A lesão de isquemia e reperfusão pulmonar (LIRI) é a principal causa de disfunção precoce do enxerto após o transplante pulmonar. Diferentes substâncias têm sido utilizadas na tentativa de proteger o pulmão na fase inicial pós-transplante e melhorar o desempenho do enxerto com pouco resultado tanto a curto quanto em longo prazo. O peptídeo liberador gastrina (GRP) está envolvido na indução de respostas imunes inatas adaptativas por induzir a quimiotaxia de mastócitos, migração de macrófagos e proliferação de células T e fibroblastos. Este agente foi capaz de proteger o dano tecidual em outros modelos experimentais de inflamação, incluindo sepsis pós-isquemia e perfuração de ceco, artrite e colite induzidos por drogas. O efeito protetor foi atribuído ao bloqueio na liberação de citocinas pró-inflamatórias, como da interleucina -1 beta (IL-1G) e TNF- alfa (TNF-H), e inibição de migração de mononucleares. Nesta tese o efeito protetor do antagonista do receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPR), o RC-3095 (RC) endovenosamente administrado antes e depois da reperfusão foi estudado em modelo animal de LIRI. Vinte ratos Wistar foram randomizados em quatro grupos: (SHAM), Isquemia-reperfusão (IR), administração de RC Pré-IR (RC-Pré) e RC Pós-IR (RC-Pós). Após a reperfusão, os animais foram observados por 120 minutos. Foi realizada a análise histológica, com verificação de escala de lesão pulmonar, e imunohistoquímica para Caspase clivada - 9 e oxido nítrico sintetase endotelial (eNOS). Expressão de IL-1G e TNF-H foram quantificadas por Enzime-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Uma redução significativa na pressão arterial média foi observada nos grupos IR e RC - Pré quando comparado com seus valores antes da reperfusão (p < 0.001). No final do experimento o grupo RC-Pós apresentou uma redução significativa na pressão arterial de oxigênio em relação ao início (p=0.005). Observou-se maior expressão de Caspase - 9 clivada no grupo RC-Pós (p>0.013), quando comparado aos demais grupos. Não houve diferença significativa na captação da eNOS entre os grupos (p=0.206). Os grupos RC - Pré e Pós mostraram discreta redução, não atingindo significância estatística, da IL-1G (p=0.159) e TNF- H (p= 0.260), quando comparado com o grupo IR. Não houve diferença estatística entre as médias dos escores histológicos entre os diferentes grupos. e SHAM. Notavelmente, quando administrado após reperfusão parece potencializar dano celular estimulando a apoptose. Concluindo, a utilização do antagonista do peptídeo liberador de gastrina, RC-3095, não produziu efeito protetor significativo na resposta inflamatória em pulmões de ratos. Estudos adicionais devem ser implementados para confirmar estes achados. / Lung ischemia reperfusion injury (LIRI) is the main cause of early graft dysfunction and death after lung transplantation. Several methods and substances have been used as an attempt to protect the lung during the early phase after transplantation and improve graft performance at short and long term with limited results. The selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095 (RC) was shown to protect from damage in various models of inflammation, including sepsis due to cecal ischemia and perforation, drug-induced arthritis and colitis, probably due to the inhibition in the release of proinflammatory cytokines, such as interleukin-1-beta and TNFalpha, as well as interference with mononuclear migration. In this thesis, the protective effect of the selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095, administrated intravenous before and after reperfusion was studied in an animal model of LIRI. A total of 20 Wistar rats were randomized in four groups: (SHAM), Ischemia-reperfusion (IR), RC Pre-IR (RCPre) and the RC Post-IR (RC-Post) .The IR groups were submitted to a model of ischemia/reperfusion by clamping of the left pulmonary hilum for 45 minutes followed by reperfusion for 120 minutes. We recorded the hemodynamic parameters, blood gas analysis and histology. We analyzed Cleaved Caspase- 9 and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) by immunohistochemistry. Expression of IL-1G and TNF-H was evaluated by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). We observed that the final mean arterial pressure significantly decreased in IR and RC Pre-IR compared to their values before reperfusion (p < 0.001).The RC-Post group showed significant decrease of partial pressure of arterial oxygen at the end of the observation compared to baseline (p=0.005). Caspase-9 activity was significantly higher in the RC-Post- IR as compared to the other groups (p < 0.013). No significant differences were observed of eNOS activity among the groups. The groups RC Pre-IR e RC Post-IR did not show a significant decrease of IL-1G (p=0.159) and TNF-H (p= 0.260), as compared to IR. The histological score showed no significant differences among the groups. Notably, its use after reperfusion seems to potentiate cell damage, stimulating apoptosis In conclusion, RC3095, a selective GRPR antagonist failed to demonstrate a significant protective effect in our LIRI model in male Wistar rats. Further studies to address this question are warranted.

