Caenorhabditis elegans is a powerful tool to study cellular migration and morphogenesis during organ development. During pharynx development, the dorsal gland cell, g1p, is born in the anterior aspect of the pharyngeal primordium and undergoes a form of morphogenesis called retrograde extension. egl-15, the single Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) in C. elegans and ina-1, one of two α-integrin receptors, are both required for the proper extension or migration of g1p cell. Mutations in either egl-15 or ina-1 show similar gland cell over-migration defects where the gland cell body migrates past the terminal bulb and is located in proximity of the intestine. The kinase domain of EGL-15 was found to be required for migration and transgenic rescue strategies were used to determine the tissue of EGL-15 function. RNA interference was used to determine if egl-15 and ina-1 are functioning in the same pathway to regulate gland cell migration. / February 2015

Approved for public release, distribution is unlimited / .08B in shipping and redistribution costs of Not Ready for Issue (NRFI) materiel. This thesis models the NAVICP shipping of unserviceable but repairable (retrograde) Navy materiel or Depot Level Repairables (DLRs). It develops an integer linear program to prescribe minimum cost shipment recommendations of DLRs from fleet to repair locations within the NAVICP and Defense Logistics Agency (DLA) distribution system subject to constraints on average shipping time (AveTime). NAVICP provided data on DLR shipments for one year from which we construct six representative DLRs, 3 of aviation and 3 of maritime cognizance. We find a cost and time savings can be achieved for all representative DLRs by avoiding the use of DLA as storage prior to induction for repair. In this study we compare shipping costs for each of the six DLRs when we constrain AveTime, from 2 to 8 days. We find 2-day constrained AveTime shipping, on average, costs 18 times that of 7-day AveTime shipping, twice that of 3-day shipping and a minimum of 5 times and a maximum of 11 times that of the costs of 4 through 6-day shipping. / Lieutenant Commander, United States Navy

A sinalização retrógrada mitocondrial é uma via de comunicação entre a mitocôndria e o núcleo que regula a expressão de uma série de genes nucleares que codificam proteínas mitocondriais, em resposta a disfunções mitocondriais. Em Saccharomyces cerevisiae, a via depende de Rtg1p e Rtg3p, que juntos formam o fator de transcrição que regula a expressão gênica, e de Rtg2p, um ativador da via. Aqui, nós mostramos novos estudos direcionados à investigação do impacto da sinalização retrógrada RTG-dependente na fisiologia mitocondrial. Verificamos que mutantes incapazes de realizar sinalização retrógrada RTG-dependente apresentam consumo de oxigênio mais elevado e menor produção de peróxido de hidrogênio em fase estacionária quando comparados a células selvagens. Interessantemente, mutantes RTG são menos capazes de decompor peróxido de hidrogênio assim como manter-se viáveis quando desafiados com peróxido. Nossos resultados indicam que a sinalização por RTG está envolvida na indução hormética de defesas antioxidantes e de resistência a estresse, função ainda não descrita para este sistema. / Mitochondrial retrograde signaling is a communication pathway between the mitochondrion and the nucleus which regulates the expression of a subset of nuclear genes that codify mitochondrial proteins, mediating cell response to mitochondrial dysfunction. In Saccharomyces cerevisiae, the pathway depends on Rtg1p and Rtg3p, which together form the transcription factor that regulates gene expression, and Rtg2p, an activator of the pathway. Here, we provide novel studies aimed at assessing the functional impact of the lack of RTG-dependent signaling on mitochondrial activity. We show that mutants defective in RTG-dependent retrograde signaling present higher oxygen consumption and reduced hydrogen peroxide release in the stationary phase when compared to wild type cells. Interestingly, RTG mutants are less able to decompose hydrogen peroxide as well as maintain viability when challenged with hydrogen peroxide. Overall, our results indicate that RTG signaling is involved in the hormetic induction of antioxidant defenses and stress resistance, a function of this system not yet described.

