Micro-organismos persistentes que permanecem viáveis e em níveis elevados nos canais radiculares após os procedimentos endodônticos podem influenciar no sucesso do tratamento endodôntico. O objetivo deste estudo foi avaliar a quantidade e a atividade metabólica de bactérias persistentes utilizando métodos moleculares baseados em rDNA e rRNA. Foram selecionados 15 pacientes com infecções endodônticas primárias assintomáticas. Amostras microbiológicas foram coletadas dos canais radiculares após a cirurgia de acesso (S1), após o preparo químico-cirúrgico realizado com Sistema Reciproc e NaOCl 2.5% (S2) e após medicação intracanal com Ca(OH)2 por 14 dias (S3). As amostras dos canais radiculares foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa para confecção de DNA complementar (cDNA). O efeito dos procedimentos endodônticos na redução bacteriana foi determinado por qPCR baseada em rDNA, utilizando iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria e iniciadores espécie-específicos para Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272. A atividade metabólica de bactérias totais e Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 foi calculada pela razão rRNA/rDNA baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para análise quantitativa e teste de McNemar para comparação da taxa de detecção dos métodos, com nível de significância de 5%. Todas as amostras S1 foram positivas para bactérias totais, com uma mediana de 1,87 x 105 cópias de rDNA por amostra. Após o preparo químico-cirúrgico houve uma redução significativa de rDNA de bactérias totais (mediana 7,86 x 104, P = 0,01). Entretanto, não houve redução de rDNA bacteriano após a medicação intracanal quando comparada à etapa anterior (mediana 7,97 x 104, P > 0,05). Os resultados da razão rRNA/rDNA revelaram que houve uma redução do metabolismo de bactérias totais em S2 (mediana 1, P = 0,04) e um aumento do metabolismo bacteriano em S3 (mediana 2, P = 0,04). Na análise de Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272, o tratamento endodôntico não influenciou na redução nem no metabolismo bacteriano. Concluiu-se que o número total de bactérias foi drasticamente reduzido após o preparo químico-cirúrgico, assim como seu metabolismo. Entretanto, o metabolismo bacteriano aumentou após o uso da medicação intracanal com Ca(OH)2. Bacteroidaceae [G-1] sp. oral taxon 272 permaneceu metabolicamente ativo após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal, participando, assim, da composição da microbiota persistente. / High levels of microorganisms that persist viable in root canals after endodontic procedures may influence endodontic treatment outcome. This study aimed to evaluate the amount and the metabolic activity of persistent bacteria using rRNA- and rDNA-based molecular methods. Fifteen patients with primary endodontic infections were selected. Microbiological samples were taken from root canals after access cavity (S1), after chemomechanical preparation with Reciproc System and 2.5% NaOCl (S2) and after intracanal medication with calcium hydroxide for 14 days (S3). DNA and RNA were extracted from root canal samples, and cDNA was synthetized using reverse transcription reaction. The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR using universal primers for 16S rRNA Bacteria domain and species-specific primers to Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272. The metabolic activity of total bacteria and Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 was calculated by rRNA/ rDNA ratio estimated by qPCR. The data was analyzed by the Wilcoxon test for quantitative analysis and McNemar test for comparison of the detection rate of the methods, with 5% significance level. All S1 samples were positive for total bacteria, with a median value of 1.87 x 105 bacterial cells. After chemomechanical preparation a significant reduction of bacterial rDNA was observed (median 7.86 x 104, P = 0.01). Nevertheless, there was no bacterial rDNA reduction after intracanal medication when compared to S2 samples (median 7.97 x 104, P > 0.05). The rRNA/ rDNA ratio showed a reduction of total bacteria metabolism in S2 (median 1, P = 0,04), and an increase of bacterial metabolism in S3 (median 2, P = 0,04). Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 analysis showed that endodontic treatment did not impact the amount and the metabolic activity of this taxon. In conclusion, the number and metabolism of total bacteria were severely reduced after chemomechanical preparation. On the other hand, the bacterial metabolism increased after intracanal dressing with Ca(OH)2. Bacteroidaceae [G-1] sp. oral taxon 272 remained metabolically active after chemomechanical preparation and intracanal dressing thus participating in the composition of the persistent microbiota.