Introdução e objetivo: Gastrin-releasing peptide (GRP) está envolvido em diversas funções cerebrais e gastrointestinais, incluindo secreção pancreática, liberação de hormônios peptídeos gastrointestinais e redução da ingestão alimentar. O objetivo deste estudo é testar os efeitos da injeção intraperitoneal do antagonista do receptor GRP sobre o peso, ingestão alimentar, parâmetros metabólicos e bioquímicos e composição corporal. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar adultos jovens, submetidos a uma perda ponderal mínima de 7%, divididos em quatro grupos: Grupo Controle (G0) que recebeu injeção de solução salina; Grupo 1 (G1) que recebeu 0,1 mg/kg de RC-3095; Grupo 2 (G2) que recebeu 0,3 mg/kg de RC-3095 e Grupo 3 (G3) que recebeu 1,0 mg/kg de RC-3095 durante 14 dias. Resultados: A variação da média diária de ingestão alimentar foi estatisticamente diferente entre os grupos (F: 3,139; df: 3; P = 0,039) e o G2, que recebeu a dose intermediária de 0,3 mg/kg de RC-3095, mostrou uma ingestão alimentar maior do que o G0 (P = 0,041). Houve um aumento similar do peso, de aproximadamente 22% (F: 0,572; df: 3; P = 0,638), assim como uma média de peso similar dos animais (F: 1,145; df: 9,685; P = 0,338) entre os grupos durante o período do estudo. Porém, a média de peso do G2 foi mais alta do que a média de peso dos animais do G0 (P = 0,042). Ao final do estudo, nenhuma diferença foi observada entre os grupos no total de massa magra ou de massa gorda da carcaça, fígado e pele dos animais. Comparando os níveis séricos de albumina, amilase, glicose, colesterol total, HDL-colesterol e interleucina-6 do Dia 1 (D1) para o Dia 14 (D14), não houve diferença estatisticamente relevante entre os grupos. Entretanto, o nível médio de triglicerídeos no G2 mostrou um aumento maior quando comparado ao G0 (P = 0,038). Conclusões: Neste estudo, a injeção da dose intermediária do antagonista do receptor GRP, o RC-3095 (0,3 mg/kg/dia), em ratos Wistar adultos jovens saudáveis submetidos a perda ponderal, interferiu na ingestão alimentar e no peso médio. Nenhum efeito sobre o ganho de peso, composição corporal ou parâmetros metabólicos e bioquímicos foi observado, exceto um aumento maior do nível sérico de triglicerídeos. Estes resultados demonstram alguns dos efeitos fisiológicos do GRP sobre a ingestão alimentar e peso, ampliando possibilidades de futuros estudos sobre fome, saciedade e metabolismo de macronutrientes ou em animais submetidos a uma condição de estresse maior, como o câncer. / Introduction and Objective: Gastrin-releasing peptide (GRP) is involved in several brain and gastrointestinal functions, including pancreatic secretion, gastrointestinal peptide hormone release, and reduction of food intake. We tested the effects of an intraperitoneal injection of the GRP receptor (GRPR) antagonist RC-3095 on weight, food intake, biochemical metabolic parameters, and body composition. Methods: Thirty-five young adult male Wistar rats, submitted to a minimal weight loss of 7%, were divided into four groups: the control group (G0) received saline; Group 1 (G1) received 0.1 mg/kg RC-3095; Group 2 (G2) received 0.3 mg/kg RC-3095; and Group 3 (G3) received 1.0 mg/kg RC-3095 for 14 days. Results: The mean daily variation of food intake was statistically different between the groups (F: 3.139; df: 3; P = 0.039); and G2, which received the intermediate dose of 0.3 mg/kg RC-3095, showed a greater food intake than G0 (P = 0.041). There was a similar increase in weight, approximately 22% (F: 0.572; df: 3; P = 0.638), as well as a similar mean animal weight (F: 1.145; df: 9.685; P = 0.338) between the groups during the study period. However, the mean weight of G2 animals was more than the mean weight of G0 animals (P = 0.042). At the end of the study, no difference was observed between the groups in terms of the total lean mass or fat mass from the rat carcass, liver, and skin. Comparing the serum levels of albumin, amylase, glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and interleukin (IL)-6 from day 1 (D1) to D14, there were no statistically relevant differences between the groups. However, the mean triglyceride level in G2 compared to G0 showed a greater increase (P = 0.038). Conclusion: In this study, the injection of an intermediate dose of GRPR antagonist RC- 3095 (0.3 mg/kg/day) into healthy young adult Wistar rats submitted to weight loss affected food intake and the mean weight. No effects on weight gain, body composition, or biochemical metabolic parameters were observed, except for a great increase in the serum triglyceride levels. These results demonstrate some physiological effects of GRP on food intake and weight, expanding the possibilities of future studies on hunger/satiety and macronutrient metabolism as well as highly stressful conditions like cancer.