Rtg2p é uma proteína que participa da sinalização retrógrada, uma via de comunicação da mitocôndria para o núcleo; também tem sido associada com a longevidade em S. cerevisiae. O objetivo deste trabalho foi identificar os determinantes estruturais de Rtg2p, envolvidos na sinalização retrógrada e no envelhecimento. Para isto foram produzidos treze mutantes pontuais a partir do desenho racional por decomposição de redes de correlação de aminoácidos (DRCN). Analisaram-se as cepas mutantes por ensaio de auxotrofia para glutamato, expressão do gene CIT2 e ensaio de longevidade replicativa. Em sua grande maioria as mutações realizadas causaram perturbações nas funções de Rtg2p, com destaque para as cepas E106A, R109E, E137A, T138A e D158A, que apresentaram longevidade igual à da cepa rtg2Δ, com apenas uma mutação pontual. Em conclusão, os resultados obtidos demonstram que o domínio N-terminal é muito importante para a função de Rtg2p, e indicam que existem determinantes estruturais que controlam a longevidade de forma dependente ou independente da resposta retrógrada. / Rtg2p is a protein involved in the retrograde signaling, a pathway of communcation from mitochondria to nucleus; also has been associated with longevity in S. cerevisiae. The goal of this study was to identify the structural determinants of Rtg2p, controlling the function of this protein in retrograde response and aging. For this purpose thirteen point mutants were produced by site-directed mutagenesis, using rational design by decomposition of residues correlation networks (DRCN). The strains was analyzed by glutamate auxotrophy, CIT2 gene expression and replicative life span assays. For the most of performed mutations, generated inactivation to Rtg2p functions, highlighting to R109E, E137A, T138A, and D158A showed longevity equal to rtg2Δ strain, even with a single amino acid change. In conclusion, our results demonstrate that the N-terminal domain is very important to the function of Rtg2p and also show there are structural determinants in Rtg2p that control longevity in both dependent or independent manner of the communication between mitochondria and nucleus.

Introdução: As estenoses biliares são sempre desafiadoras, tanto no diagnóstico como na conduta terapêutica aplicada, seja ela curativa ou paliativa. A obtenção de espécimes se faz necessária uma vez que muitas doenças benignas mimetizam as neoplasias biliopancreáticas, tornando o diagnóstico anatomopatológico fundamental. Apesar da baixa acurácia, a colangiopancreatografia retrógrada endoscópica (CPRE) é o método tradicionalmente utilizado para diagnosticar estenoses biliares por meio do escovado citológico e da biópsia transpapilar. Por outro lado, diversos estudos têm reportado acurácia satisfatória da ecoendoscopia com punção aspirativa com agulha fina (EE-PAAF). Este estudo propõe comparar prospectivamente esses métodos no diagnóstico anatomopatológico da estenose biliar com suspeita de origem maligna. Métodos: Após a realização do cálculo amostral, 50 pacientes com estenoses biliares com suspeita maligna foram submetidos à CPRE com escovado citológico e biópsia transpapilar e à EE-PAAF durante a mesma sedação ou com intervalo máximo de sete dias. O padrão-ouro do resultado anatomopatológico dos métodos foram a cirurgia e o seguimento clínico por pelo menos seis meses. Foram avaliados os índices de acurácia (sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo, razão de verossimilhança positiva e negativa e acurácia), de concordância e as complicações entre os métodos, além da realização de subanálises, incluindo avaliação de técnicas, localização anatômica e tamanho da lesão. Resultados: O diagnóstico anatomopatológico obtido na associação dos dois métodos nos 50 pacientes (26 mulheres e 24 homens, com média de idade de 63,08 anos) foram: 47 malignos, um suspeito para malignidade e dois benignos. O diagnóstico definitivo definido pelo padrão-ouro demonstrou 48 estenoses malignas e duas benignas. O tamanho médio das lesões foi 3,48 cm, sendo 31 lesões extraductais e 19 intraductais, bem como 35 distais e 15 proximais. Na análise por intenção de