,9; 399,0 and 386,8 days and 105,9; 114,0 e 101,8 days, respectively. Calves born of Braford cows on T2 had higher weaning weights (P<0,05) than the calves born of cows of the same breed on T2 and Hereford cows on T2. Calves of EW had adjusted weights at 180 days lower (P<0,01) than the calves of NW (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectively). The treatments and the weaning age did not affetc (P>0,05) the weight of calves at 365 days of age. The steers of EW had carcass and slaughter weights, at 14 months, lower (P<0,01) than the steers of NW. However, the average daily gain and the dressing percentage of the steers of EW were higher (P<0,01) than the steers of NW. Weaning age did not affect (P>0,05) the subcutaneous fat thickness.
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Manejo reprodutivo pós-parto de vacas primíparas e desenvolvimento de terneiros / Post-partum reproductive management of primiparous cows and growth of their calves

Pötter, Bernardo Augusto Albornoz January 2002 (has links)
O trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de cargas animais de 240 e 320 kg PV/ha em campo nativo (T1 e T2, respectivamente), de 400 kg PV/ha em pastagem melhorada com azevém (Lolium multiflorum L.) por 80 dias pós-parto e, após, carga animal igual a T2 em campo nativo (T3), e do desmame dos terneiros aos 100 dias (DP) ou aos 180 dias (DC) de idade sobre o desempenho reprodutivo de vacas de corte primíparas Hereford e Braford, e sobre o desenvolvimento de seus terneiros. A taxa de prenhez (TP) não foi influenciada (P>0,05) pelos tratamentos (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), nem pela idade de desmame (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Houve efeito significativo dos tratamentos (P<0,05) sobre a TP aos 21 dias (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) e aos 42 dias (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) após iniciada a estação de acasalamento. O intervalo entre partos (IEP) e o intervalo parto-concepção (IPC) foram influenciados (P<0,01) pelos tratamentos. O IEP e o IPC para T1, T2 e T3 foram 390,9; 399,0 e 386,8 dias e 105,9; 114,0 e 101,8 dias, respectivamente Terneiros filhos de vacas Braford no T2 foram mais pesados ao desmame (P<0,05) do que terneiros filhos de vacas da mesma raça no T1 e filhos de vacas Hereford no T2. Os terneiros do DP tiveram pesos ajustados aos 180 dias menores (P<0,01) do que os do DC (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectivamente). Não houve efeito (P>0,05) dos tratamentos, nem da idade de desmame sobre o peso dos terneiros aos 365 dias de idade. Os novilhos do DP tiveram pesos de abate e de carcaça, aos 14 meses, inferiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Entretanto, o ganho de peso e o rendimento de carcaça dos novilhos do DP foram superiores (P<0,01) aos novilhos do DC. Não houve efeito (P>0,05) da idade de desmame sobre a espessura de gordura subcutânea. / The experiment was conducted to evaluate the effects of stocking rates of 240 and 320 kg LW/ha on natural pasture (T1 and T2, respectively), of 400 kg LW/ha on improved pasture with ryegrass (Lolium multiflorum L.), during 80 days postpartum and, after, the same stocking rate of T2 on natural pasture (T3), and the effects of weaning calves at 100 (EW) or 180 (NW) days of age on the reproductive performance of primiparous beef Hereford and Braford cows and growth of their calves. The pregnancy rate (PR) was not affected (P>0,05) by treatments (T1 = 93,8%; T2= 90,6%; T3= 100%), neither by the weaning age (DP= 97,8%; DC= 91,3%). Significant effect (P<0,05) was detected on the PR at first 21 days (T1= 15,6%; T2= 0,0%; T3= 17,9%) and 42 days (T1= 46,9%; T2= 37,5%; T3= 71,4%) of the mating season. The calving interval (CI) and the calving-conception interval (CCI) were affected (P<0,01) by the treatments. The CI and the CCI for T1, T2 and T3 were 390,9; 399,0 and 386,8 days and 105,9; 114,0 e 101,8 days, respectively. Calves born of Braford cows on T2 had higher weaning weights (P<0,05) than the calves born of cows of the same breed on T2 and Hereford cows on T2. Calves of EW had adjusted weights at 180 days lower (P<0,01) than the calves of NW (174,6 kg vs. 197,2 kg, respectively). The treatments and the weaning age did not affetc (P>0,05) the weight of calves at 365 days of age. The steers of EW had carcass and slaughter weights, at 14 months, lower (P<0,01) than the steers of NW. However, the average daily gain and the dressing percentage of the steers of EW were higher (P<0,01) than the steers of NW. Weaning age did not affect (P>0,05) the subcutaneous fat thickness.
