Abstract Farming of cobia (Rachycentron canadum) is one of the important maricultured fish species in Taiwan. However, bacterial diseases have plagued cobia aquaculture industry. In this study, based on the growth characteristic, morphological, and biochemical properties of an isolated bacterium, from diseased fish of were similar to those of Photobacterium damselae subsp. piscicida. The 16S rRNA sequence showed 99% identity with P. damselae subsp. Piscicida (GenBank accession number AY147860.1). The pathogenicity experiments were tested by intraperitoneal injection (IP) in juvenile cobia (12~17 g). The LD50 value of P. damselae subsp. piscicida for cobia was 1.0¡Ñ105.6 cells/ml. In order to understand the spreading routes of P. damselae subsp. piscicida in cobia, we infected in cobia fries with P. damselae subsp. piscicida. The results showed that 6h postinfection, P. damselae subsp. piscicida was isolated from gills and gastrointestines. And at 96h P. damselae subsp. piscicida could be isolated form all organs. Histology and fluorescence in situ hybridization showed that the bacterium enters via gills or gastrointestinal tracts and spreaded to kidney and liver, and eventually developed into systemic infection. In addition, genus-specific sequence of 16S rRNA of pasteurellosis was amplified by PCR using the PDPF and PFPR primer. A 847 bp fragment was observed in all the nodules organ and bacterial suspension. The technique is capable of rapid identification of the sequence pathogen in fish.

Submitted by DANIEL ARGENTIM null (argentim7@yahoo.com.br) on 2016-01-15T17:49:32Z No. of bitstreams: 1 Argentim_Daniel Tese.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-01-15T19:26:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 argentim_d_dr_bot_int.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-15T19:26:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 argentim_d_dr_bot_int.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) Previous issue date: 2016-01-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adequada frequência alimentar pode proporcionar maior crescimento dos peixes, contudo a escolha da melhor estratégia pode variar de acordo com as condições ambientais. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da frequência alimentar e da temperatura da água no desempenho do bijupirá. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x3 com seis tratamentos e três repetições. Os tratamentos consistiram em ofertar a ração em quatro ou 24 refeições por dia aos juvenis de bijupirá (40 ±4,5 g) submetidos a três temperaturas da água, 24, 27 ou 30°C. Os resultados mostraram que houve interação da temperatura da água e frequência de alimentação sobre o desempenho dos peixes. Na água com temperatura de 24 e 27°C, os peixes alimentados quatro vezes ao dia apresentaram maior ganho de peso médio (GPM), maior taxa de crescimento específico (TCE) e melhor conversão alimentar (CAA) (p<0,05) do que aqueles alimentados 24 vezes ao dia, porém, esta diferença não foi significativa para os peixes mantidos a 30°C. No entanto, não houve diferença (p>0,05) para a conversão alimentar dos peixes criados na água com temperatura de 24, 27 e 30°C quando a ração foi distribuída com maior frequência (24vezes/dia). Portanto, quando criado em temperaturas de 24 e 27°C, o bijupirá deve ser alimentado quatro vezes ao dia, mas quando os peixes são criados na temperatura de 30°C as frequências de alimentação avaliadas (04 e 24 refeições/dia) não influenciam o desempenho do bijupirá. / The appropriate feeding frequency can provide the fastest fish growing performance; however the choice of the best feeding strategy may vary according to environmental conditions. The aim of this study was to evaluate the effect of feeding frequency and water temperatures in cobia performance. The experimental design was completely randomized in a 2x3 factorial design with six treatments and three replicates. The treatments consisted of the feed offering four or 24 meals a day to cobia juvenile (40 ± 4.5 g) and three water temperatures, 24, 27 or 30°C. The results showed that there was interaction between the water temperature and feeding frequency on fish performance. The fish fed four times a day, in water at 24 to 27°C, had higher average weight gain (AWG), specific growth rate (SGR) and feed conversion rate (FCR) (p <0.05) than those fed 24 times a day, however, this difference was not significant for fish raised in water at 30°C. However, there was no difference in feed conversion rate (p> 0.05) for fish raised at 24, 27 and 30°C when the feed was distributed more times per day (24 times/day). Therefore, when raised in temperature 24 and 27 ° C, the cobia must be fed four times a day, but when the fish are raised in temperature to 30 ° C the evaluated feeding frequency (04 and 24 meals / day) do not affect cobia performance. / FAPESP: 2013/02488-0

