Made available in DSpace on 2014-07-08T02:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459063-Texto+Completo-0.pdf: 1347092 bytes, checksum: 2e34761fdd59a6506f5f964b304ec24c (MD5) Previous issue date: 2014 / Introduction: Dental pulp is composed of loose connective tissue, which reacts when facing a pathogenic agent, and the inflammation is the first response. DGKα is one of the key enzymes involved on inflammations cellular events. It participates on the neutrophils recruiting to the injury site and on the regulation of superoxide production. The aim of this study was to evaluate the localization of the DGKα in healthy and inflamed/infected dental pulp of rats.Methods: Were used eighteen (18) male Wistar rats. The animals were divided into three groups of six rats each. In Group 1 (control group), no cavity opening was performed. In Groups 2 and 3 dental pulp of the left first molars was exposed to oral environment for 24hours and 7 days respectively. Euthanasia was performed after the experimental periods and the jaws were dissected for histological evaluation and immunodetection of DGKα enzyme.Results: Histological analysis of the dental pulp showed that tissue exposure led to inflammatory and degenerative events, which varied in their extension according to the experimental period of time. In groups 2 and 3, DGKα immunolabeling was observed in neutrophils and abscessed areas, being detected on a greater amplitude of pulp tissue in the 24 hour period.Conclusions: DGKα is expressed on the initial stages of pulp inflammation, although there is no relation with its extent. The understanding of the DGKα role in the pathways of pulp inflammation can help the development of new therapeutic strategies to promote pulp repair. / Introdução: A polpa dentária é formada por um tecido conjuntivo frouxo, que reage frente a um agente agressor patogênico, sendo a inflamação uma de suas manifestações iniciais. A DGKα é uma das enzimas-chave envolvida em eventos celulares da inflamação. A mesma participa do recrutamento de neutrófilos para o local da injúria e da regulação da produção de superóxido. O objetivo deste estudo foi avaliar, em ratos, a localização da DGKα em polpas saudáveis e em polpas inflamadas/infectadas.Metodologia: Foram utilizados dezoito (18) ratos machos Wistar. Os animais foram divididos em três grupos de seis animais cada. No grupo 1 (grupo controle), não foi realizado nenhum procedimento. Nos grupos 2 e 3, a polpa dentária dos primeiros molares do lado esquerdo foi exposta ao meio bucal por 24horas e por 7 dias, respectivamente. A eutanásia foi realizada após os períodos experimentais, e as mandíbulas foram dissecadas para análise histológica e imunolocalização da enzima DGKα.Resultados: A avaliação histológica da polpa dentária mostrou que a exposição tecidual levou a eventos inflamatórios e degenerativos, que variaram de acordo com o período de tempo. Nos grupos 2 e 3, houve marcação da DGKα em neutrófilos e áreas próximas a abscessos, sendo detectada em uma maior amplitude no período de 24 horas.Conclusões: A DGKα é expressa em estágios iniciais da inflamação, não sendo relacionada com a extensão da inflamação pulpar. O entendimento do papel da DGKα na cascata de eventos da inflamação pulpar pode trazer informações para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas que promovam o reparo pulpar.

