This study aimed to isolate and characterize probiotic strains from fermented milk and multiplies in the swine plasma medium for inoculation in Italian salamis, with the starter culture Staphylococcus xylosus isolated from artisanal salamis. Colonies count of the fermented milks was in the MRS (De Man Rogosa Sharpe Agar, Oxoid) medium by the technique of 'pour-plate'. The strains were isolated through the technical spread plate in selective medium, MRS. Individual strains were confirmed by Gram staining, catalase test and identified by kits Api 20 A and 50 CHL (Bio Merieux SA, Marcy L'Etoile, France). After, passed the tests of resistance to sodium chloride added to the MRS agar, in concentrations of 1%, 1.5%, 2%, 2.5% and 3% and resistance to nitrite and nitrate, which were conducted by the same procedure at concentrations of 80, 100, 120, 150 and 200 ppm. They also passed through of 0.3% bile and acid resistance tests, pH: 3.0, 2.5 and 2.0 of 3M HCl for 3 and 6 hours. In the second experiment, the isolate strain of Lactococcus lactis ssp lactis 2 passed through multiplication in fermented machine for use as a starter in probiotics dry fermented sausages. The probiotic strains were multiplied in plates with swine plasma medium plus agar and isolate starter Staphylococcus xylosus in BAIRD-PARKER plate. In the treatments were used as starters the S. xylosus and Lactococcus lactis, and as probiotic strains: Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 and Bifidobacterium spp 2. Control treatment was added with commercial starters, the Treatment 1: with isolate starters; Treatment 2: with isolate starters adding more probiotic strain a Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 and Treatment 3: starters more probiotic isolate strain Bifidobacterium spp 2. Were evaluated microbiological, physic-chemical and sensory aspects. Samples of fermented milks examined showed higher counts to 107CFU.g-1 and the strains were: Actinomyces israelli, 7 Actinomyces naeslundii, Lactobacillus acidophylus/jensenii, Bifidobacterium spp 2, Lactococcus lactis ssp lactis 2 e Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1. The strains Bifidobacterium spp 2 and Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 were resistant to all concentrations of sodium chloride, nitrite and nitrate, and the pH of 3.0 for 3 hours and 6 hours. The L. paracasei ssp paracasei 1 showed lower counts to 106 UFC.mL-1 at pH 2.0, with 5.63 Log UFC.mL-1 in 3 hours of incubation and 3.79 Log UFC.mL-1 in 6 hours. The strain of Bifidobacterium spp 2 lost its probiotic viability after exposure of 6 hours in the pH of 2.0 and 2.5, showing reduction of 9.4 Log UFC.mL-1 to 3.67 and 4.18 Log UFC.mL-1, respectively. The strains analyzed showed resistance to bile salts and remained in a viable state after 4 hours of exposure to 0.3% of bile salts. The propagation in a culture medium made with swine plasma achieved levels of 5.52 Log CFU.mL-1 to 8.58 Log CFU.mL-1 and optical density of 0.14 to 0.882, in 27 hours of fermentation. All final physical and chemical parameters were up to standards with pHs and activities of water in accordance with the safety standards of the product. Sensory characteristics showed that the isolated strains notes were statistically equal and/or above the commercial strains and probiotics salamis had cells in a viable state for 30 days of storage. / Este trabalho teve como objetivo isolar e caracterizar cepas probióticas de leites fermentados comerciais e multiplica-lás em meio de cultura à base de plasma suíno para inoculação em salames tipo Italiano, juntamente com a cultura starter Staphylococcus xylosus isolada de salames artesanais. A contagem das colônias dos leites fermentados foi em meio MRS (De Man Rogosa Sharpe Agar, Oxoid) pela técnica de semeadura em profundidade. As cepas foram isoladas através da técnica spread-plate em meio seletivo, MRS. Cepas individuais foram confirmadas por coloração de Gram e prova da catalase, e identificadas pelos kits Api 20 A e 50 CHL (Bio Merieux SA, Marcy L Etoile, France). Após, foram realizados os testes de resistência ao cloreto de sódio adicionado ao ágar MRS, nas concentrações de 1%, 1,5%, 2 %, 2,5% e 3% e resistência ao nitrito e nitrato, que foram realizados pelo mesmo procedimento, nas concentrações de 80, 100, 120, 150 e 200 ppm. Realizou-se também os testes de resistência a bile 0,3% e a acidez, em pH: 3,0, 2,5 e 2,0 de HCl 3M durante 3 e 6 horas. No segundo experimento, a cepa de Lactococcus lactis ssp lactis 2 isolada foi multiplicada em fermentador para uso como starter nos salames. As cepas probióticas foram multiplicadas em placas com meio de plasma suíno acrescido de ágar e o starter isolado de Staphylococcus xylosus em placas de BAIRD-PARKER. Nos tratamentos foram usados como starters o S. xylosus e Lactococcus lactis, e como cepas probióticas: Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 e Bifidobacterium spp 2. O tratamento Controle