A quimioterapia disponível para o tratamento das leishmanioses conta com um número reduzido de fármacos, com efeitos adversos severos e progressivo aumento de resistência. O reposicionamento de fármacos oferece uma grande oportunidade para introdução de novas terapias. Antidepressivos orais têm demonstrado eficácia tanto in vitro quanto in vivo contra espécies de Leishmania spp. Neste estudo, o antidepressivo sertralina (SRT), e o fármaco ciclobenzaprina (CBP), um relaxante muscular de estrutura tricíclica análoga a antidepressivos, foram avaliados quanto a atividade contra Leishmania (L.) infantum. Estudos metabolômicos não dirigidos utilizando multiplataforma analítica, foram combinados a análises de parâmetros celulares, essenciais para obtenção de uma ampla descrição dos mecanismos de ação. A CBP mostrou uma atividade leishmanicida in vitro, com valor de CE50 de 4,3 ?M contra formas promastigotas e 8,6 ?M contra formas amastigotas intracelulares. O fármaco apresentou uma citotoxicidade (CC50) de 70,6 ?M em células NCTC, e um índice de seletividade similar a miltefosina. Os estudos de mecanismo de ação, sugeriram que a CBP se difunde pela membrana plasmática, causando diminuição do ??p e no interior citoplasmático, parece induzir um estresse do RE com liberação de Ca+2; concomitantemente, induz um desacoplamento brando da cadeia respiratória mitocondrial e depleção dos níveis de ATP. Com o efeito prolongado, a liberação de Ca+2 parece ativar a autofagia, e seu influxo para a mitocôndria potencializar os efeitos deletérios, diminuindo o ??m e aumentando a produção de ROS. A longo prazo, o CBP induz uma extensa alteração metabólica, caracterizada aumento dos níveis da maioria dos metabólitos identificados e atividade desregulada de transportadores de membrana, gerando alto gasto energético associado a condições insuficientes de produção de energia mitocondrial, resultando em morte celular. A sertralina também apresentou atividade leishmanicida in vitro, com valor de CE50 de 2 ?M contra formas promastigotas e 3,9 ?M contra formas amastigotas intracelulares. Sua toxicidade em células NCTC foi de 19,6 ?M, resultando em um índice de seletividade similar a miltefosina. Nossos estudos confirmaram a mitocôndria de Leishmania como alvo primário e, o efeito de desacoplamento da cadeia respiratória associado ao colapso energético, estresse oxidativo seguido da despolarização do ??m como a possível origem desta disfunção mitocondrial. Estudos metabolômicos evidenciaram que a extensão do desarranjo metabólico, abrange diminuição da capacidade de detoxificação do metabolismo tiol-redox, uma severa depleção do pool intracelular de aminoácidos e poliaminas, evidenciando uma completa deterioração do metabolismo energético, por meio de um mecanismo multialvo direcionado a vias metabólicas essências do parasita. Finalmente, este estudo descreve a atividade anti-Leishmania de dois fármacos orais aprovados, com mecanismos de ação letais e irreversíveis no parasita, encorajando o prosseguimento para futuros estudos pré-clínicos na leishmaniose visceral americana / The available chemotherapy for the treatment of leishmaniasis has a reduced number of drugs, with severe adverse effects and progressive increase of resistance. The drug repurposing offers a great opportunity for the introduction of new therapies. Oral antidepressants have been demonstrated efficacy both in vitro and in vivo against Leishmania spp. In this study, the antidepressant sertraline (SRT), and the drug cyclobenzaprine (CBP), a muscle relaxant with tricyclic structure analogous to antidepressants, were evaluated against Leishmania (L.) infantum. Untargeted metabolomic studies using multiplataform analysis were combined to cellular parameters to a broad description of the mechanisms of action. Cyclobenzaprine showed an in vitro leishmanicidal activity with an EC50 value of 4.3 ?M against promastigotes and 8.6 ?M against intracellular amastigote forms. The drug showed a cytotoxicity (CC50) of 70.6 ?M in NCTC cells, and a selectivity index similar to miltefosine. Mechanism of action studies suggested that CBP diffuses through the plasma membrane, causing a decrease of the ??p and inside the cytoplasm, the drug seems to induce an ER stress, with release of Ca+2; concomitantly, it induces a mild decoupling of the mitochondrial respiratory chain and depletion of ATP levels. With the prolonged effect, a release of Ca+ 2 appears to activate an autophagy, and its mitochondrial influx results in a potentiation of deleterious effects as decreasing of ??m and increasing ROS production. In long term, CBP induces an extensive metabolic alteration, characterized increased levels of most of the identified metabolites and unregulated activity of membrane transporters. These generates a high energy expenditure associated to limited conditions of mitochondrial energy production, resulting in the cellular death. Sertraline also showed in vitro leishmanicidal activity, with an EC50 value of 2 ?M against promastigotes and 3.9 ?M against intracellular amastigote forms. Its toxicity in NCTC cells was 19.6 ?M, resulting in a selectivity index similar to