Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-15T18:25:22Z No. of bitstreams: 1 vitor_e_vidal_ioc_bcm_0021_2010.pdf: 5115263 bytes, checksum: fa627a814efc2aa5bda7207fe780c399 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-15T18:25:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitor_e_vidal_ioc_bcm_0021_2010.pdf: 5115263 bytes, checksum: fa627a814efc2aa5bda7207fe780c399 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / As calpaínas constituem uma família de cisteína-peptidases neutras dependentes de cálcio presentes numa ampla variedade de organismos. Em virtude da relevância fisiológica dessa proteases, inibidores de calpaínas já vêm sendo desenvolvidos para o tratamento de doenças humanas e microbianas. Estudos recentes vêm relatando a presença de diversas proteínas relacionadas às calpaínas em tripanossomatídeos, mas pouco se sabe a respeito das funções específicas dessas proteínas nesses micro-organismos. Nesse contexto, uma vez que os fármacos atualmente disponíveis para o tratamento da doença de Chagas apresentam sérios efeitos colaterais e podem ser ineficazes, inibidores proteolíticos poderiam ser uma alternativa no tratamento desta doença. Portanto, o presente trabalho investiga a presença de moléculas similares às calpaínas no Trypanosoma cruzi e o efeito inibidor do inibidor III de calpaínas (MDL28170) sobre a proliferação, viabilidade, diferenciação, ultraestrutura e interação das diferentes formas do parasito com células hospedeiras em ensaios in vitro. Nossos resultados revelam a reatividade cruzada de anticorpos produzidos contra calpaínas já bem caracterizadas de Drosophila melanogaster, Homarus americanus e. Trypanosoma brucei contra moléculas de superfície do T. cruzi, conforme demonstrado por imunofluorescência e citometria de fluxo. Em ensaios de Western Blotting foi possível observar que o anticorpo anti-DM-calpaína foi capaz de reagir contra uma proteína de 80 kDa. Pesquisas realizadas no GenBank demonstraram a presença de 4 seqüências nomólogas à calpaína de D. melanogaster no genoma do T. cruzi. Essas 4 seqüências foram identificadas como cisteína-paptidases de massa molecular predita em torno de 80kDa. Nos ensaios de inibição com o MDL28170 foi possível observar a redução da proliferação das formas epimastigotas ao longo de 5 dias de cultura; e a redução significativa da viabilidade das formas tripomastigotas sanguíneas dos parasitos tratados com 25 µM do composto. O inibidor, adicionado nas concentrações de 6,25 à 25 µM, também foi capaz de diminuir de forma dose- e tempo-dependente o número de macrófagos parasitados e o número de parasitas interiorizados nos ensaios de interação com macrófagos peritoneais murinos. O MDL28170 em concentração a partir de 12,5 µM teve ainda um efeito inibitório significativo sobre a adesão de formas epimastigotas ao epitélio intestinal de Rhodnius prolixus; assim como os anticorpos anti-calpaínas foram capazes de inibir significativamente a interação com o inseto vetor. Por fim, foi possível observar uma redução significativa no processo de diferenciação por metaciclogênese em meio TAU e alterações ultraestruturais em reservossomos, Golgi e membrana plasmática quando formas epimastigotas do T. cruzi foram tratadas com MDL28170.. Embora mais estudos sejam necessários para melhor caracterizar moléculas similares às calpaínas no T. cruzi, o nosso trabalho acrescenta novos conhecimentos sobre as possíveis funções dessas moléculas e sobre a possibilidade de utilização de inibidores de calpaínas como uma alternativa promissora para o desenvolvimento de compostos mais potentes e seletivos para o tratamento da doença de Chagas. / The calpains are a family of cysteine ​​peptidases neutral calcium dependent present in a wide variety of organisms. Due to the physiological relevance of such proteases, calpain inhibitors have already been developed for the treatment of human diseases and microbial. Recent studies have reported the presence of several proteins related to calpain in trypanosomatids, but little is known about the specific functions of these proteins in these micro-organisms. In this context, since the drugs currently available for the treatment of Chagas' disease have serious side effects and can be ineffective, proteolytic inhibitors could be an alternative in treatment of this disease. Therefore, the present study investigates the presence of molecules similar to calpain in Trypanosoma cruzi and the inhibitory effect of calpain inhibitor III (MDL28170) on proliferation, viability, differentiation, ultrastructure and interaction of the different forms of the parasite with host cells in vitro tests . Our results reveal the cross-reactivity of antibodies produced against calpains already well-characterized Drosophila melanogaster, and Homarus americanus. Trypanosoma brucei against surface molecules of T. cruzi, as demonstrated by immunofluorescence and flow cytometry. In assays Western Blotting was observed that the anti-DM-calpain was able to react against a protein of 80 kDa. Surveys conducted in GenBank showed the presence of 4 nomólogas the calpain sequences of D. melanogaster genome of T. cruzi. These four sequences were identified as cysteine ​​paptidases predicted molecular mass of around 80 kDa. In inhibition assays with MDL28170 was possible to observe a reduction in the proliferation of epimastigotes over 5 days of culture, a significant reduction in the viability of blood trypomastigotes of parasites treated with 25 mM of the compound. The inhibitor added at concentrations of 6.25 to 25 mM, was also able to decrease in a dose-and time-dependent number of infected macrophages and the number of parasites internalized interaction assays with murine peritoneal macrophages. The MDL28170 in concentration from 12.5 mM still had a significant inhibitory effect on the adhesion of epimastigotes to the intestinal epithelium of Rhodnius prolixus, as well as anti-calpain were able to significantly inhibit the interaction with the insect vector. Finally, we observed a significant reduction in the differentiation process by metacyclogenesis amid TAU and ultrastructural changes in reservossomos, Golgi and the plasma membrane when epimastigotes of T. cruzi were treated with MDL28170 .. Although more studies are needed to better characterize molecules similar to calpains in T. cruzi, our work adds new insights into the possible roles of these molecules and the possibility of using inhibitors of calpain as a promising alternative for the development of more potent and selective compounds for the treatment of Chagas' disease.