A lesão de isquemia e reperfusão pulmonar (LIRI) é a principal causa de disfunção precoce do enxerto após o transplante pulmonar. Diferentes substâncias têm sido utilizadas na tentativa de proteger o pulmão na fase inicial pós-transplante e melhorar o desempenho do enxerto com pouco resultado tanto a curto quanto em longo prazo. O peptídeo liberador gastrina (GRP) está envolvido na indução de respostas imunes inatas adaptativas por induzir a quimiotaxia de mastócitos, migração de macrófagos e proliferação de células T e fibroblastos. Este agente foi capaz de proteger o dano tecidual em outros modelos experimentais de inflamação, incluindo sepsis pós-isquemia e perfuração de ceco, artrite e colite induzidos por drogas. O efeito protetor foi atribuído ao bloqueio na liberação de citocinas pró-inflamatórias, como da interleucina -1 beta (IL-1G) e TNF- alfa (TNF-H), e inibição de migração de mononucleares. Nesta tese o efeito protetor do antagonista do receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPR), o RC-3095 (RC) endovenosamente administrado antes e depois da reperfusão foi estudado em modelo animal de LIRI. Vinte ratos Wistar foram randomizados em quatro grupos: (SHAM), Isquemia-reperfusão (IR), administração de RC Pré-IR (RC-Pré) e RC Pós-IR (RC-Pós). Após a reperfusão, os animais foram observados por 120 minutos. Foi realizada a análise histológica, com verificação de escala de lesão pulmonar, e imunohistoquímica para Caspase clivada - 9 e oxido nítrico sintetase endotelial (eNOS). Expressão de IL-1G e TNF-H foram quantificadas por Enzime-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Uma redução significativa na pressão arterial média foi observada nos grupos IR e RC - Pré quando comparado com seus valores antes da reperfusão (p < 0.001). No final do experimento o grupo RC-Pós apresentou uma redução significativa na pressão arterial de oxigênio em relação ao início (p=0.005). Observou-se maior expressão de Caspase - 9 clivada no grupo RC-Pós (p>0.013), quando comparado aos demais grupos. Não houve diferença significativa na captação da eNOS entre os grupos (p=0.206). Os grupos RC - Pré e Pós mostraram discreta redução, não atingindo significância estatística, da IL-1G (p=0.159) e TNF- H (p= 0.260), quando comparado com o grupo IR. Não houve diferença estatística entre as médias dos escores histológicos entre os diferentes grupos. e SHAM. Notavelmente, quando administrado após reperfusão parece potencializar dano celular estimulando a apoptose. Concluindo, a utilização do antagonista do peptídeo liberador de gastrina, RC-3095, não produziu efeito protetor significativo na resposta inflamatória em pulmões de ratos. Estudos adicionais devem ser implementados para confirmar estes achados. / Lung ischemia reperfusion injury (LIRI) is the main cause of early graft dysfunction and death after lung transplantation. Several methods and substances have been used as an attempt to protect the lung during the early phase after transplantation and improve graft performance at short and long term with limited results. The selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095 (RC) was shown to protect from damage in various models of inflammation, including sepsis due to cecal ischemia and perforation, drug-induced arthritis and colitis, probably due to the inhibition in the release of proinflammatory cytokines, such as interleukin-1-beta and TNFalpha, as well as interference with mononuclear migration. In this thesis, the protective effect of the selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095, administrated intravenous before and after reperfusion was studied in an animal model of LIRI. A total of 20 Wistar rats were randomized in four groups: (SHAM), Ischemia-reperfusion (IR), RC Pre-IR (RCPre) and the RC Post-IR (RC-Post) .The IR groups were submitted to a model of ischemia/reperfusion by clamping of the left pulmonary hilum for 45 minutes followed by reperfusion for 120 minutes. We recorded the hemodynamic parameters, blood gas analysis and histology. We analyzed Cleaved Caspase- 9 and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) by immunohistochemistry. Expression of IL-1G and TNF-H was evaluated by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). We observed that the final mean arterial pressure significantly decreased in IR and RC Pre-IR compared to their values before reperfusion (p < 0.001).The RC-Post group showed significant decrease of partial pressure of arterial oxygen at the end of the observation compared to baseline (p=0.005). Caspase-9 activity was significantly higher in the RC-Post- IR as compared to the other groups (p < 0.013). No significant differences were observed of eNOS activity among the groups. The groups RC Pre-IR e RC Post-IR did not show a significant decrease of IL-1G (p=0.159) and TNF-H (p= 0.260), as compared to IR. The histological score showed no significant differences among the groups. Notably, its use after reperfusion seems to potentiate cell damage, stimulating apoptosis In conclusion, RC3095, a selective GRPR antagonist failed to demonstrate a significant protective effect in our LIRI model in male Wistar rats. Further studies to address this question are warranted.

