Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-03-04T19:06:35Z No. of bitstreams: 1 2014_EderAlvesBarbosa.pdf: 4378638 bytes, checksum: 00877b1f9ca18fc438dfee9ec43f6fb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-04-29T21:01:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_EderAlvesBarbosa.pdf: 4378638 bytes, checksum: 00877b1f9ca18fc438dfee9ec43f6fb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_EderAlvesBarbosa.pdf: 4378638 bytes, checksum: 00877b1f9ca18fc438dfee9ec43f6fb0 (MD5) / Esse trabalho descreve um modelo experimental o qual emprega análises da expressão de peptídeos da secreção cutânea de anfíbios, com enfoque nas variações dos níveis de transcrição de genes de interesse e no mapeamento de peptídeos estocados nas glândulas granulares. A partir desse modelo, foram utilizadas ferramentas de biologia molecular e espectrometria de massa para investigar processos de maturação das glândulas granulares em Phyllomedusa azurea durante a metamorfose e para avaliar como esse anfíbio responde a diferentes estímulos. Os resultados evidenciam a presença dos peptídeos no tecido cutâneo, em pequenas concentrações, apenas a partir do estágio 41 de desenvolvimento. Um súbito aumento da concentração de peptídeos na pele de P. azurea é observado quando este migra para o hábitat terrestre. Contudo, mesmo logo após o término da metamorfose, as glândulas granulares não apresentaram o mesmo padrão de conteúdo peptídico do animal adulto. Os resultados indicam também que glândulas individuais armazenam um conteúdo próprio e que a presença de microrganismos modula tanto os processo de transcrição gênica, quanto os de tradução e estocagem de peptídeos. Ainda, fundamentado no modelo experimental proposto, a expressão diferencial de peptídeos nas glândulas granulares dorsais e inguinais foi investigada em anfíbios adultos da espécie Physalaemus nattereri. Observa-se, a partir dos resultados, que peptídeos antimicrobianos foram flagrados uniformemente distribuídos ao longo de todo o tecido cutâneo de P. nattereri, ao passo que os peptídeos relacionados a bradicininas são preferencialmente sintetizados nas glândulas inguinais. Isto sugere uma fina sintonia entre o sistema fisiológico e o comportamento deimático apresentado por esse anfíbio. O modelo experimental apresentado aqui pode ser estendido a outros grupos de animais, assim como, em experimentos que envolvam questionamentos relacionados a interações peptídeos/proteínas em tecidos das mais diversas origens. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present work describes a strategy that involves peptide frog skin expressing analysis, based on RNA transcription level measurement and glandular peptide skin mapping, to respond biological relevant questions. The chosen experimental model is based on molecular biology and mass spectrometry techniques to investigate granular glands maturation process of Phyllomedusa azurea through metamorphose and the peptide skin composition when this anuran is submitted to biotic stress. The results show that larvae of P. azurea on stage 37 presents right levels of RNA transcriptions, although low concentration of peptides were identified on skin just from stage 41. There was a sudden increased peptide skin concentration when P. azurea migrates to terrestrial habitat (stage 43). But, after metamorphose end, the standard glandular peptide content of juvenile frogs is different from adult frogs. The results show that individual glands have an intrinsic peptide content stored and that the microorganisms can alter the transcriptional level processes, as well as, the peptide skin gland content. The same experimental model was applied to investigate the differential peptide expression on granular glands and inguinal macro glands from Physalaemus nattereri. The results show that the antimicrobial peptides are present on entire animal skin, while the bradykinin related peptides are present mainly on inguinal macro glands. Our finding suggest an amazing fine-tuning among animal behavior, skin physiology and gene expression. The experimental model introduced here represents an alternative strategy for differential gene expression analysis and peptide interaction identification directly on biological tissue that can be applied on different animal models.