A aquicultura é uma indústria em franco desenvolvimento no mundo todo, apesar de a criação de peixes marinhos no Brasil ainda estar aquém do seu potencial. O beijupirá (Rachycentron canadum) é uma espécie que vem despertando interesse dos criadores, devido às suas altas taxas de crescimento, adaptabilidade ao cultivo e aceitação no mercado. As condições de cultura intensiva podem gerar fatores de estresse aos organismos que afetam seu estado fisiológico. Neste trabalho, beijupirás foram cultivados em dois sistemas de criação diferentes, um tanque indoor com sistema de circulação de água aberto e um tanque-rede costeiro, e parâmetros genotóxicos, morfométricos e a atividade de enzimas da defesa antioxidante foram comparados ao final de um período de 11 semanas de criação. Não houve diferenças significativas nas taxas de crescimento dos dois tanques, porém o ensaio cometa e o de micronúcleo e demais anormalidades nucleares detectaram um maior dano ao DNA e uma maior frequência de anormalidades nucleares nos peixes mantidos no tanque indoor. Esses ensaios mostraram-se muito sensíveis para observar o estado fisiológico de beijupirás em cativeiro. A expressão da proteína p53, que é relacionada a integridade do DNA, foi detectada por imuno-histoquímica e não apresentou diferenças significativas entre os dois tanques, porém o valor da sua expressão foi alto, podendo indicar que a p53 estava ativada para regular os danos ao DNA já existentes e detectados pelo ensaio cometa. A atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e catalase também não apresentaram diferenças significativas entre os peixes dos dois tanques. A atividade destas enzimas precisa ser melhor estudada, pois não há um padrão de respostas conhecido para as diversas espécies de peixes já estudadas. Também foi realizada uma exposição de beijupirás à &#946;-naftoflavona (BNF) nas concentrações 2mg/kg e 10mg/kg em condições controladas de laboratório para compreender melhor os mecanismos de resposta desta espécie a um composto reconhecidamente tóxico. Foram avaliados parâmetros genotóxicos e enzimas relacionadas à defesa antioxidante. O ensaio cometa não detectou diferenças significativas no dano ao DNA entre os beijupirás dos controles e expostos à BNF, porém o ensaio de micronúcleo e demais anormalidades nucleares apresentou diferenças significativas entre os peixes expostos às duas concentrações em relação aos controles. Os danos detectados pelo ensaio cometa são quebras reparáveis que acontecem na fita de DNA, enquanto as anormalidades nucleares são danos permanentes, portanto, durante o período de exposição à BNF é possível que o tempo tenha sido suficiente para o reparo das quebras no DNA. Com relação às enzimas, apenas a catalase apresentou diferenças significativas de atividade, com uma inibição de atividade causada pela BNF em maior concentração em relação ao controle. Analisando-se os dois experimentos, as técnicas de ensaio cometa e micronúcleo e demais anormalidades nucleares indicaram serem as mais sensíveis para um monitoramento de beijupirás de cultivo, com a vantagem de não haver necessidade de sacrifício dos organismos. Ainda são necessários mais estudos com as enzimas da defesa antioxidante, em busca de um padrão na sua resposta a substâncias tóxicas. / The aquaculture production is continuously growing in the world, even though the marine fish cultures in Brazil are still smaller than its potential. The intention of rearing the cobia (Rachycentron canadum) species is currently increasing due to its high growth rates, adaptability to captivity and acceptance on the market. The intensive culturing conditions may cause stress to the organism, even affecting its physiological state. In this work, cobia has been reared in two different kinds of tanks: the first one was an indoor tank with open water circulation system and the other one was a near shore cage tank. Genotoxic and morphometric parameters and the activity of antioxidant defense enzymes were measured and compared at the end of 11 weeks of culturing. There weren\'t any significant differences between both tanks on the growth rate, but both the comet assay and the micronuclei and others nuclear abnormalities assay detected higher DNA damage and nuclear abnormalities frequency on the fish that were kept at the indoor tank. The comet and the nuclear abnormalities assays seem to be more sensitive to monitoring the physiological state of cobia during the culture. The protein p53, related to DNA integrity, expression was detected by immunohistochemical and didn\'t show significant differences, but the value of the expression was high, so it could indicate that p53 was activated to regulate the DNA damage that was detected by the comet assay. The activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and catalase also didn\'t demonstrate any significant differences between the fish at any of the tanks. As there isn\'t any known response pattern for the several species of fish that have already been studied, more studies are necessary concerning these enzymes. In addition to the experiment already mentioned, cobia were exposed to &#946;-naphthoflavone (BNF) at concentrations of 2mg/kg and 10mg/kg on laboratory controlled conditions to better understand the response mechanisms of this species to a toxic substance. The genotoxic parameters and the antioxidant defense enzymes activity were measured. The comet assay didn\'t detect any significant differences between the exposed to BNF and the control groups, however the nuclear abnormalities assay showed significant differences between the two exposed concentrations and the control groups. The DNA damages identified by the comet assay are breaks on the DNA strands, meanwhile, nuclear abnormalities are permanent damages. Therefore, during the exposed period it was possible that the time had been sufficient to repair the breaks on DNA. Catalase activity had significant differences with inhibition of the activity in cobia exposed to BNF of higher concentration, the others enzymes didn\'t demonstrate results with significant differences. Looking at both experiments, the comet assay and nuclear abnormalities assay seem to be the most sensitive to cobia\'s monitoring and they also have the advantage that there is no need to sacrifice the fish. Further studies on the antioxidant defense enzymes are needed in order to find a pattern on its response to toxic compounds.

