Vários resultados na literatura fornecem fortes evidências de que o processamento de memórias requerem a participação da proteína cinase C (PKC) em estruturas sabidamente necessárias para este processamento, como o hipocampo, a amígdala basolateral (ABL) e o córtex parietal posterior (CPP). Neste trabalho mostramos que o inibidor seletivo das isoformas cálcio-dependentes da PKC, Go 6976, produz um efeito amnésico dosedependente sobre a consolidação de memória espacial de longa duração em ratos submetidos ao treino no labirinto aquático de Morris (LAM), quando infundido na região CA1 do hipocampo dorsal 15 minutos pré-treino, imediatamente pós-treino ou 15 minutos pré-teste para esta tarefa, sem alterar a atividade locomotora dos animais. Ainda na tarefa do LAM, o Go 6976 também apresentou este efeito amnésico sobre a reconsolidação de memórias espaciais de longa duração recentes e antigas, bem como sobre a consolidação da memória espacial de longa duração relativa ao treino reverso no LAM, mas não teve efeito sobre a memória espacial de curta duração nem sobre a extinção da memória espacial de longa duração. Já na tarefa de esquiva inibitória (EI) o Go 6976 produziu um efeito amnésico quando infundido na ABL imediatamente ou 30 minutos pós-treino, ou no CPP 270 ou 360 minutos pós-treino, enquanto o inibidor não-seletivo das isoformas da PKC, Go 7874, produziu os mesmos efeitos, exceto por, no CPP, causar amnésia quando infundido 180 ao invés de 270 minutos pós-treino. Estes resultados indicam que as PKCs, sobretudo as cálcio-dependentes, são importantes para o processamento de memórias espaciais e aversivas, apresentando na consolidação de memórias aversivas distintos tempos críticos de ativação em diferentes estruturas cerebrais, e sendo necessárias para a aquisição, consolidação, evocação e reconsolidação de memórias espaciais.

Cistinose é uma doença genética sistêmica causada pelo transporte deficiente lisossomal acumulando cistina nos lisossomos de quase todos tecidos. Apesar do dano tecidual depender do acúmulo de cistina, os mecanismos moleculares deste ainda são obscuros. Adenilatoquinase, junto com a creatinaquinase, são responsáveis pela rede de transferência de fosfato, cruciais a homeostasia energética. Considerando que a cistina inibe a atividade da creatinaquinase, que as duas enzimas contem grupamentos tiólicos, e há uma forte interação entre as duas atividades, nosso principal objetivo foi investigar os efeitos da cistina na atividade da adenilatoquinase em córtex cerebral de ratos Wistar. Para os estudos in vivo, os animais foram injetados duas vezes ao dia com 1,6 mmol/g de peso corporal de cistina dimetil éster e/ou 0,46 mmol/g de peso corporal de cisteamina. Os animais foram tratados do vigésimo quinto dia ao vigésimo nono dia de vida e foram sacrificados 12 horas após a última injeção. Cistina inibiu a atividade da enzima in vitro de forma dose-dependente, ao passo que cisteamina preveniu a inibição. A atividade da adenilatoquinase diminuiu no córtex cerebral dos ratos com sobrecarga com cistina dimetiléster e a co-administração com cisteamina preveniu a diminuição da atividade de enzima. Considerando que a adenilatoquinase, juntamente com a creatinaquinase, é essencial para a homeostase energética, a liberação de cistina pelos lisossomos com consequente inibição enzimática, podem prejudicar a homeostasia energética, contribuindo para o dano tecidual em pacientes com cistinose. / Cystinosis is a systemic genetic disease caused by a lysosomal transport deficiency accumulating cystine in the lysosomes of almost all tissues. Although tissue damage might depend on cystine accumulation, the molecular mechanisms of tissue damage are still obscures. Adenylate kinase, along with creatine kinase, is responsible for the enzymatic phosphotransfer network, crucial for energy homeostasis. Taking into account that cystine is known to inhibit creatine kinase activity, the two enzymes have thiol groups, and the strong interaction between the two activities, our main objective was to investigate the effect of cystine on adenylate kinase activity in the brain cortex of Wistar rats. Cystine inhibited the enzyme activity in vitro in a concentration dependent way, whereas cysteamine prevented the inhibition. For the in vivo studies, the animals were injected twice a day with 1.6 mmol/g body weight of cystine dimethylester and/or 0.46 mmol/g body weight of cysteamine from the 25th to the 29th postpartum day and sacrificed after 12 hours. Adenylate kinase activity was found diminished in the brain cortex of rats loaded with cystine dimethylester and co-administration of cysteamine prevented the diminution of the enzyme activity. Considering that adenylate kinase together with creatine kinase is crucial for energy homeostasis, the release of cystine from lysosomes with consequent enzymes inhibition could impair energy homeostasis, contributing to tissue damage in patients with cystinosis.