foi adicionado de starters comerciais; o Tratamento 1: com starters isolados; Tratamento 2: com starters isolados mais adição da cepa probiótica Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 e Tratamento 3: starters isolados mais cepa probiótica Bifidobacterium spp 2. Foram avaliados os aspectos microbiológicos, físico-químicos e sensoriais. As amostras de leites fermentados analisadas apresentaram contagens superiores a 107 UFC.g-1 e as cepas encontradas foram: Actinomyces israelli, Actinomyces naeslundii, Lactobacillus acidophylus/jensenii, Bifidobacterium spp 2, Lactococcus lactis ssp lactis 2 e Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1. As cepas Bifidobacterium spp 2 e Lactobacillus paracasei ssp paracasei 1 foram resistentes a todas as concentrações de cloreto de sódio, nitrito e nitrato, e ao pH de 3,0 durante 3 horas e 6 horas. O L. paracasei ssp paracasei 1 apresentou contagens inferiores a 106 UFC.mL-1 em pH 2,0, com 5,63 Log UFC.mL-1 em 3 horas de incubação e 3,79 Log UFC.mL-1 em 6 horas. A cepa de Bifidobacterium spp 2 perdeu sua viabilidade probiótica após a exposição de 6 horas nos pH de 2,0 e 2,5, apresentando redução de 9,4 Log UFC.mL-1 para 3,67 e 4,18 Log UFC.mL-1, respectivamente. As cepas analisadas apresentaram resistência aos sais biliares, permanecendo em estado viável após 4 horas de exposição à 0,3% de sais biliares. A multiplicação em meio de cultura com plasma suíno alcançou níveis de 5,52 Log UFC.mL-1 a 8,58 Log UFC.mL-1 e densidade óptica de 0,14 a 0,882, em 27 horas de fermentação. Os parâmetros físico-químicos finais estavam todos de acordo com os padrões de pH e atividade de água, conforme as normas de segurança do produto. Com relação às características sensoriais, as cepas isoladas apresentaram notas estatisticamente iguais e/ou superiores às comerciais e os salames probióticos apresentaram células em estado viável durante 30 dias de armazenamento.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 310696 bytes, checksum: e605f10bbbe4b744866d2e079c4a4535 (MD5) Previous issue date: 2003-08-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alcohol dehydrogenase, ADH, activity was investigated in Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, and the probiotic strain Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, after growth at 37°C for 12 hours, and storage at 4°C for 21 days. L. delbrueckii subsp. bulgaricus and L. acidophilus presented positive results for ADH activity in Alcohol Indicator Medium, while L. delbrueckii UFV H2b20 presented negative results after 21 days. This method was not discriminatory for S. thermophilus. ADH activity was also measured by the oxidation of NAD(P)H and expressed as μmol of NAD(P)H oxydized per min per mg protein. The average activity in L. acidophilus was 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1. The activity increased to 9,17x10-7µmol.min-1.mg-1 after cells were kept in MRS medium at 4°C, for 5 days. Increases in ADH activity were also detected in cell free extracts of L. delbrueckii subsp. bulgaricus and S. thermophilus. The three strains displayed low ADH activity in MRS broth after 21 days at 4°C. The headspace analysis by Gas Chromatography/ Mass Spectroscopy revealed acetaldehyde production by L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus and S. thermophilus. The latter produced acetaldehyde only after storage at 4°C. Ethanol production was not detected. Despite some ADH activity was detected in liquid medium, the combined results do not support completely the hypothesis that ADH activity would be induced itself after storage at low temperatures. Other studies are still needed. / A atividade de etanol desidrogenase, ADH, foi investigada em espécies de bactérias usadas na fabricação do iogurte, Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, e da linhagem probiótica Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, após crescimento a 37°C por 12 horas e estocagem a 4°C por 21 dias. Em meio indicador de álcool, L. delbrueckii subsp. bulgaricus e L. acidophilus apresentaram resultado positivo para atividade de ADH, enquanto L. delbrueckii UFV H2b20, resultado negativo. A detecção da atividade, nesse meio, não foi discriminatória para S. thermophilus. A atividade de ADH, em meio líquido, foi determinada pela medida da oxidação de NAD(P)H e expressa em µmoles de NAD(P)H oxidado por minuto por mg de proteína. A atividade em L. acidophilus foi, em média de 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1, aumentando para 9,17x10- 7µmol.min-1.mg-1, após a estocagem das células em meio MRS, por 5 dias, a 4°C. Também houve aumento de atividade de ADH nos extratos livres de células de L. delbrueckii subsp. bulgaricus e S. thermophilus. Os resultados em meio líquido mostraram que as três culturas apresentaram baixa atividade de ADH durante a estocagem por 21 dias, a 4°C. A metodologia baseada em GC/MS, por headspace, permitiu detectar acetaldeído produzido por L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus e S. thermophilus, o qual produziu acetaldeído somente após a estocagem a 4°C. Entretanto, a atividade de ADH não foi observada após a incubação para crescimento a 37°C, por 12 h, nem após a estocagem a 4°C por 21 dias, não sendo observada a produção de etanol, nas condições estudadas. Estes resultados não confirmam a hipótese de uma ADH que se manifestaria após longos períodos em baixas temperaturas, embora baixa atividade da enzima tenha sido detectada em meio líquido. Outros estudos são necessários.

