Oxifuncionalização de alcanos sob condições suaves de reação é uma difícil reação devido à elevada energia da ligação C-H nestas moléculas. Na natureza, algumas enzimas, com destaque para as monooxigenases do citocromo P-450, conseguem promover estas oxidações parciais com elevada eficiência e seletividade. Metaloporfirinas sintéticas têm sido estudadas como modelos químicos do citocromo P- 450, uma vez que estas enzimas possuem uma FeIIIporfirina como grupo prostético. Neste trabalho, estudou-se a oxifuncionalização dos alcanos cicloexano e npentano com iodosilbenzeno (PhIO) usando-se os catalisadores [Mn{T(4-N-MePy)P}]5+, [Mn(TPFP)]+, [Mn(TDCSPP)]3- e [Mn(TF4TMAPP)]5+ em meio homogêneo e suportados em matrizes de sílica quimicamente modificada via ligação iônica e/ou covalente, usando-se acetona, diclorometano e benzeno como solventes. Observou-se elevados rendimentos de produtos oxigenados (álcoois e cetonas), preferencialmente em reações catalisadas por [Mn(TF4TMAPP)]5+ tanto em meio homogêneo quanto suportada, tornando este catalisador como um dos mais promissores para oxidações de compostos orgânicos, principalmente quando imobilizado nos suportes SiSO3 - e SiSO3 -(IPG), uma vez que estes catalisadores suportados são facilmente obtidos e, além disso, as fortes interações eletrostáticas entre a MnIIIporfirina catiônica e os sólidos aniônicos evitam a lixiviação do Mn-complexo a partir do suporte durante a reação. No tocante à reatividade, notou-se diferença nos valores de razão álcool/cetona obtendo, de uma maneira geral, os menores valores para reações em acetona. Experimentos sob atmosfera inerte levaram a valores de razão álcool/cetona muito maiores, indicando a participação de O2 do ar no mecanismo da reação, independentemente do solvente. Estudos de efeito isotópico cinético intermolecular nas reações competitivas n-pentano ´ n-pentano perdeuterado indicaram, devido aos valores de kH/kD entre 6 e 7 obtidos em reações nos três solventes, que a etapa determinante de velocidade é a abstração de átomo de hidrogênio do alcano a partir de uma espécie metaloxo, muito provavelmente MnV=O, comum a todas as reações estudadas, as quais devem estar operando pelo clássico mecanismo de recombinação de oxigênio. Um estudo mais detalhado das oxidações catalíticas em meio de acetona, que conduzia a menores valores de razão álcool/cetona, levou à detecção do composto 1-(acetiloxi)-2-propanona, formado apenas em reações na presença de catalisador, sob atmosfera de ar e na presença de um dos dois substratos. Além disso, oxidações do cicloexano catalisadas por [Mn(TF4TMAPP)]-SiSO3 na presença de bromotriclorometano, substância capaz de reagir com radicais alquila, em diferentes solventes (diclorometano, 1,2-dicloroetano, benzeno e acetona) permitiu determinar um efeito da viscosidade na distribuição dos produtos álcoois e cetonas formados, que indicou que quanto menor a viscosidade do solvente, maior o escape de radicais alquila a partir da gaiola do solvente, o que é o responsável pelos menores valores de razão álcool/cetona encontrados em oxidações em meio de acetona. A partir de todos estes estudos determinou-se que o mecanismo de recombinação de oxigênio está operando em todas as oxidações catalíticas estudadas, mas com um considerável escape de radicais alquila a partir da gaiola do solvente, principalmente em solventes menos viscosos. O material [Mn(TPFP)]-APDES, obtido pelo método sol gel via ligação covalente entre grupos pentafluoro da metaloporfirina e grupos ?NH2 do silano, mostrou atividade catalítica satisfatória nas oxidações de n-pentano e cicloexano. / The oxyfunctionalisation of alkanes under mild conditions is a hard reaction due to the high energy of the C-H bond in these molecules. Some enzymes, from which it should be highlighted cytochromes P450 monooxygenases, are able to promote these oxidations with high efficiency and selectivity. Synthetic metalloporphyrins are often studied as chemical models of the cytochrome P450, since these enzymes contains a Fe(III)porphyrin in their prosthetic groups. This work reports studies on the oxyfunctionalisation of two alkanes, namely cyclohexane and n-pentane, with iodosylbenzene (PhIO) catalysed by the MnIIIporphyrins [Mn{T(4-N-MePy)P}]5+, [Mn(TPFP)]+, [Mn(TDCSPP)]3- and [Mn(TF4TMAPP)]5+ in homogeneous solutions as well as supported on chemically modified silica surfaces, via ionic and/or covalent binding, using acetone, dichloromethane and benzene as reaction solvents. It has been observed high yields of oxygenated products (alcohols and ketones), rather in reactions catalysed by [Mn(TF4TMAPP)]5+, in both conditions, homogeneous and heterogeneous, making this catalyst one of the most promising catalyst for