O propósito deste estudo foi verificar o comportamento inflamatório do tecido osteomedular de ratos quando em contato com agregado de trióxido mineral (MTA Angelus®) ou pasta de moldagem zinco-enólica LS (Vigodent®) adicionada de um tipo de substância radiopacificadora (subnitrato de bismuto ou iodofórmio) e acrescida ou não de hidróxido de cálcio. O grupo controle era constituído por tubos vazios. Os implantes foram inseridos no interior da tíbia e fêmur direitos de cada um dos 51 ratos totalizando 102 amostras. Em cada um dos períodos experimentais de 30, 60 e 90 dias, coletou-se 34 espécimes que, após processamento histotécnico, foram microscopicamente analisados e seus fenômenos julgados com base em um sistema de escores.. Os testes estatísticos de Kruskal-Wallis, Mann Whitney e Dunn, nos permitiram verificar que o reparo aconteceu associado a ambos materiais, embora mais tardio nos grupos com óxido de zinco e eugenol (p=0.05). A adição de um ou outro agente radiopacificador não alterou o caráter inflamatório da pasta e a incorporação de hidróxido de cálcio parece não melhorar seu comportamento biológico(p=0.05). / This study investigated the rat bone marrow healing associated to mineral trioxide aggregate (MTA®- Angelus) or a zinc-oxide impression paste (LS® - Vigodent) added of radiopaque substance (iodoform or bismuth subnitrate) and calcium hydroxide. The control group was composed of empty tubes. The tubes were surgically inserted in the right femur and tibia of 45 rats, resulting in 102 specimens . On each experimental period of 30, 60 and 90 days after surgical implantation, seventeen animal were randomly killed, and had their right leg removed to be fixed, decalcified and embedded in parafin. After histological procedures, the tissue phenomena were examined under light microscope, in a blind way, based on a qualitative scale. The statistical tests showed anticipated repair associated with mineral trioxide aggregate (p≥ 0.05). No statistical differences were found between inflammatory behaviour of both radiopaque agents (p≥0.05). The calcium hydroxide powder added to zinc-oxide eugenol sealer seemed not to improve its biological performance (p≥0.05).

O presente trabalho avaliou as concentrações de 0 (controle), 5, 15 e 50 ppm de flúor na água na indução ectópica de osso em ratos jovens (90dias) e velhos (365 dias). Para tanto, 80 ratos Wistar, sendo 40 com 90 dias e 40 com 365 dias receberam implantes de matriz óssea alógena desmineralizada. Depois de 28 dias, os animais foram mortos e os implantes radiografados e analisados morfometricamente. Também foram obtidas amostras do fêmur e plasma dos animais, para análise de flúor com o eletrodo. A análise de flúor na superfície do fêmur foi feita pelo método direto e no fêmur e no plasma foi feita após difusão facilitada por HMDS. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey, teste t e regressão linear (p<0,05). A concentração média (±DP) de F no plasma (µg/mL) para os ratos de 90 dias foi de 0,025±0,002a, 0,037±0,007ab, 0,057±0,011b, 0,145±0,029c, na superfície do fêmur (µg/g) foi de 564±122a, 961±357ab, 1415±546bc, 3194±502c e no fêmur(µg/g) foi de 207±21a, 481±76a, 1217±188b, 2735±355c, para as concentrações de 0(controle), 5, 15 e 50 ppm, respectivamente . Para os ratos de 365 dias, a concentração de flúor no plasma (µg/mL) foi de 0,031±0,003a, 0,045±0,010ab, 0,063±0,016b, 0,118±0,026c, na superfície do fêmur (µg/g) foi de 675±120a, 1298±426ab, 2140±681bc, 3870±843c e no fêmur (µg/g) foi de 694±152a, 1376±583b, 1732±564b, 4494±343c. Houve correlação positiva da quantidade de flúor presente entre o plasma e a superfície do fêmur (r = 0,89; p<0,0001 e r = 0,87; p<0,0001), plasma e o fêmur (r = 0,91; p<0,0001 e r = 0,82; p<0,0001) e entre a superfície do fêmur e fêmur (r = 0,99; p<0,0001 e r = 0,84; p<0,0001) para os ratos de 90 e 365 dias respectivamente. A análise morfométrica revelou uma maior formação óssea para os ratos jovens, que receberam 5 ppm F na água de beber, embora não tenha havido significância, enquanto houve um prejuízo significante na formação óssea para aqueles que receberam 50 ppm F. Para os ratos velhos, não houve diferença significante entre os subgrupos. As observações radiológicas confirmaram os achados morfométricos. Os resultados sugerem que o flúor em pequenas doses na água de beber tem efeito anabólico na formação óssea em ratos, mas isto só