A aquicultura é uma indústria em franco desenvolvimento no mundo todo, apesar de a criação de peixes marinhos no Brasil ainda estar aquém do seu potencial. O beijupirá (Rachycentron canadum) é uma espécie que vem despertando interesse dos criadores, devido às suas altas taxas de crescimento, adaptabilidade ao cultivo e aceitação no mercado. As condições de cultura intensiva podem gerar fatores de estresse aos organismos que afetam seu estado fisiológico. Neste trabalho, beijupirás foram cultivados em dois sistemas de criação diferentes, um tanque indoor com sistema de circulação de água aberto e um tanque-rede costeiro, e parâmetros genotóxicos, morfométricos e a atividade de enzimas da defesa antioxidante foram comparados ao final de um período de 11 semanas de criação. Não houve diferenças significativas nas taxas de crescimento dos dois tanques, porém o ensaio cometa e o de micronúcleo e demais anormalidades nucleares detectaram um maior dano ao DNA e uma maior frequência de anormalidades nucleares nos peixes mantidos no tanque indoor. Esses ensaios mostraram-se muito sensíveis para observar o estado fisiológico de beijupirás em cativeiro. A expressão da proteína p53, que é relacionada a integridade do DNA, foi detectada por imuno-histoquímica e não apresentou diferenças significativas entre os dois tanques, porém o valor da sua expressão foi alto, podendo indicar que a p53 estava ativada para regular os danos ao DNA já existentes e detectados pelo ensaio cometa. A atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e catalase também não apresentaram diferenças significativas entre os peixes dos dois tanques. A atividade destas enzimas precisa ser melhor estudada, pois não há um padrão de respostas conhecido para as diversas espécies de peixes já estudadas. Também foi realizada uma exposição de beijupirás à &#946;-naftoflavona (BNF) nas concentrações 2mg/kg e 10mg/kg em condições controladas de laboratório para compreender melhor os mecanismos de resposta desta espécie a um composto reconhecidamente tóxico. Foram avaliados parâmetros genotóxicos e enzimas relacionadas à defesa antioxidante. O ensaio cometa não detectou diferenças significativas no dano ao DNA entre os beijupirás dos controles e expostos à BNF, porém o ensaio de micronúcleo e demais anormalidades nucleares apresentou diferenças significativas entre os peixes expostos às duas concentrações em relação aos controles. Os danos detectados pelo ensaio cometa são quebras reparáveis que acontecem na fita de DNA, enquanto as anormalidades nucleares são danos permanentes, portanto, durante o período de exposição à BNF é possível que o tempo tenha sido suficiente para o reparo das quebras no DNA. Com relação às enzimas, apenas a catalase apresentou diferenças significativas de atividade, com uma inibição de atividade causada pela BNF em maior concentração em relação ao controle. Analisando-se os dois experimentos, as técnicas de ensaio cometa e micronúcleo e demais anormalidades nucleares indicaram serem as mais sensíveis para um monitoramento de beijupirás de cultivo, com a vantagem de não haver necessidade de sacrifício dos organismos. Ainda são necessários mais estudos com as enzimas da defesa antioxidante, em busca de um padrão na sua resposta a substâncias tóxicas. / The aquaculture production is continuously growing in the world, even though the marine fish cultures in Brazil are still smaller than its potential. The intention of rearing the cobia (Rachycentron canadum) species is currently increasing due to its high growth rates, adaptability to captivity and acceptance on the market. The intensive culturing conditions may cause stress to the organism, even affecting its physiological state. In this work, cobia has been reared in two different kinds of tanks: the first one was an indoor tank with open water circulation system and the other one was a near shore cage tank. Genotoxic and morphometric parameters and the activity of antioxidant defense enzymes were measured and compared at the end of 11 weeks of culturing. There weren\'t any significant differences between both tanks on the growth rate, but both the comet assay and the micronuclei and others nuclear abnormalities assay detected higher DNA damage and nuclear abnormalities frequency on the fish that were kept at the indoor tank. The comet and the nuclear abnormalities assays seem to be