oxidations of organic compounds, mainly when it is immobilised on the supports SiSO3 - e SiSO3 - (IPG), since these supported catalysts are easily obtained and, in addition, the strong electrostatic interactions between the cationic MnIIIporphyrin and the anionic supports avoid the leaching of the Mn-complex from the solid support during the reaction. On the reactivity, it has been noticed difference on the values of alcohol/ketone ratios, mainly for oxidations in acetone. Experiments under inert atmosphere clearly yielded higher values of alcohol/ketone ratio, indicationg the participation of O2 from the air in the reaction mechanism, apart of the solvent used. Studies of intermolecular kinetic isotope effect in the competitive reactions among n-pentane ´ perdeuterated n-pentane indicated, from the values of kH/kD between 6 and 7 obtained for the reactions in the three solvents, that the rate-limiting step is the hydrogen atom abstraction of the alkane from a metal-oxo species, much probably MnV=O, common to all reactions investigated, which should be operating by the classical oxygen rebound mechanism. A more detailed study of the catalytic oxidations in acetone, that conducted to lower values of alcohol/ketone ratio, allowed the detection of 1-(acetyloxi)-2-propanone, which is formed only in reactions with catalyst, under air atmosphere and in presence of substrate. Furthermore, cyclohexane oxidations catalysed by [Mn(TF4TMAPP)]-SiSO3 in presence of bromotrichloromethane, an alkyl radical trapping, in different solvents (dichloromethane, 1,2-dichloroethane, acetone and benzene) allowed us to determine a viscosity effect in the formation of the products alcohols and ketones, that indicated as less viscous is the solvent as high is the escape of alkyl radicals from the solvent cage, being it responsible by the lower values of alcohol/ketone ratios observed in acetone oxidations. From these studies, it has been determined the oxygen rebound mechanism is operating in all catalytic oxidations investigated in this work, but there is a significant escape of alkyl radicals from the solvent cage, mainly for reactions performed in less viscous solvents. The material [Mn(TPFP)]-APDES, obtained by the sol gel method via covalent binding between pentafluoro groups of the metalloporphyrin and ?NH2 groups of the silane, showed a satisfactory catalytic activity in oxidations of n-pentane and cyclohexane.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 256.pdf: 1172274 bytes, checksum: 68658bbceb0ae55a41e1ecc9323bf1d7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Tem sido relatado que infecçöes e estímulos inflamatórios causam alteraçöes da atividade e dos níveis de expressäo de várias formas de citocromos P450 (CYP) hepáticos em animais de laboratório e em seres humanos. Estas alteraçöes podem ter reflexos tanto no clearance de fármacos quanto na ativaçäo meólica de pró-mutágenos, pró-carcinógenos e pró-teratógenos. Assim, infecçöes e processos inflamatórios estäo entre os fatores que modulam a atividade ou a expressäo dos CYP e podem alterar a cinética e a toxicidade de xenobióticos. Teve como objetivo avaliar os efeitos da infecçäo com S., mansoni sobre o conteúdo total de citocromos P450, as atividades de isoenzimas das subfamílias 1A, 2A e 2B, e os níveis de CYP10 e 2A5 na fraçäo microssomal hepática de camundongos das linhagens Swiss Webster e DBA/2. Avalia a evoluçäo da esquistossomose murina em Swiss Webster e DBA/2 comparando dois modelos de infecçäo experimental animais infectados com 100 cercárias aos 10 dias de vida (lactentes) ou na vida adulta (45 dias de vida). Foram determinados o peso corporal e de órgäos (fígado, baço e intestinos), o ganho ponderal, o índice de penetraçäo das cercárias, a mortalidade, a taxa de recuperaçäo de vermes após perfusäo sistêmica e o número de ovos no fígado e intestinos. Indica que na fase intermediária de evoluçäo da esquistossomose mansônica murina (55 dias pós infecçäo) há uma acentuada diminuiçäo dos níveis totais de CYP e de atividades relacionadas as subfamílias CYP1A e CYP2B. Por outro lado, contrastando com esta depressäo generalizada de CYPs, há um claro aumento de CoH, relacionada ao CYP2A5/2 infectados.