acontece em animais jovens. / This study evaluated the effects of various fluoride (F) concentrations (0, 5, 15 and 50 ppm) on ectopic bone formation in young and old rats. Eighty male Wistar rats were received as weanlings and were assigned to 4 groups (n=20/gr), which differed according to the F concentration they received in the drinking water. Groups 1, 2, 3 and 4 received water containing 0(control), 5, 15 and 50 mg F/L, respectively. When half of the rats were 90 days old, demineralized bone was implanted. The animals were killed 28 days after and implant, plasma and femur were collected. The other rats received demineralized bone matrix implants when they were 365 days old and were also killed 28 days after. The femur surface was analyzed for F with the ion-specific electrode. The femur ash and the plasma were analyzed for F with the ion specific electrode, following HMDSfacilitated diffusion. The implants were analysed by histomorphometry and radiography. Data were tested for statistically significant differences by ANOVA and Tukey´s test, t test and linear regression (p<0.05). Mean plasma F concentrations (µg/mL) for 90-day-old rats were 0.025±0.002a, 0.037±0.007ab, 0.057±0.011b and 0.145±0.029c, femur surface F concentrations (µg/g) were 564 ±122a, 961±357ab, 1415±546bc and 3194±502c and femur F concentrations (µg/g) were 207±21a, 481±76a, 1217±188b and 2735±355c, for groups 1, 2, 3 and 4 respectively. For 365 -day-old rats, plasma (µg/mL) F concentrations were 0.031±0.003a, 0.045±0.010ab, 0.063±0.016b and 0.118±0.026c, femur surface F concentration (µg/g) were 675±120a, 1298±426ab, 2140±681bc and 3870±843c and femur F concentrations (µg/g) were 694±152a, 1376±583b, 1732±564b and 4494±343c respectively. Significant positive correlations were found between plasma and femur surface(r=0.89; p<0.0001 F and r=0.87; p<0.0001), plasma and femur (r=0.91; p<0.0001 and r=0.82; p<0.0001) and femur surface and femur (r=0.92; p<0.0001 and r=0.84; p<0.0001) for 90 and 365 day old rats respectively. The morphometric analyses indicated an increase in bone formation for younger rats that received 5 ppm F in the drinking water but this was not statistically significant. The younger rats that received 50 ppm F showed a significant impairment on the bone formation. The bone formation was not significantly different among the older rats. The results suggest that lower doses of fluoride in the drinking water may have an anabolic effects on bone formation in younger rats.

Introdução e objetivos: O dano de isquemia-reperfusão (I/R) é uma das principais causas de má-função do enxerto precocemente após um transplante hepático e influencia de forma adversa a sobrevida dos pacientes após o transplante. Uma série de mediadores tem sido implicada na sua patogênese, incluindo o óxido nítrico (NO). Devido aos benefícios do NO durante a pré-condição isquêmica e reperfusão, estratégias para prevenir ou melhorar o I/R através do estímulo da produção hepática de NO é uma área de significativo interesse clínico. Neste estudo, foi avaliado o papel da S-nitroso-Nacetilcisteína (SNAC) como uma doadora de NO na prevenção do I/R em um modelo animal. Materiais e métodos: Fígados obtidos de 15 ratos Wistar machos foram divididos em 3 grupos experimentais, conforme a solução de preservação utilizada: solução da Universidade de Wisconsin (UW); solução de SNAC; e solução de UW + SNAC (SNAC+UW). Os níveis de AST, ALT e LDH foram determinados em amostras do líquido de preservação em 2, 4 e 6 horas de isquemia a frio. Após 6 h, os fígados foram submetidos a um modelo de reperfusão hepática ex-situ por 15 minutos. AST, ALT, LDH e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) foram determinadas no sangue após a reperfusão, e foram seccionados fragmentos hepáticos para histologia, determinação de TBARS, catalase e glutationa, além da análise da expressão imunohistoquímica de ICAM-1 e TNF-R2. Resultados: Durante a preservação a frio, a liberação de AST e LDH no grupo SNAC foi significativamente menor que nos grupos UW e SNAC+UW (p= 0.004 and p=0.03, respectivamente), não tendo havido diferença significativa na dosagem de ALT (p=0.3). Após a reperfusão, os níveis séricos de AST, ALT e LDH, bem como de TBARS e catalase foram semelhantes entre grupos. Comparado ao grupo UW, a concentração hepática de glutationa foi menor nos grupos SNAC e SNAC + UW (p<0.001). Não houve sinais