miltefosine. Our studies confirmed the mitochondria of Leishmania as the primary target, and the uncoupling of the respiratory chain associated with energy collapse, oxidative stress, and the depolarization of ??m as the possible origin of this mitochondrial dysfunction. Metabolomics evidenced an extended metabolic disarray caused by SRT encompassing a decrease in the scavenging capacity of the thiol-redox metabolism and a severe depletion of the intracellular pool of amino acids and polyamines. The complete deterioration of energetic metabolism was evident through a multi-target mechanism, affecting the main metabolic pathways of the parasite. Finally, this study describes an anti-Leishmania activity of two approved oral drugs with lethal and irreversible mechanisms of action in the parasite, encouraging future preclinical studies in American visceral leishmaniasis.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-02-20T13:36:43Z No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-02-23T18:05:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-23T18:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) Previous issue date: 2018-01-14 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Background Breast cancer is highly prevalent among women worldwide. It is classified into three main subtypes: the estrogen receptor positive (ER+), the human epidermal growth factor receptor 2 positive (HER2+), and the triple negative breast cancer (TNBC). This latter type is the most prevalent in clinics. Each type requires a specific treatment, being TNBC an actual challenge for treating. Drug repurposing is an easy and cheaper methodology to identify new therapies for cancer treatment. This study evaluated the effects of aspirin and metformin, isolated or in combination, in breast cancer cells of different subtypes. Methods The breast cancer cell lines MCF-7, MDAMB- 231, and SK-BR-3 were treated with aspirin and/or metformin (0.01 mM - 10 mM); functional in vitro assays were performed. The interactions with the estrogen receptors (ER) were evaluated in silico. Results Metformin altered the morphology, and reduced the viability and migration of the ER+ cell line MCF-7. A synergistic effect for the combination of metformin and aspirin was observed in the TNBC cell subtype MDAMB- 231, according to the evaluation of viability and colony formation. No significant effects were observed for either drugs in the HER2+ cell subtype SK-BR-3. The effects of metformin and aspirin partly rely on cyclooxigenase-2 (COX-2) upregulation, without any alteration of lipoxin production. In silico, metformin and aspirin bound the ERa receptor with the same energy. Conclusion We provide novel evidence on the mechanisms of action of aspirin and metformin in breast cancer cells, showing favorable outcomes for these drugs in the ER+ and TNBC subtypes. / O c?ncer de mama ? uma doen?a altamente prevalente entre mulheres nos cinco continentes, sendo uma das principais causas de morte associadas ao c?ncer. Esse tumor ? classificado em tr?s subtipos principais: c?ncer de mama estrog?nio positivo (ER+), c?ncer de mama HER2 positivo (HER2+) e, c?ncer de mama triplo negativo (TNBC). A necessidade da identifica??o do subtipo tumoral ? de extrema import?ncia para escolha do tratamento. Atualmente, o subtipo triplo negativo ? o que gera maiores desafios cl?nicos, pois o tratamento ainda ? pouco espec?fico, n?o sendo eficiente em muitos casos. O reposicionamento de drogas baseia-se na determina??o de indica??es diferentes daquelas para as quais os f?rmacos foram previamente aprovados. Representa um m?todo f?cil e r?pido para a identifica??o de novos tratamentos, se comparado com o desenvolvimento tradicional de novos f?rmacos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aspirina e da metformina, dois medicamentos j? aprovados internacionalmente, isolados ou em combina??o, em linhagens de c?ncer de mama de tr?s diferentes subtipos. As linhagens celulares utilizadas foram MCF-7 (ER+), MDA-MB-231 (triplo negativa) e SK-BR-3 (HER2+), as quais foram submetidas ao tratamento com metformina e/ou aspirina (0.01 mM - 10 mM). Ap?s o tratamento, foram realizados ensaios funcionais in vitro. Al?m disso, an?lises in silico foram empregadas para identificar a intera??o entre o receptor de estrog?nio (ER) e os f?rmacos. Na linhagem MCF-7, a metformina induziu altera??es morfol?gicas, redu??o da viabilidade e da migra??o celular. Foi observado um efeito sinerg?stico entre a combina??o de metformina e aspirina na linhagem MDA-MB-231, em rela??o ? viabilidade celular e ? capacidade de forma??o col?nias. Entretanto, na linhagem SK-BR-3, n?o foram obtidos efeitos significativos. Acredita-se que os efeitos da metformina e da aspirina podem estar relacionados ? indu??o da express?o de COX-2, independente da produ??o de lipoxinas. Dados in silico demonstraram que a aspirina e a metformina possuem a capacidade de se ligar, com a mesma energia, ao ERa. O presente estudo traz novas evid?ncias sobre os mecanismos de a??o da aspirina e da metformina em c?lulas de c?ncer de mama, com efeitos antitumorais predominantes nos subtipos ER+ e triplo negativo.