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Orientador: Shirlei Maria Recco Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:30:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruschi_DanielPacheco_D.pdf: 18653513 bytes, checksum: 6cab8e91377d38b25d3a8a77e634c16a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Dificuldades na identificação de populações e delimitação taxonômica de espécies, evidências de espécies crípticas e padrões biogeográficos diversos fazem dos anuros gênero Phyllomedusa (Hylidae, Phyllomedusinae) um interessante candidato a estudos taxonômicos e evolutivos. Na presente tese, foram realizados estudos visando acessar diferentes níveis de diferenciação entre os táxons e possibilitar inferência de eventos e processos envolvidos na diversificação das espécies, contribuindo no melhor entendimento das questões taxonômicas e evolutivas do gênero. Utilizando citogenética, filogenia molecular e filogeografia, investigamos aspectos da evolução cromossômica e molecular em representantes do gênero Phyllomedusa. No primeiro capítulo avaliamos o status taxonômico de populações atribuídas à P. hypochondrialis e P. azurea, utilizando dados morfológicos, cromossômicos e filogenia molecular. Reforçamos a dificuldade de distinção entre estas duas espécies baseado somente em seus caracteres de diagnose, já que estes se sobrepõem quando a amostragem é ampliada. Destacamos variações inter- e intrapopulacionais na posição da NOR em P. hypochondrialis. No segundo capítulo, para entender essa variação em P. hypochondrialis, delimitar as populações brasileiras de P. azurea e estimar a diversidade genética entre populações de P. nordestina, foi realizada uma análise filogeográfica dessas três espécies. As inferências filogenéticas indicaram forte estruturação regional entre as populações de P. hypochondrialis amostradas, recuperando quatro clados bem suportados. Processos demográficos históricos foram importantes na distribuição das variações de NOR, sendo que os clados demograficamente estáveis exibiram conservada posição de NOR no par 8, enquanto as populações que experenciaram eventos de rápida expansão demográfica exibiram variação neste marcador. A história evolutiva dessa espécie foi influenciada pela interação entre eventos geomorfológicos na transição Mioceno-Plioceno, que persistiram por episódios de flutuações climáticas ocorridas durante o Pleistoceno. As populações distribuídas dentro de domínios de cerrado demostraram uma recente colonização durante o Pleistoceno, sendo que hipotetizamos que sucessivos ciclos de expansão/retração de matas de galeria permitiram a colonização desta linhagem neste bioma. Recuperamos P. azurea parafilética em relação à P. nordestina. Interessantemente, os dois clados divergentes de P. nordestina estão separados pelo rio São Francisco (SF), definindo um clado localizado na margem esquerda e outro na margem direita desse rio. A estimativa do tempo de divergência entre estes dois grupos são condizentes com o reposicionamento histórico do curso deste rio no nordeste brasileiro, que deve ter contribuído no isolamento destes grupos por um processo de vicariância. Esta barreira geográfica teve papel fundamental na divergência entre as duas linhagens, suportada pelo alto nível de diferenciação entre os grupos de margens opostas do rio e ausência de fluxo gênico entre os grupos. Sugerimos futura reavaliação da taxonomia de populações distribuídas na margem esquerda do rio SF. A história evolutiva de P. azurea, foi marcada por um profundo evento de perda de diversidade genética, que deve ter contribuído para a rápida fixação dos alelos exclusivos encontrados nesta população. No terceiro capítulo, uma abordagem integrativa foi utilizada para descrição de uma nova espécie, filogeneticamente relacionada às espécies do grupo de P. hypochondrialis que habitam ambientes de altitude, condizente com a área na qual o táxon foi encontrado, revelando um interessante padrão biogeográfico. No quarto e quinto capítulo, descrevemos citogeneticamente cinco espécies (P. vaillantii, P. tarsius, P. bahiana, P. distincta e P. ayeaye). Observamos cariótipos conservados, possibilitando o reconhecimento de homeologias cromossômicas. Apesar de ainda existirem lacunas na citogenética do gênero, variações interessantes na posição da NOR reportam uma alta razão de transposição de sítios de rDNA no genoma destes representantes e alertam para seu papel na evolução cromossômica no gênero / Abstract: We conducted cytogenetic, phylogenetic and phylogeographical studies to investigate aspects of chromosomal and molecular evolution in the Neotropical tree frogs of the genus Phyllomedusa genus (Hylidae, Phyllomedusinae), which have been the subject of extensive taxonomical debate. In the first chapter, the study focuses on the morphological variation found in populations attributed to P. hypochondrialis, and examines whether this variation is interspecific or inter-population. The results of this analysis support the need for a thorough revision of the