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:01:19Z No. of bitstreams: 1 Tese_ClaudiaMaríaRíosVelásquez.pdf: 10298436 bytes, checksum: a818292b9ed3715f2201a29b38afb273 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:01:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ClaudiaMaríaRíosVelásquez.pdf: 10298436 bytes, checksum: a818292b9ed3715f2201a29b38afb273 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:01:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ClaudiaMaríaRíosVelásquez.pdf: 10298436 bytes, checksum: a818292b9ed3715f2201a29b38afb273 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T17:01:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ClaudiaMaríaRíosVelásquez.pdf: 10298436 bytes, checksum: a818292b9ed3715f2201a29b38afb273 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A malária é um problema de saúde pública. O Brasil é o país sul-americano que mais casos aporta todo ano, a maioria deles ocorridos na região Amazônica. Até o presente não há nenhuma vacina eficaz contra a malária. O controle dessa doença baseia-se principalmente no combate vetorial. Um dos desafios atuais é encontrar novas moléculas úteis para bloquear a transmissão da malária no vetor, sendo necessário para isso conhecer a biologia da interação entre os parasitos e seus hospedeiros. A maioria dos grupos de pesquisa utiliza como modelos de laboratórios combinações não naturais de Anopheles – Plasmodium. Neste trabalho foi avaliada a suscetibilidade ao P. vivax em espécies Amazônicas de Anopheles, fêmeas de Anopheles darlingi, An. albitarsis s.l., An. nuneztovari s.l. e An. triannulatus s.l. e An. aquasalis foram infectadas com P. vivax utilizando um sistema de infecção experimental por membrana artificial. Todas as espécies de Anopheles estudadas foram suscetíveis à infecção por P. vivax, porém a taxa de infecção e o numero de oocistos variaram significativamente entre elas. An. aquasalis (Spearman rho = 0.255, n = 386, p < 0.01) e An. darlingi (rho = 0.518; n = 54, p < 0.01) mostraram uma correlação positiva entre o número de gametócitos e o número de oocistos formados. Também foi avaliada a via JAK/STAT de resposta imune em A. aquasalis, durante a fase tardia da infecção, e em A. darlingi, no início da infecção. A expressão dos genes STAT, PIAS e NOS foi avaliada por q-PCR. Em An. aquasalis a expressão dos genes estudados foi induzida a partir de 8 dPI (PIAS e NOS) e 12 dPI (STAT), e começou a diminuir aos 14dPI, provavelmente indicando a indução transitória desses genes na fase tardia da infecção. Em An. darlingi não foi observada a ativação dessa via imune durante a fase inicial da infecção com P. vivax. Estudos futuros devem ser realizados para saber de que forma os genes regulados pela via JAK/STAT podem modular o desenvolvimento do P. vivax em An. aquasalis, e outras vias de sinalização devem ser estudadas na resposta de An. darlingi à infecção pelo Plasmodium. / Malaria is a public health concern. Brasil is the Latin American country with the higher number of cases registered, the most in the Amazon Region. Actually, there is not an effective vaccine against malaria and the disease control is based on vector control. New challenges include finding new molecules to block malaria transmission, making necessary to know the mechanisms involved in the Plasmodium – Anopheles interactions. The most studies have used laboratory parasite – vector pairs which does not resemble natural parasite – hst interactions. The goals of this work were 1) to compare the susceptibility of five Amazonian Anopheles mosquito species to Plasmodium vivax, and 2) to evaluate JAK/STAT immune pathway during the late-phase of A. aquasalis infection and the early phase of A. darlingi. To evaluate the P. vivax mosquito susceptibility we fed by membrane feeding assays field populations of Anopheles darlingi, An. albitarsis s.l., An. nuneztovari s.l. and An. triannulatus adult females and, An. aquasalis from colony. All the Anopheles species were susceptible to P. vivax infection, although the infection rate and oocyst numbers were significantly different among them. There was a positive correlation between the density of gametocytes and the infection rate in An. aquasalis (Spearman rho = 0.255, n = 386, p < 0.01) and An. darling (rho = 0.518; n = 54, p < 0.01). Anopheles aquasalis had high infection intensity, showing that the An. aquasalis - P. vivax pair is a feasible laboratory model. To evaluate the expression of STAT, PIAS and NOS in An. aquasalis and An. darlingi was used qPCR method. In An. aquasalis the studied genes were induzed since 8 dPI (STAT) and 12 dPI (both PIAS and NOS), and was diminishing at 14dPI, probably indicating that JAK/STAT activation in later phases of P. vivax infection is transient. In An. darlingi the genes STAT, PIAS and NOS were no expressed during the early phase of the infection with P. vivax. The role of JAK/STAT pathway, in later stages of P. vivax infection of An. darling, remains to be investigated.