Sistemas de localização e rastreamento de objetos e pessoas a partir da utilização de sistema de posicionamento global (GPS) estão disponíveis nas mais diversas áreas e aplicações. Em muitos casos estes sistemas sofrem diversos problemas em relação, principalmente, a falhas nas informações relacionadas a precisão e periodicidade das coordenadas transmitidas. As coordenadas GPS coletadas de um dispositivo, por exemplo de um carro, deveriam ser sempre localizadas em uma via. No entanto, em decorrência de problemas de comunicação ou de falta de precisão da informação reportada, muitas vezes as posições observadas são deslocadas da sua posição real. Uma das formas de contornar este problema é aplicar modelos matemáticos que permitem realizar o reposicionamento de rotas. Estes algoritmos recebem o nome de Map Matching, o objetivo deste trabalho e realizar o estudo, aplicação e desenvolvimento de técnicas de Map Matching aplicados ao problema de reposicionamento de coordenadas GPS em sistemas de localização e apresentação da rota em um mapa. Os modelos avaliados foram o modelo Ponto-a-Ponto, Ponto-a-Curva, Ponto-a-Curva Greenfeld, sendo ainda proposto uma extensão do modelo Ponto-a-Curva denominado Ponto-a-Curva Modificado. Todos os modelos foram implementados na ferramenta de simulação especialmente desenvolvida para este trabalho e foram realizadas uma série de simulações computacionais. Os resultados foram analisados a partir da definição de critérios específicos necessários para dar conta de um problema de posicionamento de veículos em uma via terrestre. / 128 f.

Made available in DSpace on 2015-02-04T21:38:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Audrey Marques Duarte.pdf: 1390189 bytes, checksum: e5e991326a3f994ed705843fefbd9a93 (MD5) Previous issue date: 2008-05-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Internet tem sido cenário de estratégias empresariais onde delineiam-se oportunidades para que marcas atuem em um novo ambiente. Utilizada como um forte canal de relacionamento entre organizações e consumidores, a Internet demonstra notável avanço não somente em termos de audiência, mas também na presença de variados segmentos de organizações que acreditam ter ali uma chance de manter ou ampliar seus mercados. O branding (gestão de marcas) apresenta-se como uma ferramenta potencial para auxiliá-las neste sentido. Porém, no Brasil especificamente, ao analisarmos o reposicionamento das marcas para o ambiente da Internet não encontramos comprovação sobre quais elementos lhes garantem sustentabilidade. Seriam os mesmos que garantem a sustentabilidade das marcas off-line (aquelas fora da Internet)? Com esta incerteza, a expressão correta do reposicionamento de marcas não pode ocorrer e, por conseqüência, o branding não pode ser exercido plenamente, o que põe em risco a boa execução dos planejamentos estratégicos das organizações. Este trabalho busca esclarecer a questão do reposicionamento das marcas para a Internet identificando os elementos geradores de sustentabilidade das mesmas e permitindo ao branding sua plena execução. Nosso estudo inicia-se a partir de um levantamento bibliográfico seguido de estudo exploratório na Internet sobre os assuntos que cercam o tema, em especial a virtualização das organizações, o branding, o reposicionamento e a presença das marcas na Internet. Realizamos também um estudo de campo com entrevistas qualificadas junto a especialistas e consumidores, identificando suas percepções sobre o relacionamento entre organizações, marcas, Internet e consumidores. A partir da experiência e conhecimento dos entrevistados foram reveladas informações importantes para que fossem esclarecidos os principais aspectos do tema desta pesquisa. Encerramos nosso trabalho com maior e mais aprofundado conhecimento sobre o branding e o reposicionamento de marcas para a Internet. Complementamos com a apresentação dos elementos que as sustentam neste ambiente, os quais são exatamente os mesmos que sustentam as marcas off-line, porém de forma adaptada. Ainda, apresentamos observações relevantes sobre o ambiente da Internet para as marcas. Acreditamos que estes resultados são revelações que em muito podem contribuir para a análise e desenvolvimento de estratégias empresariais e com isso auxiliar na evolução da Internet em nosso país. Contudo, sendo nossa pesquisa qualitativa, os resultados não podem ser adotados de maneira conclusiva, mas sim como início de estudos futuros mais aprofundados.