phenotypic features used to discriminate P. azurea and P. hypochondrialis, given the considerable overlap found in these characters when more populations are samples. We also report inter- and intra-population variability in the NOR of P. hypochondrialis. In the second chapter, we use phylogeographic approaches to evaluate the source of the karyotype variation found within P. hypochondrialis, provide a better delimitation of the Brazilian populations of P. azurea, and estimate the genetic diversity within P. nordestina. These three species are closely related, but are associated with distinct South American morphoclimatic domains. Our results reveal a deep genetic structuring in the P. hypochondrialis populations, based four well-supported clades with a low migration signal among haplogroups. The evolutionary history of this species has been influenced by the interaction between the geomorphological changes occurring in the Miocene-Pliocene that have persisted through the episodes of climatic fluctuation that occurred during the Pleistocene. The populations of the Cerrado domain appear to have colonized this region during the Pleistocene period, when successive cycles of forest expansion and retraction may have facilitated expansion into this biome via gallery forests. We were able to recognize two cryptic lineages within the P. nordestina populations, differentiated by the São Francisco River in northeastern of Brazil. Estimates of coalescence time indicated a process of divergence between two geographic clades of P. nordestina during the Pliocene-Pleistocene transition, which is temporally congruent with historical modifications to the course of the São Francisco River. This geographic barrier has had a primary role in the divergence of lineages, supported by the high differentiation between populations from opposite margins of the river and the absence of gene flow between haploclades. A strong signature of genetic decline marks the evolutionary history of the Brazilians populations of P. azurea. While more extensive surveys are needed, Brazilian populations of this species appear to be restricted to the Pantanal biome. In the third chapter, we describe a new species of the P. hypochondrialis group, diagnosed using molecular, morphological and chromosomal approaches. The new species is closely related phylogenetically with all the highland species of the clade, revealing an interesting biogeographical pattern. Finally, in chapters four and five, we present cytogenetic data on four species of the genus Phyllomedusa (P. vaillantii, P. tarsius, P. distincta, P. bahiana and P. ayeaye). We found conservative karyotypes, permitting the recognition of chromosomal homologies. Despite the gaps in the chromosomal studies of this genus, the inter- and intraspecific variation found in the number and location of rDNA sites reflects the rapid rate of evolution of this character in Phyllomedusa, and highlights the important role of this sequence in the chromosomal evolution of this genus / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biologias, Programa de Pós Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-20T15:20:30Z No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / A secreção cutânea de anuros é reconhecida como uma rica fonte de compostos biologicamente ativos, incluindo aminas biogênicas, alcaloides, bufadienolídeos, peptídeos e proteínas. Os peptídeos antimicrobianos constituem um sistema de defesa imediato, atuando sobre um grande espectro de mircroorganismos. A busca por novas alternativas terapêuticas no tratamento de infecções e câncer tem impulsionado nos estudos voltados à prospecção de novos peptídeos antimicrobianos. No presente trabalho, as secreções cutâneas de Leptodactylus labyrinthicus e Phyllomedusa azurea foram utilizadas para avaliar seus efeitos antiproliferativos e citotóxicos sobre células tumorais. Também foram submetidas a fracionamento cromatográfico a fim de se isolar peptídeos com atividade inibitória sobre a proliferação do fungo patogênico Candida albicans. As frações bioativas foram analisadas por MALDI-TOF MS e submetidas à recromatografia por RP-HPLC. De acordo com a estratégia experimental empregada foi possível a obtenção de duas frações homogêneas a partir da secreção de P. azurea, denominadas PaF31-7(F12) e PaF36-10(F13) que foram empregadas na determinação dos MICs para C. albicans. Tais frações mostraram-se capazes de inibir parcialmente o crescimento da levedura C. albicans na maior concentração empregada (128 µM). Também foram avaliados os efeitos citotóxicos e antiproliferativos das secreções brutas de P. azurea e L. labyrinthicus sobre as linhagens celulares HeLa, B16F10 e NIH3T3. Observou-se que a secreção bruta de L. labyrinthicus apresenta atividade antiproliferativa acentuada sobre células tumorais empregadas, especialmente células Hela, com um IC50 de 4,216 µg/mL sem apresentar citotoxicidade relevante contra células normais da linhagem NIH3T3. Ensaios adicionais de citometria de fluxo revelaram que a secreção bruta de