Toxoplasma gondii é um parasito do filo Apicomplexa que infecta uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os humanos. O parasito invade a célula hospedeira por penetração ativa, com a participação das proteínas de suas organelas secretoras durante esse processo. Até o momento, somente um número limitado de proteínas secretoras tem sido descoberto, além disso, as moléculas efetoras envolvidas na invasão e sobrevivência do parasito não estão completamente compreendidas. A osteopontina (OPN) é uma glicofosfoproteína adesiva secretada, multifuncional, que contém o domínio arginina-glicina-ácido aspártico (RGD) de ligação à integrina, que está envolvida em uma variedade de eventos fisiológicos e patológicos, incluindo sinalização e sobrevivência celular. Pela primeira vez, nós demonstramos pelas técnicas de imunofluorescência e imunocitoquímica ultraestrutural que há uma intensa marcação para uma proteína OPN-like nos grânulos densos de taquizoítos de T. gondii extracelulares. O western blotting e o RT-PRC confirmaram a expressão de OPN-like nos taquizoítos. Nossos resultados também mostram que após a invasão dos macrófagos, a proteína OPN-like está localizada na membrana do vacúolo parasitóforo. Esses dados sugerem que os grânulos densos secretam uma proteína OPN-like, e nós podemos especular que essa proteína participa durante o processo de interação do parasito com as células hospedeiras. . / Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite infecting a broad host range, including humans. The parasite invades host cell by active penetration with the participation of its secretory organelles proteins during this process. Until now, only a limited number of secretory proteins have been discovered, and the effectors molecules involved in parasite invasion and survival are not well understood. Osteopontin (OPN) is a multifunctional secreted adhesive glycophosphoprotein containing the arginine-glycine-aspartic acid (RGD) integrin-binding domain, which is involved in various physiological and pathological events including cell signaling and survival. For the first time we demonstrated by immunofluorescence and immunoelectron microscopy approaches that there is an intense labeling for an OPN-like protein in the dense granules of extracellular T. gondii tachyzoites. Western blotting and RTPCR confirmed this protein expression in tachyzoites. Our results also showed that after macrophage invasion the OPN-like protein is localized at the parasitophorous vacuole membrane. These data suggest that dense granules secrete an OPN-like protein, and we can speculate that this protein participates during the parasite interaction process with host cells.