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Caracterização expressional do gene lacase 2 em Aedes aegypti / Expressional characterization of laccase 2 in Aedes aegypti

Caroline Louise Garcia Mendes 22 May 2017 (has links)
Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.
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Caracterização do gene CDK7 e análise de sua possível atuação nos endociclos de Rhynchosciara americana. / Cdk7 gene characterisation and analysis of its possible role in the endocycles of Rhynchosciara americana.

Martens, Adam Arai 20 April 2012 (has links)
CDKs são proteínas responsáveis pela ativação e progressão do ciclo celular e também apresentam função na ativação e alongamento na transcrição. Dentre elas, CDK7 atua em ambas as funções, fosforilando as CDKs do ciclo celular e fazendo parte do fator geral de transcrição TFIIH como subunidade catalítica. A partir de uma biblioteca de ESTs de glândula salivar, construído com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o início do último ciclo replicativo da politenização e início da amplificação gênica, foram encontradas poucas mensagens relacionadas diretamente com o ciclo celular, correspondendo a 3.11% do ESTs. Dentre elas, foram encontradas as mensagens de Cdc2-like e Cdk7; portanto, foi realizada a caracterização do gene Cdk7 e a análise de sua atuação durante o desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana. O gene Cdk7 apresenta 4 éxons, mais que em vertebrados. A sequência completa do mRNA foi obtida a partir de RACE, apresentando 1230 bases e uma ORF de 1020 bases. Perfis de expressão foram determinados por RT-PCR e Western blots. Modificações pós-traducionais foram analisadas por imunoblots em 2D. Seu perfil de expressão de mRNA e proteína apresentam variações durante o ciclo celular e entre os tecidos analisados; os imunoblots mostram a presença de uma fosforilação e possíveis modificações na cadeia lateral de alguns aminoácidos. O estudo de proteínas relacionadas ao ciclo celular nesse modelo é importante para um melhor entendimento dos ciclos celulares incomuns presentes em diferentes tecidos de insetos. / CDKs are proteins responsible for activation and progression of cell cycle and also work on the activation and elongation of transcription. Among them, CDK7 acts in both functions, phosphorylating cell cycle CDKs and as a part of general transcription factor TFIIH as its catalytic subunit. From an EST library of salivary gland, constructed with mRNAs present during the period when the beginning of the last polyteny replicative cycle occurs, it was found only few messages directly related to cell cycle, corresponding to 3.11% of the ESTs. Among them, it was found Cdc2-like and Cdk7; therefore, it was performed the characterisation of Cdk7 gene and the analysis of its role during the larval development of Rhynchosciara americana. Cdk7 gene presents 4 exons, more than in vertebrates. Complete mRNA sequence was obtained via RACE, presenting 1230 bases and an 1020 bases ORF. Expression profiles were determined by RT-PCR and Western blots. Posttranslational modifications were analysed by 2D immunoblots. Its mRNA and protein expression profiles presented variations during cell cycle and between the studied tissues; immunoblots showed the presence of one phosphorylation and possible modifications on the side chain of some amino acids. The study of proteins related to cell cycle in this model is important for a better understanding of uncommon cell cycles in different insect tissues.