L. labyrinthicus não interfere de forma significativa nas etapas do ciclo celular, no entanto, observa-se um aumento importante na fragmentação do DNA de células HeLa quando expostas à secreção, sugerindo que a morte celular ocorra por meio de apoptose. Mais estudos precisam ser realizados a fim de se determinar o mecanismo pelo qual a secreção bruta de L. labyrinthicus promove a morte das células tumorais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The anurans skin secretion is recognized as a rich source of active biological compounds, including alkaloids, peptides and proteins. The antimicrobial peptides constitute an immediate defense system, acting on a wide spectrum of microorganisms. The quest for new therapeutics alternatives for infections treatments and cancer have been driven studies focused on prospecting for new antimicrobial peptides. In this present work, the skin secretions by Leptodactylus labyrinthicus and Phillomedusa azurea were utilized for evaluating their antiproliferative and cytotoxic effects on tumor cells. Were also subjected the skin secretion to fractionation in order to isolate peptides with inhibitory activity on the proliferation of the pathogenic fungus Candida albicans. The bioactive fractions were analyzed by MALDI-TOF MS, and subjected to rechromatography by RP-HPLC. According to the experimental strategy used was possible to achieve two homogeneous fractions secretion from P. azurea, called PaF31 7 (F12) and PaF36 10 (F13). These fractions were capable of partially inhibiting the growth of the yeast C. albicans in greater concentration employed (128 μM). We also evaluated the cytotoxic and antiproliferative crude secretions of P. azurea and L. labyrinthicus on cell lines HeLa, NIH3T3 and B16F10 effects. It was found that the crude secretion of L. labyrinthicus shows marked antiproliferative activity on tumor cells employed, especially Hela cells with an IC50 of 4.216 μ g / ml without showing significant cytotoxicity against normal NIH3T3 cells lineage. Additional tests of flow cytometry showed that the crude secretion of L. labyrinthicus not significantly interfere with the stages of the cell cycle, however, there was a significant increase in DNA fragmentation in HeLa cells exposed to secretion, suggesting that cell death occurs by apoptosis. More studies need to be conducted to determine the mechanism by which the crude secretion of L. labyrinthicus promotes tumor cell death.

Orientadores: Shirlei Maria Recco-Pimentel, Carmen Sílvia Busin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T01:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruschi_DanielPacheco_M.pdf: 3876863 bytes, checksum: 337679c24ea52e966f84be587a0058cb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A taxonomia e as relações de parentesco em Phyllomedusa são temas de constantes discussões. Hipóteses sobre os relacionamentos intra- e interespecíficos desse gênero decorrem basicamente de análises morfológicas e comportamentais, o que não têm sido suficiente para responder alguns dos questionamentos. O grupo de P. hypochondrialis, o maior dentro do gênero, apresenta dificuldades na sua delimitação e, até o momento, não foi observada nenhuma sinapomorfia que possa reunir as espécies atualmente alocadas no grupo, de maneira que outras ferramentas podem ser elucidativas para resolução dessa problemática. O presente trabalho teve como objetivo utilizar dados citogenéticos e de sequências de DNA mitocondrial para o estudo de algumas das espécies do grupo de P. hypochondrialis. Todos os espécimes apresentaram o número diplóide 2n=26 e morfologia dos cromossomos bastante conservada, o que permitiu a inferência de homeologias cromossômicas. Exceto nas populações de Phyllomedusa sp. (aff. azurea) que apresentam o par 7 submetacêntrico, os cariótipos das demais populações analisadas foram constituídos por seis pares metacêntricos (1, 4, 8, 11-13), seis submetacêntricos (2, 3, 5, 6, 9, 10) e um subtelocêntrico (par 7). A diferença detectada no par 7 pode ser atribuída à presença de uma NOR nos braços curtos dos cromossomos 7 submetacêntricos. Pequenas variações na morfologia de alguns pares cromossômicos, incluindo a localização da NOR, foram observadas em P. rohdei de Ilhéus/BA em relação à descrita por outros autores, corroborando a hipótese da provável existência de espécies crípticas sob esse nome. O cariótipo de P. nordestina se diferenciou dos demais principalmente pela grande quantidade de heterocromatina e pela posição da NOR em 9p. A análise de morfologia externa relativa aos dois caracteres indicados para diagnose e separação de P. hypochondrialis e P. azurea, aplicados a todos os espécimes de diferentes localidades brasileiras, mostrou variações intrapopulacionais não acompanhadas de variações citogenéticas e moleculares. Esses dados apontam a necessidade de uma re-avaliação desses caracteres de diagnose e separação para essas espécies. A análise conjunta de dados citogenéticos e moleculares das populações permitiu identificar a população de