Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T06:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276359.pdf: 1473962 bytes, checksum: 6cb68d86b04b24c68bbeb51ee0cb3ae7 (MD5) / O receptor de Vitamina D (VDR) e o receptor Pregnano X (PXR) são receptores nucleares e agem como fatores de transcrição quando ativados pela ligação de moléculas específicas. PXR e VDR possivelmente se originaram da duplicação de um gene ancestral. Em mamíferos, esses receptores compartilham um número de genes alvos e dividem a função de mediação da resposta de detoxificação de xenobióticos. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito de agonistas dos receptores nucleares PXR e VDR na expressão de genes de biotransformação de xenobióticos em peixes da espécie Danio rerio. Para isso, 48 horas após o tratamento de peixes D.rerio com agonistas específicos para estes receptores, foi analisada a expressão hepática e intestinal dos genes CYP3A65, CYP3C1, CYP24, CYP2AA1, CYP2AA2, GST?, GST?, ABCB5, VDR? e PXR. Os agonistas utilizados foram 1?,25-diidroxivitamina D3, como ativador do VDR, e 5-Pregnen-3?-ol-20-ona, como ativador do PXR. A análise da expressão dos genes foi feita através da técnica de RT-PCR em tempo real, utilizando o método delta-delta Ct. A expressão da ?-actina foi utilizada para normalizar os dados. Ambos ligantes induziram genes da fase I, II e III do processo de biotransformação em peixes, no intestino e no fígado. A pregnenolona aumentou a expressão de CYP3A65, CYP3C1, CYP2AA1, CYP2AA2, GST?, GST?, ABCB5 e PXR no fígado e CYP3A65, CYP3C1, CYP2AA1, CYP2AA2, GST?, GST? e PXR no intestino dos peixes, o que sugere um importante papel do PXR como mediador da biotransformação em peixes desta espécie. Além disso, 1?,25-diidroxivitamina D3 aumentou a expressão dos genes CYP24, CYP3C1, CYP2AA1, CYP2AA2, GST? e PXR no fígado e CYP24, CYP2AA1, CYP2AA2, GST?, GST? e PXR no intestino dos peixes. Até então, não havia sido demonstrado o efeito do hormônio derivado da vitamina D na expressão de genes envolvidos no processo de biotransformação em peixes. Os resultados obtidos neste trabalho suportam a hipótese de que os dois receptores da família NR1I, PXR e VDR, compartilham a mediação na resposta de detoxificação em peixes, assim como em mamíferos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-21T03:21:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348717.pdf: 4564177 bytes, checksum: ddfe0bfcc39a181f13e5529670c4532c (MD5) Previous issue date: 2017 / Os compostos trans-resveratrol e N-acetilcisteína são potentes antioxidantes de grande importância industrial. O trans-resveratrol é um polifenol encontrado em diversos alimentos, especialmente em amoras, uvas e seus derivados. Esse composto apresenta inúmeros benefícios para saúde: antioxidante, antiplaquetário, antifúngico, anti-inflamatório, cardioprotetor entre outros. A N-acetilcisteína é um composto de tiol (-SH) com um potente efeito antioxidante. Esse composto vem demonstrando efeitos relevantes em diversas condições como na doença renal crônica, no câncer, na insuficiência pulmonar e nas doenças mentais. A técnica de Dispersão de Solução Aumentada por Fluidos Supercríticos (Solution Enhanced Dispersion by Supercritical Fluids, na sigla em inglês SEDS) é um método que pode ser aplicado para micronizar compostos com propriedades bioativas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o emprego da técnica SEDS na micronização de trans-resveratrol e N-acetilcisteína utilizando um DCC 23 com três pontos centrais, avaliando-se a influência da concentração do composto, temperatura e pressão de operação em relação ao tamanho médio de partícula (Dp), além das propriedades biológicas in vitro e in vivo. O trans-resveratrol antes do processo de micronização apresentava o tamanho médio de 36,65 µm e da NAC de 709,82 µm, sendo o melhor resultado de ambos compostos obtido nas mesmas condições de operação: concentração de 20 mg·mL-1, pressão de 80 bar e temperatura de 35 °C, o que reduziu o tamanho original em cerca de 166,59 vezes obtendo um diâmetro médio de partículas de 0,22 µm para trans-resveratrol e redução de cerca de 248,19 vezes obtendo Dp de 2,86 µm para N-acetilcisteína. Em relação às propriedades do trans-resveratrol após o processo de micronização verificou-se o aumento da solubilidade do composto em água, cerca de 2,8 vezes comparado ao composto não-micronizado, incremento da velocidade de dissolução em 1,8 vezes e além de aumentar a atividade antioxidante do composto. Pelas análises de DSC e DR-X observou-se que houve modificações na estrutura cristalina