tratamento, sensibilidade, especificidade e acurácia da EE foram superiores aos resultados da CPRE (93,8%, 100% e 94% contra 60,4%, 100% e 62%, respectivamente) (p = 0,034) com índices de complicações semelhantes. Não houve concordância entre os métodos e a combinação deles aumentou a sensibilidade e acurácia para 97,9% e 98%, respectivamente. Nas subanálises, a EE foi superior à CPRE tanto nas lesões extraductais com acurácia de 100% contra 54,8%, p=0,019, quanto nas lesões maiores que 1,5 cm (95,8% contra 61,9%, p=0,031). Entretanto os resultados foram semelhantes nas lesões intraductais e nas menores que 1,5 cm. Não houve diferença significativa entre os métodos nas análises de lesões proximais, distais e pancreáticas. Nas subanálises das técnicas empregadas, o escovado citológico e a biópsia transpapilar apresentaram resultados semelhantes entre si, tal como as técnicas de capilaridade e vácuo. Conclusão: A EE-PAAF é superior à CPRE associada ao escovado citológico e à biópsia transpapilar, com índices de complicações semelhantes. Não há concordância entre os métodos e a associação deles aumenta os índices de acurácia. A EE-PAAF é superior à CPRE com obtenção de espécimes na avaliação de lesões extraductais e nas maiores que 1,5 cm e é semelhante nas intraductais e nas menores que 1,5 cm. O escovado citológico e a biópsia transpapilar apresentam resultados semelhantes entre si, tal como as técnicas de capilaridade e vácuo. Não há diferença entre os métodos nas análises individuais de lesões distais, proximais e pancreáticas / Background and Aims: Biliary strictures are always a challenging clinical scenario and the anatomopathological diagnosis is essential in the therapeutic management, whether for curative or palliative purposes. The acquisition of specimens is necessary since many benign diseases mimic biliopancreatic neoplasms. Endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) is the traditionally used method, despite its low accuracy based on biliary brush cytology and forceps biopsy. On the other hand, several studies reported good accuracy rates using endoscopic ultrasound guided-fine needle aspiration (EUS-FNA). The aim of this prospective study is to compare the accuracy of EUS and ERCP for tissue sampling of biliary strictures. Methods: After performing the sample calculation, fifty consecutive patients with indeterminate biliary strictures were included to undergo ERCP and EUS procedures on the same sedation or with a maximum interval of 7 days. The gold standard method was surgery or six months\' follow-up. Evaluation of the accuracy indices (sensitivity, specificity, positive and negative predictive value, positive and negative likelihood ratio and accuracy), concordance and adverse events among the methods were performed. Also, subtype analyses of the techniques evaluation, anatomical localization and size of the lesion were included. Results: The final diagnosis reported in 50 patients (26 Female and 24 Male with a mean age of 63.08 years old) was 47 malignant, one suspicious for malignance and two benign lesions. Thirty-one lesions were extraductal and 19 intraductal, 35 were distal and 15 proximal strictures. The mean size of the lesion was 3.48 cm. In the intention-to-treat analysis, the sensibility and accuracy of EUS-FNA were superior than ERCP tissue sampling with biliary brush cytology and intraductal forceps biopsy (93.8%, 94% vs. 60.4%, 62%, respectively) (p=0.034), with similar adverse events. There was no concordance between the methods and combining both methods improved the sensitivity and accuracy for 97.9% and 98%, respectively. In the subtype analyses, the EUS-FNA was superior, with a higher accuracy than ERCP tissue sampling in evaluating extraductal lesions (100% vs. 54.8%, p=0.019) and in those larger than 1.5 cm (95.8% vs. 61.9%, p=0.031), but were similar in evaluating intraductal lesions and lesions smaller than 1.5 cm. There was no significant difference between the methods in the analyses of proximal, distal and pancreatic lesions. In the subtype analyses of the techniques employed, the brush cytology and the intraductal transpapillary biopsy presented