histológicos de dano de preservação em nenhuma amostra, assim como não houve expressão hepática de ICAM-1 e TNF-R2. Conclusão: A solução de SNAC demonstrou um efeito protetor superior na preservação de fígados de ratos durante a isquemia a frio, tendo sido equivalente à UW após a reperfusão. / Background/aims: Ischemia-reperfusion injury (I/R) is one of the major causes of poor graft function early after liver transplantation which adversely influences patients’ survival. A variety of mediators have been implicated in the pathogenesis of ischemiareperfusion vascular injury, including nitric oxide (NO). Due to the beneficial effects of NO during preconditioning and reperfusion, strategies to prevent or ameliorate I/R through the stimulation of hepatic NO production are an area of significant clinical interest. We evaluated the role of S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC) as an NO donor, in the prevention of liver I/R in an animal model. Methods: Adult male Wistar rats were randomly assigned into three experimental groups of 5 animals, accordingly to the preservation solution: 1. University of Wiscosin (UW) solution; 2. SNAC solution; and 3. SNAC-containing UW solution (SNAC+UW). AST, ALT and LDH were determined on samples of the cold storage solution at 2, 4 and 6 h of preservation. After 6 h of cold storage, a 15 min reperfusion model was applied. After this period, the reperfusion system was interrupted and blood samples were taken for measurements of AST, ALT, LDH and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Hepatic fragments were processed for histological studies, determination of TBARS, catalase and glutathione, and also expression ICAM-1 and TNF-R2. Results: During the cold preservation, AST and LDH in the SNAC group were significantly lower than in UW group and the SNAC+UW group (p= 0.004 and p=0.03, respectively). ALT was comparable among the groups (p=0.3). After reperfusion, serum levels of AST, ALT and LDH, as well as hepatic TBARS and catalase showed no significant differences among the groups. Compared to the UW group glutathione concentration was lower in the SNAC and SNAC+UW (p<0.001). No histological signs of preservation injury were found. In immunohistochemistry, the expression of ICAM-1 and TNF-R2 were not detected in any of the organs. Conclusion: SNAC solution showed a higher protective effect for the preservation of rat livers during cold storage, but was comparable to UW solution post-reperfusion.

A manipulação neonatal imprime alterações no desenvolvimento neuroendócrino, morfológico e comportamental de ratos. A área pré-óptica medial (MPOA) contém neurônios produtores do hormônio liberador do hormônio luteinizante (LHRH) que estão intimamente relacionados com a reprodução. Os núcleos periventricular anteroventral (AVPV) e a amígdala medial póstero-dorsal (MePD) são áreas do sistema nervoso central (SNC) que apresentam receptores de estrógeno, portanto poderiam estar atuando no feedback das gonadotrofinas. O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos da manipulação neonatal sobre o volume do núcleo, a densidade de células, o diâmetro do corpo celular de neurônios e o número total estimado de neurônios da MePD e AVPV dos lados direito e esquerdo, em ratas aos 11 e 90 dias de idade. Na MPOA, foram avaliadas a densidade de células e o diâmetro do corpo celular de neurônios. A MPOA apresentou uma redução da densidade numérica de 50% em ratas manipuladas de 11 dias e 50% em ratas manipuladas aos 90 dias de idade. A manipulação neonatal provocou alterações nos parâmetros analisados nas três áreas estudadas, quando comparadas aos grupos não manipulados. Na MePD a redução foi 63% e de 47% respectivamente aos 11 e aos 90 dias de idade. No AVPV a redução foi de 44% e de 54% aos 11 e 90 dias de idade. As dimensões lineares do soma dos neurônios da MePD e MPOA apresentaram uma redução de tal forma que o diâmetro dos neurônios no grupo manipulado foi significativamente menor do que o grupo não manipulado. Mas as dimensões lineares dos neurônios do AVPV não apresentaram alterações significativas. A manipulação neonatal por uma causa ainda desconhecida induz a alterações estáveis na MPOA, MePD e AVPV. A diminuição do número de neurônios nessas estruturas pode explicar a redução da atividade do eixo hipotálamo-hipófise-gonadal (HPG) em ratas adultas, manipuladas no período neonatal.