do trans-resveratrol. Já as propriedades físico-químicas da NAC micronizada versus não-micronizado observou-se aumento na velocidade de dissolução, sendo que somente o contato do solvente com o composto ocorre total dissolução do mesmo, além do aumento da atividade antioxidante. Pelas análises de DR-X verificou-se que a cristalinidade da NAC micronizada foi reduzida após o processo, e pela análise de DSC verificou-se que houve deslocamento do ponto de fusão do composto, indícios de modificações da estrutura. Foi comprovado pelo FTIR que não houve degradação dos compostos. Pela análise de solvente residual utilizando CG-EM e CG-FID, pode ser assinalado que os compostos micronizados estão de acordo com as normas para consumo humano. Assim, o fato de o melhor resultado ter sido obtido nas condições mais brandas de temperatura e pressão é relevante, pois além de redução do custo do processo há a possibilidade de trabalhar com compostos termossensíveis. Por fim, nos testes in vivo em zebrafish observou-se que a NAC micronizada diminuiu a concentração eficaz mínima em 100 vezes, obtendo o mesmo efeito tipo ansiolítico do composto não-micronizado. Portanto, a micronização aumentou a biodisponibilidade e potencializou os efeitos terapêuticos tanto in vitro como in vivo dos fármacos o que abre novos horizontes na área de micronização por fluido supercrítico tanto para indústria farmacêutica, química como de alimentos. / Abstract : Trans-resveratrol compounds and N-acetylcysteine are potent antioxidants of great industrial interest. The trans-resveratrol is a polyphenol found in various foods, especially in Blueberry, grape seeds, in the skin of the grapes and in red wine. This compound offers numerous health benefits, such as: antioxidant, antifungal, anti-inflammatory, antiplatelet, cardioprotective among others. N-Acetylcysteine is a thiol (-SH) with a potent antioxidant effect. This compound comes demonstrating preventive effect as protector in chronic kidney disease, cancer, pulmonary insufficiency among others. The technique Solution Enhanced Dispersion by Supercritical Fluids (SEDS), is a method that can be applied to micronization compounds with bioactive properties. In this context, the objective of this work was to evaluate the use of the method in the micronization of SEDS trans-resveratrol and N-acetylcysteine using both a DCC 23 with 3 central points, evaluating the influence of the concentration of the compound (4, 12, and 20 mg·mL-1), temperature (308, 313 and 318 F) and pressure (80, 100 and 120 bar) operating in relation to average particle diameter (Dp). In addition to evaluating biological properties in vitro and in vivo.The average size of the drug before processing of the trans-resveratrol was 36.65 µm and the NAC of 709.82 µm and the best result of both compounds were obtained in the same conditions: concentration of 20 mg·mL-1, 80 bar pressure and a temperature of 308 F, which reduced the original size at about 166.59 times getting an average diameter of 0.22 µm particles for trans-resveratrol and reduction of about 248.19 times getting Dp of 2.86 µm for N-acetylcysteine. In relation to the properties of Trans-resveratrol after the micronization process, the solubility of the compound increased in water, about 2.8 times compared to the non-micronized compound, increasing the dissolution rate by 1.8 times and increasing the activity Antioxidant of the compound. From DSC and PXRD analyzes, we observed that there were modifications in the trans-resveratrol crystal structure. The physicochemical properties of the micronized versus non-micronized NAC observed an increase in the dissolution rate, and only the contact of the solvent with the compound occurs totally dissolution of the same, besides the increase of the antioxidant activity. From the PXRD analysis it was found that micronized NAC reduced crystallinity after the process, and by DSC analysis it was found that there was a shift of the compound melting point indicative of structure modifications. It was proved by the FTIR found that there was no degradation of the compounds. Finally, the residual solvent analysis using GC-MS and GC-FID, it was proven that the micronized compounds are in accordance with the standards for human consumption. Thus, the fact that the best results have been obtained in milder conditions of temperature and pressure is relevant, as well as reducing the cost of the process there is the possibility of working with heat-sensitive compounds. Finally, in the in vivo tests in Zebrafish it was observed that the micronized NAC decreased the minimum effective concentration in 100 times, obtaining even anxiolytic type effect of the non-micronized compound. Therefore, micronization increased the bioavailability and potentiated the therapeutic effects, in vitro and in vivo, of the drugs, which opens new horizons in the area of supercritical fluid micronization for both the pharmaceutical, chemical and food industries.