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Efeitos da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento de filhotes de macacos-prego (cebus sp) / Effects of parity and infant gender on maternal care and infant development of tufted capuchin monkeys (Cebus sp)

Carminatti, Marina de Oliveira Ferraz 07 July 2009 (has links)
Dentre os mamíferos, a ordem Primates é caracterizada por uma gestação longa e, normalmente, nascimento de um único filhote por período reprodutivo. Ainda assim, as fêmeas primatas dão a luz a filhotes pouco desenvolvidos, que requerem grande investimento parental, realizado principalmente por elas. O prolongado período pós-parto, em que o filhote depende integralmente de seu cuidador para alimentação, transporte e proteção, é chamado de infância e perdura até o momento em que o indivíduo é capaz de sobreviver sozinho. Nesse período é possível observar o estilo de cuidado materno, medido através do investimento da mãe em cuidados para seu filhote. É nesse mesmo período que as relações afetivas entre mãe e filhote e com os outros membros do grupo são estabelecidas. Em algumas espécies de mamíferos, incluindo primatas, há diferença entre o investimento materno das mães em relação ao sexo do filhote ou a paridade e posição hierárquica delas. Nesse trabalho, verifiquei o efeito da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento físico e social dos filhotes de um grupo semi-livre de macacos-prego. Além disso, a presente pesquisa deu continuidade a um estudo anterior, com o mesmo grupo, também sobre estilo de cuidado materno e desenvolvimento dos filhotes. Assim, também foi objetivo deste trabalho comparar estas variáveis em função de mudanças na demografia do grupo e nas condições ambientais. Os dados foram coletados no Parque Ecológico do Tietê entre setembro de 2006 e abril de 2008, através dos métodos de animal-focal e todas as ocorrências, e analisados através de análises de agrupamentos e de variância. O estilo de cuidado materno parece estar relacionado com a paridade da mãe, mães primíparas têm maior investimento, de maneira geral, em amamentação, transporte e manutenção da proximidade de seus filhotes, enquanto multíparas investem mais em catação, mas as diferenças não foram significativas. O desenvolvimento físico e social dos filhotes não foi afetado pela mudança na demografia do grupo, mas sim pela mudança das condições ambientais. Uma alteração na disponibilidade do alimento provisionado provocou aumento nas taxas de locomoção do grupo em busca de alimento. O aumento na distância entre mães e filhotes também foi observado e esteve relacionado ao crescimento das redes familiares que promovem a proteção do filhote por indivíduos aparentados que não somente suas mães. O investimento materno foi maior em filhotes machos. Quanto ao desenvolvimento, filhotes fêmeas se alimentaram e se locomoveram independentemente mais que filhotes machos, ainda que a locomoção independente tenha sido maior para machos no início do desenvolvimento. Filhotes fêmeas, no entanto, mantiveram relações de proximidade mais fortes com a mãe e com os outros membros do grupo. O maior investimento materno em machos, independente da paridade das mães, é esperado em populações de primatas em que a oferta de alimento não é limitante do sucesso reprodutivo das fêmeas e em que, portanto, o sexo com maior variabilidade de sucesso reprodutivo em função de habilidades competitivas é o masculino. / In comparison with other mammals, the order Primates is characterized by a prolonged gestation and by the birth of a single offspring in each reproductive period. Besides, female primates give birth to very immature infants that require great parental investment performed mainly by the mothers. Infancy is the post-partum period in which the young is completely dependent on its care-giver for feeding, transportation and protection, and lasts up until the individual is capable of surviving on its own. During this period we can observe the style of maternal care by measuring the mothers investment in care given to her offspring. The affiliative relationship between the infant and its mother, as well as with other members of the social group are established throughout this same period. In some mammal species, including primates, maternal care can differ according to the sex of the infant, and on female parity and hierarchical position. In this study I investigate the effect of mothers parity and on infants sex on the style of maternal care and on the physical and social development of the offspring in a group of semi-free tufted capuchin monkeys. Furthermore, this research followed a previous study, carried out with the same group of monkeys, also regarding the style of maternal care and development of young. Therefore it is also the goal of this study to compare these variables considering differences in group demography and in the environmental conditions between the two study periods. Data were collected at Parque Ecológico do Tietê from September 2006 to April 2008. Data were collect through focal-animal and all occurrences methods, and analyzed by cluster and variance analysis. The style of maternal care seems to be related to the parity of the mother. Primiparous mothers generally invest more in nursing, transportation and in maintaining proximity with their offspring while multiparous mothers invest more in grooming. However the differences were not statistically significant. The physical and social development of the young were not affected by the demographic changes undergone by the group, but were, on the other hand, affected by changes in environmental conditions. An alteration in the availability of provisioned food resulted in an increase in the rate of locomotion of the group in search for food. An increase in the distance between mother and offspring was also noted and was related to the growth of family networks, leading to the protection of the young by kin related individuals besides their mother. There was greater maternal investment in male infants. Regarding infant development, female infants had higher frequencies of independent feeding and locomotion than male infants, even though independent locomotion was greater for males at the beginning of their development. Female infants also maintained greater proximity with their mothers and with other members of the group than male infants. A greater maternal investment in male offspring, independent of the parity of mothers, is expected in primate populations living in areas where food supply is not limiting of females reproductive success, which is the case of the study area, because in such populations males present greater variability than females in reproductive success.
