国立情報学研究所で電子化したコンテンツを使用している。

BACKGROUND:Neoadjuvant chemotherapy followed by cytoreduction surgery has been used where an accurate cytologic or pathologic diagnosis is usually required before the initiation of neoadjuvant chemotherapy. However, it is difficult to make definitive diagnosis of presence of cancer cells, particularly gynecologic versus non-gynecologic origin, from those ascites specimens due to the absence of specific biomarkers of gynecologic cancers. In the present study, we evaluated if, in addition to the routine morphologic diagnosis, the biomarker PAX8 could be useful in recognition of ovarian epithelial cancer cells prior to the neoadjuvant chemotherapy.METHODS:Two hundred and two cytology specimens including 120 pretreatment ovarian cancer samples, 60 benign controls, and 22 malignant non-gynecologic cases were studied. All cytology slides were morphologically reviewed in a blinded fashion without knowing corresponding pathology diagnosis, if present. A total of 168 cytology specimens with a cell block were stained with PAX8 and Calretinin. These included patients with potential for ovarian cancer neoadjuvant chemotherapy (n=96), metastatic cancers (n=22), and benign controls (n=50).RESULTS:Among the 96 ascitic samples prior to neoadjuvant chemotherapy, 76 (79%) showing morphologic features consistent with cancers of ovarian primary were all PAX+/Calretinin-. The remaining 20 (21%) cases were positive for adenocarcinoma, but morphologically unable to be further classified. Among the 22 metastatic cancers into the pelvis, one case with PAX8+/Calretinin- represented a renal cell carcinoma and the remaining 21 PAX8-/Calretinin- metastatic cancers were either breast metastasis (n=4) and the metastasis from gastrointestinal tract (n=17). Among the 50 benign control pelvic washing cases, 5 PAX8+/Calretinin-cases represented endosalpingiosis (n=4) and endometriosis (n=1), 25 PAX8-/Calretinin+cases showed reactive mesothelial cells, and the remaining 20 specimens with PAX8-/Calretinin- phenotype typically contained inflammatory or blood cells without noticeable diagnostic epithelia.CONCLUSIONS:PAX8 identifies all Mullerian derived benign or malignant epithelia. When combining with Calretinin, PAX8 is a sensitive marker to diagnose the carcinomas of ovarian origin, which will be ideal to be used for those patients with a possible advanced ovarian cancer prior to receiving neoadjuvant chemotherapy.

Paired box (PAX) gener kodar för en familj av nio stycken PAX transkriptionsfaktorer. PAX transkriptionsfaktorer är uppbyggda av en N-terminal DNA-bindande domän som utgörs av 128 aminosyror, en oktapeptid, och en C-terminal DNA-bindande domän. Studier har visat att PAX8 har en betydande roll vid utvecklingen av olika typer av tumörer. MRQ-50 är en antikropp som används inom Region Skåne för att påvisa PAX8 uttryck vid histopatologisk diagnostik. MRQ-50 riktas mot N-terminalen av PAX8 som är homolog med N-terminalen av PAX5. Detta kan leda till en korsreaktion i B-lymfocyter samt neoplasier, vilket inte är optimalt för diagnostik. Av den anledningen fortsätter forskning för att hitta en ny klon som kan ersätta MRQ-50. EP331 är en antikropp som är anpassad för detektion av det nukleära antigenet PAX8 och korresponderar till C-terminalen av human PAX8 protein. Syftet med arbetet är att optimera ett immunhistokemiskt färgningsprotokoll för detektion av PAX8 med hjälp av anti-PAX8 antikroppen EP331 och undersöka om godkända resultat kan erhållas. Detta gjordes för att ta reda på om det går att optimera ett protokoll med EP331, och om det erhålls lämpligare resultat än MRQ-50. Optimeringen gjordes på kontrollvävnader njure, tuba/äggledare och appendix och testades slutligen på patientprov med tumörvävnad. För protokolloptimering testades heat induced epitope retrieval, inkuberings tid av EP331, amplifiering, Ultra Wash i olika testomgångar. Resultatet visade att kärnor i epitelceller i proximala-, distala-njurtubuli och parietala epitelceller som klär Bowmans kapsel infärgades måttligt till starkt. De sekretoriska epitelen i tuba infärgades med stark intensitet och cilierade epitel måttligt. Infärgningen på patientprover visar godkänd specificitet, med en generell måttlig till stark intensitet. Med fler forskningsstudier av EP331 är det möjligt att primärantikroppen kan ersätta MRQ-50.

Paired box protein - 8 (PAX8) är ett protein kodat av PAX8-genen som lokaliseras i kromosom 2. PAX8 reglerar transkriptionen för organogenesen av tyreoidea, placenta, njure samt innerörat. MRQ-50 är en klon mot PAX8 som används för klinisk patologisk diagnostik inom Region Skåne. Det har visat sig att MRQ-50 korsreagerar med lymfocyter och andra PAX-proteiner i vävnaden. Syftet med studien var att utveckla och optimera ett protokoll för maskinell immunhistokemisk färgning med en alternativ klon av PAX8 antikropp, klon SP348. Immunhistokemi (IHC) används för detektion av antigen i vävnadssnitt och används som komplement inom histopatologi. I denna studie undersöktes två olika varianter av samma klon SP348, Anti PAX8 antibody [SP348] –N- terminal (PAX8-N) samt Anti PAX8 antibody [SP348] - BSA and Azid free (PAX8-B). Flera olika förbehandlingsprotokoll testades i Roche Ventana Benchmark ultra. Förbehandlingsprotokollen hade olika tid och temperatur samt två olika förbehandlingsbuffertar, CC1 och CC2. Två olika visualiserings kit användes, OptiView DAB IHC detektion kit och UltraView Universal DAB kit. Protokollnummer 4818 med buffert CC1 ansågs som bäst där inkubationstiden var 48 minuter med temperaturen 100C. PAX8-N hade en betydligt renare kontrastinfärgning och starkare intensitet jämfört med PAX8-B som hade måttlig till stark kontrast i majoriteten av vävnaderna som analyserades. Vid jämförelse med MRQ-50, klon som används kliniskt inom Region Skåne, visar PAX8-N en renare infärgning. / Paired box protein - 8 (PAX8) is a protein encoded by the PAX8 gene located on chromosome 2. PAX8 regulates the transcription for organogenesis of thyroid, placenta, kidney and inner ear. MRQ-50 is a clone directed against PAX8 and used for clinical diagnostics within Region Skåne. MRQ-50 has been shown to cross-react with lymphocytes and other PAX genes in tissues. The purpose of the study was to optimize a protocol for automated immunohistochemical staining with an alternative antibody clone directed to PAX8, clone SP348. Immunohistochemistry (IHC) is used to detect antigens in tissue sections and is used as a complement within histopathology. In this study, two different variants of the same clone SP348, Anti PAX8 antibody [SP348] -N terminal (PAX8-N) and Anti PAX8 antibody [SP348] - BSA and Azide free (PAX8-B) were investigated. Several pre-treatment protocols were tested on Ventana Benchmark ultra from Roche. The pre-treatment protocols had different incubation time, temperature and two different pre-treatment buffers, CC1 and CC2. Two different detection kits were used, OptiView DAB IHC detection kit and UltraView Universal DAB kit. The protocol number 4818 with buffer CC1, incubation time of 48 minutes and temperature of 100C was considered optimal. PAX8-N had a significantly clearer contrast staining och stronger intensity compared to PAX8-B which had a moderate to strong contrast in the majority of the tissues analyzed. When compared to MRQ-50, the currently used clone clinically in Region Skåne, PAX8-N shows a cleaner staining.