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345983.pdf: 6571309 bytes, checksum: eff889a321cea8a94cbde6e36c5b4a0d (MD5) Previous issue date: 2017 / Os ecossistemas costeiros fornecem bens e serviços valiosos. Entretanto, a maioria destes ecossistemas já apresentam impactos antropogênicos. Historicamente os ecossistemas costeiros são alvo do descarte de resíduos industriais, agrícolas e de efluentes urbanos. Esta contaminação, além de gerar riscos à saúde humana, modifica a ecologia dos ecossistemas marinhos. Esta dissertação está dividida em dois capítulos. O primeiro trata do sequenciamento e caracterização do transcriptoma de glândula digestiva de vieiras da espécie Nodipecten nodosus. As leituras passaram por verificação de qualidade e foram montadas através de três diferentes métodos. A montagem de melhor qualidade (Velvet k = 45) apresentou um tamanho de contig N50 de 2.301 pares de base (pb), compreendendo 76.861 transcritos. Destes,33,72% foram anotados em bancos de dados públicos. Diversos transcritos de genes envolvidos na biotransformação de xenobióticos e com atividade antioxidante foram identificados. No segundo capítulo foram apresentados os resultados da classificação dos 33 transcritos citocromos P450 (CYP) buscados no transcriptoma de glândula digestiva da vieira N. nodosus. Seis novas famílias CYP foram identificadas. Além disso, a proteína CYP30E1 foi caracterizada estruturalmente, através de métodos computacionais. As sequências analisadas apresentaram, em geral, os motivos característicos desta superfamília conservados. A caracterização do CYP30E1 revela uma altas emelhança com o CYP3A4 humano, indicando funções semelhantes no metabolismo de alguns xenobióticos. Esta dissertação apresenta importantes contribuições na caracterização do transcriptoma da vieira N. nodosus e de seus transcritos CYP.<br> / Abstract : Coastal ecosystems provide valuable goods and services. However, most of these ecosystems already show anthropogenic impacts. Historically, coastal ecosystems have been subject to the disposal of industrial, agricultural and urban wastes. This contamination, in addition to producing risks to human health, modifies the marine ecosystem's ecology. This work is divided into two chapters. The first deals with the sequencing and characterization of the transcriptome of the digestive gland of scallops from the species N. nodosus. High-throughput sequencing reads went through quality checking and were assembled through three different methods. The assembly with the highest quality (Velvet k = 45) had a N50 contig size of 2,301 base pairs, comprising 76,861 transcripts. Of these, 33.72% were annotated in public databases. Several transcripts from genes involved in xenobiotic transformation or that had antioxidant activity were identified. In the second chapter, the results of the classification of 33 cytochrome P450 transcritos, searched in the digestive gland transcriptome of the scallop N. nodosus, were presented. Six new CYP families were identified. In addition, the protein CYP30E1 was characterized structurally, by computational methods. The analyzed sequences presented, in general, well conserved motifs from this superfamily. The characterization of the CYP30E1 revealed a high similarity with the human CYP3A4, indicating similar function in the metabolism of xenobiotics. This dissertation produced important contributions in the transcriptome characterization of the scallop N.nodosus and its CYP transcripts.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:35:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3091_.pdf: 5412006 bytes, checksum: be06859c7e88c331680518d5ac8e82fa (MD5) Previous issue date: 2009-03-25 / Neste trabalho estudou-se a síntese, caracterização e algumas propriedades dos filmes de Poliacrilonitrila (PAN), quando adsorvidas cargas orgânicas de metaloporfirinas naturais, no caso específico moléculas orgânicas de propriedades químicas muito conhecidas, as clorofilas (Chl) e o citocromo c (Cyt-c) e também cargas inorgânicas: sais de Fe (II), Fe (III) e K+. Nos experimentos para obtenção dos dados, foram utilizadas as técnicas de espectroscopia no infravermelho (FTIR); Ultravioleta-Vísivel (UV-VIS); de fluorescência (EF); Mössbauer (EM); e também difração de raios-X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV), analise térmica (TG e DSC), análise elementar, viscosimetria, voltametria, e medidas de resistividade. A síntese da PAN realizada em quatro repetições apresentou um rendimento acima de 77%. A massa molar da PAN foi obtida através de viscosimetria e o grau de cristalinidade foi obtido através de DRX, sendo estes dados comparáveis ao da literatura. No processo de adsorção de citocromo c, clorofilas, e sais de Fe(II), Fe(III) e K+ foram obtidos produtos com características próprias que foram analisadas através de FTIR, TG, DSC, UV-VIS e EF, o que demonstrou alterações significativas nas propriedades físicas e químicas destes materiais. Além das analises convencionais foram efetuadas analises de Mössbauer e medidas de condutividade dos materiais. As isotermas e a cinética de adsorção foram realizadas para os sais de Fe(III) e citocromo c mostrando resultados da adsorção destes substâncias na PAN.