A Dieta Cetogênica é caracterizada pelo alto teor de gordura e baixo teor de carboidratos e proteínas, e tem sido proposta como benéfica em crianças com desordens epiléticas que não respondem ao tratamento convencional de drogas anti-epiléticas. O retardo de crescimento é um importante inconveniente desta dieta e as causas metabólicas ainda não estão bem caracterizadas. O objetivo desse estudo é examinar a variação de peso corporal e de tecido adiposo de ratos Wistar tratados com a dieta cetogênica durante 6 semanas, e a atividade da fração citosólica da enzima fosfoenolpiruvato carboxicinase (PEPCK) no tecido adiposo. Os ratos alimentados com a dieta cetogênica apresentaram uma diminuição do peso corporal, mas um significante aumento de tecido adiposo. A razão tecido adiposo/peso corporal apresentou diferenças entre os ratos cetogênicos e os controles já na primeira semana de tratamento, cerca de 2 vezes maior nos ratos cetogênicos. A lipogênese visceral foi mantida por um aumento na atividade da PEPCK, objetivando o fornecimento de glicerol-3- fosfato para a síntese de triacilglicerol e este acúmulo de gordura foi acompanhado por intolerância à glicose. Não foram observadas mudanças na glicemia e lipidemia basais. Estes dados contribuem para o entendimento dos efeitos metabólicos da dieta cetogênica e sugere alguns riscos potenciais desta dieta.

A serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT), é um dos neurotransmissores que possui um papel importante na neurobiologia do comportamento agressivo. Estudos têm demonstrado que níveis elevados de serotonina conduzem a uma diminuição da agressividade em muitas espécies diferentes incluindo a espécie humana. Os receptores 5-HT1B estão envolvidos em funções comportamentais importantes, como o comportamento agressivo. Injeções sistêmicas de agonistas dos receptores 5-HT1B apresentam efeitos específicos antiagressivos. Recentemente, no córtex pré-frontal, mais especificamente na região orbitofrontal, tem sido identificado uma importante inibição no controle do comportamento, em particular o comportamento impulsivo e agressivo. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos de dois agonistas dos receptores 5-HT1B o CP-94,253 e o CP-93,129 sobre o comportamento agressivo de ratas fêmeas submetidas à provocação social e o papel do córtex pré-frontal: a região orbitofrontal, sobre o comportamento agressivo. Foram utilizadas ratas fêmeas Wistar microinjetadas no nono dia pós-parto com CP-94,253 ou CP-93,129. O agonista dos receptores 5-HT1B o CP-94,253 foi injetado nas doses de 0,56 (n=8) e 1,0 μg/0,2μl (n=8). O outro agonista dos receptores 5-HT1B o CP-93,129 foi injetado na dose de 1,0 μg/0,2μl (n=9). O veículo para o CP-94,253 foi Dimetilsulfóxido (DMSO) 5% juntamente com 5% de Tween 80 diluídos em água destilada e para o CP-93,129 o veículo foi salina. O experimento iniciou com fêmeas prenhas. No 5º dia pós-parto, a fêmea foi submetida ao protocolo de provocação social. No 6º dia pós-parto, a fêmea foi submetida à cirurgia estereotáxica e no 9º dia pós-parto a fêmea foi microinjetada com veículo ou agonistas 5- HT1B. Após a microinjeção foi realizado o teste comportamental, sendo que os comportamentos - agressivos e não-agressivos – foram filmados para posterior análise. A freqüência dos comportamentos foi comparada entre os grupos tratados e veículo pela análise de variância no grupo do CP-94,253 e foi utilizado pelo Teste t de Student para comparar o grupo CP-93,129 com o veículo. Os resultados mostraram uma diminuição no comportamento agressivo maternal (ataque lateral, postura agressiva e dominar) após a microinjeção do agonista CP-93,129 comparado com o grupo salina. Os dois agonistas dos receptores 5-HT1B o CP-94,253 e o CP-93,129 não tiveram os mesmos efeitos. O CP- 93,129, quando microinjetado no córtex pré-frontal, na região orbitofrontal de ratas submetidas à provocação social, tem efeitos antiagressivos enquanto que o CP-94,253 não alterou o comportamento agressivo.