Introdução e objetivo: Gastrin-releasing peptide (GRP) está envolvido em diversas funções cerebrais e gastrointestinais, incluindo secreção pancreática, liberação de hormônios peptídeos gastrointestinais e redução da ingestão alimentar. O objetivo deste estudo é testar os efeitos da injeção intraperitoneal do antagonista do receptor GRP sobre o peso, ingestão alimentar, parâmetros metabólicos e bioquímicos e composição corporal. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar adultos jovens, submetidos a uma perda ponderal mínima de 7%, divididos em quatro grupos: Grupo Controle (G0) que recebeu injeção de solução salina; Grupo 1 (G1) que recebeu 0,1 mg/kg de RC-3095; Grupo 2 (G2) que recebeu 0,3 mg/kg de RC-3095 e Grupo 3 (G3) que recebeu 1,0 mg/kg de RC-3095 durante 14 dias. Resultados: A variação da média diária de ingestão alimentar foi estatisticamente diferente entre os grupos (F: 3,139; df: 3; P = 0,039) e o G2, que recebeu a dose intermediária de 0,3 mg/kg de RC-3095, mostrou uma ingestão alimentar maior do que o G0 (P = 0,041). Houve um aumento similar do peso, de aproximadamente 22% (F: 0,572; df: 3; P = 0,638), assim como uma média de peso similar dos animais (F: 1,145; df: 9,685; P = 0,338) entre os grupos durante o período do estudo. Porém, a média de peso do G2 foi mais alta do que a média de peso dos animais do G0 (P = 0,042). Ao final do estudo, nenhuma diferença foi observada entre os grupos no total de massa magra ou de massa gorda da carcaça, fígado e pele dos animais. Comparando os níveis séricos de albumina, amilase, glicose, colesterol total, HDL-colesterol e interleucina-6 do Dia 1 (D1) para o Dia 14 (D14), não houve diferença estatisticamente relevante entre os grupos. Entretanto, o nível médio de triglicerídeos no G2 mostrou um aumento maior quando comparado ao G0 (P = 0,038). Conclusões: Neste estudo, a injeção da dose intermediária do antagonista do receptor GRP, o RC-3095 (0,3 mg/kg/dia), em ratos Wistar adultos jovens saudáveis submetidos a perda ponderal, interferiu na ingestão alimentar e no peso médio. Nenhum efeito sobre o ganho de peso, composição corporal ou parâmetros metabólicos e bioquímicos foi observado, exceto um aumento maior do nível sérico de triglicerídeos. Estes resultados demonstram alguns dos efeitos fisiológicos do GRP sobre a ingestão alimentar e peso, ampliando possibilidades de futuros estudos sobre fome, saciedade e metabolismo de macronutrientes ou em animais submetidos a uma condição de estresse maior, como o câncer. / Introduction and Objective: Gastrin-releasing peptide (GRP) is involved in several brain and gastrointestinal functions, including pancreatic secretion, gastrointestinal peptide hormone release, and reduction of food intake. We tested the effects of an intraperitoneal injection of the GRP receptor (GRPR) antagonist RC-3095 on weight, food intake, biochemical metabolic parameters, and body composition. Methods: Thirty-five young adult male Wistar rats, submitted to a minimal weight loss of 7%, were divided into four groups: the control group (G0) received saline; Group 1 (G1) received 0.1 mg/kg RC-3095; Group 2 (G2) received 0.3 mg/kg RC-3095; and Group 3 (G3) received 1.0 mg/kg RC-3095 for 14 days. Results: The mean daily variation of food intake was statistically different between the groups (F: 3.139; df: 3; P = 0.039); and G2, which received the intermediate dose of 0.3 mg/kg RC-3095, showed a greater food intake than G0 (P = 0.041). There was a similar increase in weight, approximately 22% (F: 0.572; df: 3; P = 0.638), as well as a similar mean animal weight (F: 1.145; df: 9.685; P = 0.338) between the groups during the study period. However, the mean weight of G2 animals was more than the mean weight of G0 animals (P = 0.042). At the end of the study, no difference was observed between the groups in terms of the total lean mass or fat mass from the rat carcass, liver, and skin. Comparing the serum levels of albumin, amylase, glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and interleukin (IL)-6 from day 1 (D1) to D14, there were no statistically relevant differences between the groups. However, the mean triglyceride level in G2 compared to G0 showed a greater increase (P = 0.038). Conclusion: In this study, the injection of an intermediate dose of GRPR antagonist RC- 3095 (0.3 mg/kg/day) into healthy young adult Wistar rats submitted to weight loss affected food intake and the mean weight. No effects on weight gain, body composition, or biochemical metabolic parameters were observed, except for a great increase in the serum triglyceride levels. These results demonstrate some physiological effects of GRP on food intake and weight, expanding the possibilities of future studies on hunger/satiety and macronutrient metabolism as well as highly stressful conditions like cancer.

A lesão de isquemia e reperfusão pulmonar (LIRI) é a principal causa de disfunção precoce do enxerto após o transplante pulmonar. Diferentes substâncias têm sido utilizadas na tentativa de proteger o pulmão na fase inicial pós-transplante e melhorar o desempenho do enxerto com pouco resultado tanto a curto quanto em longo prazo. O peptídeo liberador gastrina (GRP) está envolvido na indução de respostas imunes inatas adaptativas por induzir a quimiotaxia de mastócitos, migração de macrófagos e proliferação de células T e fibroblastos. Este agente foi capaz de proteger o dano tecidual em outros modelos experimentais de inflamação, incluindo sepsis pós-isquemia e perfuração de ceco, artrite e colite induzidos por drogas. O efeito protetor foi atribuído ao bloqueio na liberação de citocinas pró-inflamatórias, como da interleucina -1 beta (IL-1G) e TNF- alfa (TNF-H), e inibição de migração de mononucleares. Nesta tese o efeito protetor do antagonista do receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPR), o RC-3095 (RC) endovenosamente administrado antes e depois da reperfusão foi estudado em modelo animal de