Orientador: Rafael Henrique Nóbrega / Resumo: As células tronco são classificadas em dois grandes grupos de acordo com sua origem e capacidade de diferenciação. Células tronco embrionárias (CTE) são originadas do zigoto, e podem ser classificadas como totipotentes, isto é, capazes de originar um indivíduo inteiro, ou pluripotentes, quando originam os três folhetos embrionários (ecto, meso e endoderme). As células tronco adultas (CTA) são as células tronco encontradas nos tecidos fetais e adultos; classificadas como uni, oligo ou multipotentes dependendo da variedade de tecidos originados a partir delas. Marcadores de células tronco, como antígenos de superfície específicos, fatores de trancrição como OCT4 e NANOG são expressos em CTE e algumas CTA, mas são rapidamente reprimidos à medida que as células se diferenciam. O presente trabalho tem como objetivo identificar marcadores de células tronco e com isso, os efeitos do hormônio endócrino Fsh e do fator parácrino GDNF na atividade proliferativa e gênica dessas populações de células e também de células de Sertoli. Foi observado que os marcadores Pou5f3 e Gfra1a são principalmente expressos em espermatogônias tronco indiferenciadas e que sua expressão reduz significativamente sob efeito do recombinante zebrafish Fsh. Por outro lado, genes como o igf3, nanos3 e nanog tiveram sua expressão aumentada significativamente. O recombinante humano GDNF não altera significativamente a expressão desses genes, porém estimula a proliferação de espermatogônias tipo Aund e Adiff e célul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Wilson Gomez Manrique / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: O zebrafish representa um importante candidato, apresentando alta homologia genética com seres humanos e respostas, porém, são poucas as informações sobre seus mecanismos eritropoiéticos frente ao e leucopoiéticos. Assim o presente estudo buscou investigar o efeito da administração exógena de eritropoietina e da dexametasona sobre a resposta hematopoiética e leucocitária durante estímulo inflamatório através da indução de aerocistite infecciosa. Para isto, realizou-se indução de aerosciste através de inóculo de A. hydrophila, seguida da aplicação por via subcutânea de dexametasona (DEX) na dose de 25µg por unidade animal e 2UI de eritropoietina recombinante humana (EPO), constituindo os seguintes tratamentos: CC+ = não tratada com EPO e não tratado com DEX (n=10); DEX+= não tratada com EPO e tratada com DEX (n=10); EPO+ = tratada com EPO e não tratada com DEX (n=10); EPO/DEX+= tratada com EPO e tratada com DEX (n=10) e PF= (padrão fisiológico) onde os animais não receberam nenhuma medicação e não foi induzido a aeroscistite (n=10). para posterior coleta sanguínea e do exsudato inflamatório da bexiga natatória no período de 2 e 4 dias após inoculação (2DPI e 4DPI) e contagem eritrocitária total, contagem de reticulócitos, leucocitária total, diferencial leucocitário e contagem total e diferencial celular do exsudato da bexiga natatória. Na análise dos dados obtidos, observou-se um aumento geral dos parâmetros eritrocitários e de reticulócitos nos grupos EPO+ ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Zebrafish represents an important candidate, presenting high genetic homology with humans and answers, however, there is little information about its erythropoietic mechanisms against leukopoietic. Thus the present study sought to investigate the effect of exogenous administration of erythropoietin and dexamethasone on the hematopoietic and leukocyte response during inflammatory stimulation through the induction of infectious aerocystitis. For this, an aerosol induction was performed through A. hydrophila inoculum, followed by subcutaneous application of dexamethasone (DEX) at the dose of 25 μg per animal and 2UI of recombinant human erythropoietin (EPO), constituting the following treatments: CC + = untreated with EPO and not treated with DEX (n = 10); DEX + = untreated with EPO and treated with DEX (n = 10); EPO + = treated with EPO and not treated with DEX (n = 10); EPO / DEX + treated with EPO and treated with DEX (n = 10) E And PF = (physiological standard) where the animals received no medication and were not induced to aerosctitis (n = 10), for subsequent blood collection and inflammatory exudate of the swimming bladder at 2 and 4 days after inoculation (2DPI and 4DPI) and total erythrocyte count, reticulocyte count, Total leukocytes, differential leukocytes, and total and differential cell count of the swim bladder exudate. In the analysis of the obtained data, a general increase of erythrocyte and reticulocyte parameters in the EPO + and DEX + group... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330549.pdf: 2250244 bytes, checksum: 52aafb6ef597f19f359fe112a89bcdc1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Glifosato é um dos herbicidas mais usados no Brasil, sendo altamente solúvel em água e quando aplicado em ambiente terrestre e aéreo pode ocorrer a sua infiltração no solo e a percolação para os corpos d'água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos, como invertebrados e vertebrados. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do glifosato, na concentração de 65 µg/L, sobre a organização estrutural e ultraestrutural, bem como sobre os parâmetros bioquímicos de toxicidade nos ovários do peixe Danio rerio. Esta concentração foi estabelecida pelo CONAMA como a máxima permitida para os rios do Brasil. As células germinativas foram caracterizadas em quatro fases: ovogônia, ovócito pré-vitelogênico I, ovócito pré-vitelogênico II e ovócito vitelogênico, baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Verificou-se um aumento significativo no diâmetro dos ovócitos pré-vitelogênicos I e nos ovócitos vitelogênicos, assim como um aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) em ovários de peixes expostos ao glifosato por um período de 15 dias (exposição subcrônica). Na análise estrutural das células germinativas não foram identificadas alterações morfológicas, porém na análise ultraestrutural, observou-se no citoplasma dos ovócitos formações membranosas concêntricas tipo myelin-like, associadas aos grânulos de vitelo periféricos, além de alterações nas cisterna dos corpos de Golgi. Houve também redução do número de mitocôndrias e cristas mitocondriais nas células foliculares. Constatou-se maior expressão de SF-1, em ovários expostos ao glifosato. Identificou-se também um aumento significativo no número de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bak, porém um número significativamente menor de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bcl2. Na exposição dos peixes ao glifosato por um período de 96 h (exposição aguda), identificou-se redução nos níveis de tióis não proteicos (NPSH) e um aumento significativo nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), caracterizando estresse oxidativo. Na exposição por um período de 360 h (15 dias), não houve a caracterização de estresse oxidativo. Mesmo na concentração de glifosato regulamentada para os rios do Brasil, efeitos subletais foram identificados nos ovários, sendo reconhecidos usando ferramentas bioquímicas e ultraestruturais. Desta forma, estas análises devem ser realizadas em testes toxicológicos na avaliação de parâmetros reprodutivos. Os efeitos adversos do glifosato sobre os ovócitos e as células foliculares demonstradas aqui representam um importante risco para a reprodução de peixes.<br> / Abstract: Glyphosate is one of the most commonly used herbicides in Brazil, being highly soluble in water and when applied in aerial and terrestrial environment can occur its infiltration into the soil and the percolation to the bodies of water, reaching different non-target aquatic organisms, such as invertebrates and vertebrates. The main goal of this study was to evaluate the effects of glyphosate, at a concentration of 65 µg/L, on structural and ultra-structural organization, as well as on the biochemical parameters of toxicity on the ovaries of the fish Danio rerio. This concentration was established by CONAMA as the maximum allowable for the Brazilian rivers. The germ cells were characterized in four stages: oogonia, previtellogenic I oocyte, previtellogenic II oocyte and vitellogenic oocyte, based on morphological criteria previously established on the literature. A significant increase on the diameter of the previtellogenic I and vitellogenic oocytes was verified, as well as a significant increase in the gonadosomatic index (GSI) in the ovaries of the fish exposed to the glyphosate for a 15 days period (sub-chronic exposure). In the structural analysis of the germ cells, morphologic changes were not identified. However, in ultrastructural analysis, concentric membranous