Este estudo identificou a presença e a viabilidade de Streptococcus spp., Propionibacterium acnes e Enterococcus faecalis antes e após os procedimentos endodônticos, utilizando o método de reação de cadeia de polimerase (PCR) baseado em RNA ribossômico (rRNA) e seus respectivos genes (rDNA). Foram coletadas amostras de 20 dentes com infecção primária antes (S1) e após o preparo químico-cirúrgico (S2), e depois do emprego do Ca(OH)2 como medicação intracanal (S3). DNA e RNA foram extraídos da mesma amostra de canal radicular e utilizados como moldes para reação de PCR com iniciadores específicos para a região 16S rRNA das espécies analisadas. Streptococcus espécies foram detectados em 20% e 25% das amostras S1 utilizando os métodos baseados em rRNA e rDNA, respectivamente; enquanto P. acnes foi detectado apenas pela análise de rRNA, estando presente em 10% das amostras S1. Após o preparo químico-cirúrgico, Streptococcus spp. foram detectado em 10% das amostras S2 quando se utilizou rDNA, porém não foi detectado pelo método baseado em rRNA, indicando ausência de células viáveis. Por outro lado, P. acnes foi detectado por ambos os métodos nas amostras S2, com prevalência de 10% e 5% quando se utilizou rRNA e rDNA como molde para PCR, respectivamente. Nas amostras S3, P. acnes foi a única espécie detectada nos ensaios baseados em rRNA, presente em 10% dos casos, enquanto o método baseado em rDNA falhou em detectar essa espécie. Por sua vez, E. faecalis não foi detectado em nenhuma amostra pelos métodos utilizados. Portanto, concluise que a suscetibilidade bacteriana aos procedimentos endodônticos varia entre as espécies Gram-positivas. Enquanto Streptococcus spp. foram suscetíveis, P. acnes persistiu ativo em canais radiculares após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal. Esses dados sugerem que há necessidade de novas estratégias para a eliminação de espécies resisitentes ao tratamento endodôntico. / This study identified the presence and viability of Streptococcus spp., Enterococcus faecalis and Propionibacterium acnes before and after endodontic procedures, using the polymerase chain reaction (PCR) based on ribosomal RNA (rRNA) and their genes (rDNA ). Samples of 20 teeth with primary infection were collected before (S1) and after chemical-surgical preparation (S2), and after Ca(OH)2 as temporary dressing (S3). DNA and RNA were extracted from the same root canal sample and used as templates for PCR with specific primers for 16S rRNA region of the analyzed species. Streptococcus species were detected in 20% and 25% of the S1 samples using methods based on rRNA and rDNA, respectively; while P. acnes was only detected by analysis of rRNA, present in 10% of the samples S1. After chemicalsurgical preparation, Streptococcus spp. were detected in 10% of S2 samples when using rDNA as template, but they were not detected by the method based on rRNA, indicating the absence of viable cells. Furthermore, P. acnes was detected by both methods in samples S2, with a prevalence of 10% and 5% when using as template rRNA and rDNA for PCR, respectively. In S3 samples, P. acnes was the only species detected in assays based on rRNA, present in 10% of cases, while the rDNA-based method failed to detect this species. E. faecalis was not detected in any sample by the methods used. Therefore, it is concluded that bacterial susceptibility to endodontic procedures may vary among Gram-positive species. While Streptococcus spp. were susceptible, P. acnes persisted active in root canals after chemicalsurgical preparation and dressing. These data suggest the need for new strategies to eliminate resisitant species to endodontic treatment.

Considerando-se a necessidade da obturação tridimensional e o adequado selamento marginal do sistema de canais radiculares, como fatores decisivos para o êxito da terapia endodôntica, este estudo objetivou avaliar as respostas inflamatórias periapicais resultantes da infiltração coronária em dentes de cães obturados com diferentes cimentos resinosos (AH Plus®, RealSeal® e RealSeal SE®) e técnicas obturadoras (condensação lateral e termoplástica). Para tanto, pré-molares e incisivos centrais e laterais de 5 cães tiveram o tratamento endodôntico realizado empregando-se limas de NiTi e creme de Endo PTC associado ao hipoclorito de sódio a 1%, estabelecendo-se como limite de instrumentação à distância de 1mm a 1.5mm aquém do vértice radiográfico. A seguir os condutos foram obturados de acordo com os grupos experimentais (n=12) e grupos controles (n=10): GI- AH Plus/condensação lateral, GII- AH Plus/termoplástificação, GIIIRealSeal/ condensação lateral, GIV- RealSeal/ termoplástificação, GV- RealSeal SE/condensação lateral, GVI- RealSeal SE/ termoplástificação, Grupo controle positivo e Grupo controle negativo. As cavidades coronárias ficaram expostas ao meio bucal por um período de 75 dias e, passado este período experimental, os cães foram eutanásiados por superdosagem de anestésico. Foi realizada a remoção cirúrgica das partes correspondentes aos pré-molares e incisivos da maxila e da mandíbula, fixação das mesmas em solução de formol a 10% por 72h e desmineralização em solução de ácido fórmico a 20% + citrato de sódio a 10% pelo período mínimo de 90 dias. Posteriormente, realizou-se a rotina histológica com cortes seriados com espessura de 6m e estes foram corados com hematoxilina e eosina (HE). Cada corte histológico foi digitalizado e analisado em relação à existência de patologia periapical por três avaliadores independentes. Os dados obtidos foram confrontados estatisticamente utilizando o teste de Kruskal-Wallis seguido do teste comparativo de Dunn, observando-se que em relação às técnicas, a termoplástificação por ondas contínuas de condensação associada à técnica de injeção mostrou melhores condições periapicais quando comparada à técnica de condensação lateral (p=0.0055), sendo que a utilização desta técnica resultou em reações inflamatórias mais intensas para o cimento RealSeal SE (p=0.002). Em relação aos cimentos avaliados, o RealSeal SE mostrou-se menos eficaz em evitar a percolação, produzindo maiores níveis de inflamação crônica independentemente do sistema de obturação (p=0.0088). / Considering the need for three-dimensional obturations and adequate marginal sealing of the radicular canal system as being decisive factors for successful endodontic therapy, this study had as its objective the evaluation of periapical inflammatory responses resulting from coronary infiltration in dog\'s teeth obturated using different resin sealers (AH Plus, RealSeal and RealSeal SE) and different obturation techniques (lateral condensation and thermoplastic). For this study, premolars, central and lateral incisors from five dogs had endodontic treatment employing NiTi files and Endo PTC cream associated with 1% sodium hypochlorite. The working length was established at a distance of 1.0 to 1.5mm short of the radiographic apex. After this, the teeth were obturated according to their experimental groups (n=12) and control groups (n=10). The groups were defined as follows: GI - AH Plus/lateral condensation, GII - AH Plus/thermoplastic, GIII - RealSeal/lateral condensation, GIV - RealSeal/thermoplastic, GV - RealSeal SE/lateral condensation, GVI - RealSeal SE/ thermoplastic, a positive control group and a negative control group. The coronal access were left exposed to the oral environment for a period of seventy-five days, and after this experimental period, the dogs were euthanized by anesthetic overdose. The parts corresponding to the premolars and the maxilar incisors were surgically removed. These were then submitted to a solution of 10% formol for 72 hours and then demineralized in a solution of 20% formic acid and 10% sodium citrate for a minimum period of ninety days. Before hand, a histological routine of serial cuts having a width of 6m was undertaken and these were colored with hematoxilin and eosin (HE). Each histological cut was digitalized and analyzed with respect to the existence of periapical inflammation by three independent evaluators. The data obtained was statistically compared, firstly using the Kruskal-Wallis test and then the comparative Dunn test, where it was noted that in relation to the techniques, thermoplastification by continuous wave of condensation associated with the injection technique showed better periapical conditions than what was seen for the lateral condensation technique (p=0.0055). On the other hand, for the sealers evaluated, the condensation technique resulted in more intense inflammatory reactions when the sealer RealSeal SE was used (p=0.002). In relation to the sealers evaluated, RealSeal SE was seen to be less effective against percolation, thus producing greater levels of chronic inflammation irrespective of the obturation system employed (p=0.0088).