Orientador: Luciano Alves dos Anjos / Coorientador: Reinaldo José da Silva / Banca: Robson Waldemar Ávila / Banca: Fábio Yamada / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a composição e estrutura da comunidade de helmintos de anfíbios de acordo com suas características reprodutivas e uso do hábitat pelo hospedeiro; determinar a riqueza e diversidade comunidade parasitária; e avaliar a distribuição espacial dos helmintos parasitas. As espécies de anfíbios coletadas foram agrupadas em seis guildas de acordo com as características reprodutivas e uso do habitat pelo anfíbio. Em todas as guildas os anfíbios estavam parasitados por pelo menos uma espécie de helminto, abrangendo desde um único hospedeiro parasitado na guilda VI até a maioria nas guildas II, III, IV e V. As guildas II, III e IV apresentaram as maiores valores de riqueza e diversidade parasitária enquanto as guildas V e VI os menores. A helmintofauna foi composta por 13 taxa, sendo os nematóides não identificados da família Cosmocercidae o taxon mais prevalente, seguido por Rhabdias sp.. As espécies de helmintos na supracomunidade apresentaram um padrão de agregação próximo ao máximo, mas nas guildas esse mesmo padrão não foi observado. Somente duas espécies foram classificadas como colonizadoras sem sucesso, larva de Physaloptera sp. e larva de Cestoda, que estavam presentes no estômago e no mesentério de hospedeiros da guilda III e IV. Todas as outras guildas apresentaram somente espécies dominantes e codominantes. A composição da fauna de helmintos foi diferente entre as guildas e a análise de ordenação reuniu os hospedeiros de acordo com as guildas criadas neste estudo. Os resultados deste estudo apontam que existe uma importância relevante das características morfológicas e comportamentais dos hospedeiros na estruturação das comunidades de helmintos parasitas em espécies simpátricas de anfíbios / Abstract: The aim of this study was to evaluate the composition and structure of helminth community of amphibians according to their reproductive characteristics and habitat use by the host; to determine the parasite community richness and diversity; and to evaluate the spatial distribution of helminth parasites. The amphibian species collected were grouped into six guilds according to the reproductive characteristics and habitat use by the host. In all guilds the amphibians were parasitized by at least one species of helminth, ranging from a single parasitized host in the guild VI even the majority in the guilds II, III, IV and V. The guilds II, III and IV showed the highest values of richness and diversity parasite while the guilds V and VI the lowest values. The helminth fauna consisted of 13 taxa, and nematodes unidentified of the family Cosmocercidae was the taxon most prevalent, followed by Rhabdias sp.. The helminth species in supracommunity have an aggregation pattern near maximum, but in guilds this same pattern was not observed. Only two species were classified as colonizing unsuccessfully, larvae of Physaloptera sp. and larvae of Cestoda, which were present in the host stomach and mesentery of guilds III and IV. All other guilds had only dominant and codominant species. The composition of the helminth fauna was different between guilds and the ordination analysis grouped the hosts in accordance with the guilds created in this study. The results of this study indicate that there is a great importance of morphological and behavioral characteristics of the host in structuring of communities of helminth parasites in sympatric species of amphibians / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:16:48Z : No. of bitstreams: 1 000737208.pdf: 2349253 bytes, checksum: 63ac5ac6eaeb3f6cca09d001f005a5bd (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar a composição e estrutura da comunidade de helmintos de anfíbios de acordo com suas características reprodutivas e uso do hábitat pelo hospedeiro; determinar a riqueza e diversidade comunidade parasitária; e avaliar a distribuição espacial dos helmintos parasitas. As espécies de anfíbios coletadas foram agrupadas em seis guildas de acordo com as características reprodutivas e uso do habitat pelo anfíbio. Em todas as guildas os anfíbios estavam parasitados por pelo menos uma espécie de helminto, abrangendo desde um único hospedeiro parasitado na guilda VI até a maioria nas guildas II, III, IV e V. As guildas II, III e IV apresentaram as maiores valores de riqueza e diversidade parasitária enquanto as guildas V e VI os menores. A helmintofauna foi composta por 13 taxa, sendo os nematóides não identificados da família Cosmocercidae o taxon mais prevalente, seguido por Rhabdias sp.. As espécies de helmintos na supracomunidade apresentaram um padrão de agregação próximo ao máximo, mas nas guildas esse mesmo padrão não foi observado. Somente duas espécies foram classificadas como colonizadoras sem sucesso, larva de Physaloptera sp. e larva de Cestoda, que estavam presentes no estômago e no mesentério de hospedeiros da guilda III e IV. Todas as outras guildas apresentaram somente espécies dominantes e codominantes. A composição da fauna de helmintos foi diferente entre as guildas e a análise de ordenação reuniu os hospedeiros de acordo com as guildas criadas neste estudo. Os resultados deste estudo apontam que existe uma importância relevante das características morfológicas e comportamentais dos hospedeiros na estruturação das comunidades de helmintos parasitas em espécies simpátricas de anfíbios / The aim of this study was to evaluate the composition and structure of helminth community of amphibians according to their reproductive characteristics and habitat use by the host; to determine the parasite community richness and diversity; and to evaluate the spatial distribution of helminth parasites. The amphibian species collected were grouped into six guilds according to the reproductive