similar results, as well as capillary and suction techniques. Conclusion: EUS-FNA is better than ERCP tissue sampling with biliary brush cytology and intraductal forceps biopsy with similar adverse events. There is no concordance between the methods and their association increases the accuracy. EUS-FNA is superior to ERCP tissue sampling in the assessment of extraductal lesions and in those larger than 1.5 cm and similar in the intraductal and in the lesions smaller than 1.5 cm. The brush cytology and intraductal transpapillary biopsy present similar results as well as capillary and suction techniques. There are no differences between methods in individual analyses of distal, proximal and pancreatic lesions

O propósito deste estudo foi avaliar se o selamento promovido pelo MTA quando utilizado como material retrobturador seria diferente se inserido por duas diferentes técnicas de aplicação e condensação. 45 incisivos superiores humanos foram divididos em 3 grupos de 15 espécimes cada. Após apicectomia e preparo apical com ultra-som, as cavidades foram preenchidas com MTA, aplicado e condensado manualmente (G I) ou por vibração ultra-sônica (G II e G III). O grupo G II recebeu o MTA com o ápice posicionado para cima e o grupo G III com o ápice para baixo a fim de verificar possíveis interferências gravitacionais. Após a obturação retrógrada, os espécimes foram avaliados por infiltração linear e por área, valendo-se do corante Rodamina B a 1%. A utilização da vibração ultra-sônica para aplicação do MTA no grupo G II resultou em infiltração significativamente menor do que a ocorrida do grupo G I. Houve também diferença estatística entre os grupos da técnica ultra-sônica, com ápice voltado para cima (G II) e para baixo (G III), o que demonstra haver influência gravitacional (p < 0,05). Tal diferença não foi detectada entre os grupos G I e G III. Diante dos resultados, o ultra-som pode ser considerado como um método alternativo de aplicação do MTA. / The purpose of this study was to evaluate if the sealing ability produced by MTA, when used as a root-end filling material, would differ when used by two different placement and condensation methods. 45 human superior incisors were divided into 3 groups of 15 specimens each. After root-end resection, they were prepared with ultrasonic instrumentation and preparations were filled with MTA, placed and condensed by hand (G I) or ultrasonic methods (G II and G III). The G III group had the apical portion upside down, to verify if gravity forces could interfere in the results.After retrograde obturation the specimens were evaluated by Rhodamine B 1% for linear and area dye leakage. The MTA ultrasonic vibration in the G II group resulted in a less dye leakage than in the G I group. There was statistical difference between ultrasonic methods with the apex upside up (G II) and upside down (G III) which demonstrate a gravitational influence in sealing ability (p < 0,05). This difference wasn’t detected between G I and G III groups. At this time ultrasonic condensation should be considered as an alternative method for MTA placement.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Antonio Pellissari.pdf: 1778484 bytes, checksum: 53efb541915c3a7f2e9f0a102717239b (MD5) Previous issue date: 2004-07-21 / Although reaching high success rates there is a great number of root canals endodontically treated which don’t reach the wished results. In these cases there is necessity to indicate the periapical surgery. Among the surgical kinds the most used is the conventional retrograde filling. This surgical modality has also impelled the main researches about the matter.The present study had the purpose to evaluate “in vitro”the microleakage when were used some retrofilling materials and also the influence of application of EDTA in the retrograde cavity before to be filled the canals. They were used in this study seventy two mandibular and maxillary human canine teeth extracted for several reasons in Surgical Clinic of State University – Ponta Grossa – Pr – Brazil. Initially all teeth were instrumented and filled according to traditional technics of preparation and