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Efeitos da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento de filhotes de macacos-prego (cebus sp) / Effects of parity and infant gender on maternal care and infant development of tufted capuchin monkeys (Cebus sp)

Marina de Oliveira Ferraz Carminatti 07 July 2009 (has links)
Dentre os mamíferos, a ordem Primates é caracterizada por uma gestação longa e, normalmente, nascimento de um único filhote por período reprodutivo. Ainda assim, as fêmeas primatas dão a luz a filhotes pouco desenvolvidos, que requerem grande investimento parental, realizado principalmente por elas. O prolongado período pós-parto, em que o filhote depende integralmente de seu cuidador para alimentação, transporte e proteção, é chamado de infância e perdura até o momento em que o indivíduo é capaz de sobreviver sozinho. Nesse período é possível observar o estilo de cuidado materno, medido através do investimento da mãe em cuidados para seu filhote. É nesse mesmo período que as relações afetivas entre mãe e filhote e com os outros membros do grupo são estabelecidas. Em algumas espécies de mamíferos, incluindo primatas, há diferença entre o investimento materno das mães em relação ao sexo do filhote ou a paridade e posição hierárquica delas. Nesse trabalho, verifiquei o efeito da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento físico e social dos filhotes de um grupo semi-livre de macacos-prego. Além disso, a presente pesquisa deu continuidade a um estudo anterior, com o mesmo grupo, também sobre estilo de cuidado materno e desenvolvimento dos filhotes. Assim, também foi objetivo deste trabalho comparar estas variáveis em função de mudanças na demografia do grupo e nas condições ambientais. Os dados foram coletados no Parque Ecológico do Tietê entre setembro de 2006 e abril de 2008, através dos métodos de animal-focal e todas as ocorrências, e analisados através de análises de agrupamentos e de variância. O estilo de cuidado materno parece estar relacionado com a paridade da mãe, mães primíparas têm maior investimento, de maneira geral, em amamentação, transporte e manutenção da proximidade de seus filhotes, enquanto multíparas investem mais em catação, mas as diferenças não foram significativas. O desenvolvimento físico e social dos filhotes não foi afetado pela mudança na demografia do grupo, mas sim pela mudança das condições ambientais. Uma alteração na disponibilidade do alimento provisionado provocou aumento nas taxas de locomoção do grupo em busca de alimento. O aumento na distância entre mães e filhotes também foi observado e esteve relacionado ao crescimento das redes familiares que promovem a proteção do filhote por indivíduos aparentados que não somente suas mães. O investimento materno foi maior em filhotes machos. Quanto ao desenvolvimento, filhotes fêmeas se alimentaram e se locomoveram independentemente mais que filhotes machos, ainda que a locomoção independente tenha sido maior para machos no início do desenvolvimento. Filhotes fêmeas, no entanto, mantiveram relações de proximidade mais fortes com a mãe e com os outros membros do grupo. O maior investimento materno em machos, independente da paridade das mães, é esperado em populações de primatas em que a oferta de alimento não é limitante do sucesso reprodutivo das fêmeas e em que, portanto, o sexo com maior variabilidade de sucesso reprodutivo em função de habilidades competitivas é o masculino. / In comparison with other mammals, the order Primates is characterized by a prolonged gestation and by the birth of a single offspring in each reproductive period. Besides, female primates give birth to very immature infants that require great parental investment performed mainly by the mothers. Infancy is the post-partum period in which the young is completely dependent on its care-giver for feeding, transportation and protection, and lasts up until the individual is capable of surviving on its own. During this period we can observe the style of maternal care by measuring the mothers investment in care given to her offspring. The affiliative relationship between the infant and its mother, as well as with other members of the social group are established throughout this same period. In some mammal species, including primates, maternal care can differ according to the sex of the infant, and on female parity and hierarchical position. In this study I investigate the effect of mothers parity and on infants sex on the style of maternal care and on the physical and social development of the offspring in a group of semi-free tufted capuchin monkeys. Furthermore, this research followed a previous study, carried out with the same group of monkeys, also regarding the style of maternal care and development of young. Therefore it is also the goal of this study to compare these variables considering differences in group demography and in the environmental conditions between the two study periods. Data were collected at Parque Ecológico do