Submitted by Andre Moraes Queiroz (andre.moraesqueiroz@ufpe.br) on 2015-04-14T14:30:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Carolina Neves Correia.pdf: 5310409 bytes, checksum: 06fd884bd1cc5beab0d792b693d0b03f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:30:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Carolina Neves Correia.pdf: 5310409 bytes, checksum: 06fd884bd1cc5beab0d792b693d0b03f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FINEP / Estudos de expressão gênica diferencial associados a perfis metabólicos de plantas submetidas a um estresse alvo são abordagens valiosas na compreensão da tolerância vegetal. Por sua vez, proteínas quinases são importantes componentes da sinalização celular, catalisando a transferência do grupo fosfato de uma molécula de ATP para um substrato, em processo chamado fosforilação, com participação ativa na aclimatação às mudanças ambientais. O presente trabalho teve como objetivo comparar in silico perfis de transcrição, de unitags SuperSAGE diferencialmente expressas e anotadas como prováveis quinases, de genótipos de cana-de-açúcar tolerantes e sensíveis ao déficit hídrico (24 h de supressão de rega). Para tanto, sequências expressas (EST) de gramíneas, de diversos bancos de dados públicos, similares às unitags (análises BLASTn), foram caracterizadas em termos de Ontologia Gênica, que conjuntamente com as anotações das EST permitiram identificar e classificar as quinases em famílias. Através dos respectivos números de Classificação Enzimática (EC), mapas metabólicos foram gerados, permitindo comparar os grupos de genótipos contrastantes (tolerantes e sensíveis ao estresse). Foram observadas 539 prováveis quinases, que distribuídas em 41 famílias e em 18 vias metabólicas, quando associadas às unitags, permitiram discuti-las com base em oito classes hierárquicas funcionais. Importantes diferenças na expressão desses transcritos mapeados como quinases, entre os grupos de genótipos tolerantes e sensíveis, após 24 h de supressão de rega, foram observadas neste trabalho, contribuindo para um melhor entendimento da percepção do estresse aplicado, podendo ser útil ao melhoramento genético da cana-de-açúcar.

Orientador: Paola Castro Moraes / Resumo: A catarata situa-se entre as afecções oculares mais frequentes em cães. A facoemulsificação é o método que melhor se adéqua à sua terapia e o preferido entre os oftalmologistas. Dentre as complicações pós-operatórias destacam-se lesões endoteliais que podem produzir descompensação permanente da córnea, alterando a sua transparência. Buscou-se avaliar os efeitos do inibidor de ROCK (Y-27632), na proteção endotelial, em cães submetidos à facoemulsificação. Utilizaram-se 20 olhos de 10 pacientes, machos ou fêmeas, com sete a 12 anos, portando catarata senil bilateral. Dois grupos foram concebidos: Olhos controles (Oc) (n=10), receberam solução salina balanceada e Olhos Tratados (Ot) (n=10), receberam intracameralmente, 0,3 mL de Y-27632, na concentração de 100 µmol/L, imediatamente após a sutura corneal. O endotélio corneal foi avaliado à microscopia especular de não contato, antes e em diferentes momentos após a facoemulsificação. Avaliaram-se a densidade (células/mm2) e a área celular (µm2), a espessura corneal (mm), a hexagonalidade (%) e o coeficiente de variação do tamanho celular (%). Valores de P iguais ou inferiores a 0,05 foram considerados significativos. Com relação à densidade de células endoteliais, ambos os grupos apresentaram perdas, sem diferença estatística. Relativamente à espessura corneal e hexagonalidade, não houve diferença. No Oc, a área celular aumentou significativamente entre os momentos avaliados, o que não foi observado em Ot. Admite-se que a aplicaçã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cataract is among the most common eye diseases in dogs. Phacoemulsification is the method that best fits its therapy. Among the complications related to this surgery, there are endothelial injuries that can induce permanent corneal decompensation, altering its transparency. The goal of this study was to evaluate the effects of ROCK inhibitor Y-27632 on endothelial protection in dogs undergoing phacoemulsification. Twenty eyes of 10 patients, male or female, aged 7 to 12 years, with bilateral senile cataract were used. Two groups were conceived: Control eyes (Oc) (n = 10), that received