characteristics and habitat use by the host. In all guilds the amphibians were parasitized by at least one species of helminth, ranging from a single parasitized host in the guild VI even the majority in the guilds II, III, IV and V. The guilds II, III and IV showed the highest values of richness and diversity parasite while the guilds V and VI the lowest values. The helminth fauna consisted of 13 taxa, and nematodes unidentified of the family Cosmocercidae was the taxon most prevalent, followed by Rhabdias sp.. The helminth species in supracommunity have an aggregation pattern near maximum, but in guilds this same pattern was not observed. Only two species were classified as colonizing unsuccessfully, larvae of Physaloptera sp. and larvae of Cestoda, which were present in the host stomach and mesentery of guilds III and IV. All other guilds had only dominant and codominant species. The composition of the helminth fauna was different between guilds and the ordination analysis grouped the hosts in accordance with the guilds created in this study. The results of this study indicate that there is a great importance of morphological and behavioral characteristics of the host in structuring of communities of helminth parasites in sympatric species of amphibians

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:10:20Z : No. of bitstreams: 1 hebling_lmgf_me_rcla.pdf: 3712259 bytes, checksum: bcf13a7d84572a6f7c4bcf78a1fda878 (MD5) / Este estudo abordou os efeitos de extratos de glândulas salivares de fêmeas de Rhipicephalus sanguineus com 2, 4 e 6 dias de alimentação (EGS2-EGS6) em coelhos New Zealand White virgens de infestação inoculados três vezes a intervalos de 21 dias. Os animais inoculados foram desafiados com carrapatos R. sanguineus, para verificar a influência dos extratos sobre a resposta imune-inflamatória dos hospedeiros. Foram estudadas as alterações histopatológicas na pele dos hospedeiros na região da lesão de fixação dos carrapatos, os parâmetros alimentar e reprodutivo das fêmeas obtidas da infestação desafio, bem como suas glândulas salivares aos 2, 4 e 6 dias de alimentação. Para obtenção dos extratos glandulares utilizou-se 55 fêmeas (110 glândulas salivares) com 2 dias de alimentação, 36 (72 glândulas) com 4 dias e 25 (50 glândulas) com 6 dias, de onde obteve-se os extratos: EGS2, a partir de glândulas salivares de fêmeas com 2 dias de alimentação; EGS4 com 4 dias, e, EGS6 com 6 dias. Os resultados revelaram que os diferentes extratos glandulares estimularam o desenvolvimento de resposta imuneinflamatória na pele dos hospedeiros comprometendo os processos alimentar e reprodutivo das fêmeas dos carrapatos. Os hospedeiros do grupo GT (EGS4) mostraram a formação de um intenso e precoce infiltrado de células inflamatórias sinalizando que este foi o extrato mais eficaz no desenvolvimento da resposta imune-inflamatória local. Por outro lado, a resposta dos hospedeiros do grupo GT (EGS6) à infestação foi mais tardia e com menor ocorrência desse infiltrado. Já o processo inflamatório local nos hospedeiros do GT (EGS2) foi o menos intenso. O teste de desafio mostrou médias para os parâmetros alimentar e reprodutivo das fêmeas oriundas da infestação desafio que não foram significativamente diferentes, com exceção do peso médio de ingurgitamento das fêmeas... / This study addressed the effects of salivary glands extracts of Rhipicephalus sanguineus females with 2, 4 and 6 days of feeding (EGS2-EGS6) in New Zealand White rabbits naive inoculated three times at intervals of 21 days. The inoculated animals were challenged with R. sanguineus ticks to verify the influence of extracts on the host’s immune-inflammatory response. Changes in the hosts’ skin at the feeding lesion, feeding and reproductive parameters as well salivary glands with 2, 4 and 6 days of feeding of females obtained from the challenge infestation were studied. To obtain the glandular extracts, we used 55 females (110 salivary glands) with 2 days of feeding, 36 (72 glands) with 4 days and 25 (50 glands) with 6 days, which were obtained the extracts: EGS2, from salivary glands of females with two days of feeding; EGS4 with 4 days and EGS6 with 6 days. The results revealed that the different glandular extracts stimulated the development of immune-inflammatory response in the hosts’ skin compromising the feeding and reproductive processes of the female ticks. The hosts of the TG group (EGS4) showed the formation of an early and intense infiltration of inflammatory cells, indicating that this extract was more effective in developing the local inflammatory-immune response. On the other hand, the response of the TG group hosts (EGS6) to the infestation was delayed and with lower incidence of this infiltrate. The local inflammatory process in the GT hosts (EGS2) was the less intense. The challenge test showed averages for feeding and reproductive parameters of females from infestation challenge that were not significantly different, with the exception of the engorgement average weight of females from TG group (EGS6). However, it was considered that these differences occurred because of the responses developed by the hosts, since the histopathology of the skin... (Complete abstract click electronic access below)