Belterra/PA como P. hypochondrialis, portadora de NOR intersticial em 8p. Dados moleculares sugerem que as populações de Uberlândia (Minas Gerais), de São Luís, Bacabeira e Urbano Santos (Maranhão) e de Porto Nacional (Tocantins) possivelmente correspondam a um mesmo táxon, P. azurea. Nesse caso, a NOR em 7p nas populações ao Norte (Maranhão e Tocantins) e em 4p ao sudeste (Minas Gerais) corresponderia a variação interpopulacional. Na análise filogenética molecular, os haplótipos de Chapada dos Guimarães + Santa Terezinha (Mato Grosso) formaram um clado e as populações de Laranjal do Jari (Amapá) e de Prainha (Pará) formaram cada uma um ramo independente. Os dados dessas quatro populações (portadoras de NOR pericentromérica em 8q) sugerem que uma revisão minuciosa deva ser realizada para auxiliar no esclarecimento de seus status taxonômicos. / Abstract: Taxonomy and phylogenetic relationships of Phyllomedusa have been subject of continuous discussions. Hypotheses about the intra- and interspecific relationships within this genus have basically arised from morphological and behavioral characteristics, which have not been enough to elucidate the problems as the assigning of species to the P. hypochondrialis group. So, other tools may help to solve this problem. This work aimed to contribute with cytogenetic analysis and mitochondrial DNA sequencing data to the understanding of intra- and interspecific relationships involving the species P. rohdei, P. nordestina, P. hypochondrialis and P. azurea of the P. hypochondrialis group. These species showed the same chromosome number, 2n=26, with a very similar morphology. All populations had karyotypes with six metacentric (1, 4, 8, 11-13), six submetacentric (2, 3, 5, 6, 9, 10) pairs and one subtelocentric pair (7). The populations of Phyllomedusa sp. (aff. azurea) from São Luis, Bacabeira, Urbano Santos (Maranhão state) and Porto Nacional (Tocantins state) had the pair 7 submetacentric. This morphological difference in pair 7 can be attributed to the Nucleolus Organizer Region (NOR) that is located only in the submetacentric pair 7. The karyotype of P. nordestina was distinguished from P. rohdei by the large amount of heterochromatin and by the position of the NOR in chromosome 9p, whereas in P. rohdei it is located in 9q. The karyotype of P. rohdei also differed from that described by other author, suggesting the existence of cryptic species. Brazilian populations of P. azurea, P. hypochondrialis and other populations related to those species were analyzed. Intrapopulational variations in characters of external morphology were not associated with cytogenetic and molecular variations, showing that it is necessary a reevaluation of the diagnosis and separation characters for those species. The combined analysis of molecular and cytogenetic data allowed classifying the population of Belterra/PA as P. hypochondrialis, with NOR in pair 8p. Molecular data suggested that populations from Uberlândia (Minas Gerais), São Luiz, Bacabeira e Urbano Santos (Maranhão) and Porto Nacional (Tocantins) probably correspond to the taxon P. azurea. By comparing the karyotype of specimens from North populations (Maranhão and Tocantins) and from Southeast populations (Minas Gerais) different NOR positions were observed and interpreted as an interpopulational variation. The genetic diversity observed among populations with pericentromeric NOR in 8q (Laranjal do Jari, Prainha and Chapada dos Guimarães + Santa Terezinha; three clades in the molecular phylogenetic analysis) suggests that these populations could be in incipient process of speciation. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-02-15T19:56:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcologiaTroficaReprodutiva.pdf: 1028405 bytes, checksum: 7a8df0bac847a39167345a69720b38c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-02-18T15:54:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcologiaTroficaReprodutiva.pdf: 1028405 bytes, checksum: 7a8df0bac847a39167345a69720b38c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-18T15:54:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EcologiaTroficaReprodutiva.pdf: 1028405 bytes, checksum: 7a8df0bac847a39167345a69720b38c9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Este estudo está dividido em dois capítulos formatados de acordo com as normas da revista Amphibia-Reptilia. No capítulo 1, intitulado “Ecologia trófica de Phyllomedusa hypochondrialis (Daudin, 1802) (Hylidae, Phyllomedusinae) na Amazônia Oriental, Pará, Brasil”, verificamos a contribuição das presas na dieta da espécie assim como diferenças na dieta em relação ao sexo, tamanho corporal e estações pluviométrica e seca. No capítulo 2 intitulado “Biologia reprodutiva e uso de hábitat por Phyllomedusa hypochondrialis (Daudin, 1802) (Hylidae, Phyllomedusinae) na Amazônia Oriental, Pará, Brasil”, descrevemos a biologia reprodutiva e o uso de recursos espaciais da espécie, período sazonal, já fêmeas tendem a procurar itens que lhes garantam maior retorno energético.