balanced saline solution (BSS) and Treated Eyes (Ot) (n = 10), which received intracamerally 0.3 mL of Y-27632 at a concentration of 100 µmol. / L, immediately after corneal suture. The corneal endothelium was assessed via non-contact specular microscopy at multiple time points before and after phacoemulsification. Cell density (cells/mm2 ) and area (µm2 ), corneal thickness (mm), hexagonality (%), and the coefficient of variation of cell size (%) were all assessed. P values equal to or less than 0.05 were considered significant. With respect to the density of endothelial cells, both groups showed losses, without statistical difference. There were no differences in corneal thickness and hexagonality. In Oc, the cellular area increased significantly between the evaluated moments, what was not observed in Ot. It is admitted that the intracameral application of 0.3mL containing 100µmol/L of Y-2763... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A Leucemia Mieloide Crônica é uma doença hematopoiética associada a células estaminais que se manifesta principalmente com a expansão mielopoese. O cromossomo Philadelphia positivo PH+ é gerado por uma translocação recíproca (9, 22) (Q34, Q11) e pela fusão entre o gene Abel- son, essa fusáo codifica e desregula á protéına Tirosina Quinase, o suficiente para a iniciação e manutenção da doença. Inibidores como o Mesilato de Imatinibe revolucionou o tratamento de pacientes com leucemia mieloide crônica. As mutaç ões no domínio de quinase do Bcr-Abl, constituindo o mecanismo mais frequente de resistência adquirida para a terapia com inibidores da tirosina quinase. A mutação T315I atualmente e maior desafio para manutenção da Leucemia mieloide crônica na fase crônica, uma vez que os inibidores de Tirosina Quinase atualmente en- contrados no mercado são incapazes de mantê-la na forma controlada. Métodos computacionais baseados em fragmentos moleculares surgiram como uma nova estratégia para a descoberta de fármacos. Foi usado o programa LigBuilder para fazer geração das novas moléculas candidatas a ffármacos, usando dois métodos o Grow e Linker, as moléculas foram selecionadas por meio de docking com programa Glide da suite Maestro em cada mutação selecionadas da tirosina quinase, usando os melhores Gscores, para cada mutac¸a˜o, posteriormente foram submetidas ao programa QikProp, que tem a função comparar as moléculas com banco de dados de fármacos conhecidos. No último passo, é feito o estudo do docking das moléculas selecionas no sítio usando os protocolos de Induced Fit docking, que realiza o docking flexível-flexível, ou seja, ligante flexível e sítio de ligação da proteína flexível. / Chronic myeloid leukemia is associated with hematopoietic stem cell disorder that manifests itself primarily with myelopoiesis the expansion. The Philadelphia chromosome positive PH is generated by a reciprocal translocation (9, 22) (q34, q11), and by the merger of the Abelson gene fusion that encodes and deregulates quinase Tyrosine protein enough for the initiation and maintenance of disease. Tyrosine quinase provides a therapeutic target, which used to inhi- bition of this protein Known as tyrosine Quinase. Inhibitors such as Imatinibe mesylate has revolutionized the treatment of patients with chronic myeloid leukemia. Mutations in domain quinase Bcr-Abl, constituting the most frequent mechanism acquired resistance to therapy with tyrosine quinase. The T315I mutation and currently biggest challenge for maintenance of chro- nic myeloid leukemia in chronic phase, since inhibitors of tyrosine Quinase currently found on the market are unable to it maintaining it in a controlled manner, leading the patient achieved. Methods based on fragment docking emerged as a new strategy for drug discovery. evaluating all possible input locations and connecting the inhibitor and protein, and thus may provide a new molecule will be able to make effective inhibition. The docking studies are divided into three parts. At first, the fragments are placed to interact within the possible interaction sites. In the second step, the molecules are created from the best fragments which interacted with a particular website. In the last step, the study of molecules created in the docking site using the protocols of Induced Fit Docking which performs flexible, flexible docking ie flexible linker protein is made flexible.