Micro-organismos persistentes que permanecem viáveis e em níveis elevados nos canais radiculares após os procedimentos endodônticos podem influenciar no sucesso do tratamento endodôntico. O objetivo deste estudo foi avaliar a quantidade e a atividade metabólica de bactérias persistentes utilizando métodos moleculares baseados em rDNA e rRNA. Foram selecionados 15 pacientes com infecções endodônticas primárias assintomáticas. Amostras microbiológicas foram coletadas dos canais radiculares após a cirurgia de acesso (S1), após o preparo químico-cirúrgico realizado com Sistema Reciproc e NaOCl 2.5% (S2) e após medicação intracanal com Ca(OH)2 por 14 dias (S3). As amostras dos canais radiculares foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa para confecção de DNA complementar (cDNA). O efeito dos procedimentos endodônticos na redução bacteriana foi determinado por qPCR baseada em rDNA, utilizando iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria e iniciadores espécie-específicos para Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272. A atividade metabólica de bactérias totais e Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 foi calculada pela razão rRNA/rDNA baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para análise quantitativa e teste de McNemar para comparação da taxa de detecção dos métodos, com nível de significância de 5%. Todas as amostras S1 foram positivas para bactérias totais, com uma mediana de 1,87 x 105 cópias de rDNA por amostra. Após o preparo químico-cirúrgico houve uma redução significativa de rDNA de bactérias totais (mediana 7,86 x 104, P = 0,01). Entretanto, não houve redução de rDNA bacteriano após a medicação intracanal quando comparada à etapa anterior (mediana 7,97 x 104, P > 0,05). Os resultados da razão rRNA/rDNA revelaram que houve uma redução do metabolismo de bactérias totais em S2 (mediana 1, P = 0,04) e um aumento do metabolismo bacteriano em S3 (mediana 2, P = 0,04). Na análise de Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272, o tratamento endodôntico não influenciou na redução nem no metabolismo bacteriano. Concluiu-se que o número total de bactérias foi drasticamente reduzido após o preparo químico-cirúrgico, assim como seu metabolismo. Entretanto, o metabolismo bacteriano aumentou após o uso da medicação intracanal com Ca(OH)2. Bacteroidaceae [G-1] sp. oral taxon 272 permaneceu metabolicamente ativo após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal, participando, assim, da composição da microbiota persistente. / High levels of microorganisms that persist viable in root canals after endodontic procedures may influence endodontic treatment outcome. This study aimed to evaluate the amount and the metabolic activity of persistent bacteria using rRNA- and rDNA-based molecular methods. Fifteen patients with primary endodontic infections were selected. Microbiological samples were taken from root canals after access cavity (S1), after chemomechanical preparation with Reciproc System and 2.5% NaOCl (S2) and after intracanal medication with calcium hydroxide for 14 days (S3). DNA and RNA were extracted from root canal samples, and cDNA was synthetized using reverse transcription reaction. The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR using universal primers for 16S rRNA Bacteria domain and species-specific primers to Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272. The metabolic activity of total bacteria and Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 was calculated by rRNA/ rDNA ratio estimated by qPCR. The data was analyzed by the Wilcoxon test for quantitative analysis and McNemar test for comparison of the detection rate of the methods, with 5% significance level. All S1 samples were positive for total bacteria, with a median value of 1.87 x 105 bacterial cells. After chemomechanical preparation a significant reduction of bacterial rDNA was observed (median 7.86 x 104, P = 0.01). Nevertheless, there was no bacterial rDNA reduction after intracanal medication when compared to S2 samples (median 7.97 x 104, P > 0.05). The rRNA/ rDNA ratio showed a reduction of total bacteria metabolism in S2 (median 1, P = 0,04), and an increase of bacterial metabolism in S3 (median 2, P = 0,04). Bacteroidaceae [G-1] sp oral taxon 272 analysis showed that endodontic treatment did not impact the amount and the metabolic activity of this taxon. In conclusion, the number and metabolism of total bacteria were severely reduced after chemomechanical preparation. On the other hand, the bacterial metabolism increased after intracanal dressing with Ca(OH)2. Bacteroidaceae [G-1] sp. oral taxon 272 remained metabolically active after chemomechanical preparation and intracanal dressing thus participating in the composition of the persistent microbiota.