Toxoplasma gondii é um parasito do filo Apicomplexa que infecta uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os humanos. O parasito invade a célula hospedeira por penetração ativa, com a participação das proteínas de suas organelas secretoras durante esse processo. Até o momento, somente um número limitado de proteínas secretoras tem sido descoberto, além disso, as moléculas efetoras envolvidas na invasão e sobrevivência do parasito não estão completamente compreendidas. A osteopontina (OPN) é uma glicofosfoproteína adesiva secretada, multifuncional, que contém o domínio arginina-glicina-ácido aspártico (RGD) de ligação à integrina, que está envolvida em uma variedade de eventos fisiológicos e patológicos, incluindo sinalização e sobrevivência celular. Pela primeira vez, nós demonstramos pelas técnicas de imunofluorescência e imunocitoquímica ultraestrutural que há uma intensa marcação para uma proteína OPN-like nos grânulos densos de taquizoítos de T. gondii extracelulares. O western blotting e o RT-PRC confirmaram a expressão de OPN-like nos taquizoítos. Nossos resultados também mostram que após a invasão dos macrófagos, a proteína OPN-like está localizada na membrana do vacúolo parasitóforo. Esses dados sugerem que os grânulos densos secretam uma proteína OPN-like, e nós podemos especular que essa proteína participa durante o processo de interação do parasito com as células hospedeiras. . / Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite infecting a broad host range, including humans. The parasite invades host cell by active penetration with the participation of its secretory organelles proteins during this process. Until now, only a limited number of secretory proteins have been discovered, and the effectors molecules involved in parasite invasion and survival are not well understood. Osteopontin (OPN) is a multifunctional secreted adhesive glycophosphoprotein containing the arginine-glycine-aspartic acid (RGD) integrin-binding domain, which is involved in various physiological and pathological events including cell signaling and survival. For the first time we demonstrated by immunofluorescence and immunoelectron microscopy approaches that there is an intense labeling for an OPN-like protein in the dense granules of extracellular T. gondii tachyzoites. Western blotting and RTPCR confirmed this protein expression in tachyzoites. Our results also showed that after macrophage invasion the OPN-like protein is localized at the parasitophorous vacuole membrane. These data suggest that dense granules secrete an OPN-like protein, and we can speculate that this protein participates during the parasite interaction process with host cells.

Este estudo investigou a ecologia de vespas parasitóides ocorrentes em galhadores Schismatodiplosis lantanae Rübsaamen, 1916 (Cecidomyiidae) em folhas de Lantana camara L. (Verbenaceae). Dessa forma, o primeiro artigo trata da ecologia comportamental da vespa parasitóide Torymus sp. (Torymidae, Hymenoptera), onde foi avaliado como as fêmeas dessa espécie defendem seu recurso de oviposição no hospedeiro. Foi analisado mudanças no comportamento devido à presença de outra fêmea coespecífica no local, ser residente do recurso, tamanho das vespas e número e tamanho das galhas através de filmagens dos experimentos realizados em laboratório. Com esse trabalho observou-se que fêmeas mudam seu comportamento quando estão na presença de um competidor em um território com hospedeiros. A estratégia de ataque foi através da ameaça, na qual suas antenas e asas são levantadas para expulsar o competidor do local. A probabilidade de haver ataques a fêmeas coespecíficas depende do tempo prévio de exploração da galha e da permanência na folha. O interesse no hospedeiro pelas invasoras foi a principal causa de conflitos com a residente. O segundo artigo trata da diversidade de vespas parasitóides e de um ciclo parasita-hospedeiro observado no período de um ano no sistema de L. camara. Foram encontradas nove espécies de vespas parasitóides, divididas em quatro famílias. Ocorreu um ciclo no parasitismo das espécies de vespas sobre seu hospedeiro no ano amostrado, podendo ser observado que são mais elevadas nos meses de Julho a Janeiro e a sobrevivência do hospedeiro foi maior nos meses de Fevereiro a Maio. As estratégias comportamentais de fêmeas de uma vespa parasitóide em relação a seus hospedeiros foram analisadas, bem como um sistema composto de diversas espécies parasitóides e sua variação no tempo. Estas observações podem contribuir para um melhor entendimento da ecologia comportamental e do padrão temporal das vespas parasitoides, e também para futuros programas de controle biológico mais eficientes. / We investigated the ecology of parasitoid wasps attacking Schismatodiplosis lantanae Rübsaamen, 1916 (Cecidomyiidae) galls on leaves of Lantana camara L. (Verbenaceae). The first article discusses the behavioral ecology of the parasitoid wasp Torymus sp. (Torymidae, Hymenoptera), reporting how their females defend oviposition resources on the hosts, changing their behavior due to the presence of a conspecific female in the patch. The identity of the wasp (resident or intruder) on the resource, female size and number and size of galls in the patch were factors studied through analysis of the behaviors revealed by video recordings of the laboratory experiments. Females change their behavior in the presence of a competitor in a territory with hosts. The strategy was to threat, raising their antennae and wings to expel the competitor of the patch. The probability of an attack on a conspecific females depended on the host exploitation time and time spent on the galled leaf. Interest in host by intruders was the main cause for conflicts. The second article reports the diversity of parasitoid wasps and a host-parasite cycle during one year period in the L. camara leaf galls system. Nine parasitoid wasp species were found, divided in four families. A cycle between parasitism and host survival was found during the sampling period. Wasp species are more abundant from July to January and host survival higher from February to May. Behavioral strategies of parasitoid wasp females toward their hosts and conspecifics have been elucidated, with the system composed of different parasitoid wasp species apparently going through an annual cycle of parasitism rate. These observations may contribute to a better understanding of parasitoid behavioral ecology and host-parasitoid dynamics, enabling more efficient future biological control programs.