more sensitive to monitoring the physiological state of cobia during the culture. The protein p53, related to DNA integrity, expression was detected by immunohistochemical and didn\'t show significant differences, but the value of the expression was high, so it could indicate that p53 was activated to regulate the DNA damage that was detected by the comet assay. The activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and catalase also didn\'t demonstrate any significant differences between the fish at any of the tanks. As there isn\'t any known response pattern for the several species of fish that have already been studied, more studies are necessary concerning these enzymes. In addition to the experiment already mentioned, cobia were exposed to &#946;-naphthoflavone (BNF) at concentrations of 2mg/kg and 10mg/kg on laboratory controlled conditions to better understand the response mechanisms of this species to a toxic substance. The genotoxic parameters and the antioxidant defense enzymes activity were measured. The comet assay didn\'t detect any significant differences between the exposed to BNF and the control groups, however the nuclear abnormalities assay showed significant differences between the two exposed concentrations and the control groups. The DNA damages identified by the comet assay are breaks on the DNA strands, meanwhile, nuclear abnormalities are permanent damages. Therefore, during the exposed period it was possible that the time had been sufficient to repair the breaks on DNA. Catalase activity had significant differences with inhibition of the activity in cobia exposed to BNF of higher concentration, the others enzymes didn\'t demonstrate results with significant differences. Looking at both experiments, the comet assay and nuclear abnormalities assay seem to be the most sensitive to cobia\'s monitoring and they also have the advantage that there is no need to sacrifice the fish. Further studies on the antioxidant defense enzymes are needed in order to find a pattern on its response to toxic compounds.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T14:03:17Z No. of bitstreams: 2 Tese_Marília_Coriolano.pdf: 2264941 bytes, checksum: 2ab211450cc7168059a117568b535642 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T14:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Marília_Coriolano.pdf: 2264941 bytes, checksum: 2ab211450cc7168059a117568b535642 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / FACEPE / Lectinas constituem um grupo heterogêneo de proteínas e glicoproteínas que se ligam especificamente a carboidratos com alta afinidade. O beijupirá, Rachycentron canadum, pertence à família Rachycentridae, e é uma espécie que reune as melhores condições para o cultivo de peixe marinho. Uma lectina foi purificada do soro do peixe Rachycentron canadum (RcaL) através de cromatografia de afinidade com uma coluna Concanavalina A-Sepharose 4B. Um pico com atividade dessa lectina foi Ca2+ (20 mM) dependente. RcaL é uma proteína com atividade em pH 7.0-8.0 e resistente a 40 ºC por 10 min. A lectina mostrou maior especificidade pelos açúcares metil-α-D-manopiranosídeo e D-manose (200 mM); frações cromatografadas de RcaL eluídas aglutinaram eritrócitos de coelho (AH: 128-1), mantiveram 66% da atividade da lectina purificada e o fator de purificação obtido foi 1.14. Sob condições redutoras, uma banda de 19.2 kDa foi revelada em SDS-PAGE. PAGE confirmou que RcaL é uma proteína ácida revelada em um única banda. Ensaios citotóxicos e imunomodulatórios com RcaL em culturas de esplenócitos de camundongos foram realizados e mostraram que a lectina não foi citotóxica e induziu alta produção de IFN- e óxido nítrico. Além disso, também foi avaliada a resposta proliferativa e a produção de citocinas em esplenócitos de camundongos in vitro estimulados com as lectinas RcaL e Con A. Os resultados demonstraram altos índices de proliferação induzidos por RcaL em relação às células controles e a Con A. RcaL induziu alta produção de IL-2 e IL-6 em relação ao controle. Somente apoptose tardia foi promovida pelo tratamento com RcaL em relação ao controle, em 24 horas de ensaio; RcaL e Con A promoveram também apoptose tardia em 48 horas de ensaio. No entanto, a viabilidade celular foi superior a 90% em esplenócitos tratados com RcaL. Os resultados mostraram que a lectina RcaL induz preferencialmente resposta imune Th1 sugerindo que ela atua como um composto imunomodulador e também induz resposta proliferativa, revelando que esta lectina pode ser usada como agente mitogênico em ensaios imunoestimulatórios.