Oxifuncionalização de alcanos sob condições suaves de reação é uma difícil reação devido à elevada energia da ligação C-H nestas moléculas. Na natureza, algumas enzimas, com destaque para as monooxigenases do citocromo P-450, conseguem promover estas oxidações parciais com elevada eficiência e seletividade. Metaloporfirinas sintéticas têm sido estudadas como modelos químicos do citocromo P- 450, uma vez que estas enzimas possuem uma FeIIIporfirina como grupo prostético. Neste trabalho, estudou-se a oxifuncionalização dos alcanos cicloexano e npentano com iodosilbenzeno (PhIO) usando-se os catalisadores [Mn{T(4-N-MePy)P}]5+, [Mn(TPFP)]+, [Mn(TDCSPP)]3- e [Mn(TF4TMAPP)]5+ em meio homogêneo e suportados em matrizes de sílica quimicamente modificada via ligação iônica e/ou covalente, usando-se acetona, diclorometano e benzeno como solventes. Observou-se elevados rendimentos de produtos oxigenados (álcoois e cetonas), preferencialmente em reações catalisadas por [Mn(TF4TMAPP)]5+ tanto em meio homogêneo quanto suportada, tornando este catalisador como um dos mais promissores para oxidações de compostos orgânicos, principalmente quando imobilizado nos suportes SiSO3 - e SiSO3 -(IPG), uma vez que estes catalisadores suportados são facilmente obtidos e, além disso, as fortes interações eletrostáticas entre a MnIIIporfirina catiônica e os sólidos aniônicos evitam a lixiviação do Mn-complexo a partir do suporte durante a reação. No tocante à reatividade, notou-se diferença nos valores de razão álcool/cetona obtendo, de uma maneira geral, os menores valores para reações em acetona. Experimentos sob atmosfera inerte levaram a valores de razão álcool/cetona muito maiores, indicando a participação de O2 do ar no mecanismo da reação, independentemente do solvente. Estudos de efeito isotópico cinético intermolecular nas reações competitivas n-pentano ´ n-pentano perdeuterado indicaram, devido aos valores de kH/kD entre 6 e 7 obtidos em reações nos três solventes, que a etapa determinante de velocidade é a abstração de átomo de hidrogênio do alcano a partir de uma espécie metaloxo, muito provavelmente MnV=O, comum a todas as reações estudadas, as quais devem estar operando pelo clássico mecanismo de recombinação de oxigênio. Um estudo mais detalhado das oxidações catalíticas em meio de acetona, que conduzia a menores valores de razão álcool/cetona, levou à detecção do composto 1-(acetiloxi)-2-propanona, formado apenas em reações na presença de catalisador, sob atmosfera de ar e na presença de um dos dois substratos. Além disso, oxidações do cicloexano catalisadas por [Mn(TF4TMAPP)]-SiSO3 na presença de bromotriclorometano, substância capaz de reagir com radicais alquila, em diferentes solventes (diclorometano, 1,2-dicloroetano, benzeno e acetona) permitiu determinar um efeito da viscosidade na distribuição dos produtos álcoois e cetonas formados, que indicou que quanto menor a viscosidade do solvente, maior o escape de radicais alquila a partir da gaiola do solvente, o que é o responsável pelos menores valores de razão álcool/cetona encontrados em oxidações em meio de acetona. A partir de todos estes estudos determinou-se que o mecanismo de recombinação de oxigênio está operando em todas as oxidações catalíticas estudadas, mas com um considerável escape de radicais alquila a partir da gaiola do solvente, principalmente em solventes menos viscosos. O material [Mn(TPFP)]-APDES, obtido pelo método sol gel via ligação covalente entre grupos pentafluoro da metaloporfirina e grupos ?NH2 do silano, mostrou atividade catalítica satisfatória nas oxidações de n-pentano e cicloexano. / The oxyfunctionalisation of alkanes under mild conditions is a hard reaction due to the high energy of the C-H bond in these molecules. Some enzymes, from which it should be highlighted cytochromes P450 monooxygenases, are able to promote these oxidations with high efficiency and selectivity. Synthetic metalloporphyrins are often studied as chemical models of the cytochrome P450, since these enzymes contains a Fe(III)porphyrin in their prosthetic groups. This work reports studies on the oxyfunctionalisation of two alkanes, namely cyclohexane and n-pentane, with iodosylbenzene (PhIO) catalysed by the MnIIIporphyrins [Mn{T(4-N-MePy)P}]5+, [Mn(TPFP)]+, [Mn(TDCSPP)]3- and [Mn(TF4TMAPP)]5+ in homogeneous solutions as well as supported on chemically modified silica surfaces, via ionic and/or covalent binding, using acetone, dichloromethane and benzene as reaction solvents. It has been observed high yields of oxygenated products (alcohols and ketones), rather in reactions catalysed by [Mn(TF4TMAPP)]5+, in both conditions, homogeneous and heterogeneous, making this catalyst one of the most promising catalyst for oxidations of organic compounds, mainly when it is immobilised on the supports SiSO3 - e SiSO3 - (IPG), since these supported catalysts are easily obtained and, in addition, the strong electrostatic interactions between the cationic MnIIIporphyrin and the anionic supports avoid the leaching of the Mn-complex from the solid support during the reaction. On the reactivity, it has been noticed difference on the values of alcohol/ketone ratios, mainly for oxidations in acetone. Experiments under inert atmosphere clearly yielded higher values of alcohol/ketone ratio, indicationg the participation of O2 from the air in the reaction mechanism, apart of the solvent used. Studies