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria Enterococcus faecalis em induzir periodontite apical no modelo experimental canino; verificar se o preparo químico-mecânico afeta a sobrevivência dessa bactéria no sistema de canais radiculares e avaliar o reparo desses dentes por meio de radiografia periapical e tomografia computadorizada cone beam. Dentes com e sem tratamento endodôntico foram avaliados por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 2 cães. A bactéria Enterococcus faecalis foi inoculada nos canais de 4 pré-molares superiores, 11 prémolares inferiores e 9 incisivos superiores. As câmaras pulpares foram seladas e, após 60 dias, os canais das raízes distais dos pré-molares e de 7 incisivos superiores foram submetidos a tratamento endodôntico em sessão única e os canais das raízes mesiais dos pré-molares e 2 incisivos superiores foram deixados sem tratamento (controle). Amostras microbiológicas foram feitas antes e após o preparo químico-mecânico. O reparo foi avaliado após 6 meses do tratamento mediante radiografias periapicais e por tomografia computadorizada cone beam. A comparação entre as imagens obtidas após o período experimental pelos 2 métodos foi feita por medições da área em mm2 de cada lesão encontrada, utilizando o software ImageTool Os resultados mostraram que a presença de periodontite apical crônica foi verificada em todos os dentes inoculados, independentemente da colonização pela bactéria Enterococcus faecalis ou pela flora mista. O preparo químico-mecânico reduziu significativamente o número de bactérias no interior dos canais radiculares (p<0.05). Os resultados radiográficos e tomográficos demonstraram lesões de menor diâmetro nos dentes tratados endodonticamente em comparação ao grupo controle (p<0.05). A comparação entre os métodos demonstrou diferença estatística entre eles sendo evidenciada áreas radiolúcidas maiores utilizando a tomografia cone beam em comparação com a radiografia periapical (p<0.05). Concluiu-se que a bactéria Enterococcus faecalis induziu periodontite apical crônica similarmente à flora mista; o tratamento endodôntico reduziu o número de bactérias cultiváveis significativamente embora sem relação com o reparo radiográfico. Os dentes tratados em sessão única apresentavam lesões menores em comparação aos não-tratados e as áreas das lesões observadas na TC cone beam foram maiores do que as áreas encontradas nas radiografias periapicais. A microscopia confocal e o método proposto neste estudo se mostraram eficazes para determinar, qualitativamente, a viabilidade bacteriana e a distribuição de ácidos nucléicos bacterianos dentro dos túbulos dentinários. Houve diferença entre a dentina infectada in vitro com o padrão de infecção in vivo, caracterizada pela presença de biofilmes aderidos à parede do canal radicular. / The aims of this study were to evaluate the Enterococcus faecalis ability to induce apical periodontitis in dogs root canals, to verify the bacterias ability to survive to the cleaning and shaping procedures and to assess the healing of the induced apical periodontitis by periapical radiograph and cone beam computed tomography. Also, endodontically treated and non-treated teeth were evaluated by confocal laser scanning microscope. Two mongrel dogs were used in the experiment. Enterococcus faecalis strain was inoculated into the root canals of 4 maxillary premolars, 11 mandibular premolars and 9 maxillary incisors. After 60 days the root canals of the distal roots of the mandibular and maxillary pre-molars and 7 maxillary incisors were endodontically treated. The premolars mesial root canal and 2 maxillary incisors were used as control (no treatment). Microbiologic samples were done after and before the cleaning and shaping procedure. The healing was evaluated after 6 months by periapical radiographs and cone beam computed tomography. The comparison between obtained images after the experimental period by the two methods was done using measures of the lesion area in mm2 with ImageTool software. The results showed the presence of chronic apical periodontitis in every inoculated teeth, with Enterococcus faecalis or mixed infection. The cleaning and shaping procedures reduced the number of bacteria of the root canals (p<0.05). The radiographic and tomographic results showed the lower diameter lesion in endodontically treated teeth than in the control group (p<0.05). The comparison between the methods showed statistical difference and greater radiolucent areas were evident in cone beam computed tomography images (p<0.05). It is possible to conclude that the bacteria Enterococcus faecalis induced chronic apical periodontitis as well as the mixed microflora; the endodontic treatment reduced the number of cultivable bacteria in a significant way, but with no relation to the radiographic healing. The treated teeth in only one session presented smaller lesions in comparison to the non-treated teeth and the lesions area in cone beam computed tomography were bigger than the areas found in periapical radiograph. The confocal microscopy and the proposed method of this study showed to be efficient to determine the bacterial ability and the distribution of bacterial nucleic acids inside the dentin tubules. There was difference between in vitro infected dentin with the in vivo infection pattern, which presents biofilm attached to the root canal walls.