A realização de uma sessão com ações excêntricas provoca dano na estrutura muscular. Durante o processo de recuperação, essa estrutura sofre adaptações que a protegem da ocorrência de dano nas sessões subseqüentes. Essas adaptações são chamadas de Efeito da Carga Repetida (ECR). Esse efeito foi estudado com a realização de apenas duas sessões de exercícios. A velocidade da ação excêntrica também pode contribuir para a variabilidade do dano induzido. O objetivo desse estudo foi investigar através da análise dos indicadores indiretos, creatina quinase (CK), força, dor, circunferência e amplitude de movimento (ADM), o dano induzido por diferentes velocidades da ação excêntrica e o efeito da carga repetida com a realização das diferentes velocidades (60ºs-1 (Exc60) e 180ºs-1 (Exc180)); e verificar se o efeito da carga repetida seria maior com a realização de três sessões de exercícios. Os resultados dos indicadores analisados tiveram alterações semelhantes nos grupos Exc60 e Exc180, sugerindo que as diferentes velocidades parecem não interferir na magnitude do dano induzido. O ECR não foi diferente entre as velocidades, pois o comportamento das variáveis analisadas foi semelhante entre os dois grupos nas duas sessões iniciais. A realização da terceira sessão de exercícios excêntricos não promove o aumento do efeito protetor, visto que não houve diferenças significantes entre a segunda e a terceira sessão. Indicando que o ECR advém principalmente da realização da primeira sessão / Performing a bout of eccentric exercise causes muscle damage. During recovery, some adaptations occur that can protect muscle structure. These adaptations are known as Repeated Bout Effect. However, this phenomenon has been studied with two bouts. Velocity of eccentric action has been referred as one possible factor which can affect the extension of muscle damage. The aim of this study was to investigate muscle damage induced by different velocities, the repeated bout effect with different velocities and to verify if the repeated bout effect could be larger if three bouts of eccentric exercise were performed. Results of indirect markers of muscle damage (CK, DOR, upper-arm circumference, maximal isometric force) showed similar alterations in groups Exc60 and Exc180, suggesting that different velocities do not affect the extension of muscle damage. Repeated bout effect is not different between velocities, because changes in markers were comparable in both groups after the first two bouts. After performing a third bout of eccentric exercise, there was not any significant differences between second and third bouts. It indicates that the first bout is responsible for the adaptations of the repeated bout effect

INTRODUÇAO: O câncer de cólon é a terceira neoplasia mais prevalente no país, com aumento progressivo da incidência associada ao envelhecimento populacional. Os avanços nos tratamentos local e sistêmico do câncer de cólon metastático tem aumentado significativamente o tempo de sobrevida global. Entretanto, ainda não existem biomarcadores consolidados na literatura, capazes de predizer resposta a estes tratamentos ou o prognóstico. No processo da carcinogênese, uma das importantes vias que se encontra alterada é a via de reparo do DNA. A Chk2 é uma proteína quinase com atividade no reparo celular atuando de forma supressora no processo da carcinogênese, sendo que alterações em sua expressão e/ou função têm sido associadas à progressão tumoral em outras neoplasias como no câncer de mama, pulmão, vulva, bexiga, cólon, ovário, osteossarcoma e linfomas. OBJETIVO: Avaliar a expressão imunohistoquímica do Chk2 no câncer de cólon metastático e correlacionar sua expressão com características clínico-patológicas e sobrevida. PACIENTES E MÉTODOS: Foram incluídos 58 pacientes com diagnóstico confirmado de câncer de cólon metastático, tratados em primeira linha com quimioterapia baseada em fluorouracila e oxaliplatina. O tempo mínimo de seguimento foram de 2 anos pós-diagnóstico. Para análise da expressão do Chk2 foram utilizadas as técnicas de tissue microarray e imunohistoquímica. Estes resultados foram correlacionados com características clínicas, patológicas e de sobrevida. Para análise estatística, foi utilizado o programa SPSS17 e o valor de p<0,05 foi considerado estatisticamente significativo. RESULTADOS: A expressão de Chk2 foi positiva em 69% dos pacientes. Houve associação entre a expressão de Chk2 e o status linfonodal (p = 0,012) e