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-25T20:20:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma. In Brazil only Schistosoma mansoni transmits this disease. The World Health Organization estimated in 2012 approximately 249 million people at risk of acquiring this disease around the world. The main strategy to control this disease is the treatment of individuals living in endemic areas with Praziquantel. The drug praziquantel is used on a large scale in the treatment of schistosomiasis and currently there are reported cases of resistance, indicating the need to discover new drugs. In silico drug repositioning is a strategy that reduces the time and cost in the search of anti-schistosomal agents. This work used bioinformatics tools and methodology based on previous studies, as a means to identify potential new S. mansoni targets and drug homologs, consequently identifying potential new schistosomal drugs. A list was compiled with S. mansoni potential targets that are part of essential processes in the database TDR and the targets that are part of the tegument were obtained in the scientific literature. The file with S. mansoni targets contained 1376 targets, and of these only 61 targets associated with 399 drugs had homology with drug targets. After removal of duplicate drugs, drugs found in previous studies and after the analysis of the conservation of the active site only 28 S. mansoni targets associated with 102 drugs had 60% or more of the active site conserved. Some of the drugs had activity and are interesting to validate this study such as: artemether, lumefantrine, meloxicam. Among the drugs found 18 drugs were selected to be tested using the following criteria: low toxicity in vivo, expired patent and a value of log P interesting for oral administration. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero Schistosoma. No Brasil apenas o Schistosoma mansoni transmite esta doença. A Organização Mundial de Saúde estimou em 2012 cerca de 249 milhões de pessoas em risco de adquirirem esta doença por meio de diferentes espécies e países. A principal estratégia no controle desta doença é o tratamento dos indivíduos que vivem em áreas endêmicas com o fármaco praziquantel. O praziquantel é o fármaco utilizado em ampla escala no tratamento desta doença e atualmente há casos de resistência relatados, sendo necessário a descoberta de novos fármacos. O reposicionamento in silico é uma estratégia que reduz o tempo e o custo na busca de fármacos esquistossomicidas. Neste trabalho, por meio da ferramenta de bioinformática e com base em estudos anteriores, identificou-se potenciais novos alvos homólogos a alvos de fármacos em uso em humanos, identificando com isso, potenciais novos fármacos esquistossomicidas. Compilou-se uma lista com os potenciais alvos do S. mansoni que fazem parte das vias essências da base de dados do TDR e encontrou-se os alvos que fazem parte do tegumento na literatura científica. O arquivo com os alvos do S. mansoni continha 1376 alvos, sendo que destes apenas 61 alvos do S. mansoni possuía homologia com alvos de fármacos associados a 399 fármacos. Após a remoção dos fármacos duplicados, fármacos encontrados em estudos anteriores e após a análise da conservação do sítio ativo restou 28 alvos do S. mansoni associados a 102 fármacos que tinha 60% ou mais do sítio ativo. Encontrou-se alguns fármacos com atividade comprovada e validam o estudo como: artemeter, lumefantrina, meloxicam. Dentre os fármacos encontrados cerca 18 fármacos foram selecionados para serem testados e a sua atividade então comprovada, utilizando os seguintes critérios: baixa toxicidade in vivo, patente expirada e um valor de log P interessante para um fármaco de administração oral.