formation of myelin-like kind were observed on the cytoplasm of the oocytes, associated to the peripheral yolk granules, and also morphological change Golgi cisterns. In follicular cells reduction on the number of mitochondria and mitochondrial cristae observed. In this analysis, it was also observed with. It was observed greater SF-1 expression in ovaries exposed to glyphosate. It was also identified a significant increase in the number of immunostained cells with the anti-Bak antibody, but a significantly lower number of immunostained cells with antibody anti-Bcl2. On exposure of fish to glyphosate for 96 hours (acute exposure), it was identified a reduction in levels of non-protein sulfhydryl (NPSH) and a significant increase in levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), featuring oxidative stress. On exposure of a period of 360 hours (15 days), there was no characterization of oxidative stress. Even with the glyphosate concentration regulated to Brazil's rivers, sublethal effects were identified on the ovaries, being recognized using biochemistry and ultrastructural tools. In this way, these analyses should be carried out in toxicological evaluation of reproductive parameters. The adverse effects of glyphosate on the oocytes and follicular cells shown here represent a major risk for the reproduction of fish.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017 / Made available in DSpace on 2017-09-19T04:09:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347992.pdf: 2382912 bytes, checksum: 7d4dc8be152c8579ca29709f01adf318 (MD5) Previous issue date: 2017 / O glifosato e os herbicidas à base de glifosato são considerados praguicidas de amplo espectro e pós-emergente, e são os mais utilizados na agricultura mundial para matar uma variedade de ervas daninhas terrestres e aquáticas. Assim, pelo uso excessivo deste agroquímico nas culturas, especialmente quando aplicado por pulverização, pode ocorrer a sua infiltração no solo e a lixiviação para os corpos de água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar a toxicidade celular do herbicida à base de glifosato, Roundup® WG (0,065; 0,65 e 6,5 mg/L), após 15 dias, sobre a morfologia, ultraestrutura e proteínas envolvidas na fusão e fissão mitocondrial no ovário do peixe-zebra, Danio rerio. Primeiramente, foi obtida a concentração letal média (CL50) de 42,61 mg/L em 96 horas para D. rerio após exposição ao Roundup® WG. Após exposição de D. rerio ao Roundup® WG por 15 dias, as células germinativas foram caracterizadas em três fases: ovócitos pré-vitelogênicos I (PreI), ovócitos pré-vitelogênicos II (Pre II) e ovócitos vitelogênicos (Vit), baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Uma diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI foi observada nas três concentrações do Roundup® WG e uma diminuição do diâmetro dos ovócitos PreII nas duas maiores concentrações avaliadas. Em relação ao conteúdo da proteína vitelina, um aumento foi observado nos ovários das fêmeas expostas, sugerindo uma relação dose-dependente do Roundup® WG. Na análise ultraestrutural, foram observadas zonas de vacuolização nas células foliculares e um aumento do espaço perivitelínico, com presença de macro e micro vesículas, bem como compartimentos mitocondriais comprometidos nos ovários de fêmeas expostas. Também, foi observado uma redução do número de mitocôndrias e um aumento de mitocôndrias alteradas com uma severidade alta nos ovócitos, bem como uma diminuição no conteúdo de Drp1, Mfn1 e Mfn2 envolvidas na fissão e fusão mitocondrial, que pode indicar à mitocôndria como um dos alvos do Roundup® WG. Estes resultados, sugerem que Roundup® WG poderia ser considerado como um possível disruptor endócrino nos ovários de D. rerio, afetando à maturação ovariana. No entanto, devem ser realizados mais testes toxicológicos avaliando outros parâmetros reprodutivos e seu impacto nos peixes. Além disso, a menor concentração de glifosato avaliada neste estudo, que é a concentração permitida pelo CONAMA (0,065 mg/L), provocou diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI, aumento do conteúdo de vitelina, bem como alteração nas mitocôndrias e diminuição de Drp1 e Mfn2, isso poderia indicar que o limite máximo permissível de glifosato no Brasil precisa ser reavaliado. Assim, o presente estudo demonstrou diferentes alterações no ovário de D. rerio expostos às concentrações do Roundup® WG, indicando a toxicidade reprodutiva deste herbicida. / Abstract: Glyphosate and glyphosate-based herbicides are considered broad-spectrum and post-emergent pesticides, and are