filling. After this the teeth had the apical portion sectioned perpendicularly to tooth long axis and its external surface was made waterproof. After the apicectomy they were prepared cavities of approximately 3 mm deep using the sonic equipment GNATUS ( JET- SONIC FOUR) with the point S12 with the angle of 90 with the active point with diamond with 3 mm long and a caliber compatible to the most of teeth. The seventy two teeth were fortuitously distributed in six groups with twelve teeth each one according to the materials to be used. In three groups before the retrograde filling it was made an application of EDTA during 3 minutes in retrograde cavity. According to the procedures and the materials used in retrofillings the six groups were so constituted: Group I – retrofilling with Sealapex+zinc oxide eugenol; Group II – retrofilling with IRM; Group III – retrofilling with MTA; Group IV – application of EDTA and retrofilling with Sealapex+zinc oxide eugenol; Group V – application of EDTA and retrofilling with IRM; Group VI – application of EDTA and retrofilling with MTA. After the operative procedures and drying of the roots these were imersed in 2 methilene solution during sixty hours at 37C. After this period the roots were washed in current water during 12 hours and the proofing layer was removed. It was performed them the longitudinal wearing of the root till the exposition of the retrofilling material making possible the analysis of the leakage. To verify the extension of the leakage the teeth were photographed with digital camera and the images transported to the computer where they were analysed in a specific program called Mocha to measure the apical microleakage. The leakage was measured from a root end to the more depth of leakage observed. The values of the leakages of each tooth in milimeters and the overages of the leakages were duly ordered and submited to the statistical analysis from which we conclude: There wasn’t influence when it was applicated the EDTA in retrograde cavity before the use of the retrofilling materials evaluated; There are statistically significative differences when the groups of retrofilling materials were compared and when the application of EDTA alone was analysed; The retrofilling material IRM presents the most degree of marginal leakage; MTA was shown to be the best among the evaluated materials; Sealapex+zinc oxide eugenol didn’t present significative difference in relation to MTA; EDTA used in retrograde cavity increased the degree of microleakage. / Embora atingindo altos índices de sucesso, há um grande número de canais radiculares, tratados endodonticamente, que não atingem os resultados desejados.Nesses casos há a necessidade da indicação da cirurgia parendodôntica. Dentre as modalidades cirúrgicas a mais empregada ainda é a obturação retrógrada convencional. Essa modalidade cirúrgica tem motivado também a maioria das pesquisas. O presente trabalho teve como objetivo a análise “in vitro”da microinfiltração, quando se utilizaram alguns materiais retrobturadores e também a influência da aplicação de EDTA na cavidade retrógrada, antes de serem retrobturados os canais. Foram utilizados no presente trabalho 72 dentes caninos humanos superiores e inferiores permanentes, extraídos por diversos motivos, na Clínica de Cirurgia da Universidade Estadual de Ponta Grossa. Inicialmente todos os dentes foram instrumentados e obturados, segundo técnicas tradicionais de preparo e obturação. Após isso os dentes tiveram a porção apical seccionada perpendicularmente em relação ao longo eixo do dente e sua superfície externa impermeabilizada. Após a apicectomia foram confeccionadas cavidades de aproximadamente 3 mm de profundidade, utilizando-se o aparelho de ultra-som Gnatus (Jet – Sonic Four) com a ponta S12, com ângulo de 90, com ponta ativa diamantada com 3 mm de comprimento e um calibre que se aplica à maioria dos canais. Os 72 dentes foram então distribuídos aleatoriamente em 6 grupos experimentais com 12 dentes cada um, segundo os materiais a serem utilizados. Em 3 grupos, antes da obturação retrógrada, foi feita a aplicação de EDTA, por 3 minutos, na cavidade