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2018-01-19T13:43:31Z No. of bitstreams: 1 493550.pdf: 4439289 bytes, checksum: 46a00bf7efe5e74fce0a2afe49066d41 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-19T13:43:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 493550.pdf: 4439289 bytes, checksum: 46a00bf7efe5e74fce0a2afe49066d41 (MD5) Previous issue date: 2001-03-14 / FUJB / FAPERJ / CAPES / A atividade reprodutiva de Phyllomedusa rohdei foi observada em uma poça temporária, localizada no município de Saquarema, Região dos Lagos, Estado do Rio de Janeiro, entre julho de 1999 a julho de 2000. O período reprodutivo se estendeu de dezembro a fevereiro (época chuvosa). As fêmeas foram maiores e mais pesadas que os machos. Machos permaneceram poucas noites em atividade de vocalização nos coros, considerando a duração da estação reprodutiva. Os números de machos e de fêmeas presentes na poça apresentaram-se positivamente correlacionados, contudo não houve correlação entre o número de machos e as razões sexuais operacionais. Machos maiores predominaram nos coros quando havia água na poça, enquanto machos menores predominaram quando a poça estava seca. A formação de casais não foi aleatória com relação às seguintes variáveis medidas para os machos: comprimento rostro-anal, massas inicial e final, número de noites presentes no coro e tempo de permanência na poça no mês de dezembro. Os machos apresentaram uma distribuição espacial agregada dentro da poça e reuniram-se preferencialmente em locais com sítios de oviposição disponíveis. Durante a corte, machos não só emitiam vocalizações como também patrulhavam a área a procura de fêmeas. Estas, por sua vez, não escolheram seus parceiros e a seleção sexual resultou da competição entre machos. / The breedind activity of Phyllomedusa rohdei was observed in a temporary pond, located at Saquarema, Rio de Janeiro State, Brazil from July, 1999 to July, 2000. The reproductive period extended from December to February (wet season). Females were larger and heavier than males. Males spent relatively few nights in activity call in the chorus, with respect to the length of the breeding season. The number of males and females present in the pond was positively correlated, but no correlation was revealed between the number of males and the operational sex ratio. Larger males predominated in the chorus when there was water in the pond, while smaller males predominated when the pond was dry. The matings were non-random in relation to the following variables measured on males: snout-vent length, initial and final mass, number of nights present in the chorus and the period of permanence in the pond in December. The spatial distribution of males in the pond was clustered, the meeting occurring preferentially in places with oviposition sites. During the courtship behavior, males call and patrol the area in search of females. Females did not choose mates and the sexual selection results from male-male competition.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T17:01:07Z No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T17:56:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T18:01:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-18T18:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Previous issue date: 2013 / Neste trabalho foi estudada a influ?ncia dos efeitos estruturais na rea??o de dimeriza??o associada ? obten??o do pept?deo antimicrobiano homotarsinina (Htr), bem como foram realizados ensaios hemol?ticos e de toxicidade desse pept?deo perante c?lulas humanas. Primeiramente foi realizada a s?ntese da cadeia monom?rica da homotarsinina (Htr-M), empregando-se a estrat?gia Fmoc de s?ntese em fase s?lida. Em seguida, o produto foi purificado por cromatografia l?quida de alta efici?ncia em fase reversa (CLAE-FR), tendo sido o homod?mero obtido sequenciado e caracterizado por espectrometria de massas (MALDI-ToF). Foram realizados estudos das prefer?ncias conformacionais da Htr-M por dicro?smo circular (CD) em diferentes meios e condi??es, como