entre a sobrevivência (p=0,034). A expressão negativa de Chk2 aumentaram as chances de envolvimento linfonodal (OR:10,2, p=0,03). O tempo de sobrevida global de pacientes Chk2 negativo foi maior (72 versus 59 meses, p=0,155), o mesmo foi observado com o tempo sobrevida livre de progressão (19 versus 13 meses, p=0,293). As curvas de sobrevida foram diferentes de acordo com a expressão do Chk2 em pacientes com ou sem envolvimento linfonodal, sendo menor nos pacientes com Chk2 positivo, p=0,028. Houveram mais óbitos em pacientes com Chk2 positivo. Análise multivariada identificou o performance status segundo a escala de ECOG (p=0,001 ); metástase sincrônica (p=0,037); diferenciação das células tumorais (p=0,029) e expressão de Chk2 (p=0,020) como fatores independentes para sobrevida global. CONCLUSÃO: A expressão positiva do Chk2 no adenocarcinoma de cólon metastático foi indicativa de maior agressividade e disseminação tumoral, impactando de forma negativa na sobrevida e desfecho dos pacientes. / INTRODUCTION: The DNA damage checkpoint pathway has been of interest to the field of cancer biology, since checkpoint defects result in the accumulation of altered genetic information, a central feature of carcinogenesis. Little is known about the role of Chk2 in colorectal cancer tumorigenesis. OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate Chk2 expression in metastatic colon cancer and correlate this with clinicopathological features and patient survival. PATIENTS AND METHODS: Tissues were obtained from 58 patients with confirmed metastatic colon cancer diagnosis, treated with capecitabine and oxaliplatin chemotherapy as standard doses. Patients included had, at least, 2 years post diagnosis of clinical following. The tissue microarray immunohistochemistry was the technic to evaluate Chk2 expression. Statistics analysis used SPSS 17. A p-value <0,050 was considered to be statistically significant. Immunohistochemical expression of Chk2 and its relationship with clinical and pathological characteristics and survival data was reported. RESULTS: The expression of Chk2 was positive in 69%. There was association between expression of Chk2 and Iymph node status (p=0.012) and between survival (p=0.034). The negative expression of Chk2 enhanced the chances of linfonodal involvement (OR:10,2, p=0.03). The global survival time of Chk2 negative patients was higher (72 versus 59 months, p= 0.155); the same was observed with progression-free survival time (19 versus 13 months, p=0.293). The survival curves were different according to Chk2 expression in patients with or without Iymph node involvement, being lower in patients with Chk2 positive, p=0.028. There were more deaths in patients with Chk2 positive. Multivariate regression analysis identified performance status ECOG (p=0.001), synchronous metastasis (p=0.037), tumor cell differentiation (p=0.029) and expression of Chk2 (p=0.020) as independent factors to overall survival. CONCLUSION: This study demonstrated that the Chk2 positive expression in colon cancer indicates increased tumor spread and tumoral aggressiveness, impacting negatively on survival and outcome of patients.

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Heloisa Sobreiro Selistre de Araujo / Banca: Ana Paula Ulian de Araujo / Resumo: Neste trabalho foi realizado o isolamento do cDNA e do gene que codifica a proteína semelhante à Pho85p de Saccharomyces cerevisiae, em Neurospora crassa. Um fragmento de 1,1 kb correspondendo à seqüência nucleotídica do gene em N. crassa foi amplificado e confirmado por sequenciamento, o qual foi utilizado no rastreamento de uma biblioteca de cDNA de N. crassa, resultando em um plasmídeo contendo a ORF que codifica a Ncpho85 e as seqüências upstream e downstream à ORF. Este inserto foi seqüenciado, a ORF isolada apresentou 1014 bp, a região upstream contém 304 bp e a downstream 561 nucleotídeos. Após sequenciamento do cDNA, a seqüência polipeptídica da proteína foi comparada com outras proteínas semelhantes à Pho85p de fungos miceliares, leveduriformes além de S. cerevisiae. Esta ORF isolada foi utilizada no rastreamento de uma biblioteca genômica de N. crassa, possibilitando o isolamento de um plasmídeo contendo a seqüência genômica, o qual foi submetido a sequenciamento. No inserto foi possível confirmar a presença do intron (de 89 bp) no nucleotídeo 69, confirmando os dados existentes no banco de dados de N. crassa. A expressão do gene foi analisada ao longo