Tietê from September 2006 to April 2008. Data were collect through focal-animal and all occurrences methods, and analyzed by cluster and variance analysis. The style of maternal care seems to be related to the parity of the mother. Primiparous mothers generally invest more in nursing, transportation and in maintaining proximity with their offspring while multiparous mothers invest more in grooming. However the differences were not statistically significant. The physical and social development of the young were not affected by the demographic changes undergone by the group, but were, on the other hand, affected by changes in environmental conditions. An alteration in the availability of provisioned food resulted in an increase in the rate of locomotion of the group in search for food. An increase in the distance between mother and offspring was also noted and was related to the growth of family networks, leading to the protection of the young by kin related individuals besides their mother. There was greater maternal investment in male infants. Regarding infant development, female infants had higher frequencies of independent feeding and locomotion than male infants, even though independent locomotion was greater for males at the beginning of their development. Female infants also maintained greater proximity with their mothers and with other members of the group than male infants. A greater maternal investment in male offspring, independent of the parity of mothers, is expected in primate populations living in areas where food supply is not limiting of females reproductive success, which is the case of the study area, because in such populations males present greater variability than females in reproductive success.
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Caracterização do gene CDK7 e análise de sua possível atuação nos endociclos de Rhynchosciara americana. / Cdk7 gene characterisation and analysis of its possible role in the endocycles of Rhynchosciara americana.

Adam Arai Martens 20 April 2012 (has links)
CDKs são proteínas responsáveis pela ativação e progressão do ciclo celular e também apresentam função na ativação e alongamento na transcrição. Dentre elas, CDK7 atua em ambas as funções, fosforilando as CDKs do ciclo celular e fazendo parte do fator geral de transcrição TFIIH como subunidade catalítica. A partir de uma biblioteca de ESTs de glândula salivar, construído com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o início do último ciclo replicativo da politenização e início da amplificação gênica, foram encontradas poucas mensagens relacionadas diretamente com o ciclo celular, correspondendo a 3.11% do ESTs. Dentre elas, foram encontradas as mensagens de Cdc2-like e Cdk7; portanto, foi realizada a caracterização do gene Cdk7 e a análise de sua atuação durante o desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana. O gene Cdk7 apresenta 4 éxons, mais que em vertebrados. A sequência completa do mRNA foi obtida a partir de RACE, apresentando 1230 bases e uma ORF de 1020 bases. Perfis de expressão foram determinados por RT-PCR e Western blots. Modificações pós-traducionais foram analisadas por imunoblots em 2D. Seu perfil de expressão de mRNA e proteína apresentam variações durante o ciclo celular e entre os tecidos analisados; os imunoblots mostram a presença de uma fosforilação e possíveis modificações na cadeia lateral de alguns aminoácidos. O estudo de proteínas relacionadas ao ciclo celular nesse modelo é importante para um melhor entendimento dos ciclos celulares incomuns presentes em diferentes tecidos de insetos. / CDKs are proteins responsible for activation and progression of cell cycle and also work on the activation and elongation of transcription. Among them, CDK7 acts in both functions, phosphorylating cell cycle CDKs and as a part of general transcription factor TFIIH as its catalytic subunit. From an EST library of salivary gland, constructed with mRNAs present during the period when the beginning of the last polyteny replicative cycle occurs, it was found only few messages directly related to cell cycle, corresponding to 3.11% of the ESTs. Among them, it was found Cdc2-like and Cdk7; therefore, it was performed the characterisation of Cdk7 gene and the analysis of its role during the larval development of Rhynchosciara americana. Cdk7 gene presents 4 exons, more than in vertebrates. Complete mRNA sequence was obtained via RACE, presenting 1230 bases and an 1020 bases ORF. Expression profiles were determined by RT-PCR and Western blots. Posttranslational modifications were analysed by 2D immunoblots. Its mRNA and protein expression profiles presented variations during cell cycle and between the studied tissues; immunoblots showed the presence of one phosphorylation and possible modifications on the side chain of some amino acids. The study of proteins related to cell cycle in this model is important for a better understanding of uncommon cell cycles in different insect tissues.