A quimioterapia disponível para o tratamento das leishmanioses conta com um número reduzido de fármacos, com efeitos adversos severos e progressivo aumento de resistência. O reposicionamento de fármacos oferece uma grande oportunidade para introdução de novas terapias. Antidepressivos orais têm demonstrado eficácia tanto in vitro quanto in vivo contra espécies de Leishmania spp. Neste estudo, o antidepressivo sertralina (SRT), e o fármaco ciclobenzaprina (CBP), um relaxante muscular de estrutura tricíclica análoga a antidepressivos, foram avaliados quanto a atividade contra Leishmania (L.) infantum. Estudos metabolômicos não dirigidos utilizando multiplataforma analítica, foram combinados a análises de parâmetros celulares, essenciais para obtenção de uma ampla descrição dos mecanismos de ação. A CBP mostrou uma atividade leishmanicida in vitro, com valor de CE50 de 4,3 ?M contra formas promastigotas e 8,6 ?M contra formas amastigotas intracelulares. O fármaco apresentou uma citotoxicidade (CC50) de 70,6 ?M em células NCTC, e um índice de seletividade similar a miltefosina. Os estudos de mecanismo de ação, sugeriram que a CBP se difunde pela membrana plasmática, causando diminuição do ??p e no interior citoplasmático, parece induzir um estresse do RE com liberação de Ca+2; concomitantemente, induz um desacoplamento brando da cadeia respiratória mitocondrial e depleção dos níveis de ATP. Com o efeito prolongado, a liberação de Ca+2 parece ativar a autofagia, e seu influxo para a mitocôndria potencializar os efeitos deletérios, diminuindo o ??m e aumentando a produção de ROS. A longo prazo, o CBP induz uma extensa alteração metabólica, caracterizada aumento dos níveis da maioria dos metabólitos identificados e atividade desregulada de transportadores de membrana, gerando alto gasto energético associado a condições insuficientes de produção de energia mitocondrial, resultando em morte celular. A sertralina também apresentou atividade leishmanicida in vitro, com valor de CE50 de 2 ?M contra formas promastigotas e 3,9 ?M contra formas amastigotas intracelulares. Sua toxicidade em células NCTC foi de 19,6 ?M, resultando em um índice de seletividade similar a miltefosina. Nossos estudos confirmaram a mitocôndria de Leishmania como alvo primário e, o efeito de desacoplamento da cadeia respiratória associado ao colapso energético, estresse oxidativo seguido da despolarização do ??m como a possível origem desta disfunção mitocondrial. Estudos metabolômicos evidenciaram que a extensão do desarranjo metabólico, abrange diminuição da capacidade de detoxificação do metabolismo tiol-redox, uma severa depleção do pool intracelular de aminoácidos e poliaminas, evidenciando uma completa deterioração do metabolismo energético, por meio de um mecanismo multialvo direcionado a vias metabólicas essências do parasita. Finalmente, este estudo descreve a atividade anti-Leishmania de dois fármacos orais aprovados, com mecanismos de ação letais e irreversíveis no parasita, encorajando o prosseguimento para futuros estudos pré-clínicos na leishmaniose visceral americana / The available chemotherapy for the treatment of leishmaniasis has a reduced number of drugs, with severe adverse effects and progressive increase of resistance. The drug repurposing offers a great opportunity for the introduction of new therapies. Oral antidepressants have been demonstrated efficacy both in vitro and in vivo against Leishmania spp. In this study, the antidepressant sertraline (SRT), and the drug cyclobenzaprine (CBP), a muscle relaxant with tricyclic structure analogous to antidepressants, were evaluated against Leishmania (L.) infantum. Untargeted metabolomic studies using multiplataform analysis were combined to cellular parameters to a broad description of the mechanisms of action. Cyclobenzaprine showed an in vitro leishmanicidal activity with an EC50 value of 4.3 ?M against promastigotes and 8.6 ?M against intracellular amastigote forms. The drug showed a cytotoxicity (CC50) of 70.6 ?M in NCTC cells, and a selectivity index similar to miltefosine. Mechanism of action studies suggested that CBP diffuses through the plasma membrane, causing a decrease of the ??p and inside the cytoplasm, the drug seems to induce an ER stress, with release of Ca+2; concomitantly, it induces a mild decoupling of the mitochondrial respiratory chain and depletion of ATP levels. With the prolonged effect, a release of Ca+ 2 appears to activate an autophagy, and its mitochondrial influx results in a potentiation of deleterious effects as decreasing of ??m and increasing ROS production. In long term, CBP induces an extensive metabolic alteration, characterized increased levels of most of the identified metabolites and unregulated activity of membrane transporters. These generates a high energy expenditure associated to limited conditions of mitochondrial energy production, resulting in the cellular death. Sertraline also showed in vitro leishmanicidal activity, with an EC50 value of 2 ?M against promastigotes and 3.9 ?M against intracellular amastigote forms. Its toxicity in NCTC cells was 19.6 ?M, resulting in a selectivity index similar to miltefosine. Our studies confirmed the mitochondria of Leishmania as the primary target, and the uncoupling of the respiratory chain associated with energy collapse, oxidative stress, and the depolarization of ??m as the possible origin of this mitochondrial dysfunction. Metabolomics evidenced an extended metabolic disarray caused by SRT encompassing a decrease in the scavenging capacity of the thiol-redox metabolism and a severe depletion of the intracellular pool of amino acids and polyamines. The complete deterioration of energetic metabolism was evident through a multi-target mechanism, affecting the main metabolic pathways of the parasite. Finally, this study describes an anti-Leishmania activity of two approved oral drugs with lethal and irreversible mechanisms of action in the parasite, encouraging future preclinical studies in American visceral leishmaniasis.