na presen?a de tamp?o Tris-HCl aquoso, em diferentes misturas de TFE-H2O e na presen?a de micelas de SDS. Realizou-se ent?o a rea??o de dimeriza??o do mon?mero em tr?s meios: (i) solu??o tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5, (ii) solu??o micelar de SDS 350 mmol?L-1 em tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5 e (iii) solu??o TFE:H2O 40:60 (v/v) em Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5. O acompanhamento cin?tico das rea??es de dimeriza??o foi realizado por CLAE-FR. Como resultado, foi observado que em solu??o micelar de SDS a rea??o se completa em aproximadamente 6h (rendimento de 62%), enquanto que em solu??o tamp?o e em solu??o de TFE:H2O s?o necess?rias 24h e 48h (rendimentos de 66% e 85%), respectivamente. Os resultados de CD obtidos para a Htr-M em condi??es similares ?s empregadas nas rea??es de dimeriza??o mostraram que a Htr-M apresenta predominantemente conforma??o rand?mica em tamp?o Tris-HCl aquoso, enquanto adota predominantemente estrutura de h?lice ? em solu??o de TFE:H2O (40:60) ou na presen?a de micelas de SDS. Assim, os resultados do acompanhamento cin?tico da rea??o de dimeriza??o indicam que a conforma??o predominantemente rand?mica da Htr-M em tamp?o Tris-HCl aquoso, bem como a diminui??o de sua mobilidade e maior intera??o com a superf?cie das micelas de SDS e os efeitos de agrega??o que ocorrem em solu??o de TFE:H2O influenciam diretamente na forma de aproxima??o das cadeias monom?ricas, atuando de maneiras diferentes na forma??o da liga??o dissulfeto. Por fim, foram realizados ensaios de toxicidade em c?lulas humanas, os quais mostraram que Htr-M e Htr n?o apresentam toxicidade a leuc?citos mononucleares, al?m do que tamb?m n?o apresentam atividade hemol?tica. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT This dissertation is mainly related to studies concerning the role of the structural effects on the dimerization reaction that leads to the antimicrobial peptide homotarsinin (Htr). Besides, hemolytic assays as well as the toxicity of this peptide against human cells have also been investigated. Firstly, the monomeric chain (Htr-M) was obtained by Fmoc solid-phase synthesis. The product was purified by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and then sequenced and characterized by mass spectrometry (MALDI-ToF). Circular dichroism (CD) studies regarding the Htr-M conformational preferences were performed for the peptide in different media and conditions, such as Tris-HCl aqueous buffer, TFE:H2O mixtures, as well as in the presence of SDS micelles. The dimerization reaction was then performed in three distinct media, namely: (i) Tris-HCl aqueous buffer 100 mmol?L-1 pH 8.5, (ii) SDS micellar solution of 350 mmol?L-1 in Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8.5 and (iii) TFE:H2O 40:60 in Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8.5. CD studies performed in similar conditions indicated that Htr-M presents predominantly random conformations in aqueous Tris-HCl buffer, whereas it adopts ?-helical arrangements in either TFE:H2O (40:60) solution or in the presence of SDS micelles. The kinetic monitoring of the dimerization reactions was carried out by RP-HPLC. The results indicated that the reaction is completed in about 6 h (yield 62%) in the presence of SDS micelles, whereas 24 h and 48 h (yields 66% and 85%) are necessary for the dimerizations performed in the aqueous Tris-HCl and in the TFE:H2O solutions, respectively. Therefore, the kinetic studies indicated that the predominantly random conformation of Htr-M in Tris-HCl aqueous buffer, as well as the mobility decrease alongside with the peptide-micelle interactions in the presence of SDS, as well as the aggregation effects in the TFE:H2O solution directly affect the inter-chain approach process, which leads to different pathways of the disulfide bond formation. Finally, toxicity assays were performed in human cells and the results showed that both Htr-M and Htr are not toxic against mononuclear leukocytes and also do not show hemolytic activity.