Em ratos, um procedimento simples, como “manipular” os filhotes por alguns minutos durante as duas primeiras semanas de vida, pode marcar decisivamente o desenvolvimento do indivíduo. Assim, esse modelo experimental tem sido muito utilizado para se examinar os mecanismos pelos quais variações precoces do ambiente do animal podem afetar seu desenvolvimento. A manipulação neonatal tem como conseqüência, na vida adulta, uma série de alterações comportamentais e neuroendócrinas que se caracterizam basicamente por uma diminuição do medo. Por outro lado, esse procedimento também induz a uma diminuição da função reprodutiva tanto em machos quanto em fêmeas. No entanto, os mecanismos neurais afetados por essas intervenções no período neonatal são pouco conhecidos. Em filhotes de ratos, a identificação da mãe é vital para a sobrevivência. Esse reconhecimento ocorre devido ao aprendizado olfatório, que se dá por condicionamento, através do pareamento do cuidado maternal (estímulo tátil) com o cheiro da mãe. O estímulo tátil, realizado pela mãe, atua sobre o locus coeruleus promovendo um aumento na liberação de noradrenalina no bulbo olfatório, que vai resultar na fosforilação do CREB, fundamental para a formação da memória olfatória. Os resultados apresentados nessa tese mostram que a manipulação neonatal repetida interfere com esse aprendizado olfatório, impedindo o reconhecimento do odor maternal. Esse efeito da manipulação neonatal é dependente de sexo, pois apenas as fêmeas foram afetadas. A manipulação neonatal interfere com a via noradrenalina/CREB, pois as ratas do grupo manipulação repetida aos 7 dias após o nascimento apresentam uma redução no conteúdo de noradrenalina no bulbo olfatório e um aumento no conteúdo de MHPG (metabólito da noradrenalina), indicando um aumento da atividade noradrenérgica no bulbo olfatório. Esse aumento pode interferir com a fosforilação do CREB, uma vez que os ratos manipulados não apresentam um aumento na fosforilação do CREB. Portanto, a ausência do reconhecimento da mãe, pelo filhote manipulado, provavelmente seja devido a um aumento da estimulação tátil que o filhote recebe o que, por sua vez, altera o sistema noradrenérgico, que está envolvido na regulação da fosforilação do CREB, fundamental para a formação da memória olfatório no bulbo olfatório. Além de interferir na relação mãe-filhote, experiências no início da vida do indivíduo podem determinar o comportamento sexual do animal quando adulto, isto provavelmente ocorre porque os odores que são associados à infância, apresentam um valor na vida adulta, entretanto, o papel desse odor muda da infância (reconhecimento da mãe) para a vida adulta (reprodução). Os resultados apresentados nessa tese mostraram que a manipulação neonatal repetida reduz a motivação sexual tanto em machos quanto em fêmeas, evidenciado pelo teste de preferência sexual. O efeito da manipulação neonatal sobre a ausência de preferência sexual é dependente de sexo, pois em machos a experiência sexual foi capaz de reverter esse efeito, o que não aconteceu em fêmeas. Assim como a motivação sexual adequada, a regulação da secreção do hormônio liberador de gondadotrofinas (GnRH) também é essencial para o sucesso reprodutivo. O GnRH desempenha um papel crucial na receptividade sexual e na ovulação. O sistema