Devido à progressiva importância atribuída à marca e, em especial, ao seu gerenciamento, diferentes teorias e modelos de compreensão, análise e prescrição foram e vêm sendo desenvolvidos, procurando se orientar abordagens e decisões estratégicas de negócio. Embora seja possível identificar algumas diferenças conceituais e/ou estruturais, dois aspectos, na prática, estão sempre presentes na análise de marcas e podem ser considerados decisivos na compreensão e gestão dessas: identidade e posicionamento de marca. Em relação a este segundo conceito, torna-se, ao longo do tempo, mais relevante, decisivo e crucial o processo de análise e avaliação da eficácia, adequação e relevância do posicionamento, em termos organizacionais, o entendimento da condição da marca e sua relação com o mercado, assim como modelos e procedimentos de avaliação para a decisão por sua eventual modificação ou adequação ao longo do tempo: o reposicionamento. Atualmente, o exame e a decisão de um reposicionamento de marcas está presente no cotidiano de profissionais de marketing e comunicação, porém não existe consenso ou uniformidade de abordagem deste tema, resultado, entre outras razões, da limitada literatura desenvolvida acerca do assunto. Este trabalho se propõe a abordar de forma estruturada conceitual e estrategicamente condições, desafios e riscos da adoção de uma estratégia de reposicionamento de marcas, utilizando argumentação baseada em literatura disponível, somada a intervenções exploratórias de exemplos reais, e propondo uma tipificação para as decisões e estratégias de reposicionamento, assim como orientações e alternativas para a gestão de marcas. A decisão por um reposicionamento de marca envolve desafios, investimentos e riscos, sendo que, na maioria das vezes, este processo se impõe ao gestor de marca. Com o objetivo de contribuir no exame e/ou avaliação do reposicionamento de marcas, este trabalho aborda as condições, as decisões e os impactos potenciais, oferecendo uma classificação e uma estrutura de análise orientadas para operação e gestão de estratégias de reposicionamento. / Different theories and comprehension, analysis and prescription models were and are being developed associated to progressive importance of brand management. Their objectives, in general, are to offer approached-based and strategic decisions for business. However, it is possible to identify some conceptual and/or structural differences among these papers, two aspects, in practice, are always present in brand’s analysis and may be recognized as decisive to understanding and administration brands: identity and positioning. This second concept is becoming more important and crucial as time goes by, playing a fundamental role in the brand efficacy evaluation, relevancy and compatibility of positioning and, particularly, the brand condition comprehension and its relationship with the market, as evaluation procedures and decision models for brand positioning change: the repositioning. Nowadays, brand repositioning analysis and decision are part of daily activities of marketing and communication professionals, but there is not approach consensus or uniformity to deal with this concept. As matter as fact, it is result – among other reasons – of limited developed literature about this issue. That thesis proposes itself to approach structurally, conceptually and strategically the conditions, challenges and risks to the adoption of brand repositioning strategy, using argumentation based on available literature added exploratory intervention in actual cases and proposing a taxonomy for repositioning strategies and decisions and brand management orientation and alternatives. Brand repositioning decision involves challenges, investments and risks. In general, this process in not a management decision, but an external imposition as a function of realized brand performance. With the objective to contribute to analysis and evaluation of brand repositioning, this research effort focus conditions, decisions and potential impacts, offering a structure and a classification oriented to repositioning strategies an operation management.