Atualmente a demanda mundial por cacau é superior à sua oferta, impulsionando a pesquisa e desenvolvimento de substitutos. Pesquisa conduzida recentemente evidenciou um potencial substituto ao submeter sementes de jaca dura a processos de fermentação, secagem e torração, resultando na produção de compostos voláteis similares aos do cacau. No entanto, o processo fermentativo foi realizado com a microbiota natural, o que impossibilita o direcionamento da produção de compostos de interesse. Desse modo, o objetivo do presente trabalho foi utilizar cultura starter de dois microrganismos isolados da fermentação da semente do cacau (Kluyveromyces marxianus e Saccharomyces cerevisiae) no processo fermentativo da semente de jaca dura, acompanhar as características da massa fermentativa, caracterizar microbiologicamente e avaliar os compostos voláteis produzidos. No primeiro capítulo são apresentados os dados referentes à primeira etapa do projeto, que envolveu a realização das fermentações em três lotes, contendo um tratamento sem inoculação de leveduras (controle) e dois tratamentos inoculados, sendo o KM, com K. marxianus, e o mix, com K. marxianus e S. cerevisiae. Neste capítulo também foram avaliadas as características da massa fermentativa ao longo do processo fermentativo (pH, exsudação, sólidos solúveis, acidez titulável e temperatura), o consumo de nutrientes (açúcares e proteínas), a produção de etanol e ácidos orgânicos (ácido acético e ácido lático) e a caracterização do conteúdo mineral. Observaram-se diferenças nos parâmetros para os tratamentos, principalmente devido à aceleração da fermentação no tratamento mix, que influenciaram na produção de compostos voláteis. Também foi evidenciada a presença de leveduras, bactérias láticas e bactérias acéticas ao longo do processo. No capítulo 2 estão apresentados os resultados obtidos na segunda etapa do projeto, que envolveu a análise dos compostos voláteis produzidos com perfil aromático semelhante ao do cacau, evidenciando a maximização da produção de alguns compostos voláteis que conferem aroma de chocolate, na presença de mix de culturas starters, indicando o potencial uso das mesmas na fermentação de jaca dura. / Currently the world demand of cocoa exceeds it\'s supply, leading the research and development of substitutes. Study recently conducted evidenced a potential substitute by subjecting hard jackfruit seeds to fermentation, drying and roasting processes, resulting in the production of volatile compounds to those of cocoa. However, the fermentative process was carried out with the natural microbiota, which makes it impossible to direct the production of interests compounds. Thus, the aim of the present work was the application of starter cultures of two microrganisms isolated from the cocoa beans fermentation (Kluyveromyces marxianus e Saccharomyces cerevisiae) in the fermentative process of hard jackfruit seeds, the monitoring of the fermentative mass characteristics, the microbiological characterization, and evaluation of volatile compounds produced. In the first chapter are presented the data refering to the first stage of the project, which involved the fermentation in three lots, containing a treatment without yeast inoculation (control) and two inoculated treatments, KM with K.marxianus, and MIX with K.marxianus and S. cerevisiae. In this chapter it was also evaluated the fermentative mass characteristics throughout the fermentation process (pH, exsudation, soluble solids, titratable acidity and temperature), the nutrients consumption (sugars and proteins), the production of ethanol and organic acids (acetic acid and lactic acid) and the characterization of mineral content. Differences were observed in the parameters for the treatments, mainly due to the acceleration of the fermentation in the MIX treatment, which influenced in the volatile compounds production. Also it was evidenced the presence of yeasts, lactic acid bacteria and acetic acid bacteria throughout the process. In chapter two are presented the results obtained in the second stage of the project, which involved the analysis of volatile compounds production and the aromatic profile similar to cocoa, evidencing the maximization of some volatile compounds production that confer chocolate aroma, in the presence of MIX of starters cultures, indicating their potential use in the hard jackfruit fermentation.