As plantas holoparasitas dependem inteiramente de recursos retirados do xilema e floema hospedeiros e são representadas atualmente por pelo menos sete linhagens, cujo posicionamento filogenético continua sendo revisto. A família Apodanthaceae inclui plantas aclorofiladas, holoparasitas de caules, cujo corpo vegetativo apresenta extrema redução. Por serem endoparasitas, tornam-se evidentes apenas na época da floração, quando as diminutas flores rompem a periderme do hospedeiro. Incluem-se nessa família três gêneros, sendo Pilostyles o de mais ampla distribuição. Apesar de existirem estudos minuciosos sobre o sistema endofítico no gênero, sua fenologia, ciclo de vida e ontogênese floral continuam desconhecidos. O presente estudo objetiva elucidar essas questões, de modo a proporcionar uma compreensão do sistema reprodutivo e do processo evolutivo das flores dessas intrigantes angiospermas, servindo de base para estudos futuros que visem a estabelecer homologias com outros clados. Primeiramente foi realizado um levantamento dos hospedeiros parasitados, analisando-se padrão de distribuição das flores e a razão sexual das populações de Pilostyles existentes nas áreas de estudo no Brasil e México. Indivíduos foram selecionados aleatoriamente para a realização dos testes de polinização, observação e coleta de visitantes, coleta de néctar e de sementes parasitas, e acompanhamento fenológico. Em laboratório realizaram-se os experimentos de germinação e as técnicas de preparo e análise histológicas das sementes e flores de Pilostyles. Com relação ao ciclo de vida, observou-se que: 1) as vespas aparecem como os visitantes mais freqüentes; 2) a dispersão provavelmente seja resultado de endozoocoria por aves; 3) a germinação provavelmente ocorre diretamente no caule hospedeiro; 4) as fenologias da hospedeira e da parasita estão diretamente relacionadas, havendo inclusive possibilidade de sincronismo. Com relação à razão sexual das populações, concluímos que: 1) a determinação do sexo das flores responde a estímulos específicos de cada espécie hospedeira; 2) a distribuição espacial das flores esta diretamente relacionada à razão sexual das populações; 3) existem flores monoclinas em número constante em todas as populações, sendo tais flores funcionalmente estaminadas. A partir do estudo da anatomia floral e embriologia, pudemos observar que: 1) as flores são envolvidas por quatro verticilos estéreis (de fora para dentro: 2 + 2 + 4 + 4); 2) a região estigmática é restrita à área das papilas; 3) a deiscência dos microsporângios é resultado da expansão e ressecamento do órgão; 4) os tricomas vesiculares secretam uma substância pegajosa, provavelmente responsável por unir os grãos de pólen e grudá-los ao corpo do polinizador; 5) a coluna das flores estaminadas é formada através de fusão pós-genital de uma coluna estilar central e de uma coluna externa, que traz no bordo superior os sacos polínicos. Concluindo, acreditamos que tais dados merecem destaque pelo ineditismo para a literatura atual da família Apodanthaceae e, principalmente, na sua capacidade de ancorar futuros estudos comparativos com outros táxons, servindo de base na avaliação das propostas taxonômicas vigentes. / Holoparasitic plants depend entirely on resources from the host xylem and phloem and are currently represented by at least seven lineages, whose phylogenetic position is still being reviewed. The Apodanthaceae family includes stem holoparasitic plants, achlorophyllous, whose vegetative body is extremely reduced. Because they are endoparasites, they become evident only at the time of flowering, when the tiny flowers emerge from the hosts bark. There are three genera in this family, being Pilostyles the one with broader distribution. There are detailed studies on the endophytic system of this genus, but its phenology, life cycle and floral ontogeny remain unknown. This study aims to elucidate these issues, in order to provide an understanding of the reproductive system and the evolutionary process of the flowers of these intriguing angiosperms. We hope these could be a basis for future studies that aim to establish homologies with other groups of angiosperms. First it was made a survey of parasitized hosts in Brazil and Mexico areas, and then the distribution pattern of flowers and sex ratio of the Pilostyles populations were analyzed. Individuals were randomly selected for the experiments of pollination, observation and collection of floral visitors, collecting nectar and phenological monitoring. Meanwhile, in the laboratory, were performed germination experiments and the histological analysis of Pilostyles seeds and flowers. Regarding the life cycle, we observed that 1) the wasps are the most frequent visitors; 2) the dispersion is probably a result of endozoochory by birds; 3) germination probably occurs directly in hosts stem; 4) the host and parasite phenologies are directly related; there is a possibility of timing. Regarding the sex ratio of the populations, we conclude that: 1) sex determination of Pilostyles flowers seems to respond to specific stimuli of each host species; 2) the spatial distribution of staminate and pistillate flowers is directly related to the sex ratio of the populations; 3) there are monoclinous flowers in constant number in all populations, and these flowers are functionally staminate. From the study of floral anatomy and embryology, we observed that: 1) the flowers are surrounded by four whorls of scales, thereby arranged from outside to inside: 2 + 2 + 4 + 4; 2) the stigmatic surface is restricted to the area with papillae, 3) the dehiscence of the pollen sacs is a result of synandrium expansion and dryness, occurring initially by individual transverse slit; 4) the vesicular trichomes secrete a sticky substance, probably responsible for uniting the pollen grains and stick it to the pollinators body; 5) the column of staminate flower is formed by post-genital fusion of a central column, the sterile gynoecium, and an external column, which brings the pollen sacs in the upper board. In conclusion, we believe that such data should be highlighted by the novelty for the Apodanthaceae family literature, and especially in its ability to underpin comparative studies with other taxa, being a basis to evaluate current taxonomic proposals.