Objetivos: O objetivo deste estudo foi o de identificar compostos seletivamente tóxicos ao carcinoma espinocelular de boca in vitro por meio do reposicionamento de fármacos. Material e Métodos: Por meio de um escaneamento baseado na viabilidade celular de 1.280 fármacos, nós selecionamos três princípios ativos (luteolin, metixene hydrochloride e nitazoxanide) letais às células de câncer de boca SCC-25 e pouco tóxicos às células de queratinócitos cutâneos imortalizados HaCaT. Os fármacos candidatos foram investigados quanto à sua dose- e tempo-resposta bem como comparados e combinados à agentes quimioterápicos padrão por meio do ensaio por colorimetria com brometo de tiazolil azul de tetrazolio (MTT). O impacto dos fármacos na motilidade do SCC-25 e do HaCaT foi verificado pelo ensaio de migração celular e seus mecanismos de ação também foram explorados por meio da verificação dos níveis das proteínas fosforiladas pelo western blotting. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e, pelo menos, três vezes independentes. O teste t de student foi utilizado para confrontar as variáveis e nível de significância de 5% foi estabelecido para todos os testes. Resultados: O flavonoide natural luteolin exerceu citotoxicidade potente contra as células de câncer de boca in vitro, apresentando baixa toxicidade ao HaCaT e alta eficiência quando comparado a quimioterápicos como a cisplatina e o AG1478. Do ponto de vista molecular, a luteolin ativou a via de sinalização do dano do DNA e, combinada com um inibidor do Chk, apresentou efeitos potencializados. Além disso, nós demonstramos que a nitazoxanide e o metixene hydrochloride são capazes de destruir células SCC-25 porém não as HaCaT de maneira proporcional à dose e ao tempo de tratamento. As combinações entre os três fármacos hit e com a cisplatina ou o AG1478 potencializaram seus efeitos contra as células malignas. Conclusões: O presente estudo traz a luteolin, o metixene hydrochloride e a nitazoxanide como fortes candidatos a agentes terapêuticos contra o câncer de boca uma vez que estes compostos apresentam maior eficácia contra células de câncer de boca e menor toxicidade contra células não tumorais in vitro do que agentes quimioterápicos convencionais. / Objectives: Here we aimed at identifying and reposition approved drugs that could be selectively toxic towards oral squamous cell carcinoma cells. Materials and Methods: Through a cell-based drug screening of 1,280 chemical molecules, we selected 3 compounds (luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide) lethal to oral cancer SCC-25 cells, while sparing immortalized keratinocyte HaCaT cells. The drugs were then further challenged for their time- and dose-responses, as well as their comparison and combination to standard chemotherapeutic agents by colorimetric assay 1-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-3,5-diphenylformazan, Thiazolyl blue formazan (MTT). The impact on SCC-25 and HaCaT motility as well as the mode of action of the drugs was then further explored by scratching assay and western blotting, respectively. All the experiments were performed in triplicated and, at least, three independent times. Students t test was performed to verify the differences among the variables and the level of significance was set at 5%. Results: The natural flavonoid luteolin was a potent cytotoxic agent against oral cancer cells in vitro, presenting low toxicity against HaCaT cells and high efficiency as compared to standard-of-care, such as cisplatin and AG1478. From a molecular standpoint, luteolin coopted the DNA-damage pathway and could be efficiently combined with Chk pharmacological inhibitor. Moreover, we demonstrated that nitazoxanide and metixene hydrochloride kill the SCC-25 but not the HaCaT cells in a dose- and time-dependent. The combinations among the three drugs hit and with cisplatin and AG1478 improved their effect against the malignant cells. Conclusions: Luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide emerge as strong cytotoxic and/or adjuvant therapy in oral cancer, as these compounds present higher efficiency and lower toxicity against oral cancer cells in vitro than conventional chemotherapeutic agents.

Este trabalho acata Musica ricercata (1951-53), importante obra do período húngaro de György Ligeti, sob o ponto de vista da performance musical. Estruturado em três capítulos, no primeiro investiga a maneira como o conjunto de onze peças reflete o reposicionamento artístico e político de Ligeti nos anos anteriores à sua saída de Budapeste em direção à Europa Ocidental, ocorrida em 1956, e se firma como marco de sua independência artística. No segundo capítulo, centramos a pesquisa no projeto composicional de Musica ricercata com objetivo de identificar tópicos de sua organização estrutural que seriam aprofundados por Ligeti em sua obra madura e, consequentemente, reafirmam a profunda reorientação tratada no capítulo anterior. Por fim, o terceiro capítulo aborda cada uma das onze peças do ciclo e investiga as relações de reciprocidade entre seu pensamento composicional, a notação empregada pelo compositor e, finalmente, sua execução. / The present study regards Musica ricercata (1951-53), an important work from György Ligeti\'s Hungarian period, from the perspective of musical performance. Structured in three chapters, the first one investigates how this collection of eleven pieces reflects both Ligeti\'s artistic and political positioning in the years that preceded his exit from Budapest towards Western Europe in 1956 and stands out as a turning point for his artistic independence. In chapter 2, the research focuses on Musica ricercata´s compositional project in order to identify some topics of its structural organization which would be amplified by Ligeti on his mature work and, consequently, reaffirm the deep reorientation considered in chapter 1. Finally, the third chapter discuss each one of the eleven pieces from the cycle in order to investigate reciprocity relations among his compositional thinking, the notation used by the composer and, eventually, their performance.