O emprego de culturas starter tem a finalidade de originar uma população microbiana que supere a microbiota contaminante ou mesmo natural da matéria-prima. O presente trabalho teve por objetivo estudar a influência de culturas starter compostas por diferentes combinações de microrganismos, assim como de uma bactéria lática não starter descrita como produtora de bacteriocina (Lactobacillus sake 2a) sobre a capacidade de sobrevivência de Staphylococcus aureus artificialmente inoculado e de diferentes grupos de microrganismos (coliformes totais, Escherichia coli, bolores e leveduras, mesófilos, bactérias láticas e Staphylococcus spp.), durante o período de maturação e vida-de-prateleira de salames tipo Italiano. Um total de 14 tratamentos tipos de salames foram preparadas (em duplicata), com as seguintes variáveis: adição ou não de 2 ou 3 culturas starter em partes iguais (FF1 + SL ou FF1 + SL + SPX, Chr. Hansen); adição ou não de uma cultura não starter; adição ou não de sais de cura. Dentre as formulações, 8 foram artificialmente contaminadas com S. aureus. As análises foram conduzidas no início do processamento (matéria-prima), durante a maturação (2º, 10º e 20º dia) e a vida-de-prateleira (a cada 10 dias, até o 90º dia). Observou-se que, apesar dos diferentes tratamentos testados, S. aureus não foi eliminado antes do término do período de maturação, permanecendo viável no produto até o final ou até boa parte de sua vida de prateleira, com uma redução que variou de 1,27 ciclos log (salames adicionados de 2 tipos culturas e sais de cura) e 1,08 ciclos log (salames adicionados de 3 tipos culturas e sais de cura). As produções adicionadas de Lactobacillus sake não puderam ser classificadas como salame tipo Italiano, por não terem alcançado o pH característico do produto, ao contrário do que ocorreu com os demais salames produzidos. A adição de sais de cura dificultou a inibição da maioria dos microrganismos, particularmente de S. aureus, exceto no caso das formulações com L. sake, para as quais observou-se um efeito sinérgico aditivo entre a cultura e os sais de cura, efeito entretanto insuficiente para garantir a segurança do produto. Os dados obtidos não permitiram concluir sobre a diferenças entre a adição ou não de culturas starter, bem como a sua composição, sobre a inibição dos microrganismos. Apesar do salame ser um produto que não fornece condições adequadas para a multiplicação microbiana, se houver uma alta contaminação inicial de S. aureus e, possivelmente, de outros patógenos, esta permanecerá no produto, podendo chegar ao consumidor com populações relativamente elevadas. / The use of starter cultures has the purpose of providing sufficient microbial numbers to ensure numerical dominance over the natural contaminating flora. The objective of this study was to evaluate the influence of starter cultures composed of different combinations of microorganisms and of a non starter bacteriocin producing lactic acid bacteria (Lactobacillus sake 2a) over the survival of an artificially inoculated Staphylococcus aureus strain and of different groups of microorganisms (total coliforms, Escherichia coli, yeasts and molds, mesophiles, lactic acid bacteria and Staphylococcus spp.), during the curing process and the shelf life of Italian salami. Fourteen formulations of salami were prepared (twice each), employing the following variables: addition or not of 2 or 3 starter cultures in equal parts (FF1 + SL or FF1 + SL + SPX, Chr. Hansen); addition or not of a non starter culture; addition or not of a curing agent composed of nitrite and nitrate. Eight of the formulations were artificially contaminated with S. aureus. Analysis proceeded in the beginning of the manufacturing process (meat), during the curing process (after the 2nd, the 10th and the 20th day) and during the shelf-life of the product (every 10 days, up to the 90th day). It was observed that, in spite of the different kinds of treatments tested, S. aureus was not eliminated during the curing process, remaining viable until the end of the shelf life, or at least during most part of it. Formulations added of L. sake could not be classified as salami, as they did not reach the typical pH of the product, pH that was reached by the other formulations prepared. Addition of curing salts made inhibition of most microorganisms difficult, particularly in the case of S. aureus, except for formulations added of L. sake, for which synergistic effect between the culture and the curing agent was observed, though unsatisfactory to ensure safety of the product. Data obtained was not enough to conclude about differences between effects of addition or not of starter cultures, and its composition, over inhibition of microorganisms. Even though salami is a product which does not provide good microbial growth conditions, when initial contamination of S. aureus, and possibly of other pathogens, is high, it will remain in the product that reaches consumers with high microbial loads.