of intermolecular kinetic isotope effect in the competitive reactions among n-pentane ´ perdeuterated n-pentane indicated, from the values of kH/kD between 6 and 7 obtained for the reactions in the three solvents, that the rate-limiting step is the hydrogen atom abstraction of the alkane from a metal-oxo species, much probably MnV=O, common to all reactions investigated, which should be operating by the classical oxygen rebound mechanism. A more detailed study of the catalytic oxidations in acetone, that conducted to lower values of alcohol/ketone ratio, allowed the detection of 1-(acetyloxi)-2-propanone, which is formed only in reactions with catalyst, under air atmosphere and in presence of substrate. Furthermore, cyclohexane oxidations catalysed by [Mn(TF4TMAPP)]-SiSO3 in presence of bromotrichloromethane, an alkyl radical trapping, in different solvents (dichloromethane, 1,2-dichloroethane, acetone and benzene) allowed us to determine a viscosity effect in the formation of the products alcohols and ketones, that indicated as less viscous is the solvent as high is the escape of alkyl radicals from the solvent cage, being it responsible by the lower values of alcohol/ketone ratios observed in acetone oxidations. From these studies, it has been determined the oxygen rebound mechanism is operating in all catalytic oxidations investigated in this work, but there is a significant escape of alkyl radicals from the solvent cage, mainly for reactions performed in less viscous solvents. The material [Mn(TPFP)]-APDES, obtained by the sol gel method via covalent binding between pentafluoro groups of the metalloporphyrin and ?NH2 groups of the silane, showed a satisfactory catalytic activity in oxidations of n-pentane and cyclohexane.

Tesis para optar al Grado Académico de Magíster en Bioquímica Área de Especialización: Toxicología y Diagnóstico Molecular y Memoria para optar al Título Profesional de Bioquímica / Los médicos prescriben fármacos sobre la base de sus características farmacológicas y sobre la posibilidad de obtener resultados clínicamente reproducibles. Sin embargo, muchos de los fármacos son eficaces en sólo 25% a 60% de los pacientes, por lo tanto, muchos pacientes no responden a los tratamientos e incluso experimentan reacciones adversas e intoxicaciones. Existen variaciones individuales en las respuestas a fármacos que pueden deberse a diversos efectos, pero en la actualidad se sabe que muchas de estas variaciones se encuentran predeterminadas genéticamente; éste es el blanco de estudio de la farmacogenética. La debrisoquina-4-hidroxilasa (CYP2D6) es una de las enzimas más importante del metabolismo de fármacos que actúan tanto a nivel del sistema nervioso central (SNC) como del sistema circulatorio. Los polimorfismos de CYP2D6 presentan grandes diferencias en las frecuencias alélicas según la población y etnia. En este estudio se analizaron a través de PCR-AS semianidada, PCR RFLP y PCRL las variables CYP2D6*2, CYP2D6*3, CYP2D6*4 y la duplicación del gen CYP2D6 en 321 voluntarios sanos. Las frecuencias alélicas encontradas son muy similares a las registradas para la población española: para *2 un 40,5%, para *3 un 1,09%, para *4 un 11,8%. No se encontraron duplicaciones del gen CYP2D6 en un subgrupo de 20 voluntarios analizados. Para determinar con exactitud la influencia de los polimorfismos del gen CYP2D6 en su actividad debrisoquina hidroxilasa, se seleccionaron 23 voluntarios del grupo en estudio que presentaban genotipos relevantes, los cuales debieron ingerir el marcador metabólico debrisoquina. Se recolectaron las muestras de orina de 0-8 horas y se analizaron a través de HPLC. Presentaron el fenotipo esperado 18 voluntarios, de los cuales el más relevante es el genotipo *4/*4 que presentó una actividad catalítica muy disminuida en comparación al grupo wt/wt. Se obtuvo una correlación genotipo-fenotipo para algunos voluntarios logrando el objetivo fundamental que busca un estudio farmacogenético, es decir, la determinación de la respuesta individual

Submitted by Jorge Cativo (jorge.cativo@inpa.gov.br) on 2018-08-23T13:05:02Z No. of bitstreams: 2 TESE_FINAL_.pdf: 4368762 bytes, checksum: 819cc6a5cad9b495a51a1d1b2a102bf7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T13:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE_FINAL_.pdf: 4368762 bytes, checksum: 819cc6a5cad9b495a51a1d1b2a102bf7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Frankliniella schultzei (Trybom, 1910) is a highly polyphagous thrips that has a pest status and a tropical and subtropical distribution. It presents plasticity in body coloration and its two morpho-colors (pale and dark) is an open taxonomic question. Although uncertain, it’s likely that they originate in the Neotropics, as most species of that genus. Recent researches in Kenya and Australia (areas where this species was introduced) indicate that morpho-colors are different species, and that the dark form is actually a complex of species. In this study, nuclear (microsatellites - SSRs) and mitochondrial (Cytochrome Oxidase I - COI) molecular markers were used to estimate the genetic diversity, and to evaluate the population structure of F. schultzei in Brazil. The Near Infrared Spectroscopy (NIRS) was used to discriminate morfo-colors. We found that the clear form of F. schultzei is a different species from the dark one, and that it probably corresponds to a