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:38:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Renata Cristina da Penha França.pdf: 3945808 bytes, checksum: 4675019a8f00e532930096e155b2dc6f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Renata Cristina da Penha França.pdf: 3945808 bytes, checksum: 4675019a8f00e532930096e155b2dc6f (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE / Com a diminuição dos estoques pesqueiros e a estagnação das capturas observada desde o final da década de 1980, a aquicultura converteu-se atualmente em uma atividade consolidada capaz de abastecer e suprir à incessante demanda por produtos pesqueiros e proteicos de alto valor nutricional por seu crescente aporte na produção mundial de pescados. O bijupirá (Rachycentron canadum), conhecido internacionalmente como cobia é uma espécie nativa da costa brasileira e tem sido apontada como excelente candidato para desenvolver a piscicultura marinha nacional. Visando um melhor conhecimento sobre as exigências nutricionais e a fisiologia digestiva desta espécie. O objetivo do presente trabalho foi realizar a caracterização bioquímica e molecular da tripsina presente nos cecos pilóricos do bijupirá (Rachycentron canadum), testar a compatibilidade da tripsina purificada com sabões em pó e a sua estabilidade através de ensaios in vitro na presença de agentes surfactantes e oxidantes e comparar as peptidases digestivas presentes entre espécimes selvagens e cultivados no início do processo de domesticação em Pernambuco. Peptidases presentes nos cecos pilóricos de bijupirás selvagens e cultivados (R. canadum) foram caracterizadas quanto as suas propriedades físico-químicas através de ensaios de pH, temperatura ótima, estabilidade térmica, SDS-PAGE, efeito de inibidores e zimogramas utilizando substratos específicos para tripsina e quimotripsina (BApNA e SApNA), respectivamente. A temperatura e o pH ótimos obtidos para a tripsina-símile dos animais selvagens e cultivados foram de 55 e 60°C e 8,0 e 10,0, respectivamente, enquanto que para quimotripsina-símile foram de 50 e 45°C e 9,5 e 8,0 respectivamente. A tripsina-símile dos bijupirás selvagens e cultivados foi fortemente inibida com a utilização de inibidores clássicos como o PMSF (inibidor de serino proteases), TLCK (inibidor clássico de tripsina) e benzamidina (inibidor clássico de tripsina). O mesmo padrão foi observado para a quimotripsina-símile utilizando o TPCK (inibidor clássico de quimotripsina). O perfil eletroforético dos animais selvagens e cultivados revelaram bandas que variaram entre 6 kDa e 195 kDa. As bandas caseinolíticas observadas no zimograma revelaram pequenas variações que podem ser indicativos do processo inicial de adaptação enzimática do bijupirá frente às novas condições de cultivos quando comparados aos animais selvagens. O processo de purificação da tripsina do bijupirá utilizando-se a cromatografia de afinidade por BPTI-sepharose demonstrou ser um método eficiente, com alta reprodutibilidade, rápido e viável que permitiu o isolamento da tripsina presente no ceco pilórico e apresentou pH ótimo de 8,5, temperatura ótima de 50ºC, estabilidade térmica até 55ºC, Km de 0,38mM, Kcat 3,14 s-1 e Kcat/Km 8.26 s-1 mM-1 utilizando BApNA (8mM) como substrato. Estas caracterísiticas físico-químicas e cinéticas foram semelhantes a outras tripsinas de peixes reportadas na literatura. A mesma apresentou-se estável na presença de agesntes oxidantes e surfactantes e compatível com sabões em pó comerciais e que pode ser empregada na indústria de detergentes como nova fonte alternativa de enzimas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9639_1.pdf: 2959564 bytes, checksum: c8360ee63b22e54ee20baf9b0c416dc9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Peptidases dos cecos pilóricos de bijupirás selvagens e cultivados (Rachycentron canadum) foram caracterizados utilizando substratos específicos de tripsina e quimotripsina, inibidores e íons metálicos. Além disso, o perfil protéico foi determinado empregando SDS-PAGE e zimogramas. Para tanto pH ótimo e temperatura dos bijupirás selvagens e cultivados foi 7,0-10,0 e 40-60 ° C para a tripsina, como 7,0-9,5 e 