retrógrada. De acordo com os procedimentos e materiais utilizados na retrobturação, os 6 grupos experimentais foram assim constituídos: Grupo I – Retrobturação com Sealapex + óxido de zinco e eugenol; Grupo II – Retrobturação com IRM; Grupo III – Retrobturação com MTA; Grupo IV – Aplicação de EDTA e retrobturação com Sealapex+óxido de zinco e eugenol; Grupo V – Aplicação de EDTA e retrobturação com IRM; Grupo VI – Aplicação de EDTA e retrobturação com MTA. Após a realização dos procedimentos operatórios e a secagem das raízes, essas foram imersas em solução de azul de metileno a 2%,por 60 horas a 37C.Decorrido esse período as raízes foram lavadas durante 12 horas em água corrente e a camada impermeabilizante removida. Realizou-se então o desgaste longitudinal da raiz no sentido vestíbulo-lingual até a exposição do material retrobturador, possibilitando assim a análise da infiltração do corante. Para verificação da extensão da penetração da solução corante os dentes foram fotografados com uma câmara fotográfica digital e as imagens levadas ao computador, onde foram analisadas em um programa específico chamado Mocha, para medir a microinfiltração apical. A infiltração foi medida a partir do extremo apical radicular, até a maior profundidade de infiltração observada. Os valores em milímetros das infiltrações de cada dente e as médias das infiltrações foram devidademente tabulados e submetidos à análise estatística, levando-nos às seguintes conclusões: Não houve influência da aplicação do EDTA na cavidade, antes do uso dos materiais retrobturadores avaliados; Existem diferenças estatisticamente significantes, quando comparados os grupos de materiais retrobturadores e quando analisada a aplicação do EDTA isoladamente; O material retrobturador IRM apresenta o maior grau de infiltração marginal; O MTA mostrou-se ser o melhor entre os materiais avaliados; O Sealapex+Óxido de zinco e eugenol não apresentou diferença significativa em relação ao MTA; O EDTA, utilizado na cavidade retrógrada, provocou um aumento no grau de infiltração.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo comparar a qualidade do selamento promovido por 3 cimentos reparadores endodônticos: Ceramicrete, iRoot-BP Plus e BioAggregate, com o ProRoot MTA branco, utilizando o modelo de infiltração de glicose sob pressão. 64 incisivos centrais superiores, recém-extraídos e sem tratamento endodôntico foram selecionados. A instrumentação do canal radicular foi realizada em todos os dentes com brocas Gates-Glidden e limas K-Flexofile (Dentsply Maillefer, Ballaigues Suíça), 1mm aquém do ápice. A patência foraminal foi confirmada a cada instrumento usado. Os dentes tiveram suas coroas removidas padronizando-os em 15mm de comprimento. Foi realizada apicetomia a 3mm do ápice e o preparo da cavidade retrógrada com o auxílio do ultrassom Various 350 (NSKNakanishi Inc., Tóquio, Japão) e da ponta E32D (NSKNakanishi Inc., Tóquio, Japão). As raízes foram distribuídas, randomicamente, em quatro grupos experimentais (n=15): G1Ceramicrete, G2iRoot BP Plus, G3BioAggregate e G4ProRoot MTA branco. Como controle negativo (n=2) foram utilizados dentes hígidos, e como controle positivo (n=2), dentes acessados e com patência confirmada. Os cimentos reparadores foram manipulados seguindo as recomendações do fabricante e inseridos na cavidade retrógrada utilizando a mesma ponta ultrassônica usada no preparo. As amostras foram mantidas na presença de umidade por 72h para o completo endurecimento dos materiais. As raízes foram montadas em um dispositivo de dupla-câmara selada para a infiltração da glicose. Foram utilizados 0,75ml de solução de glicose a 1Mol/L na câmara superior e 0,75ml de água destilada na câmara inferior. Os dispositivos foram conectados a um sistema de distribuição de pressão, que permitiu a infiltração de 32 amostras em uma mesma etapa. A solução de glicose foi forçada apicalmente sob uma pressão de 15psi durante 1 hora. Uma alíquota de 10l foi coletada da câmara inferior para quantificar a glicose infiltrada. A concentração de glicose foi determinada com o auxílio do Kit GlucoseHK (Megazyme, Wicklow, Irlanda) e de um