single biological unit in the world. We also inferred the existence of a complex of species within the dark form of F. schultzei in Brazil, in which populations (two species) are living in sympatry and sharing the same hosts. These populations are highly structured, with a higher percentage of variation within than between them, and a low or nonexistent gene flow. Adding haplotype network data into this context, we deduced that the southern region of Brazil should be the most likely center of origin and dispersal of F. schultzei, since it presents composition of samples by more stable and genetically diverse localities. These are the first scientific data produced about the population genetics of F. schultzei in their most likely region of origin – South America / southern Brazil, which are in agreement with the reports for for the species analyzed in Kenya and Australia. / Frankliniella schultzei (Trybom, 1910) é um tripes altamente polífogo, com status de praga e distribuição tropical e subtropical. Apresenta plasticidade na coloração corporal e suas duas morfo-cores (clara e escura) é uma questão taxonômica em aberto. Apesar de incerta, tem provável origem nos Neotrópicos como a maioria das espécies do gênero. Recentes pesquisas, no Quênia e na Austrália (áreas de introdução da espécie), indicam que as morfo-cores são espécies diferentes e que a forma escura é um complexo de espécies. Neste estudo, marcadores moleculares nuclear (microssatélites - SSR) e mitocondrial (Citocromo Oxidase I - COI) foram utilizados com o objetivo de estimar a diversidade genética e avaliar a estrutura populacional de F. schultzei no Brasil e a Espectroscopia no Infravermelho Próximo (NIRS) para a discriminação das morfo-cores. Encontramos que a forma clara de F. schultzei é uma espécie diferente da forma escura e que, provavelmente, corresponda a uma única unidade biológica no mundo. Inferimos também a existência de um complexo de espécies dentro da forma escura de F. schultzei no Brasil, com populações (duas espécies) vivendo em simpatria e compartilhando os mesmos hospedeiros. Estas se encontram altamente estruturadas, com maior porcentagem da variação dentro que entre elas, e com baixo ou inexistente fluxo gênico. Acrescentando dados de rede de haplótipos a este contexto, deduzimos que a região sul do Brasil deve ser o provável centro de origem e dispersão de F. schultzei escura, por apresentar composição de amostras por localidade mais estáveis e mais diversas geneticamente. Estes são os primeiros dados científicos produzidos sobre genética populacional de F. schultzei em sua provável região de origem – América do Sul / região sul do Brasil, os quais estão em consonância com os relatos para a espécie analisados no Quênia e Austrália.

Tesis para Optar al Grado Académico de Magíster en Bioquímica, Área de Especialización: Toxicología y Diagnóstico Molecular / Memoria para Optar al Título de Bioquímica / El ser humano está constantemente expuesto a agentes externos (xenobióticos), entre los que se incluyen los fármacos. La mayoría de estos xenobióticos son lipofílicos siendo absorbidos por la mucosa gastrointestinal hacia la circulación sistémica. Para facilitar su excreción existen enzimas de biotransformación, tales como las monooxigenasas o citocromo P450 (CYP), las cuales se encuentran principalmente en el hígado y transforman sustancias lipofílicas en compuestos hidrofílicos modificando la velocidad de excreción, la vida media y otras propiedades fármaco/tóxicocinéticos. La variabilidad interindividual en el metabolismo y respuesta a fármacos es extensa debido a las características genéticas individuales y las interacciones con otros xenobióticos. Este tema es abordado por la farmacogenética, una disciplina que analiza la información genética del paciente para diseñar una terapia farmacológica más apropiada y por consiguiente, la información previa de esto puede ser beneficiosa, en especial en aquellos fármacos con un índice terapéutico estrecho o una concentración plasmática mínima. Ello debido a que es bien sabido que la mayoría de las enzimas de biotransformación son polimórficas, causando ya sea la supresión, disminución o aumento del metabolismo de fármacos. Por lo tanto, es necesario conocer su variación en un individuo para ajustar una terapia farmacológica individualizada. Una de las enzimas relevantes en la respuesta farmacológica, responsable del metabolismo de gran cantidad de fármacos y que corresponde casi al 30% de las enzimas P450 hepáticas es CYP3A4. Se han descrito numerosos polimorfismos en el gen que codifica para esta enzima, siendo CYP3A4*1B uno de los más estudiados. Al respecto, estudios in vitro han mostrado que esta variante exhibe una actividad enzimática dos veces menor que el genotipo común o wild type CYP3A4 wt/wt, sin embargo, in vivo no se ha logrado demostrar que esta variante esté asociada a una disminución de la actividad enzimática. El medicamento hipnosedativo Zolpidem utilizado para iniciar o mantener el sueño es biotransformado principalmente por CYP3A4, por lo que esta enzima puede tener un papel muy relevante en la respuesta farmacoterapéutica. A pesar de que se han realizado estudios in vitro que han demostrado su biotransformación por CYP3A4 (61%), CYP2C9 (22%) y CYP1A2 (14%), aún no se demuestra que la presencia del polimorfismo de CYP3A4 *1B altere los parámetros farmacocinéticos en humanos, ya