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Identificação e caracterização de seqüências expressas (EST) na musculatura peitoral de frangos de corte. / Identification and characterization of expressed sequence tags (EST) in broiler’s breast muscle.

Alves, Helena Javiel 23 November 2004 (has links)
A produção de aves no Brasil vem crescendo na ordem de 10% a cada ano, o que se explica pela atualização constante da tecnologia do setor (http://www.abef.com.br). Sendo a carne de frango a fonte de proteína animal mais barata e acessível ao consumidor, há necessidade de se produzir cada vez mais animais com maior acúmulo de massa muscular. Para isso, o entendimento dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na formação da musculatura esquelética é de extrema relevância. Os fatores miogênicos, genes responsáveis pela determinação e diferenciação de células musculares, foram clonados e progressos significativos foram desenvolvidos quanto ao controle da expressão dos mesmos. A utilização da técnica de seqüenciamento de DNA possibilita a identificação e caracterização de novos genes envolvidos na complexa rede de fatores que regulam a formação da musculatura esquelética em aves. Neste estudo, foram construídas duas bibliotecas de cDNA (fase embrionária e pós-eclosão) de músculo peitoral de uma linhagem de corte (TT) e uma biblioteca da fase embrionária de uma linhagem de postura (CC). A análise das seqüências EST (Expressed Sequence Tags) foi utilizada para identificar possíveis novos genes envolvidos no processo de formação da musculatura esquelética. As seqüências EST identificadas possibilitaram a construção de um banco com 6247 ESTs da musculatura peitoral das linhagens de corte e postura nas duas fases de desenvolvimento. Com o intuito de estabelecer uma relação entre o perfil de expressão dos fatores miogênicos: MyoD, MRF4 e miogenina; e dos genes Pax-3 e miostatina e a formação e maturação das fibras musculares, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real. Em geral, a expressão dos fatores miogênicos foi maior na linhagem de corte em relação à de postura nas idades estudadas. Este estudo deverá contribuir para as áreas celular e molecular de desenvolvimento, além de fornecer recursos úteis aos programas de melhoramento genético de aves que visam obter animais com maior acúmulo de massa muscular. / Brazilian’s chicken production is increasing annually around 10%, which can be explained by the current technology applied to this sector (http://www.abef.com.br). Being chicken’s meat the cheapest animal protein source for consumers, there is a need to produce even more animals with increased muscular mass. For this purpose, understanding the molecular and cellular mechanisms involved with the skeletal muscle development is of great relevance. The myogenic factors, genes responsible for the determination and differentiation of muscle cells, were cloned and significant progress was made on the control of their expression. The use of DNA sequencing technique allows the identification and characterization of new genes involved in the complex chain of factors signalling systems that regulates the expression of avian skeletal muscles. In this study, two cDNA libraries (embryonic and post-hatching phases) were constructed from the breast muscle of a chicken broiler line (TT) and one library, from the embryonic phase, from a chicken layer line (CC). The EST (Expressed Sequencing Tags) analysis was used to identify probable new genes involved in the skeletal muscle development. The identified ESTs were used to generate a database containing 6247 breast muscle ESTs from two chicken lines in two development phases. Real time PCR was employed with the aim of establishing a relationship among the expression profile of myogenic factors (MyoD, MFR4, and myogenin), Pax-3 and myostatin genes with the formation and maturation of muscle fibers. In general, the expression of myogenic factors was greater in the broiler than in the layer chicken line in the phases under study. These results should contribute to other cellular and molecular development studies besides providing useful resources for chicken breeding programs whose objective is the deposition of skeletal muscle mass.

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