Objetivos: O objetivo deste estudo foi o de identificar compostos seletivamente tóxicos ao carcinoma espinocelular de boca in vitro por meio do reposicionamento de fármacos. Material e Métodos: Por meio de um escaneamento baseado na viabilidade celular de 1.280 fármacos, nós selecionamos três princípios ativos (luteolin, metixene hydrochloride e nitazoxanide) letais às células de câncer de boca SCC-25 e pouco tóxicos às células de queratinócitos cutâneos imortalizados HaCaT. Os fármacos candidatos foram investigados quanto à sua dose- e tempo-resposta bem como comparados e combinados à agentes quimioterápicos padrão por meio do ensaio por colorimetria com brometo de tiazolil azul de tetrazolio (MTT). O impacto dos fármacos na motilidade do SCC-25 e do HaCaT foi verificado pelo ensaio de migração celular e seus mecanismos de ação também foram explorados por meio da verificação dos níveis das proteínas fosforiladas pelo western blotting. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e, pelo menos, três vezes independentes. O teste t de student foi utilizado para confrontar as variáveis e nível de significância de 5% foi estabelecido para todos os testes. Resultados: O flavonoide natural luteolin exerceu citotoxicidade potente contra as células de câncer de boca in vitro, apresentando baixa toxicidade ao HaCaT e alta eficiência quando comparado a quimioterápicos como a cisplatina e o AG1478. Do ponto de vista molecular, a luteolin ativou a via de sinalização do dano do DNA e, combinada com um inibidor do Chk, apresentou efeitos potencializados. Além disso, nós demonstramos que a nitazoxanide e o metixene hydrochloride são capazes de destruir células SCC-25 porém não as HaCaT de maneira proporcional à dose e ao tempo de tratamento. As combinações entre os três fármacos hit e com a cisplatina ou o AG1478 potencializaram seus efeitos contra as células malignas. Conclusões: O presente estudo traz a luteolin, o metixene hydrochloride e a nitazoxanide como fortes candidatos a agentes terapêuticos contra o câncer de boca uma vez que estes compostos apresentam maior eficácia contra células de câncer de boca e menor toxicidade contra células não tumorais in vitro do que agentes quimioterápicos convencionais. / Objectives: Here we aimed at identifying and reposition approved drugs that could be selectively toxic towards oral squamous cell carcinoma cells. Materials and Methods: Through a cell-based drug screening of 1,280 chemical molecules, we selected 3 compounds (luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide) lethal to oral cancer SCC-25 cells, while sparing immortalized keratinocyte HaCaT cells. The drugs were then further challenged for their time- and dose-responses, as well as their comparison and combination to standard chemotherapeutic agents by colorimetric assay 1-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-3,5-diphenylformazan, Thiazolyl blue formazan (MTT). The impact on SCC-25 and HaCaT motility as well as the mode of action of the drugs was then further explored by scratching assay and western blotting, respectively. All the experiments were performed in triplicated and, at least, three independent times. Students t test was performed to verify the differences among the variables and the level of significance was set at 5%. Results: The natural flavonoid luteolin was a potent cytotoxic agent against oral cancer cells in vitro, presenting low toxicity against HaCaT cells and high efficiency as compared to standard-of-care, such as cisplatin and AG1478. From a molecular standpoint, luteolin coopted the DNA-damage pathway and could be efficiently combined with Chk pharmacological inhibitor. Moreover, we demonstrated that nitazoxanide and metixene hydrochloride kill the SCC-25 but not the HaCaT cells in a dose- and time-dependent. The combinations among the three drugs hit and with cisplatin and AG1478 improved their effect against the malignant cells. Conclusions: Luteolin, metixene hydrochloride, and nitazoxanide emerge as strong cytotoxic and/or adjuvant therapy in oral cancer, as these compounds present higher efficiency and lower toxicity against oral cancer cells in vitro than conventional chemotherapeutic agents.