do crescimento do fungo, em diferentes meios de cultivo, através de experimentos de Northern blot. A presença de duas bandas de hibridização, uma de 2,2 kb e uma 2,7 kb foi observada em todos os experimentos realizados. Um pico de expressão dos dois transcritos ocorreu no tempo de 12 horas, sendo mais evidente para o transcrito de menor tamanho, o qual seria o transcrito do cDNA isolado anteriormente. Resultados preliminares da expressão da proteína ao longo do crescimento do fungo foram obtidos por Western blot. Apenas uma banda da proteína foi observada, a qual apresentou o tamanho aproximado de 40 kDa, próximo ao tamanho da proteína NcPHO85, deduzida a partir da seqüência do cDNA. / Abstract: In this study we performed the isolation of the cDNA and the gene that codes for the Pho85p-like protein from Saccharomyces cerevisiae in Neurospora crassa. A fragment of 1.1 kb corresponding to the nucleotide sequence of the gene from N. crassa was amplified by PCR and confirmed by DNA sequencing. This fragment was used to screen a N. crassa cDNA library resulting in a plasmid containing the ORF plus and the upstream and downstream regions. The insert from the plasmid was sequenced and the ORF showed to have 1014 bp, whereas the upstream and downstream regions had 304 bp and 561 bp, respectively. After sequencing the cDNA, the polypeptide sequence was compared to the same protein from mycelial fungi and yeasts. The isolated ORF was used to screen a N. crassa genomic library leading to the isolation of a plasmid containing the genomic sequence. After DNA sequencing the insert showed the presence of an intron (89 bp) starting at nucleotide 69. This result was in agreement with the information from the N. crassa database. Gene expression analysis during the vegetative growth in different media was performed by Northern blot. Two hybridization bands were observed in the experiments, one of 2.2 kb and another one of 2.7 kb. The maximum expression of both transcripts happened at 12 h of growth, this was more pronounced for the smaller transcript, which probably is the transcript of the isolated cDNA. Preliminary results of protein expression during vegetative growth were obtained by Western blot analysis. Only one band with approximately 40 kDa was observed, the expected size for the NcPHO85 protein sequence deduced from the cDNA sequence. In order to evaluate the role of this protein in glycogen metabolism and in other cellular functions in N. crassa we started the gene inactivation. / Mestre

Orientador: Guilherme de Camargo Ferraz / Banca: Ruthnea Aparecida Lázaro Muzzi / Banca: Aureo Evangelista Santana / Resumo: As principais alterações fisiológicas ou patológicas induzidas pelo exercício que ocorrem na musculatura esquelética ou cardíaca podem ser identificadas por meio de biomarcadores séricos. Consolidados em atletas da espécie humana e equina, são praticamente inexistentes em cães estudos sobre a dinâmica destes biomarcadores relacionados com a prática de exercício máximo e treinamento. Objetivou-se determinar a cinética dos biomarcadores séricos musculares creatina quinase (CK), aspartato aminotransferase (AST), mioglobina; e cardíacos, troponina cardíaca I (cTnI) e creatina quinase isoenzima MB (CK-MB) de cães submetidos a esforço intenso e condicionamento aeróbio. A ação da venopunção sobre os biomarcadores também foi avaliada. Foram utilizados 18 cães hígidos da raça Beagle distribuídos em três grupos: sedentário (S), não treinado (NT) e treinado (T). Os cães foram submetidos a dois testes de esforço incremental (TEI-1 e TEI-2) para obtenção da curva lactato-velocidade (CLV). Verificou-se se a CLV teve modelo exponencial. O programa de treinamento foi realizado em esteira por 8 semanas na velocidade relacionada a 70-80 % do limiar de lactato (VLL). Determinou-se a velocidade correspondente a frequência cardíaca no momento da fadiga (VFCFadiga). Os biomarcadores séricos foram quantificados nos momentos basal, antes e 1, 6, 12, 24, 48 e 72 h após os TEIs. Aplicou-se análise de variância de dois fatores para amostras repetidas no tempo seguida por teste de Tukey e correlação de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main physiological or pathological alterations induced by exercise on skeletal or cardiac musculature can be identified using serum biomarkers. While studies on the dynamics of such biomarkers are consolidated in humans and horses, they are virtually inexistent on maximum exercise and training