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parte 1.pdf: 1874528 bytes, checksum: 7e46501ade5b782c1d4f3f9926c18a43 (MD5) Previous issue date: 2006-11-30 / Control of the process of repair or progression of periapical lesions after endodontic treatment is monitored by conventional or digital radiography. In this research digital subtraction radiography (DSR) was used that uses the subtraction of images longitudinally, in which the change in the alveolar bone is visualized against a uniform gray background. The objectives of this study were: (1) to evaluate the repair process of periapical lesions after endodontic treatment by using DSR; (2) to quantify by means of point/pixel (picture element), area (histogram) and linear measures (profile line), the gain or loss of mineral density in the area of the lesion, using the average of the pixel values; (3) to compare the diagnostic information, suggestive of the repair process, obtained through a subjective evaluation of DSR with a conventional radiographic evaluation and digitalized image and (4) to evaluate the contribution of DSR to an early identification of the repair of periapical lesions after endodontic treatment. The sample consisted of twelve patients with a total of seventeen periapical lesions. The x-rays were digitalized and submitted to DSR using DSR&#61650; software. The pixel values of the subtracted images were determined by using Image Tool&#61650; software. Both the conventional x-rays as well as the digitalized and subtracted images were qualitatively evaluated. The results showed a gain in mineral density with a mean&#61617;dp of 133.49&#61617;5.17, 130.27&#61617;5.77 and 129.41&#61617;4.46 for the points/pixel, histogram and profile line tools, respectively. In the evaluation of numerical gain Pearson s Coefficient of Correlation (r) presented these values: mean of points/histogram = 0.746; mean of points/profile line = 0.724 and histogram/profile line = 0.860. When the numerical values were transformed into percentile gain mean&#61617;dp of 0.67&#61617;4.01, 1.21&#61617;4.33 and 1.16&#61617;3.36 were obtained for the points/pixels, histogram and profile line tools, respectively. In the evaluation of the percentile gain Spearman s Coefficient of Correlation (rs) showed the following values: mean of points/histogram = 0.697; mean of the points/profile line = 0.646 and histogram/profile line = 0.844. In the qualitative analysis, the frequency of success in the ordering of the correct sequence of the repair process using conventional radiography, digitalized image and DSR was 37.3%, 31.4% and 31.4%, respectively. One concluded, therefore, that: (1) the process of repair of periapical lesions after endodontic treatment can be evaluated quantitatively by means of longitudinal analysis using DSR; (2) any one of the three tools can be used to quantify the repair, considering that correlation exists between the time of repair and the increase of the value of pixel; (3) the comparative evaluation between the subjective methods using conventional radiography, digitalized image and SDR, it showed that all had been capable to evidence the process of repair of periapical lesions from the first radiography (15 days), not having difference between them and (4) the quantitative evaluation by SDR obtained to after evidence the beginning of the repair with 15 days the beginning of the endodontic treatment, even so this repair was really effective from 105 days after the beginning of the endodontic treatment. / O controle do processo de reparo ou progressão de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico é monitorado pelo exame radiográfico convencional ou digital. Nesta pesquisa foi utilizada a subtração digital radiográfica (SDR), que utiliza a subtração de imagens longitudinalmente, na qual a mudança no osso alveolar é visualizada contra um plano de fundo (background) cinza homogêneo. Os objetivos desse estudo foram: (1) avaliar o processo de reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico por meio de SDR; (2) quantificar por meio de ponto/pixel (picture element), área (histograma) e medida linear (perfil linha) na área da lesão, o ganho ou perda de densidade mineral por meio da média dos valores dos pixels; (3) comparar as informações diagnósticas, sugestivas do processo de reparo, obtidas por meio da avaliação subjetiva da SDR com a avaliação radiográfica convencional e imagem digitalizada; e (4) avaliar a contribuição da SDR na identificação precoce do reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico. A amostra constituiu-se de doze indivíduos totalizando dezessete lesões periapicais. As radiografias foram digitalizadas e submetidas à SDR utilizando o programa DSR&#61650;. As imagens subtraídas tiveram os valores de pixel determinados utilizando o programa Image Tool&#61650;. Tanto as radiografias convencionais quanto as imagens digitalizadas e subtraídas foram avaliadas qualitativamente. Os resultados evidenciaram ganho de densidade mineral com média&#61617;dp de 133,49&#61617;5,17; 130,27&#61617;5,77; 129,41&#61617;4,46 para as ferramentas ponto/pixel; histograma e perfil linha respectivamente. Na avaliação do ganho numérico o Coeficiente de Correlação de Pearson (r) mostrou valores de: média dos pontos/ histograma = 0,746; média dos pontos/ perfil linha = 0,724 e histograma/ perfil linha = 0,860. Quando os valores numéricos foram transformados em ganho percentual foram obtidas média&#61617;dp de 0,67&#61617;4,01; 1,21&#61617;4,33; 1,16&#61617;3,36 para as ferramentas ponto/pixel; histograma e perfil linha respectivamente. Na avaliação do ganho percentual o Coeficiente de Correlação de Spearman (rs) mostrou valores de: média dos pontos/ histograma = 0,697; média dos pontos/ perfil linha = 0,646 e histograma/ perfil linha = 0,844. Na análise qualitativa, a freqüência de acertos na ordenação da seqüência correta do processo de reparo usando radiografia convencional, imagem digitalizada e SDR foi de 37,3%; 31,4% e 31,4% respectivamente. Concluiu-se, portanto, que: (1) o processo de reparo de lesões periapicais pós-tratamento endodôntico pode ser avaliado quantitativamente por meio de análise longitudinal com SDR (2) qualquer uma das três ferramentas pode ser utilizada para quantificar o reparo, considerando que existe correlação entre o tempo de reparo e o aumento do valor de pixel; (3) a avaliação comparativa entre os métodos subjetivos, usando radiografia convencional, imagem digitalizada e a SDR, mostrou que todos foram capazes de evidenciar o processo de reparo de lesões periapicais desde a primeira radiografia (15 dias), não havendo diferença entre eles e (4) a avaliação quantitativa por meio de SDR conseguiu evidenciar o início do reparo com 15 dias após o início do tratamento endodôntico, embora esse reparo fosse realmente efetivo a partir de 105 dias após o início do tratamento endodôntico.