noradrenérgico e o óxido nitrérgico apresentam um papel fundamental na regulação indireta da secreção do GnRH. Ratas manipuladas no período neonatal, quando adultas, apresentam um aumento do conteúdo de GnRH na área pré-óptica medial. Os resultados apresentados nessa tese mostraram que a manipulação neonatal repetida não altera o conteúdo de noradrenalina e MHPG na pré-óptica medial e hipotálamo médio basal. No entanto, o conteúdo de óxido nítrico no hipotálamo está reduzido nas ratas do grupo manipulação repetida, podendo ser uma das prováveis causa do aumento do conteúdo de GnRH na pré-óptica medial da rata manipulada no período neonatal, resultando na redução do pico de LH na tarde do proestro e conseqüentemente na redução da ovulação. Em conclusão, a manipulação no período neonatal interfere negativamente no estabelecimento de relações sociais como a relação mãe-filhote e a escolha do parceiro sexual.

O glutamato (Glu) é o neurotransmissor excitatório mais abundante do sistema nervoso central e está envolvido em funções cerebrais como aprendizado/memória, desenvolvimento e envelhecimento cerebral. Mudanças na vulnerabilidade neuronal durante o desenvolvimento pós-natal podem ser parcialmente explicadas por mudanças na expressão das subunidades de receptores de Glu (GluRs). O objetivo desse trabalho foi determinar o padrão de expressão das subunidades de GluRs do tipo N-metil-D-aspartato (NMDA) em quatro estruturas cerebrais (cerebelo, córtex, estriato e hipocampo) em diferentes estágios do desenvolvimento pós-natal de ratos por quantificação relativa por PCR em tempo real. Mudanças significativas na expressão de Grin1 foram observadas em quase todas as estruturas em relação aos níveis pós-natais de expressão. Níveis de expressão de Grin2A foram menores no cerebelo com um padrão de aumento gradual e níveis elevados na vida adulta no córtex e no hipocampo. A expressão do Grin2B demonstrou um padrão decrescente no cerebelo assim como no hipocampo. Por outro lado, o padrão de expressão de Grin2C mostrou uma tendência a aumentar nas quatro estruturas, a qual foi mais evidente no cerebelo com um aumento significativo nos níveis de expressão. O padrão de expressão do Grin2D foi também caracterizado por uma tendência para uma diminuição nos níveis de expressão pela vida adulta. Essa tendência foi mais evidente no cerebelo e no hipocampo. Expressões de Grin3A e Grin3B não demonstraram uma tendência específica. No caso de Grin3B, níveis semelhantes de expressão foram observados com a exceção de um pico de expressão no cerebelo de ratos de 10 dias. Os dados obtidos nesse estudo permitiram-nos introduzir novos aspectos na área de expressão de GluRs e poderão contribuir para desvendar potenciais alvos para o desenvolvimento de terapias mais efetivas para muitas doenças. / Glutamate (Glu) is the most abundant excitatory neurotransmitter of the central nervous system and is involved in cerebral functions such as learning/memory, development, and cerebral aging. The changes in vulnerability of neurons during postnatal development can be partially explained by changes in expression of glutamate receptors subunits (GluRs). In this work, we aimed to determine expression profile of ionotropic Nmethil- D-aspartate (NMDA) GluR subunits in four brain structures (cortex, cerebellum, striatum and hippocampus) in different stages of postnatal rat development by relative quantification real-time PCR using glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (Gapdh) as endogenous control. Significant changes in Grin1 expression were demonstrated in almost each age from all structures in relation to the initial postnatal expression