espectrofotômetro de luz visível (Campsec M330, Cambridge, Reino Unido) em um comprimento de onda de 340nm. O teste não-paramétrico Kruskal-Wallis e o teste Dunns foram utilizados na análise estatística. Os resultados encontrados demonstraram que houve diferença significativa entre os grupos experimentais (p=0,0036). O BioAggregate apresentou a maior concentração de glicose-1,85(g/L), seguido do ProRoot MTA-1,2; IRoot BP-0,85 e Ceramicrete-0,75. Não houve diferença entre os três novos cimentos reparadores e o material padrão-ouro (p>0,05). Não houve diferença entre Ceramicrete e iRoot BP Plus (p>0,05), porém estes foram estatisticamente diferentes do BioAggregate (p<0,05). Diante dos resultados obtidos, pode-se concluir que: nenhum dos cimentos testados foi capaz de promover selamento hermético; os três novos cimentos testados não revelaram o mesmo padrão de selamento; os três novos cimentos testados revelaram um padrão de selamento semelhante a do ProRoot MTA branco; e o Ceramicrete e o iRoot BP Plus apresentaram padrão de selamento superior em comparação com o BioAggregate. / The present study sought to compare the sealing ability of three new reparative endodontic cements Ceramicrete, iRoot-BP Plus, BioAggregate and compared to white ProRoot MTA, using the glucose leakage model under pressure. Sixty-four recently extracted maxillary incisors, without previous endodontic treatment, were selected. A crown-down root canal instrumentation was performed using Gates-Glidden burns and Kerr Flexofile (Dentsply Maillefer, Ballaigues Switzerland), 1mm short of the apical foramen (working length). The apical patency was confirmed after the use of each instrument, with a Kerr file #10, 1mm beyond the foramen. The teeth had their crowns removed, leaving roots 15mm in length. After that, apicetomy was carried out at 3mm from the apex. The retrograde preparation was performed using the E32D ultrasonic tip (NSK Nakanishi Inc., Tokyo, Japan). Roots were randomly distributed in four experimental groups (n=15): G1 - Ceramicrete, G2 - iRoot BP Plus, G3 - BioAggregate and G4 - white ProRoot MTA as gold-standard for comparisons. For the negative control group (n=2) teeth with intact crowns were used, and for the positive control (n=2), teeth with access and apical patency. The root-end filling material was manipulated as recommended by the manufacturer and inserted into the retrograde cavity using the same ultrasonic tip. The samples were stored at 100% humidity for three days to allow setting of the material. After that, the roots were mounted in a double-chamber apparatus where 0,75ml of 1Mol/L glucose solution was placed into the superior chamber and 0,75ml of distilled water was placed into the inferior chamber. The devices were connected to a pressure distribution system that was developed to allow the leakage of 32 samples at a single stage. The glucose solution was forced apically under a pressure of 15psi during 1 hour. A sample of 10l was taken from the inferior chamber and the glucose concentration was measured following an enzymatic reaction using the Glucose HK Kit (Megazyme, Wicklow, Ireland) and a spectrophotometer (Campsec M 330, Cambridge, UK) at a wave-length of 340nm. The Kruskal-Wallis and the Dunns test were used for statistical analyses. The results demonstrated that there was significant difference between experimental groups (p=0,0036). BioAggregate displayed the highest glucose concentration - 1.85(g/L), followed by ProRoot MTA - 1.2; iRoot BP Plus - 0.85; Ceramicrete - 0.75. No significant difference was observed between the three new reparative cements and the gold-standard (p>0.05). There was no difference between Ceramicrete and iRoot BP Plus (p>0.05), however both materials were significantly different fromBioAggregate (p<0.05). Considering the results, it can be concluded that none of the tested cements was able to prevent glucose leakage, the 3 new tested cements do not presented a similar quality of sealing, and the three new tested cements presented a similar sealing pattern of ProRoot MTA and both Ceramicrete and iRoot BP Plus presented better quality of sealing than BioAggregate.