sea sometidos a monodosis o a un tratamiento con Zolpidem. De acuerdo a estos antecedentes, el objetivo del presente trabajo de tesis persiguió determinar la frecuencia del polimorfismo CYP3A4 *1B en la población chilena sana, y asociar el polimorfismo a cambios en los parámetros farmacocinéticos de Zolpidem en un grupo de voluntarios sanos sometidos a una monodosis de Zolpidem. La detección de los diferentes genotipos se realizó a través de PCR-RFLP convencional y los parámetros farmacocinéticos se obtuvieron mediante análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados obtenidos mostraron una frecuencia genotípica de un 0,889 para el genotipo silvestre (wt/wt), 0,111 para los heterocigotos (wt/*1B) y no se encontraron individuos homocigotos mutados (*1B/*1B) en 253 chilenos sanos. La frecuencia alélica fue de un 0,945 para el alelo silvestre (wt) y un 0,055 para el alelo mutado (*1B). El análisis estadístico para establecer la relación entre el genotipo y los parámetros farmacocinéticos de 32 personas estudiadas (28 para wt/wt y 4 para wt/*1B) no mostró una asociación estadísticamente significativa, por lo que sería necesario disponer de un mayor número de individuos tratados con el fármaco de modo de establecer la presencia de metabolizadores rápidos o lentos de Zolpidem o en su defecto realizar un estudio farmacocinético en un grupo de individuos previamente identificados como portadores del alelo mutado. Sin perjuicio de lo anterior, es necesario destacar que el objeto último de la farmacogenética es establecer respuestas individuales, por lo que el hallazgo de 4 individuos con genotipo mutado y el análisis de sus niveles plasmáticos de Zolpidem podrían permitir disponer de una herramienta útil para el ajuste de la dosis de este medicamento. / Human beings are constantly exposed to external agents (xenobiotics), including drugs. Most of xenobiotics are lipophilic and therefore they are absorbed by gastrointestinal mucous towards the systemic circulation. To facilitate their excretion biotransformation enzymes, such as monooxygenases or cytochrome P450 (CYP), found mainly in the liver, change lipophilic substances to hydrophilic compounds by modifying their excretion rate, half-life, and other pharmacokinetics or toxicokinetics properties. The interindividual variability in metabolism and drug responses is huge because of individual genetics characteristic and interactions with other xenobiotics. This topic is approached by pharmacogenetics, an area that analyzes the genetic makeup of patients a suitable pharmacological therapy design and therefore. The knowledge derived from this research can be beneficial, especially for those drugs with a tight therapeutic index or minimum plasmatic concentration. Since it is well-known that most biotransformation enzymes are polymorphic, causing suppression, decrease or increase of drug metabolism, it is necessary to know individual variation to fit an individualized pharmacology therapy. One of the relevant enzymes responsible for the metabolization of many drugs and part of hepatic P450 enzymes is CYP3A4. This enzyme presents several polymorphisms, being CYP3A4*1B one of the most studied. In vitro studies have shown that this variant shows only half of the enzymatic activity of the common genotype (CYP3A4 wild type). It has not been shown in vivo that this variant is associated to an enzymatic activity reduction. The hypnosedative drug Zolpidem used to induce or maintain sleep is mainly biotransformed by CYP3A4, therefore this enzyme may have a relevant role in the pharmacotherapeutic response. In spite of in vitro studies have demonstrated its biotransformation by CYP3A4 (61%), CYP2C9 (22%) and CYP1A2 (14%), it still has not been shown that the presence of the CYP3A4*1B polymorphism modifies zolpidem pharmacokinetic parameters in humans, whether they are administered as a monodose or a treatment sustained. The goal of this thesis was to determine CYP3A4*1B polymorphism frequency in a healthy Chilean population and in a group of healthy volunteers under a Zolpidem monodose treatment, and to relate the genotypes frequencies to changes in Zolpidem pharmacokinetic parameters. Detection of correlated genotypes were realized through conventional PCR-RFLP and the pharmacokinetic parameters were measured through high performance liquid chromatography (HPLC) analysis. The results showed a genotypic frequency of 0,889 for the wild type genotype (wt/wt) and 0,111 for heterozygous (wt/*1B). We did not find homozygote individuals for the (*1B/*1B) genotype in 253 healthy Chileans. The allelic frequency was 0,945 for the wild type allele (wt) and 0,055 for mutated allele (*1B). The statistic analysis to establish the relation among genotype and pharmacokinetic parameters of 32 individuals (28 wt/wt and 4 wt/*1B) did not show a significant statistically association. It will be necessary to analyze a higher number of subjects treated with the drug to establish rapid or poor Zolpidem metabolizers. Alternatively a pharmacokinetic study can be restored in a group previously identified as carriers of mutated allele. It is important to stand out that the final purpose of pharmacogenetics is the establishment of individual answers, therefore, the finding of wt/*1B genotype subjects together with their plasma levels of Zolpidem could permit us to have an useful tool to fit the drug posology.