LIRI. Vinte ratos Wistar foram randomizados em quatro grupos: (SHAM), Isquemia-reperfusão (IR), administração de RC Pré-IR (RC-Pré) e RC Pós-IR (RC-Pós). Após a reperfusão, os animais foram observados por 120 minutos. Foi realizada a análise histológica, com verificação de escala de lesão pulmonar, e imunohistoquímica para Caspase clivada - 9 e oxido nítrico sintetase endotelial (eNOS). Expressão de IL-1G e TNF-H foram quantificadas por Enzime-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Uma redução significativa na pressão arterial média foi observada nos grupos IR e RC - Pré quando comparado com seus valores antes da reperfusão (p < 0.001). No final do experimento o grupo RC-Pós apresentou uma redução significativa na pressão arterial de oxigênio em relação ao início (p=0.005). Observou-se maior expressão de Caspase - 9 clivada no grupo RC-Pós (p>0.013), quando comparado aos demais grupos. Não houve diferença significativa na captação da eNOS entre os grupos (p=0.206). Os grupos RC - Pré e Pós mostraram discreta redução, não atingindo significância estatística, da IL-1G (p=0.159) e TNF- H (p= 0.260), quando comparado com o grupo IR. Não houve diferença estatística entre as médias dos escores histológicos entre os diferentes grupos. e SHAM. Notavelmente, quando administrado após reperfusão parece potencializar dano celular estimulando a apoptose. Concluindo, a utilização do antagonista do peptídeo liberador de gastrina, RC-3095, não produziu efeito protetor significativo na resposta inflamatória em pulmões de ratos. Estudos adicionais devem ser implementados para confirmar estes achados. / Lung ischemia reperfusion injury (LIRI) is the main cause of early graft dysfunction and death after lung transplantation. Several methods and substances have been used as an attempt to protect the lung during the early phase after transplantation and improve graft performance at short and long term with limited results. The selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095 (RC) was shown to protect from damage in various models of inflammation, including sepsis due to cecal ischemia and perforation, drug-induced arthritis and colitis, probably due to the inhibition in the release of proinflammatory cytokines, such as interleukin-1-beta and TNFalpha, as well as interference with mononuclear migration. In this thesis, the protective effect of the selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095, administrated intravenous before and after reperfusion was studied in an animal model of LIRI. A total of 20 Wistar rats were randomized in four groups: (SHAM), Ischemia-reperfusion (IR), RC Pre-IR (RCPre) and the RC Post-IR (RC-Post) .The IR groups were submitted to a model of ischemia/reperfusion by clamping of the left pulmonary hilum for 45 minutes followed by reperfusion for 120 minutes. We recorded the hemodynamic parameters, blood gas analysis and histology. We analyzed Cleaved Caspase- 9 and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) by immunohistochemistry. Expression of IL-1G and TNF-H was evaluated by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). We observed that the final mean arterial pressure significantly decreased in IR and RC Pre-IR compared to their values before reperfusion (p < 0.001).The RC-Post group showed significant decrease of partial pressure of arterial oxygen at the end of the observation compared to baseline (p=0.005). Caspase-9 activity was significantly higher in the RC-Post- IR as compared to the other groups (p < 0.013). No significant differences were observed of eNOS activity among the groups. The groups RC Pre-IR e RC Post-IR did not show a significant decrease of IL-1G (p=0.159) and TNF-H (p= 0.260), as compared to IR. The histological score showed no significant differences among the groups. Notably, its use after reperfusion seems to potentiate cell damage, stimulating apoptosis In conclusion, RC3095, a selective GRPR antagonist failed to demonstrate a significant protective effect in our LIRI model in male Wistar rats. Further studies to address this question are warranted.

Introdução e objetivo: Gastrin-releasing peptide (GRP) está envolvido em diversas funções cerebrais e gastrointestinais, incluindo secreção pancreática, liberação de hormônios peptídeos gastrointestinais e redução da ingestão alimentar. O objetivo deste estudo é testar os efeitos da injeção intraperitoneal do antagonista do receptor GRP sobre o peso, ingestão alimentar, parâmetros metabólicos e bioquímicos e composição corporal. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar adultos jovens, submetidos a uma perda ponderal mínima de 7%, divididos em quatro grupos: Grupo Controle (G0) que recebeu injeção de solução salina; Grupo 1 (G1) que recebeu 0,1 mg/kg de RC-3095; Grupo 2 (G2) que recebeu 0,3 mg/kg de RC-3095 e Grupo 3 (G3) que recebeu 1,0 mg/kg de RC-3095 durante 14 dias. Resultados: A variação da média diária de ingestão alimentar foi estatisticamente diferente entre os grupos (F: 3,139; df: 3; P = 0,039) e o G2, que recebeu a dose intermediária de 0,3 mg/kg de RC-3095, mostrou uma ingestão alimentar maior do que o G0 (P = 0,041). Houve um aumento similar do peso, de aproximadamente 22% (F: 0,572; df: 3; P = 0,638), assim como uma média de peso similar dos animais (F: 1,145; df: 9,685; P = 0,338) entre os grupos durante o período do estudo. Porém, a média de peso do G2 foi mais alta do que a média de peso dos animais do G0 (P = 0,042). Ao final do estudo, nenhuma diferença foi observada entre os grupos no total de massa magra ou de massa gorda da carcaça, fígado e pele dos animais. Comparando os níveis séricos de albumina, amilase, glicose, colesterol total, HDL-colesterol e interleucina-6 do Dia 1 (D1) para o Dia 14 (D14), não houve diferença estatisticamente relevante entre os grupos. Entretanto, o nível médio de triglicerídeos no G2 mostrou um aumento maior quando comparado ao G0 (P = 0,038). Conclusões: Neste estudo, a injeção da