O emprego de culturas starter tem a finalidade de originar uma população microbiana que supere a microbiota contaminante ou mesmo natural da matéria-prima. O presente trabalho teve por objetivo estudar a influência de culturas starter compostas por diferentes combinações de microrganismos, assim como de uma bactéria lática não starter descrita como produtora de bacteriocina (Lactobacillus sake 2a) sobre a capacidade de sobrevivência de Staphylococcus aureus artificialmente inoculado e de diferentes grupos de microrganismos (coliformes totais, Escherichia coli, bolores e leveduras, mesófilos, bactérias láticas e Staphylococcus spp.), durante o período de maturação e vida-de-prateleira de salames tipo Italiano. Um total de 14 tratamentos tipos de salames foram preparadas (em duplicata), com as seguintes variáveis: adição ou não de 2 ou 3 culturas starter em partes iguais (FF1 + SL ou FF1 + SL + SPX, Chr. Hansen); adição ou não de uma cultura não starter; adição ou não de sais de cura. Dentre as formulações, 8 foram artificialmente contaminadas com S. aureus. As análises foram conduzidas no início do processamento (matéria-prima), durante a maturação (2º, 10º e 20º dia) e a vida-de-prateleira (a cada 10 dias, até o 90º dia). Observou-se que, apesar dos diferentes tratamentos testados, S. aureus não foi eliminado antes do término do período de maturação, permanecendo viável no produto até o final ou até boa parte de sua vida de prateleira, com uma redução que variou de 1,27 ciclos log (salames adicionados de 2 tipos culturas e sais de cura) e 1,08 ciclos log (salames adicionados de 3 tipos culturas e sais de cura). As produções adicionadas de Lactobacillus sake não puderam ser classificadas como salame tipo Italiano, por não terem alcançado o pH característico do produto, ao contrário do que ocorreu com os demais salames produzidos. A adição de sais de cura dificultou a inibição da maioria dos microrganismos, particularmente de S. aureus, exceto no caso das formulações com L. sake, para as quais observou-se um efeito sinérgico aditivo entre a cultura e os sais de cura, efeito entretanto insuficiente para garantir a segurança do produto. Os dados obtidos não permitiram concluir sobre a diferenças entre a adição ou não de culturas starter, bem como a sua composição, sobre a inibição dos microrganismos. Apesar do salame ser um produto que não fornece condições adequadas para a multiplicação microbiana, se houver uma alta contaminação inicial de S. aureus e, possivelmente, de outros patógenos, esta permanecerá no produto, podendo chegar ao consumidor com populações relativamente elevadas. / The use of starter cultures has the purpose of providing sufficient microbial numbers to ensure numerical dominance over the natural contaminating flora. The objective of this study was to evaluate the influence of starter cultures composed of different combinations of microorganisms and of a non starter bacteriocin producing lactic acid bacteria (Lactobacillus sake 2a) over the survival of an artificially inoculated Staphylococcus aureus strain and of different groups of microorganisms (total coliforms, Escherichia coli, yeasts and molds, mesophiles, lactic acid bacteria and Staphylococcus spp.), during the curing process and the shelf life of Italian salami. Fourteen formulations of salami were prepared (twice each), employing the following variables: addition or not of 2 or 3 starter cultures in equal parts (FF1 + SL or FF1 + SL + SPX, Chr. Hansen); addition or not of a non starter culture; addition or not of a curing agent composed of nitrite and nitrate. Eight of the formulations were artificially contaminated with S. aureus. Analysis proceeded in the beginning of the manufacturing process (meat), during the curing process (after the 2nd, the 10th and the 20th day) and during the shelf-life of the product (every 10 days, up to the 90th day). It was observed that, in spite of the different kinds of treatments tested, S. aureus was not eliminated during the curing process, remaining viable until the end of the shelf life, or at least during most part of it. Formulations added of L. sake could not be classified as salami, as they did not reach the