the most widely used in global agriculture to kill a variety of terrestrial and aquatic weeds. Thus, due to the excessive use of this agrochemical in the crops, especially when applied by spraying, infiltration into the soil and leaching into the water bodies can occur, reaching different non-target aquatic organisms. Therefore, the objective of this study was to investigate the cellular toxicity of glyphosate-based herbicide, Roundup® WG (0.065, 0.65 and 6.5 mg/L) on morphology, ultrastructure and proteins involved in fusion and fission mitochondrial in the ovaries of zebrafish, Danio rerio. First, the determination of mean lethal concentration (LC50) was 42.61 mg/L in 96 hours for D. rerio after exposure to Roundup® WG. After exposure of D. rerio to concentrations of Roundup® WG for 15 days, germ cells of ovaries were characterized in three phases: pre-vitellogenic oocytes I (PreI), pre-vitellogenic oocytes II (PreII) and vitellogenic oocytes (Vit), based on morphological criteria already established in the literature. A diameter decrease in the PreI was observed in the three concentrations of Roundup® WG as well as a diameter decrease of the PreII oocytes when two highest concentrations were evaluated. In relation to the content of the vitellin protein, an increase in its content was observed in the ovaries of exposed females, depending on the concentration of the herbicide. In the ultrastructural analysis, zones of vacuolization in follicular cells and an increase of perivitelinic space with presence of macro and micro vesicles were observed, as well as compromised mitochondria compartments in the ovaries of exposed females. In addition, reductions in the number of mitochondria and an increase of altered mitochondria with high severity in oocytes were observed, as well as a decrease in the content of Drp1, Mfn1 and Mfn2 involved in mitochondrial fission and fusion. These may indicate the mitochondria as a Roundup® WG target. These results suggest that Roundup® WG could be considered as a possible endocrine disrupter in the ovaries of D. rerio, affecting ovarian maturation. However, further toxicological tests should be performed to evaluate other reproductive parameters and their impact on fish. In addition, the lowest concentration of glyphosate evaluated in this study, which is the concentration allowed by CONAMA (0.065 mg/L), caused a diameter decrease of the PreI, an increase in vitellin content, as well as a change in the mitochondria and a decrease in Drp1 and Mfn2. In this respect, the maximum permissible limit of glyphosate in Brazil needs to be reevaluated. Thus, the present study demonstrated different alterations in the ovaries of D. rerio exposed to concentrations of Roundup® WG, indicating reproductive toxicity of this herbicide.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213393.pdf: 956920 bytes, checksum: a810d760f276b24af6058e83ddf60604 (MD5) / O receptor pregnano X (PXR) é um receptor nuclear envolvido na regulação transcricional de enzimas envolvidas no metabolismo de fármacos e também de proteínas transportadoras. Em mamíferos, vários xenobióticos induzem a expressão dos genes do citocromo P4503A (CYP3A) e de resistência a multidrogas 1 (MDR1) através da via de sinalização do receptor PXR. Pouca atenção tem sido dada aos estudos sobre a identificação da função biológica dos homólogos do PXR em espécies de não-mamíferos. O peixe-zebra tem se tornado amplamente utilizado e aceito como espécie modelo em estudos toxicológicos e farmacológicos no entendimento dos mecanismos de doenças humanas e na identificação de vias de sinalização conservadas. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão in vivo dos genes PXR, CYP3A e MDR1 no fígado de peixes-zebra tratados com o esteróide sintético pregnenolona 16a-carboninitrilo (PCN), o antimicótico sintético clotrimazol (CTZ) e o composto fármaco nifedipina (NIF). Peixes (n=15 por grupo) foram expostos à PCN, CTZ e NIF (20 mg.Kg-1) por 48 horas. Os fígados foram retirados e utilizados para a extração do RNA total (n=5 por grupo). A partir do cDNA obtido foi realizada a reação de PCR, utilizando diferentes iniciadores para a amplificação de PXR, CYP3A, MDR1 e ß-ACTINA. Fígados de peixes tratados com PCN mostraram uma indução de 1,9 vezes na indução do PXR seguida de 1,8 vezes na indução do CYP3A e de 1,6 vezes na indução do MDR1 nos níveis de mRNA. CTZ e NIF não afetaram estatisticamente a expressão dos genes PXR, CYP3A e MDR1. O padrão similar na expressão do mRNA dos genes PXR, CYP3A e MDR1 encontrado em peixes tratados com diferentes indutores de PXR sugere que a associação intrínseca entre esses três genes é conservada no peixe-zebra.