among dogs. This study aimed to determine the kinetics of the muscle serum biomarkers creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST), and myoglobin and of cardiac biomarkers cardiac troponin I (cTnI) and creatine kinase isoenzyme MB (CK-MB) of dogs subjected to intense effort and aerobic conditioning. The effect of venipuncture on the biomarkers was also assessed. Eighteen healthy Beagle dogs were assigned to three groups: sedentary (S), untrained (U), and trained (T). The dogs were subjected to two incremental effort tests (IET-1 and IET-2) so that their lactate vs. velocity curve (LVC) could be obtained. It was verified whether LVC followed an exponential model. The eight-week training program was carried out on a treadmill with speed set to 70-80% of the velocity at lactate threshold (VLT). The velocity corresponding to the heart rate at the moment of fatigue (VHRFatigue) was determined. Serum biomarkers were quantified at the baseline, before, and 1, 6, 12, 24, 48, and 72 h after the IETs. Two-factor analysis of variance was applied for samples repeated over time followed by Tukey's test and Pearson correlation (P≤0.05). The increase (P≤0.05) in the velocyties corresponding to VLT and VHRFatigue indicated an improvement in aerobic fitness of group T. Serum activity of CK and AST increased (P≤0.05), reached maximum values after 6 h in both IETs, and returned to baseline levels after 12-24 h. As a whole, the assessment of the behavior of muscle biomarkers showed recovery of muscle tissues after the IETs. Lev ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-07T13:22:30Z No. of bitstreams: 2 tiago_jose_silva.pdf: 1811358 bytes, checksum: 1654fd6d60ba2571e51302a48d7407c9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-07T13:25:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tiago_jose_silva.pdf: 1811358 bytes, checksum: 1654fd6d60ba2571e51302a48d7407c9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-07T13:25:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tiago_jose_silva.pdf: 1811358 bytes, checksum: 1654fd6d60ba2571e51302a48d7407c9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-07T13:26:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tiago_jose_silva.pdf: 1811358 bytes, checksum: 1654fd6d60ba2571e51302a48d7407c9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-07T13:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tiago_jose_silva.pdf: 1811358 bytes, checksum: 1654fd6d60ba2571e51302a48d7407c9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / A produ??o biotecnol?gica de enzimas por fungos filamentosos requer o conhecimento das suas caracter?sticas de crescimento, fisiologia e metabolismo porque a compreens?o das respostas biol?gicas e nutricionais contribui para o ajuste dos bioprocessos. Neste trabalho foram analisados o crescimento apical e alguns par?metros bioqu?micos e fisiol?gicos da resposta das linhagens Aspergillus tubingensis AN1257 e Talaromyces trachyspermus T10.5 a fontes de carbono complexas indutoras de carboidrases. Foi utilizada uma abordagem polif?sica de identifica??o baseada em caracter?sticas fenot?picas e moleculares. As linhagens foram cultivadas em meio suplementado com glicose (controle), amido e carboximetilcelulose (CMC). O crescimento apical foi avaliado quanto aos eventos iniciais, hidrata??o, polariza??o e extens?o do tubo germinativo, bem como foi investigado o papel da via de PKC nestes processos. As linhagens diferiram quanto ao potencial de produ??o de carboidrases sendo o T. trachyspermus T10.5 o mais eficiente para a express?o de amilase. A produ??o de celulase foi verificada apenas em meio s?lido. Os eventos iniciais do crescimento apical de T. trachyspermus T10.5 foram atrasados pelos carboidratos polim?ricos em meio s?lido: ap?s 14h de cultivo a propor??o de con?dios apolares, polares e com tubo germinativo foi de 31,0 ? 5,7%; 34,0 ? 0,0% e 35,0 ? 5,7% (glicose) contra 40,0 ? 0,0%; 45,0 ? 0,8% e 14,0 ? 1,6% (amido) ou 90,0 ? 4,9%; 6,0 ? 1,6% e 4,0 ? 3,3% (CMC). A biomassa de T. trachyspermus T10.5 foi formada exponencialmente no per?odo de 24 a 48h em cultivo submerso e n?o foi diminu?da por nenhuma fonte de carbono. Nas culturas submersas, a fase exponencial de crescimento foi simult?nea ao consumo exponencial do substrato; o esgotamento das fontes de carbono precedeu o in?cio da fase estacion?ria; a atividade de ?-amilase (239,2 ? 