40-55 ° C para quimotripsina. A tripsina e quimotripsina foram estáveis por 30 min a 50 ° C. O perfil eletroforetíco e zimograma foram similares para bijupirás selvagens e cultivados com faixas que variam de 195 kDa a 6 kDa. A atividade da enzima (BApNA como substrato) foi fortemente inibida por benzamidina e TLCK, sintéticos inibidores de tripsina, onde, como, a atividade de quimotripsina (SApNA como substrato) foi ligeiramente inibido por um inibidor de quimotripsina específico (TPCK). O uso de substratos e inibidores específicos sugerem a presença de tripsina e quimotripsina no cecos pilóricos de ambos animais selvagens e cultivados (Rachycentron canadum). Além disso, observou-se que os zimogramas dos animais selvagens e cultivados foram semelhantes, sugerindo que peptidases digestiva não foram influenciadas pela dieta artificial empregada e nem pela gestão de cultivo

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9504_1.pdf: 2191437 bytes, checksum: 16fae40cd934ddd16c686841334890d0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Lectinas constituem um grupo heterogêneo de proteínas e glicoproteínas que se ligam especificamente a carboidratos com alta afinidade. O beijupirá, Rachycentron canadum, pertence à família Rachycentridae, e é uma espécie que reune as melhores condições para o cultivo de peixe marinho. Uma lectina foi purificada do soro do peixe Rachycentron canadum (RcaL) através de cromatografia de afinidade com uma coluna Concanavalina A-Sepharose 4B. Um pico com atividade dessa lectina foi Ca2+ (20 mM) dependente. RcaL é uma proteína com atividade em pH 7.0-8.0 e resistente a 40 ºC por 10 min. A lectina mostrou maior especificidade pelos açúcares metil-&#945;-D-manopiranosídeo e D-manose (200 mM); frações cromatografadas de RcaL eluídas aglutinaram eritrócitos de coelho (AH: 128-1), mantiveram 66% da atividade da lectina purificada e o fator de purificação obtido foi 1.14. Sob condições redutoras, uma banda de 19.2 kDa foi revelada em SDS-PAGE. PAGE confirmou que RcaL é uma proteína ácida revelada em um única banda. Ensaios citotóxicos e imunomodulatórios com RcaL em culturas de esplenócitos de camundongos foram realizados e mostraram que a lectina não foi citotóxica e induziu alta produção de IFN-&#61543; e óxido nítrico. Além disso, também foi avaliada a resposta proliferativa e a produção de citocinas em esplenócitos de camundongos in vitro estimulados com as lectinas RcaL e Con A. Os resultados demonstraram altos índices de proliferação induzidos por RcaL em relação às células controles e a Con A. RcaL induziu alta produção de IL-2 e IL-6 em relação ao controle. Somente apoptose tardia foi promovida pelo tratamento com RcaL em relação ao controle, em 24 horas de ensaio; RcaL e Con A promoveram também apoptose tardia em 48 horas de ensaio. No entanto, a viabilidade celular foi superior a 90% em esplenócitos tratados com RcaL. Os resultados mostraram que a lectina RcaL induz preferencialmente resposta imune Th1 sugerindo que ela atua como um composto imunomodulador e também induz resposta proliferativa, revelando que esta lectina pode ser usada como agente mitogênico em ensaios imunoestimulatórios

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-07T14:44:31Z No. of bitstreams: 1 Carolina Notaro de Barros.pdf: 1851976 bytes, checksum: ea4c03805ac579e8724b14c8dce99a18 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-07T14:44:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carolina Notaro de Barros.pdf: 1851976 bytes, checksum: ea4c03805ac579e8724b14c8dce99a18 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Bacterial diseases restrict the expansion of intensive sea cage cobia (Rachycentron canadum) farming. They are usually treated with antibiotics, which in excess may lead to bacterial drug-resistance. Antibiotic residue can also reach the wild fish or other animals, fish farmers and fish consumers. In this study it was aimed to identify, by biochemical and molecular tests, potentially pathogenic Gram-negative bacteria multi-resistant to antibiotics and potentially probiotic Gram-positive bacteria isolated from farmed cobia intestine in different periods of the year. Ten fingerlings and 30 juveniles were collected, of which 82.5% showed evidence of bacterial infection and 47.5% of nephrocalcinosis. Biochemical and molecular identification results agreed in 86.11% of the 