dose intermediária do antagonista do receptor GRP, o RC-3095 (0,3 mg/kg/dia), em ratos Wistar adultos jovens saudáveis submetidos a perda ponderal, interferiu na ingestão alimentar e no peso médio. Nenhum efeito sobre o ganho de peso, composição corporal ou parâmetros metabólicos e bioquímicos foi observado, exceto um aumento maior do nível sérico de triglicerídeos. Estes resultados demonstram alguns dos efeitos fisiológicos do GRP sobre a ingestão alimentar e peso, ampliando possibilidades de futuros estudos sobre fome, saciedade e metabolismo de macronutrientes ou em animais submetidos a uma condição de estresse maior, como o câncer. / Introduction and Objective: Gastrin-releasing peptide (GRP) is involved in several brain and gastrointestinal functions, including pancreatic secretion, gastrointestinal peptide hormone release, and reduction of food intake. We tested the effects of an intraperitoneal injection of the GRP receptor (GRPR) antagonist RC-3095 on weight, food intake, biochemical metabolic parameters, and body composition. Methods: Thirty-five young adult male Wistar rats, submitted to a minimal weight loss of 7%, were divided into four groups: the control group (G0) received saline; Group 1 (G1) received 0.1 mg/kg RC-3095; Group 2 (G2) received 0.3 mg/kg RC-3095; and Group 3 (G3) received 1.0 mg/kg RC-3095 for 14 days. Results: The mean daily variation of food intake was statistically different between the groups (F: 3.139; df: 3; P = 0.039); and G2, which received the intermediate dose of 0.3 mg/kg RC-3095, showed a greater food intake than G0 (P = 0.041). There was a similar increase in weight, approximately 22% (F: 0.572; df: 3; P = 0.638), as well as a similar mean animal weight (F: 1.145; df: 9.685; P = 0.338) between the groups during the study period. However, the mean weight of G2 animals was more than the mean weight of G0 animals (P = 0.042). At the end of the study, no difference was observed between the groups in terms of the total lean mass or fat mass from the rat carcass, liver, and skin. Comparing the serum levels of albumin, amylase, glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and interleukin (IL)-6 from day 1 (D1) to D14, there were no statistically relevant differences between the groups. However, the mean triglyceride level in G2 compared to G0 showed a greater increase (P = 0.038). Conclusion: In this study, the injection of an intermediate dose of GRPR antagonist RC- 3095 (0.3 mg/kg/day) into healthy young adult Wistar rats submitted to weight loss affected food intake and the mean weight. No effects on weight gain, body composition, or biochemical metabolic parameters were observed, except for a great increase in the serum triglyceride levels. These results demonstrate some physiological effects of GRP on food intake and weight, expanding the possibilities of future studies on hunger/satiety and macronutrient metabolism as well as highly stressful conditions like cancer.

Targeted radionuclide therapy is becoming a widely used cancer treatment strategy. By radiolabeling receptor-specific peptides, cancer cells overexpressing the receptor can be selectively targeted, and the cytotoxic radionuclide can be delivered to the target cell or tissue for therapeutic or diagnostic purposes. Bombesin analogues have been previously developed and utilized to target the gastrin-releasing peptide receptor (GRPR), a receptor commonly overexpressed in prostate cancer cells. The RM26 analogue derived from the native bombesin is an antagonistic ligand of GRPR and a possible candidate for targeted radiotherapy. Prolonging the half-life of the molecule is an important aspect of developing a new protein therapeutic. Using albumin binding domain (ABD) for this purpose is an emerging strategy in recent years. ABD is able to bind to serum albumin and thus remains in the blood circulation for a long period of time. It is also a scaffold for protein engineering efforts and by coupling receptor-specific ligands to ABD, the target-specific binding along with extended in vivo halflife can be achieved. In this project, an RM26 analogue with a PEG linker and ABD with a DOTA chelator for future radiolabeling were synthesized with solid phase peptide synthesis (SPPS), conjugated, purified by RP-HPLC and analyzed by mass spectrometry. The binding properties of the conjugate were evaluated by SPR-based biosensory studies, and further experiments are planned for the testing the product and its potential application in radionuclide therapy. / Riktad radioterapi är en allt vanligare metod för behandling av cancer. Genom att radioinmärka receptor-specifika peptider kan dessa selektivt levereras till tumörceller som uttrycker receptorn. Radioterapi kan användas för diagnostik eller terapi, beroende på kopplad radionuklid. Bombesinanaloger har utvecklats och använts för att selektivt binda gastrinfrisättande peptidreceptor (gastrin-releasing peptide receptor, GRPR), en receptor som ofta är överuttryckt i prostatacancer. Bombesinanalogen RM26, som har sitt ursprung från nativt bombesin, är en antagonist till GRPR och kan möjligen användas för riktad radioterapi av prostatacancer. Vid utvecklingen av nya proteinläkemedel är halveringstiden i serum en viktig aspekt. En nyligen utvecklad strategi för att förlänga halveringstiden i serum är fusion av det  tumörspecifika proteinet till en albumin-bindande domän (ABD). ABD binder till albumin, ochsåledes kan fusionsproteinet bevaras i blodcirkulationen under en längre tid. I detta projekt, har både RM26 med en PEG-linker, och ABD med en DOTA kelator syntetiserats med fastfaspeptidsyntes (solid phase peptide synthesis, SPPS). RM26-PEG och DOTA-ABD har därefter konjugerats, renats med RP-HPLC och analyserats med massspektrometri. Bindning till albumin har utvärderats med ytplasmonresonans (surface plasmon resonance, SPR). Vidare studier planeras för att utvärdera peptid-proteinkonjugatet och dess potential för riktad radioterapi.