typical pH of the product, pH that was reached by the other formulations prepared. Addition of curing salts made inhibition of most microorganisms difficult, particularly in the case of S. aureus, except for formulations added of L. sake, for which synergistic effect between the culture and the curing agent was observed, though unsatisfactory to ensure safety of the product. Data obtained was not enough to conclude about differences between effects of addition or not of starter cultures, and its composition, over inhibition of microorganisms. Even though salami is a product which does not provide good microbial growth conditions, when initial contamination of S. aureus, and possibly of other pathogens, is high, it will remain in the product that reaches consumers with high microbial loads.

Thesis (MSc Food Sc )--Stellenbosch University, 2003. / ENGLISH ABSTRACT: Kepi is a refreshing, fermented dairy beverage that differs from other fermented milk products in that it is produced with a mixed microbial community which is confined to discrete grains. These grains can be recovered as a solid matrix at the end of the fermentation and then be reutilised as a starter to ferment the next batch of milk. The grain microbial community consists of a symbiotic association of yeasts and lactic acid bacteria, but the overall composition of the grains has not been completely elucidated. The microbes in the grains are embedded in a protein-polysaccharide Kefiran matrix, which appears essential for grain formation. The mechanism of grain formation is still not fully understood and it thus remains undecided which organism is really responsible for the production of this proteinpolysaccharide matrix. The aim of this study was to isolate, characterise and identify the microbes present in Kefiran from mass cultured South African grains and then to evaluate grain formation with these purified cultures isolated from Kefiran strings using a mass cultivation process. Sixteen strains of lactic acid bacteria and one yeast strain were isolated from Kefiran strings produced during the mass cultivation of South African Kepi grains. API technology, numerical clustering and DNA sequence comparisons were used to identify the purified isolates. The isolates were grouped into seven clusters by numerical clustering and clustering distance from selected reference and marker strains. The heterofermentative lactobacilli were identified as Lactobacillus parakefiri and Lb. kefiri and the homofermentative strains as Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus, Lb. gallina rum, Lb. acidophilus and Lb. bavaricus. One isolate was found to be a member of the genus Lactobacillus, but was not positively identified to species level. Cultures isolated from Kefiran were evaluated for ability to grain formation by adding 1 x 109 cfu.ml:' bacteria and 1 x 108 cfu.ml' yeast to double pasteurised, full cream milk during the mass cultivation process. It was found that the control and all the cultures in double pasteurised milk showed grain accumulation indicating that other microbes were present in pasteurised and double pasteurised milk which had an influence on the grain forming ability. The cultures isolated from pasteurised and double pasteurised milk included members of the species Pediococcus, Acinetobacter, Lactococcus laetis ssp. lactis, Candida lipolytica, C. guilliermondii, Chryseobacterium meningosepticum, Pseudomonas putida and four isolates of the Bacillus cereus group. It was found that these rod-shaped "milk isolates" resulted in grain accumulation when inoculated into UHT milk and it was concluded that the "milk isolates" did contribute to grain formation. These isolates were then combined with the Kefiran cultures and this resulted in grains very similar to the traditional Kepi grains. These grains were made from Lb. gallinarum in double pasteurised milk as well with a combination of Lb. gallinarum, Lb. acidophilus, Lb. kefiri, Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus, Candida lambica and Pseudomonas putida in URT milk. The grains were firm, elastic and did not dissolve in water but kept their structure and were retained when sieved. An acceptable Kepi beverage was produced from these grains. From these typically traditional grain characteristics it was concluded that, even though the microbial compositions were probably not the same, the general appearance was similar to traditional grains and that it is thus possible to produce grains from pure single strain Kefiran cultures and "milk isolates". Furthermore, it was possible to produce a Kepilike beverage from these grains, which included similar characteristics as the traditional Kepi beverage. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Kepi is "n verfrissende, gefermenteerde suiweldrankie wat van ander gefermenteerde produkte verskil in die opsig dat dit vervaardig word deur Kepi korrels in melk te inkubeer. Die Kepi korrels kan aan die einde van die fermentasie herwin word en weer gebruik word om die volgende lot melk te fermenteer. Die korrels bestaan uit "n simbiotiese samestelling van giste en melksuurbakterieë, maar die presiese samestelling van die korrels is steeds onbekend. Die mikro-organismes is vasgevang in "n proteïen-polisakkaried Kefiran matriks en die Kefiran word as essensieel beskou vir korrelvorming. Die meganisme van korrelvorming bly steeds onbekend en daar is nog nie tot "n gevolgtrekking gekom oor watter organisme die Kefiran produseerder is nie. Die doel van die studie was om die mikro-organismes in Kefiran te isoleer en te identifiseer deur Suid-Afrikaanse Kepi korrels te massa kweek. Hierdie mikroorganismes was dan verder geëvalueer ten opsigte van korrel vorming. Sestien melksuurbakterieë isolate en een gis isolaat is geïsoleer vanuit die Kefiran. API tegnologie, numeriese groepering en DNA volgorde vergelykings was gebruik om die isolate te identifiseer. Die isolate is in sewe groepe verdeel volgens numeriese groepering. Die afstand van verwysings en merker organismes is ook in ag geneem. Die heterofermentatiewe organismes is geïdentifiseer as Lactobacillus parakefiri en Lb. kefiri en die heterofermentatiewe organismes as Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus, Lb. gallina rum, Lb. acidophilus en Lb. bavaricus. Een isolaat kon nie geïdentifiseer word tot op spesie vlak nie, maar is verwant aan die genus Lactobacillus. Hierdie geïsoleerde Kefiran kulture is geëvalueer ten op sigte van korrelvorming, deur 1 x 109 kve.ml' van die bakterieë en 1 x 108 kve.ml' van die gis by dubbel gepasteuriseerde volroom melk te voeg tydens die massakwekings proses. Die kontrole wat geen bygevoegde kulture bevat nie, sowel as die wat wel bygevoegde kulture bevat, het korrel vorming getoon. Laasgenoemde toon dat daar organismes teenwoordig is in gepasteuriseerde en dubbel gepasteuriseerde melk wat "n rol kan speel tydens korrelvorming. Die kulture wat geïsoleer is vanuit gepasteuriseerde en dubbel gepasteuriseerde melk, sluit in: Pediococcus, Acinetobacter, Lactococcus laetis ssp. lactis, Candida lipolytica, C. guilliennondii, Chryseobacterium menigosepticum, Pseudomonas putida en vier isolate van die Bacillus cereus groep. Hierdie organismes wat uit melk geïsoleer is, het korrelvorming getoon in UHT melk en die gevolgtrekking kan gemaak word dat die "melk organismes" wel "n rol speel tydens korrel vorming. Hierdie "melk isolate" in kombinasie met die Kefiran kulture het korrels tot gevolg gehad wat baie dieselfde was as tradisionele Kepi korrels. Laasgenoemde korrels is gemaak deur Lb. gallina rum in dubbel gepasteuriseerde melk, sowel as deur "n kombinasie van Lb. gallina rum, Lb. acidophilus, Lb. kefiri, Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus, Candida lambica en Pseudomonas putida in UHT melk. Die korrels was stewig, elasties, het nie opgelos in water nie en het hulle struktuur behou wanneer gesif. Wanneer hierdie tipiese tradisionele korrels se eienskappe in ag geneem word, kan die gevolgtrekking gemaak word dat alhoewel die mikrobiese samestelling van die korrels nie dieselfde is as die tradisionele korrel nie, is die algemene voorkoms en eienskappe dieselfde en dat dit wel moontlik is om korrels te produseer deur isolate geïsoleer vanuit Kefiran en melk. Verder was dit moontlik om "n drankie te vervaardig met die korrels wat baie dieselfde is as tradisionele Kepi.