72 Gram-negative strains isolated. There were identified 18 species, 12 genera and five families, Aeromonaceae, Neisseriaceae, Pseudomonadaceae, Vibrionaceae and Enterobacteriaceae, the last one being more significant (63.88 %). The most frequent species were Enterobacter cloacae (27.78%) and Photobacterium damselae subsp. damselae (25%), greater pathogen to cobia. Antibiogram showed that 95.83% of the strains were penicillin resistant (6,25 μg), 62.50% ampicillin resistant (10 ug) and 15.28% enrofloxacin resistant (5 ug). Antibiotic multi-resistance was detected in 69.44% of the strains tested and E. cloacae achieved the highest MAR rate (0.8571). Regarding Gram-positive bacteria, 53 strains were obtained and classified in 13 species of the families Enterococcaceae, Paenibacillaceae, Staphylococcaceae, Streptococcaceae e Bacillaceae. Bacillus cereus was the most frequent species (39.62%) and Bacillaceae the most representative family. Antibacterial activity was observed in 16.98% of the strains, which produced inhibition zones ranged from 9.33 ± 0.58 to 28.77 ± 0.25 mm against Vibrio vulnificus, V. parahaemolyticus and V. alginolyticus. Species presenting antibacterial activity were Staphylococcus piscifermentans, S. lugdunensis, Bacillus spp., Enterococcus spp., E. faecium and Lactococcus lactis subsp. lactis. Of these, E. faecium was the most significant species (33.33%) producing the largest inhibition zones especially against V. vulnificus. Period of year was not significant (P ≥ 0.05) for cobia’s intestinal bacterial diversity, multidrug resistance of Gram-negative, or to the quantity of Gram-positive with antimicrobial properties. Intestine from R. canadum contains Gram-negative bacteria multi-drug resistant and potentially pathogenic to aquatic animals and humans, and Gram-positive bacteria with antimicrobial activity against vibrios, which must be considered as a prophylactic and/or therapeutic alternative against vibriosis in cobia farming. / A ocorrência de doenças bacterianas representa restrição à expansão do cultivo intensivo de beijupirá (Rachycentron candum) em tanques-rede e são tratadas normalmente com administração de antibióticos, que usados inadequadamente podem provocar o desenvolvimento de bactérias resistentes, chegar aos peixes selvagens, outros animais e afetar piscicultores e consumidores do produto. Objetivou-se identificar a diversidade bacteriana Gram-negativa, potencialmente patogênica multirresistentes a antibióticos e Gram-positiva, potencialmente probiótica frente a Vibrio spp., isoladas do intestino de beijupirá cultivado offshore sob influência de distintos períodos do ano. Foram coletados dez alevinos e 30 juvenis, dos quais 82,5% exibiram indícios de infecção bacteriana e 47,5% de nefrocalcinose. Das 72 linhagens Gram-negativas identificadas por bioquímicos, 86,11% apresentaram concordância com a classificação molecular. Foram descritas 18 espécies, 12 gêneros e cinco famílias, Aeromonaceae, Neisseriaceae, Pseudomonadaceae, Vibrionaceae e Enterobacteriaceae, sendo a útima mais representativa (63,88%). As espécies mais frequentes foram Enterobacter cloacae (27,78%) e Photobacterium damselae subsp. damselae (25%), maior patógeno do beijupirá. 95,83% dos isolados foram resistentes à penicilina (6,25 μg), 62,50% a ampicilina (10μg) e 15,28% a enrofloxacina (5 μg). 69,44% foram multirresistentes aos antibióticos e a linhagem com maior índice de resistência múltipla a antimicrobianos (MAR) foi da espécie E. cloacae (0,8571). Com relação às bactérias Gram-positivas, foram isoladas 53 linhagens classificadas em 13 espécies, pertencentes às famílias Enterococcaceae, Paenibacillaceae, Staphylococcaceae, Streptococcaceae e Bacillaceae, sendo a última mais representativa na qual inclui Bacillus cereus, a espécie mais frequente (39,62%). 