11 U/min.mL) induzida por amido coincidiu com o crescimento exponencial, permaneceu est?vel durante a fase estacion?ria e foi reprimida por glicose. O crescimento apical de A. tubingensis AN1257 respondeu mais rapidamente ? fonte de carbono: 36,0 ? 4,3% dos con?dios cultivados em meio suplementado com glicose estavam polarizados ap?s 6h, contra 1,3 ? 0,9% (amido) e 2,7 ? 1,9% (CMC). A extens?o do tubo germinativo da linhagem AN1257 tamb?m foi atrasada e reduzida por amido e CMC. A forma??o de biomassa de A. tubingensis AN1257 nas culturas submersas foi fortemente reduzida por CMC, que apresentou um efeito tamponante no meio. Nas demais culturas submersas, o crescimento exponencial de A. tubingensis AN1257 ocorreu entre 0 a 24h (glicose) ou 12 a 24h (amido) coincidindo com forte acidifica??o do meio e consumo acentuado de substrato. O efeito da ativa??o de PKC foi distinto nas duas linhagens: a ativa??o dessa enzima n?o parece modular a germina??o em A tubingensis AN1257, mas inibe fortemente a germina??o de T. trachyspermus T10.5. Assim, as duas esp?cies apresentaram respostas diferentes ? fonte de carbono e ? ativa??o de PKC, com fisiologia, germina??o e crescimento apical peculiares, cuja compreens?o permitir? direcionar a aplica??o biotecnol?gica das linhagens AN1257 e T10.5 de forma mais eficiente. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT The biotechnological production of enzymes by filamentous fungi requires the knowledge of its characteristics of growth, physiology and metabolism because the comprehension of the biological and nutritional responses contributes to the adjustment of the bioprocesses. In this work, it were analyzed the apical growth, and some biochemical and physiological parameters of the response of the strains Aspergillus tubingensis AN1257 and Talaromyces trachyspermus T10.5 to complex carbon sources that induce carbohydrases. It was utilized a polyphasic approach of identification based on phenotypic and molecular characteristics. The strains were cultivated in media supplemented with glucose (control), starch and carboxy-methylcellulose (CMC). The apical growth was evaluated regarding the initial events, hydration, polarization and germtube extension, and the role of the PKC pathway in these processes was investigated as well. The strains differed according to their potential for carbohydrase production and T. trachyspermus T10.5 was the more efficient for amylase expression. Cellulase production was verified only in solid media. The initial events of T. trachyspermus T10.5 apical growth were delayed by the polymeric carbohydrates in solid media: after 14h of cultivation, the proportion of non-polar, polar and germtube-containing conidia was 31.0 ? 5.7%; 34.0 ? 0.0% and 35.0 ? 5.7% (glucose) versus 40.0 ? 0.0%; 45.0 ? 0.8% and 14.0 ? 1.6% (starch) or 90.0 ? 4.9%; 6.0 ? 1.6% and 4.0 ? 3.3% (CMC). The biomass of T. trachyspermus T10.5 was formed exponentially from 24 to 48h during submerged cultivation, and it was not decreased by any carbon source. In the submerged cultures, the exponential growth phase was simultaneous to the exponential consumption of the substrate; depletion of the carbon sources preceded the stationary phase; the ?-amylase activity (239.2 ? 11 U/min. mL) induced by starch coincided with the exponential growth, remained stable during the stationary phase and was repressed by glucose. A. tubingensis AN1257 apical growth responded more promptly to the carbon source: 36.0 ? 4.3% of the conidia cultivated in medium supplemented with glucose were polarized after 6h, versus 1.3 ? 0.9% (starch) and 2.7 ? 1.9% (CMC). Germtube extension by strain AN1257 was also delayed and reduced by starch and CMC. Biomass formation by A. tubingensis AN1257 in submerged cultures was strongly reduced by CMC, which presented a buffering effect in the medium. In other submerged cultures, the exponential growth of A. tubingensis AN1257 occurred from 0 to 24h (glucose) or 12 to 24h (starch), concomitant to a strong acidification of the medium and to intense substrate consumption. The effect of PKC activation was different in the two strains: activation of this enzyme does not seem to modulate germination in A. tubingensis AN1257, but it strongly inhibits T. trachyspermus T10.5 germination. Thus, the two species presented different responses to the carbon source and to PKC activation, with peculiar physiology, germination and apical growth, whose comprehension will allow direct the biotechnological application of strains AN1257 and T10.5 more efficiently.