O objetivo deste estudo in vivo foi avaliar o reparo periapical e a expressão de mediadores inflamatórios após tratamento endodôntico em sessão única, dentes de cães com lesão periapical, utilizando protocolos de Irrigação por Pressão Apical Negativa, Irrigação Ultrassônica Passiva e Irrigação Convencional por Pressão Positiva. Um total de 80 canais radiculares de pré-molares de cães, com lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram submetidos ao tratamento endodôntico em sessão única ou mantidas sem tratamento. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 4 grupos: Grupo 1 - Irrigação por Pressão Apical Negativa (n=20 canais radiculares); Grupo 2 - Irrigação Ultrassônica Passiva (n=20 canais radiculares), Grupo 3 - Irrigação por Pressão Positiva (n=20 canais radiculares) e Grupo IV - Lesão periapical sem tratamento (n = 20 canais radiculares). Foi realizado os protocolos de irrigação com NaOCL 5,25% e instrumentação, utilizando limas Protaper rotatória F3-F4, em seguida os canais foram obturados com cimento AH Plus&reg;. Após 180 dias, os animais foram eutanasiados, as peças removidas e submetidas ao processamento histotécnico para análise imunohistoquímica para osteopontina, fator de necrose tumoral-&alpha; e interleucina 1-&alpha;. A análise radiográfica do reparo das lesões periapicais foi realizada por meio do Índice Periapical, obtido antes e 180 dias após o tratamento endodôntico. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Exato de Fisher ou Kruskal-Wallis seguido pelo pós-teste de Dunn. O nível de significância adotado foi de 5%. Aos 180 dias após o tratamento endodôntico, o exame radiográfico mostrou a persistência de áreas radiolúcidas periapicais e descontinuidade da lâmina dura em 35% dos espécimes do Grupo pressão apical negativa, 40% dos espécimes do Grupo ultrassônica passiva e 40% dos espécimes do Grupo pressão positiva. Porém, quando comparado às radiografias previamente ao tratamento, em todos os grupos, pôde-se observar uma redução no tamanho das lesões periapicais. Não houve diferença entre os grupos, independente do protocolo de irrigação utilizado (p > 0,05). O tratamento endodôntico realizado em sessão única, resultou na menor síntese do fator de necrose tumoral-&alpha; e de osteopontina na região periapical, comparativamente à lesão periapical sem tratamento (p < 0,05), independente do protocolo de irrigação utilizado (p > 0,05). A produção de interleucina-1&alpha; não foi modulada pelo tratamento endodôntico (p > 0,05). Com base nas metodologias empregadas e nos resultados obtidos no presente estudo in vivo, pôde-se concluir que houve reparo da lesão periapical em cerca de 60% dos casos após tratamento endodôntico realizado em sessão única e menor síntese do fator de necrose tumoral-&alpha; e de osteopontina na região periapical, comparativamente à lesão periapical sem tratamento, independente do protocolo de irrigação utilizado (pressão apical negativa, ultrassônica passiva e por pressão positiva) / The aim of this in vivo study was to evaluate the periapical repair and the expression of inflammatory mediators after endodontic treatment in dogs with periapical lesions using Negative Apical Pressure Irrigation, Passive Ultrasonic Irrigation and Conventional Positive Pressure Irrigation protocols. A total of 80 root canals of premolars of dogs with periapical lesions experimentally induced, were submitted to endodontic treatment in a single session, or maintained without treatment. The teeth were randomly divided into 4 groups: Group 1 - Irrigation by Pressure, Apical Negative (n=20 root canals); Group 2 - Irrigation, Ultrasonic, Passive (n=20 root canals), Group 3 - Irrigation by Positive Pressure (n=20 root canals), and Group IV - Lesion periapical without treatment (n = 20 root canals). Was done the protocols of irrigation with NaOCL 5.25% and instrumentation, using files Protaper rotatory F3- F4, then the channels were obturados with cement AH Plus&reg;. After 180 days, the animals were euthanized, the pieces removed and submitted to histotechnical processing for immunohistochemical analysis for osteopontin, tumor necrosis factor-&alpha; and interleukin 1-&alpha;. Radiographic analysis of the repair of the periapical lesions was performed using the Periapical Index, obtained before and 180 days after the endodontic treatment. The results were submitted to statistical analysis using Fisher\'s exact test or Kruskal-Wallis test followed by Dunn\'s post-test. The level of significance was 5%. At 180 days after the endodontic treatment, the radiographic examination showed the persistence of periapical radiolucent areas and discontinuity of the lamina dura in 35% of the negative apical pressure group, 40% of the passive Ultrasonic Group specimens and 40% of the positive pressure Group specimens. However, when compared to radiographs prior to treatment, in all groups, a reduction in the size of periapical lesions was observed. There was no difference between the groups, regardless of the irrigation protocol used (p> 0.05). Endodontic treatment performed in a single session resulted in the lower synthesis of tumor necrosis factor-&alpha; and osteopontin in the periapical region, compared to untreated periapical lesion (p 0.05). The production of interleukin-1&alpha; was not modulated by endodontic treatment (p> 0.05). Based on the methodologies used and the results obtained in the present in vivo study, it was concluded that the periapical lesion was repaired in about 60% of cases after endodontic treatment performed in a single session and lower synthesis of tumor necrosis factor-&alpha; and osteopontin in the periapical region, compared to the untreated periapical lesion, regardless of the irrigation protocol used (negative apical pressure, passive ultrasonic and positive pressure)