16,98% dos isolados apresentaram atividade antibacteriana, produzindo halos de inibição que variaram de 9,33 ± 0,58 a 28,77 ± 0,25 mm, frente ao Vibrio vulnificus, V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. As espécies com atividade antibacteriana foram Staphylococcus piscifermentans, S. lugdunensis, Bacillus spp., Enterococcus spp., E. faecium e Lactococcus lactis subsp. lactis. E. faecium (33,33%) foi a espécie mais representativa, incluída no gênero Enterococcus spp. responsável pelos maiores halos de inibição especialmente frente ao V. vulnificus. O período do ano não influenciou significativamente (P ≥ 0,05) na diversidade bacteriana intestinal do beijupirá, na multirresistência das Gram-negativas, nem no número de Gram-positivas com propriedades antimicrobianas. O intestino do R. canadum inclui bactérias Gram-negativas potencialmente patogênicas para animais aquáticos e humanos, com elevadas taxas de multirresistência aos antimicrobianos testados, Gram-positivas patogênicas oportunistas para humanos e linhagens com atividade antimicrobiana frente à víbrios. As espécies Gram-positivas identificadas são consideradas probióticas para outras espécies de peixes e após os resultados encontrados nesse estudo, potenciais probióticas para beijupirá como alternativa profilática e/ou terapêutica frente às vibrioses.

Cobia represents one of the most attractive candidate species for aquaculture in the history of the industry. With rapid growth rate, high survival rates, and delectable flesh, cobia possess highly desirable characteristics for a cultured fish. Although interest in this species is high, issues pertaining to nutritional requirements must be resolved if this animal is to be produced sustainably. Cobia are high level marine carnivores and, as such, require relatively high dietary protein levels which usually are met through the use of fish meal. Fish meal supplies have become limited and costly, and alternate proteins must be utilized if future aquaculture production is to meet demand. Moreover, the movement towards organic aquaculture production presents additional challenges with respect to fish meal inclusion in aquafeeds designed for cobia. This thesis summarizes research pertaining to fish meal replacement in cobia aquafeeds with organically certifiable alternate protein sources. Initial trials with an organically certifiable yeast-based protein source indicated that up to 25% of the fish meal could be replaced without detrimental impacts to growth rates, feed efficiency, or biological indices. Substitution levels above this resulted in decreased performance in all measured parameters. Based on these results and other research however, it is hypothesized that fish meal replacement levels could be increased to 40% without detrimental impacts upon production characteristics. In a subsequent study, multiple organically certifiable alternate protein sources were investigated for their ability to replace fish meal in aquafeeds for juvenile cobia. A 25% inclusion level of yeast-based protein was used along with a 40% inclusion level. The remaining alternate proteins (soybean meal, soybean isolate, and hemp) also were included at 40% of dietary protein. Two additional diets were formulated to contain all four alternate proteins with or without 8% fish meal. Lack of fish meal resulted in poor survival, while the 8% inclusion of fish meal resulted in decreased overall performance compared to fish fed the fish meal control and the diets with up to 40% organic protein source. When included at 40% of fish meal replacement, these alternate protein sources led to returned excellent weight gain, feed efficiencies, and other production characteristics when compared to the 100% fish meal control diet. I hypothesized that higher inclusion level of alternate protein sources could be achieved with specific amino acid supplementation. Two additional trials involved the use of the yeast-based protein with supplementation by the amino acids methionine, tryptophan, and taurine. Diets containing 50 and 75% of the yeast-based protein were investigated with the addition of methionine (0.3%) and tryptophan (0.2%), with and without taurine (0.5%). Taurine significantly and dramatically increased production performance. A final trial re-evaluated that ability of the yeast-based protein to completely replace fish meal with supplemental taurine (0.5%). While growth at the 50% inclusion level equaled that of the control, at higher levels (75 and 100%), growth was reduced even with taurine supplementation, leading to the hypothesis that other essential amino acids may also have been limiting. This thesis presents evidence that replacement of fish meal, as well as organic production of cobia, is feasible. However, these studies also illustrate the necessity of developing quantitative amino acid requirement data for cobia if these goals are to be fully realized. / Master of Science