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:18:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337735.pdf: 10736659 bytes, checksum: 42e8e2ea8991b610be6a882697f3ee00 (MD5) Previous issue date: 2015 / A formação de vasos sanguíneos compreende processos fundamentaisna embriogênese, ocorrendo inicialmente por vasculogênese, seguidapor angiogênese. Falhas no equilíbrio fisiológico entre indutores pró- eantiangiogênicos podem contribuir com processos fisiopatológicos,referidos como doenças angiogênicas. Plantas medicinais como o Cissusverticillata L., sobre a qual foram reportadas ações antirreumática eantiinflamatória; hipoglicemiante; vasoconstrictora e antimitótica, sãoutilizadas pela medicina popular, no Brasil. Foram estudados os efeitosdos extratos foliares aquoso (EACv) e hidroalcóolico (EHCv) dessaespécie sobre a formação de vasos, por meio de ensaios in vivo(embriões de Gallus domesticus e Danio rerio; camundongos adultos daespécie Mus musculus). E in vitro (com células endoteliais da veiaumbilical humana-HUVEC). Os resultados mostram a presença deflavonoides na composição dos extratos, e ação antioxidante (29-59%).In vivo os extratos, isoladamente ou associados a FGFb ou VEGF-A,retardaram o crescimento dos embriões de D. rerio e G. domesticus, enestas espécies inibiram a vasculogênese e a angiogênese nasmembranas vitelínica e corioalantóica. Os extratos isolados não inibirama angiogênese em camundongos adultos, mas nos três modelos aassociação de extratos+FGFb ou VEGF-A foi capaz de reverter o efeitoangiogênico destes fatores. Em células HUVEC os extratos de C.verticillata reduziram a viabilidade celular e o brotamento vascularestimulado por FGFb e VEGF-A. No entanto, a não efetividade sobremecanismos de proliferação, migração, tubulogênese e modulação deVEGFR2, apontam a necessidade de estudos adicionais paradeterminação dos alvos moleculares do EACv e EHCv. É possívelconcluir que estes inibem vasculogênese e angiogênese embrionária, eque tais ações estariam relacionadas à inibição da viabilidade e aobloqueio do brotamento angiogênico sobre células endoteliais, bemcomo à capacidade dos EACv e EHCv de reverterem a potente atividadede fatores de crescimento angiogênicos, verificados no presente estudo.<br> / Abstract : The formation of blood vessels includes fundamental processes inembryogenesis, taking place through the vasculogenesis, followed ofangiogenesis. Failures in the physiological balance between pro- andantiangiogenic inductors can contribute to pathophysiological processesreferred as angiogenic diseases. Medicinal plants such as Cissusverticillata L. have been reported are used in folk medicine in Brazil asantirheumatic, anti-inflammatory hypoglycemic, vasoconstrictor andantimitotic actions. The effects of aqueous (AECv) and hydroalcoholic(HECv) leaf extracts of C. verticillata on the blood vessels formationwere studied by assaying in vivo (of Gallus domesticus and Danio rerioembryos as well in adults mice of Mus musculus). In vitro, assays withendothelial cells from human umbilical vein (HUVEC) experimentalmodels. The findings show the presence of flavonoids in both extractscomposition and also an antioxidant action (29-59%). Whenadministered in vivo the extracts, alone or associated with FGF orVEGF-A, have slowed the embryonic growth of D. rerio and G.domesticus, and (in this last species) inhibited vasculogenesis andangiogenesis in the yolk and chorioallantoic membranes. The extractsalone did not inhibited advanced angiogenesis, in M. musculus adults,however, in the three animal models the association of extracts + FGFbor VEGF-A was capable to reverse the angiogenic effect of theseexogenous growth factors. There was verified a decrease in cell viabilityand the vascular sprouting as stimulated by FGFb and VEGF-A, inHUVEC. However, the non-effectiveness of important angiogenicmechanisms, such as proliferation and cell migration; tubulogenesis andVEGFR2 receptor modulation, indicate that more studies in order todetermine the molecular targets of the extracts remains to be performed.In conclusion, the findings show that the extracts inhibit embryonicvasculogenesis and angiogenesis, and also that such actions are possiblyrelated with decrease of viability and the blockade of angiogenicsprouting on the endothelial cells, as well the capacity of both extracts toreverse the potent activity of angiogenic growth factors, as observed inthe present study.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.