Este estudo investigou a ecologia de vespas parasitóides ocorrentes em galhadores Schismatodiplosis lantanae Rübsaamen, 1916 (Cecidomyiidae) em folhas de Lantana camara L. (Verbenaceae). Dessa forma, o primeiro artigo trata da ecologia comportamental da vespa parasitóide Torymus sp. (Torymidae, Hymenoptera), onde foi avaliado como as fêmeas dessa espécie defendem seu recurso de oviposição no hospedeiro. Foi analisado mudanças no comportamento devido à presença de outra fêmea coespecífica no local, ser residente do recurso, tamanho das vespas e número e tamanho das galhas através de filmagens dos experimentos realizados em laboratório. Com esse trabalho observou-se que fêmeas mudam seu comportamento quando estão na presença de um competidor em um território com hospedeiros. A estratégia de ataque foi através da ameaça, na qual suas antenas e asas são levantadas para expulsar o competidor do local. A probabilidade de haver ataques a fêmeas coespecíficas depende do tempo prévio de exploração da galha e da permanência na folha. O interesse no hospedeiro pelas invasoras foi a principal causa de conflitos com a residente. O segundo artigo trata da diversidade de vespas parasitóides e de um ciclo parasita-hospedeiro observado no período de um ano no sistema de L. camara. Foram encontradas nove espécies de vespas parasitóides, divididas em quatro famílias. Ocorreu um ciclo no parasitismo das espécies de vespas sobre seu hospedeiro no ano amostrado, podendo ser observado que são mais elevadas nos meses de Julho a Janeiro e a sobrevivência do hospedeiro foi maior nos meses de Fevereiro a Maio. As estratégias comportamentais de fêmeas de uma vespa parasitóide em relação a seus hospedeiros foram analisadas, bem como um sistema composto de diversas espécies parasitóides e sua variação no tempo. Estas observações podem contribuir para um melhor entendimento da ecologia comportamental e do padrão temporal das vespas parasitoides, e também para futuros programas de controle biológico mais eficientes. / We investigated the ecology of parasitoid wasps attacking Schismatodiplosis lantanae Rübsaamen, 1916 (Cecidomyiidae) galls on leaves of Lantana camara L. (Verbenaceae). The first article discusses the behavioral ecology of the parasitoid wasp Torymus sp. (Torymidae, Hymenoptera), reporting how their females defend oviposition resources on the hosts, changing their behavior due to the presence of a conspecific female in the patch. The identity of the wasp (resident or intruder) on the resource, female size and number and size of galls in the patch were factors studied through analysis of the behaviors revealed by video recordings of the laboratory experiments. Females change their behavior in the presence of a competitor in a territory with hosts. The strategy was to threat, raising their antennae and wings to expel the competitor of the patch. The probability of an attack on a conspecific females depended on the host exploitation time and time spent on the galled leaf. Interest in host by intruders was the main cause for conflicts. The second article reports the diversity of parasitoid wasps and a host-parasite cycle during one year period in the L. camara leaf galls system. Nine parasitoid wasp species were found, divided in four families. A cycle between parasitism and host survival was found during the sampling period. Wasp species are more abundant from July to January and host survival higher from February to May. Behavioral strategies of parasitoid wasp females toward their hosts and conspecifics have been elucidated, with the system composed of different parasitoid wasp species apparently going through an annual cycle of parasitism rate. These observations may contribute to a better understanding of parasitoid behavioral ecology and host-parasitoid dynamics, enabling more efficient future biological control programs.