level. Levels of expression of Grin2A were lower in cerebellum with a gradual raising pattern and high levels in adulthood in cortex and hippocampus. Grin2B expression levels were found to show a decreasing pattern in cerebellum as well as in hippocampus. Conversely, Grin2C expression pattern was found to show an increasing tendency in all four brain structures being more evident in cerebellum with significantly high expression levels. Expression profile of Grin2D was also characterized by a tendency to a drop in expression levels throughout adulthood. This tendency was well defined mainly in cerebellum and in hippocampus. Grin3A and Grin3B expression were found to show a non specific tendency. In the case of Grin3B, even levels of expression were seen with a marked exception of a peak in expression in cerebellum of 10-days old rats. Data generated in this study brings new insight in the field of GluRs expression and might contribute to unmask potential targets for the development of more effective therapies for many disorders.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4830_1.pdf: 7927751 bytes, checksum: 9f743297b41b5a4d3aa0cefd7386f6d9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O extrato bruto de bromelina é obtido a partir de vegetais da família das bromélias, em especial do abacaxi, contém proteínas e carboidratos, entre as proteínas encontramos as endo-petidases, fosfatases, glicosidases, peroxidases, celulases, nucleases e os inibidores de proteases. Destacam-se a bromelina do talo (E.C. 3.4.22.32), ananaina (E.C. 3.4.22.31), comosaina e a bromelina do fruto (E.C. 3.4.22.33), com pesos moleculares em torno de 23 a 24 kD. Extratos obtidos do caule e fruto do abacaxizeiro têm sido utilizados como medicamento desde o período précolombiano pelos curandeiros indígenas e pela população em geral até os dias atuais. Estudos in vitro e in vivo relatam diversas aplicações clínicas para a bromelina, como agente antiinflamatório, antitrombótico, digestório e mucolítico. Publicações recentes sugerem um papel importante para a bromelina no tratamento de doenças inflamatórias e infecciosas intestinais. A bromelina, assim como outros peptídeos, foi detectada no plasma após ingestão oral em humanos. Em camundongos foi detectada a presença da bromelina no plasma e em resíduos fecais, com atividade enzimática demonstrável em níveis biologicamente significativos, após administração oral. Estes resultados apontam a bromelina como um importante agente terapêutico de administração oral aplicável em um amplo espectro de patologias. Recentemente, foi comercialmente disponibilizado o Melxi ®, medicação que combina o extrato de bromelina com o mel de abelha e que possui em sua atividade mucolítica sua principal indicação terapêutica. Com o objetivo de avaliar a toxicidade tecidual do Melxi ® e da bromelina, estas substâncias foram administradas em altas concentrações em animais. Foram utilizados ratos Wistar, com idade entre 6 e 8 semanas e peso aproximado de 200 g. Os animais foram distribuídos em 4 grupos de 10 animais e receberam administração de solução oral, através de gavagem de Melxi® 20 ml/kg (grupo A), bromelina[15mg/ml] 20 ml/Kg (grupo B), bromelina[1g/Kg] 20 ml/Kg (grupo C) e NaCl[0,9%] 20 ml/kg. Os animais foram observados por um período de 24 horas. Não foram detectadas alterações fisiológicas, lesões macroscópicas ou microscópicas em tecidos gástrico, hepático, renal, esplênico e pulmonar após a administração oral de Melxi ® e bromelina em ratos, estes resultados indicam a bromelina e o Melxi® como medicações de origem natural e baixa toxicidade, aplicável em diversas situações clínicas