Os tumores hipofisários representam cerca de 10% a 15% das neoplasias intracranianas. Embora a etiopatogenia ainda não seja plenamente caracterizada, muitos mecanismos moleculares envolvidos na tumorigênese hipofisária já foram desvendados. Utilizandose da metodologia de arranjos de cDNA contendo aproximadamente 20.000 genes, nosso grupo recentemente comparou a expressão de duas condições distintas: um pool de quatro adenomas hipofisários clinicamente não funcionantes e a metástase de um carcinoma hipofisário não funcionante. Vários genes mostraram-se diferencialmente expressos, entre eles, CRABP1 (cellular retinoic acid binding protein 1), CRABP2 (cellular retinoic acid binding protein 2), GRP (gastrin-releasing peptide) e RERG (RAS-like, estrogen-regulated, growth inhibitor). Este estudo visou avaliar a expressão desses quatro genes em uma série de 59 adenomas hipofisários (30 adenomas clinicamente não funcionantes, 13 somatotrofinomas, 8 corticotrofinomas e 8 prolactinomas), comparando cada grupo tumoral com um conjunto de tecidos hipofisários normais. Enquanto os prolactinomas demonstraram expressão reduzida do RNAm dos genes CRABP1 e CRABP2 quando comparados ao grupo de tecidos normais, os somatotrofinomas apresentaram expressão reduzida apenas do RNAm de CRABP2. Os adenomas clinicamente não funcionantes, por sua vez, demonstraram menor expressão do RNAm de GRP e maior expressão do RNAm de RERG quando comparados ao grupo de hipófises normais. Portanto, observou-se que tanto o gene CRABP1 quanto os genes CRABP2, GRP e RERG apresentaram diferenças na expressão do transcrito entre os grupos de adenomas de hipófise, contudo, seu papel na tumorigênese hipofisária permanece a ser investigado. / Pituitary tumors account for approximately 10%-15% of the intracranial neoplasms. Although the pathogenesis is not fully characterized, many molecular mechanisms involved in pituitary tumorigenesis have been unraveled. Using the methodology of cDNA microarray containing approximately 20000 genes, our group recently compared the expression of two distinct conditions: a pool of four clinically nonfunctioning pituitary adenomas and a spinal cord metastasis of a nonfunctioning pituitary carcinoma. Several genes were shown to be differentially expressed, among them, CRABP1 (cellular retinoic acid binding protein 1), CRABP2 (cellular retinoic acid binding protein 2), GRP (gastrin-releasing peptide) and RERG (RAS-like, estrogen-regulated, growth inhibitor). This study aimed to evaluate the expression of these four genes in a series of 59 pituitary adenomas (30 nonfunctioning, 13 GH-secreting, 8 ACTH-secreting and 8 PRL-secreting adenomas), comparing each tumor group with a set of normal pituitary tissues. While PRL-secreting adenomas showed lower expression of CRABP1 and CRABP2 mRNA when compared with normal tissues, GH-secreting adenomas had only lower expression of CRABP2 mRNA. Clinically nonfunctioning adenomas showed lower expression of GRP mRNA and higher expression of RERG mRNA when compared with the normal pituitary glands. Therefore, it was observed that not only the CRABP1 gene but also the CRABP2, GRP and RERG genes showed differences in transcript expression between the groups of pituitary adenomas. However, their role in pituitary tumorigenesis remains to be investigated.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. / Background: Recently, targeting of neuropeptides has been suggested to have potential therapeutic effects in RA. The gastrin-releasing peptide (GRP) is the homologous mammalian of the bombesin (BN), and its receptor signaling is involved in several functions, including cancer growth, immune cell regulation and inflammatory conditions, and has been found in RA synovial fluid in concentrations that correlate with IL-6 and TNF. RC-3095 is the antagonist of the GRP receptor, and has been demonstrated to modulate the release of proinflammatory cytokines (TNF and IL-1 ) by activated macrophages, leading to decreased inflammatory infiltration. Objective: To determine the effects of RC-3095 in clinical and histopathologic parameters and inflammatory mediators on complete Freund´s adjuvant-induced arthritis. Methods: The arthritis was induced by injection of complete Freund´s adjuvant (CFA) into the left hind footpad in males of Wistar rats. The animals were divided into control, vehicle injected control, placebo group (saline subcutaneously 50ml/kg, once daily for 8 days after modeling), treatment group (0.3 mg/kg of RC-3095 subcutaneously, once daily for 8 days after induction). Clinical evaluation was accomplished daily, through scoring of the paw edema. The animals were sacrificed 15 days after induction for collection of hind foot joints for histology. We used a histological scoring system which was previously described, and interferon (INF)-g, Interleukin (IL)-1 , tumor necrosis factor (TNF), interleukin (IL)-6 and interleukin (IL)-10 were measured by ELISA. Statistical analyses were compared by Student t-test to determine the difference between placebo and treatment groups for histological scores, and cytokines levels were compared using Mann-Whitney test (p<0.05). Results: There was significant inhibition of joint histological findings in the RC-3095 treated group, including synovial inflammatory infiltration(p<0,001), synovial hyperplasia (p=0.004), extension of pannus (p<0.001), synovial fibrosis (p<0.001), angiogenesis (p=0.033), cartilage (p 0.001) and bone erosion (p<0.001). IFN-g (p<0.001), IL-1 (p<0.001), TNF (p=0.003), IL-6 (p=0.048) and IL-10 (p=0.015) serum levels were significantly lower in the treated group. Paw swelling and subcutaneous inflammation, evaluated clinically, were not different between CFAinduced groups. Conclusions: RC-3095 was able to improve experimental arthritis, attenuate joint damage and decrease serum levels of IFN-g, IL-1 , TNF, IL-6 and IL-10. These data indicate that interference with GRP pathway is a potential new strategy for the treatment of RA that needs further investigational studies.