Procedimentos clínicos complementares realizados após o preparo químico-cirúrgico de canais radiculares visam potencializar a limpeza e desinfecção após a fase de preparo. O objetivo deste trabalho foi avaliar, por métodos moleculares baseados em rDNA e rRNA, a eficácia antimicrobiana de procedimentos complementares de primeira e de segunda sessão, realizados após o PQC em dentes com periodontite apical. Baseado em estudo piloto prévio, amostras microbiológicas dos canais radiculares de 20 dentes unirradiculares com periodontite apical foram coletadas na primeira sessão clínica: após a cirurgia de acesso (S1), após o PQC realizado com Sistema Reciproc e NaOCl 2,5% (S2), após a utilização do instrumento XP-endo Finisher (S3a), e após a ativação ultrassônica (S3b). Na segunda sessão clínica as amostras foram coletadas após medicação intracanal entre sessões por 14 dias (S4), e após o repreparo dos canais na segunda sessão de tratamento (S5). As amostras foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa (RT-PCR) para confecção da fita dupla de DNA complementar (cDNA). DNA e cDNA foram submetidos a reações de qPCR, com iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria. A atividade metabólica das bactérias foi verificada através da relação entre os níveis de rRNA e rDNA das amostras baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para amostras pareadas (p < 0,05). Todas amostras S1 foram positivas para bactérias (mediana: 1,79 x 105 cópias de rDNA). Doze canais (60%) permaneceram infectados em S2, com uma redução significativa de rDNA (mediana: 7,58 x 103; P = 0,0001). Em S3a e S3b, o número de canais infectados reduziu para 11 (55%) e 10 (50%), respectivamente, e aumentou para 14 (70%) em S4; porém não houve diferenças significativas entre os níveis de rDNA bacteriano quando essas amostras foram comparadas às amostras S2 ou comparadas entre si (P > 0,05). A prevalência de canais infectados voltou a cair em S5 para 6 (30%) e o número cópias de rDNA bacteriano detectado reduziu de maneira significativa quando comparado às amostras S4 (p = 0,0061). Nas amostras positivas para os 2 métodos, os níveis de rRNA foram significativamente maiores do que os níveis de rDNA nas amostras S1 (p = 0,0007) e S4 (p = 0,0499), indicando um alto metabolismo bacteriano. A relação dos níveis de rRNA e de rDNA revelou uma redução do metabolismo de bactérias totais em S2, S3a e S3b e um aumento significativo do metabolismo bacteriano em S4 (p = 0,0173) quando comparado a S3b. Concluiu-se que: o PQC promoveu redução dos níveis e da atividade metabólica de bactérias nos canais radiculares; o uso do instrumento XP-endo Finisher e ativação ultrassônica não contribuiu para uma desinfecção adicional na primeira sessão; após o uso de Ca(OH)2 como medicação intracanal, houve um aumento no metabolismo de bactérias persistentes; o repreparo dos canais radiculares após medicação intracanal, na segunda sessão, promoveu maior desinfecção do que os procedimentos realizados na primeira sessão do tratamento de dentes com periodontite apical. / Supplementary procedures performed after the chemical-surgical preparation of root canals aim to enhance cleaning and disinfection in endodontic treatment. The objective of this clinical study was to evaluate using molecular microbiological techniques based on rDNA and rRNA, the antimicrobial efficacy of supplementary disinfection procedures performed in multiple sessions after the chemical-surgical preparation in teeth with apical periodontitis. Based on a previous pilot study, microbiological samples of the root canals of 20 unirradicular teeth with apical periodontitis were taken after the access surgery (S1), after the chemical-surgical preparation using Reciproc and 2,5% NaOCl (S2) after the XP-endo Finisher (S3a), after ultrasonic activation (S3b), after intracanal medication for 14 days (S4), and after re-preparation of the root canals in the second treatment appointment (S5). The samples were submitted to DNA and RNA extraction. The RNA was subjected to the reverse transcription reaction (RT-PCR) to make the complementary DNA double strand (cDNA). The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR using universal primers for the 16S rRNA region of the Bacteria domain. The metabolic activity of the bacteria was assessed by the rRNA/rDNA ratio based on qPCR assay data. Data were analyzed by the Wilcoxon signed-rank test (P < 0.05). All S1 samples were positive for bacteria (median 1.79 x 105 rDNA copies). Twelve root canals (60%) remained infected in S2, with a significant reduction of rDNA (median: 7.58 x 103; P = 0.0001). In S3a and S3b, the number of infected teeth decreased to 11 (55%) and 10 (50%), respectively, and increased to 14 (70%) in S4; however there were no significant differences between bacterial rDNA levels when these samples were compared to the S2 samples or compared to each other (P> 0.05). The prevalence of infected canals dropped back to 6 (30%) in S5 and the number of bacterial rDNA detected significantly reduced when compared to S4 samples (p = 0.0061). In samples with positive reactions for both methods, rRNA levels were significantly higher than the rDNA levels in S1 (p = 0.0007) and S4 (p = 0.0499), indicating a high metabolic activity of bacteria. The results of the rRNA/rDNA ratio revealed a reduction in the metabolism of total bacteria in S2, S3a and S3b and a significant increase in metabolic activity of bacteria in S4 (p = 0.0173) when compared to S3b. It was concluded that: PQC promoted reduction of the levels and metabolic activity of bacteria in the root canals; the use of XP-endo Finisher plus ultrasonic activation did not contribute to an additional disinfection in the first session; after the use of Ca(OH)2 as intracanal medication, there was an increase in the metabolismo of persistente bacteria; the repreparation of the root canals in the second session after the use of intracanal medication, promoted greater disinfection than the procedures performed in the first session of the treatment of teeth with apical periodontitis.

Durante o preparo químico-cirúrgico são utilizados instrumentos e substâncias químicas, que constituem um binômio indivisível e necessário para alcançar a modelagem e a sanificação dos canais radiculares. Assim, propõe-se com este trabalho avaliar in vivo, por meio de método molecular de PCR quantitativo, baseado em DNA (qPCR), a eficiência do preparo químico-cirúrgico empregando como agente de irrigação o Hipoclorito de Sódio (NaOCL) a 2,5% ou o Gel de Endo PTC associado ao Hipoclorito de Sódio a 1,0% na redução bacteriana de canais radiculares de dentes portadores de periodontite apical primária. Foram selecionados 30 pacientes portadores de infecção endodôntica primária, totalizando 30 dentes, com rarefação óssea periapical visível na radiografia, sem tratamento endodôntico prévio. Os pacientes foram divididos de forma randomizada em dois grupos distintos, de acordo com a substância química auxiliar utilizada durante a instrumentação, NaOCL 1% + Endo-PTC leve ou NaOCL 2,5%. Em todos os casos empregou-se instrumentos Reciproc R40 ou R50 e as coletas foram realizadas antes (S1) e após o prepare químico-cirúrgico (S2). A análise de aderência foi realizada por meio do teste de Kolmogorov-Smirnov, as análises intragrupo foram realizadas com teste de Wilcoxon para amostras relacionadas e as comparações entre os dois grupos foram realizadas com o teste de Mann-Whitney, para a análise quantitativa de bactérias. Em ambos os grupos, houve diminuição significativa no número de bactérias entre S1 e S2 (p<0,05). No grupo NaOCL 1% + Endo-PTC leve, houve redução de 3,7x105(S1) para 5,7x104 (S2). No grupo NaOCl 2,5%, redução de 1,3x105 (S1) para 1,1x104(S2). Na comparação entre grupos, o NaOCL a 2,5% (91,62%) promoveu maior redução bacteriana do que o grupo NaOCL 1% + Endo-PTC (84,60%) (p<0,05). / During the chemomechanical preparation, instruments and chemical substances are used, which constitute an indivisible and necessary binomial to achieve modeling and sanification. Knowing the auxiliary chemical substances, understanding their mechanisms of action, being able to use them efficiently, is fundamental, so that the chemical-surgical preparation is well performed by the clinician. Thus, the purpose of this study is to evaluate in vivo, the efficiency of the chemomechanical preparation using as the irrigant agent 2,5% sodium hypochlorite and Endo-PTC gel, associated to 1% sodium hypochlorite, to assess the bacterial reduction of root canals of teeth with primary apical periodontitis, using a molecular quantitative method DNA-based - polymerase chain reaction (qPCR). Were selected 30 patients with primary infection totaling 30 teeth, with visible periapical bone rarefaction on the radiography, without previous endodontic treatment. Patients were randomly divided into two distinct groups according to the auxiliary chemical substances used during the instrumentation, 1% sodium hypochlorite associated with Endo-PTC gel or 2,5% sodium hypochlorite. In all cases, reciproc instruments R40 or R50 were used and the samples were taken before (S1) and after chemical surgical preparation (S2). The adherence analysis was performed using the Kolmogorov-Smirnov test, intragroup analysis were performed with Wilcoxon test for related samples and comparisions between the two groups were performed with the Mann-Whitney test for the quantitative analysis of bacteria. In the both groups, there was a significant decrease in the number of bacteria between S1 and S2 (p<0,05), the inicial sample (S1) of the group Endo-PTC, the median 3,7x105, reduced to 5,7x104. In the other group of NaOCl, the median in S1 was 1,3x105 that reduced to 1,1x104 . In the comparision between groups, the 2,5% NaOCl promoted a greater microbial reduction of 91,62%, than the Endo-PTC associated with 1% NaOCl (p<0,05) 84,60%.

Durante o preparo químico-cirúrgico são utilizados instrumentos e substâncias químicas, que constituem um binômio indivisível e necessário para alcançar a modelagem e a sanificação dos canais radiculares. Assim, propõe-se com este trabalho avaliar in vivo, por meio de método molecular de PCR quantitativo, baseado em DNA (qPCR), a eficiência do preparo químico-cirúrgico empregando como agente de irrigação o Hipoclorito de Sódio (NaOCL) a 2,5% ou o Gel de Endo PTC associado ao Hipoclorito de Sódio a 1,0% na redução bacteriana de canais radiculares de dentes portadores de periodontite apical primária. Foram selecionados 30 pacientes portadores de infecção endodôntica primária, totalizando 30 dentes, com rarefação óssea periapical visível na radiografia, sem tratamento endodôntico prévio. Os pacientes foram divididos de forma randomizada em dois grupos distintos, de acordo com a substância química auxiliar utilizada durante a instrumentação, NaOCL 1% + Endo-PTC leve ou NaOCL 2,5%. Em todos os casos empregou-se instrumentos Reciproc R40 ou R50 e as coletas foram realizadas antes (S1) e após o prepare químico-cirúrgico (S2). A análise de aderência foi realizada por meio do teste de Kolmogorov-Smirnov, as análises intragrupo foram realizadas com teste de Wilcoxon para amostras relacionadas e as comparações entre os dois grupos foram realizadas com o teste de Mann-Whitney, para a análise quantitativa de bactérias. Em ambos os grupos, houve diminuição significativa no número de bactérias entre S1 e S2 (p<0,05). No grupo NaOCL 1% + Endo-PTC leve, houve redução de 3,7x105(S1) para 5,7x104 (S2). No grupo NaOCl 2,5%, redução de 1,3x105 (S1) para 1,1x104(S2). Na comparação entre grupos, o NaOCL a 2,5% (91,62%) promoveu maior redução bacteriana do que o grupo NaOCL 1% + Endo-PTC (84,60%) (p<0,05). / During the chemomechanical preparation, instruments and chemical substances are used, which constitute an indivisible and necessary binomial to achieve modeling and sanification. Knowing the auxiliary chemical substances, understanding their mechanisms of action, being able to use them efficiently, is fundamental, so that the chemical-surgical preparation is well performed by the clinician. Thus, the purpose of this study is to evaluate in vivo, the efficiency of the chemomechanical preparation using as the irrigant agent 2,5% sodium hypochlorite and Endo-PTC gel, associated to 1% sodium hypochlorite, to assess the bacterial reduction of root canals of teeth with primary apical periodontitis, using a molecular quantitative method DNA-based - polymerase chain reaction (qPCR). Were selected 30 patients with primary infection totaling 30 teeth, with visible periapical bone rarefaction on the radiography, without previous endodontic treatment. Patients were randomly divided into two distinct groups according to the auxiliary chemical substances used during the instrumentation, 1% sodium hypochlorite associated with Endo-PTC gel or 2,5% sodium hypochlorite. In all cases, reciproc instruments R40 or R50 were used and the samples were taken before (S1) and after chemical surgical preparation (S2). The adherence analysis was performed using the Kolmogorov-Smirnov test, intragroup analysis were performed with Wilcoxon test for related samples and comparisions between the two groups were performed with the Mann-Whitney test for the quantitative analysis of bacteria. In the both groups, there was a significant decrease in the number of bacteria between S1 and S2 (p<0,05), the inicial sample (S1) of the group Endo-PTC, the median 3,7x105, reduced to 5,7x104. In the other group of NaOCl, the median in S1 was 1,3x105 that reduced to 1,1x104 . In the comparision between groups, the 2,5% NaOCl promoted a greater microbial reduction of 91,62%, than the Endo-PTC associated with 1% NaOCl (p<0,05) 84,60%.