Made available in DSpace on 2018-08-01T23:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10881_81 - Mylla Carla Cescon Freire.pdf: 1313608 bytes, checksum: 57fa1668897624f985a8b3440fe12072 (MD5) Previous issue date: 2017-04-07 / O Stenella coeruleoalba é um pequeno cetáceo pelágico da família Delphininae que apresenta uma ampla distribuição e pode ser encontrado em águas tropicais e temperadas dos oceanos Atlântico, Pacífico e Índico, bem como em mares adjacentes, como o Mar Mediterrâneo. O presente estudo teve por objetivo analisar a região do citocromo b (Cit-b) e a região controle (D-loop) do DNA mitocondrial de indivíduos do Nordeste e do Sul do Brasil (Oceano Atlântico Sul), além de compará-las com sequências de golfinhos-listrados provenientes do Oceano Atlântico Norte, e com isso avaliar os índices de diversidade e a presença ou a ausência de estruturação genética entre as diferentes localidades. Os S. coeruleoalba do Brasil apresentaram uma alta diversidade genética para ambos os marcadores mitocondriais analisados (D-loop: h= 0,984; &#960;= 0,294; Cit-b: h= 0,848; &#960;= 0,249) e considerando o marcador Cit-b constituem duas populações (FST= 0,180; P= 0,045). Uma diferenciação significativa entre as unidades amostrais de S. coeruleoalba do Atlântico Norte e do Atlântico Sul foi verificada a partir dos dois marcadores mitocondriais avaliados (D-loop: FST= 0,034/ P= 0,009; Cit-b: FST= 0,130/ P= 0,026). Ademais, com a região D-loop, foi possível evidenciar estruturação genética entre dois grupos de golfinhos-listrados do Mar Mediterrâneo (FST= 0,0913/ P= 0,000). Não foi possível identificar estruturação entre os indivíduos do oeste do Oceano Atlântico Norte com as unidades amostrais do Brasil, mesmo estes não apresentando compartilhamento de haplótipos. Tal fato sugere que estas unidades possam ter surgido de linhagens próximas geneticamente e ainda fazem parte de uma mesma população. Até então, nenhum estudo genético populacional com a espécie S. coeruleoalba havia sido realizado no Oceano Atlântico Sul. Entender como os golfinhos-listrados encontram-se estruturados é de suma importância para compreender a genética destes indivíduos e assim definir estratégias de conservação adequadas para cada população identificada.

Introdução: A esquizofrenia é uma doença mental que evolui para a cronicidade em mais de 80 % dos casos, caracterizada por distorções do pensamento, delírios bizarros, alterações na senso-percepção e respostas emocionais inadequadas, que podem levar o paciente a algum grau de deterioração. É uma das formas mais importantes de doença psiquiátrica, porque afeta pessoas jovens, com evolução em geral para incapacitação funcional e prejuízo social. A farmacoterapia tem provado ser o ponto chave na terapêutica da esquizofrenia. Embora não curativas, as drogas antipsicóticas se estabeleceram como o tratamento primário para todos os estágios da doença, possuindo efeito clínico significativo em cerca de 80 % dos casos,os demais apresentam a chamada forma refratária, que responde em 60 % dos casos a medicação denominada Clozapina.A CYP1A2 é a principal enzima hepática de metabolização da clozapina, e o conhecimento prévio de sua atividade enzimática pode possibilitar a personalização da terapia medicamentosa, permitindo ao médico escolher o fármaco e a dose que melhor se adapte ao perfil de metabolização do paciente, aumentando desta forma a eficácia do tratamento e a redução do aparecimento dos efeitos adversos descritos para a clozapina. Objetivo: Avaliar a excreção de cafeína inalterada na urina, como um indicativo da atividade da CYP1A2, através da utilização de cafeína como fármaco de prova. Metodologia: Foram estudados 20 adultos portadores do diagnóstico DSM-IV e CID-10 de Esquizofrenia, com forma refratária, estabilizados, em uso continuado de clozapina há pelo menos 12 meses. Foi administrado 200mg de cafeína com coleta de urina 6 horas após, e dosagem através de uma técnica de cromatografia gasosa. Não foi evidenciada correlação entre a dose de clozapina administrada e a cafeína detectada, a qual deveria ser negativa, o que pode ser explicado pelo tamanho da amostra. Porém, a excreção de cafeína apresentou diferença (P=0,019) entre homens e mulheres, acompanhando o descrito na literatura para a atividade da CYP1A2.