Introdução: Os neuropeptídeos regulam uma variedade de aspectos da função nervosa e neuroendócrina, atuando através da ativação de receptores específicos da membrana celular. No sistemana nervoso central (SNC) os receptores do pepetídeo liberador de gastrina (GRPR) são amplamente expressos, e numerosos efeitos centrais têm sido descritos com a sua ativação, incluindo efeitos sobre a saciedade, regulação do ritmo circadiano, termorregulação, modulação do stress, resposta ao medo, ansiedade e memória. Pesquisas mostram que o bloqueio farmacológico do GRPR em modelos animais leva ao aparecimento de deficits na interação social, padrões restritivos de comportamento e estereotipias motoras, sintomas semelhantes ao comportamento autista em humanos, sugerindo a possibilidade de que o complexo GRP/GRPR possa ter um papel na patogênese do transtorno do espectro autista (TEA). Recentemente, dois estudos não controlados com administração do peptídeo liberador de gastrina (GRP) a 13 crianças com autismo sugeriram que ele é seguro e que possa melhorar alguns sintomas do transtorno, principalmente interação social e sintomas associados à irritabilidade. Objetivos: Comparar a eficácia, segurança, tolerabilidade do GRP em relação ao placebo em sintomas do TEA. Metodologia: Ensaio clínico crossover, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, com uso de GRP 160 picomol/kg por 4 dias consecutivos, em 10 crianças com autismo. Os desfechos foram medidos através da escala Aberrant Behavior Checklist (ABC). Resultados: Todos os participantes eram do sexo masculino, com idade entre 4 e 9 anos. Houve uma redução nos escores da escala ABC e suas subescalas após o uso de GRP e de placebo. Apesar dessa redução ser mais proeminente com o GRP, principalmente nas subescalas Irritabilidade, Comportamento estereotipado e Hiperatividade, não houve diferença estatística entre os resultados (p 0,334). Após uma semana da infusão, 5 crianças apresentavam melhora maior que 25% no escore total da escala ABC com uso de GRP e 2 com uso de placebo, não apresentando diferença estatística (p 0,375). Não houve efeitos adversos, alterações dos sinais vitais ou variações laboratoriais associados ao uso de GRP em nenhum paciente. Conclusões: Os resultados deste estudo, apesar do tamanho reduzido da amostra, reforçam os dados anteriores sobre a segurança do GRP no uso a curto prazo. Apesar de ter ocorrido redução dos escores da escala ABC após uso de GRP, não houve diferença estatística em relação ao placebo. Devido ao desenho crossover e tamanho pequeno da amostra do estudo atual, não foi possível esclarecer a real eficácia do GRP na redução dos sintomas do TEA na infância. Existe a necessidade de novas pesquisas com outros delineamentos e tamanho amostral maior para confirmar a eficácia e segurança do GRP em crianças com autismo. / Introduction: The neuropeptides regulate a variety of aspects of the nervous and neuroendocrine function, acting through activation of specific receptors of the cellular membrane. In system central nervous (CNS) the gastrin-releasing peptide recptors (GRPR) are widely expressed, and numerous central effects have been reported with their activation, including effects on satiety, regulating the circadian rhythm, thermoregulation, stress modulation, response to fear, anxiety and memory. Research has shown that pharmacological blockade of GRPR in animal models leads to the deficits in social interaction, restrictive patterns of behavior and motor stereotypies, autistic symptoms similar to human behavior, suggesting the possibility that the complex GRP/GRPR may have a role in the pathogenesis of autism spectrum disorder (ASD). Recently, two studies are not controlled with the administration of gastrin releasing peptide (GRP) to 13 children with autism suggest that it is safe and can improve some symptoms of the disorder, especially social interaction and symptoms associated with irritability. Objectives: To compare the efficacy, safety, tolerability GRP compared to placebo in ASD symptoms. Methodology: crossover clinical trial, randomized, double-blind, placebo-controlled, using GRP 160 picomol/kg for 4 consecutive days in 10 children with autism. Outcomes were measured by the Aberrant Behavior Checklist scale (ABC). Results: All participants were male, aged between 4 and 9 years. There was a reduction in the scores of the ABC range and its subscales after use GRP and placebo. Despite this reduction be more prominent with the GRP, particularly in subscales Irritability, Stereotypic behavior and Hyperactivity and noncompliance, there was no statistical difference between the results (p 0.334). After a week of infusion, 5 children showed improvement greater than 25% in the total score of the ABC scale in GRP use and 2 with placebo use, however there was no statistical difference (p 0.375). No adverse effects, changes in vital signs or laboratory abnormalities associated with use of GRP in any patient. Conclusions: The results of this study, despite the small sample size, reinforce previous data on the safety of the GRP in the short-term use. Although there was a reduction in ABC scale scores after use of GRP, there was no statistical difference from placebo. Due to the small sample size and design of the current study, it was not possible to clarify the real effectiveness of GRP in reducing the symptoms of ASD in childhood. There is a need for further research with other designs and larger sample size to confirm the efficacy and safety of GRP in children with autism.