Orientador: Cláudio Cabello / Banca: Rogério Lopes Vieites / Banca: Simone Damasceno Gomes / Resumo: Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma massa alimentícia produzida a partir de mandioca cozida para utilização em diversos fins culinários. Foram investigadas as características sensoriais, químicas e microbiológicas dessa massa alimentícia de mandioca e também parâmetros que interferem na vida de prateleira do produto final. A variedade de mandioca foi a IAC 576-70, classificada como de mesa, colhida com idade fisiológica de 14 meses e estocada por 24 horas. Em seguida as raízes foram descascadas, cortadas em toletes e retirado o cordão central nas raízes. Foram colocadas em alto clave a 100ºC por 40 minutos e em seguidas moídas onde receberam adição de maltodextrina de amido de milho waxy 0, 5, 10 e 15%, para a diminuição da retrogradação e adição de ácido cítrico a 1% no controle da contaminação microbiológica. As amostras foram acondicionadas em embalagens de polietileno e armazenadas a temperatura refrigerada (10ºC ± 0,5 ºC) e em temperatura ambiente, para análises físico, químicas e microbiológicas. Os lotes de amostras foram produzidos em triplicatas com 7 períodos de avaliações (0, 2, 4, 6, 8, 10 e 12). Houve diferenças estatisticamente significativas (p≤0,01) tanto em relação ao tempo como ao armazenamento para os teores de açúcar redutor, acidez titulável e textura, e os teores de umidade e pH não variável significativamente. O tratamento com adição de maltodextrina a 15% apresentou o melhor resultado contra o aumento da textura. O comportamento destes fatores durante a vida de prateleira não afetou os parâmetros sensoriais avaliados em produtos culinários da massa (purê e mandioca frita). Não ocorreu sinérese nas amostras. Aos sete DAP (dias após o preparo), a contaminação microbiológica na condição ambiente foi visualmente 2 alta, sendo descartado esse lote. O lote em condição refrigerado seguiu suas avaliações até o 14º DAP. / Abstract: This work had as objective the development of a nutritious mass produced starting from cooked cassava for use in the several ends culinary. Were investigated the sensorial characteristics, physics chemistries and microbiological this foodstuffs mass of cassava and also parameters that interfere in the shelf life of the finish product. The cassava variety was IAC 576-70, classified as of table, picked with physiologic age of 14 months and stocked by 24 hours and soon afterwards they were peeled, cut in thole and withdraw central cord in the roots. They were put in high key to 100ºC for 40 minutes and soon afterwards ground where received treatments with addition of maltodextrina of starch of corn waxy 0 were, 5, 10 and 15%, and citric acid addition to 1% that searched for to reduce the retrogradação and to control the contamination microbiological. The samples were conditioned in packings of polyethylene and stored the refrigerated temperature (10ºC ± 0,5 ºC) and in room atmosphere. The lots of samples were produced in triplicates with 7 periods of evaluations (0, 2, 4, 6, 8, 10 and 12). There were significant differences statistically (p≤0,01) so much in relation to the time as to the storage for the tenors of sugar reducer, acidity titulável and texture, and the humidity tenors and pH they stayed unaffected. The treatment with maltodextrina addition to 15% presented the best result against the increase of the texture. The behavior of these factors during the shelf life didn't affect the appraised sensorial parameters in culinary products of the mass (purée and fried cassava). It didn't happen syneresis in the samples. To seven DAP (days after the preparation), the contamination microbiological in the environment condition was visually high, being discarded this lot. The lot in condition refrigerated followed their evaluations until 14th DAP. / Mestre

Le champignon filamenteux Podospora anserina constitue un système modèle pour l’étude de plusieurs processus biologiques, notamment le vieillissement. Une relation de causalité entre le fonctionnement de la chaine respiratoire et la longévité a été établie pour la première fois chez P. anserina et cette relation de causalité semble conservée. Le lien entre fonctionnement de la chaîne respiratoire et longévité pourrait se faire en partie par l’induction d’une régulation rétrograde en réponse à un dysfonctionnement mitochondrial. Les études des régulations rétrogrades mitochondriales et chloroplastiques montrent qu’en réponse à un dysfonctionnement de ces organites, il y a une reprogrammation de l’expression génique qui participe à la plasticité adaptative des espèces en réponse à l’environnement. Un gène cible d’une régulation rétrograde mitochondriale a été identifié chez P. anserina: le gène aox. L’oxydase alternative appartient à une voie respiratoire alternative en conditions de dysfonctionnement de la voie des cytochromes. Deux facteurs de transcription acteurs de cette régulation rétrograde mitochondriale ont été identifiés par une approche génétique. Ces protéines, RSE2 et RSE3, appartiennent à la famille des protéines Zn2Cys6 et sont les régulateurs majeurs du gène aox. Outre le gène aox, ces deux facteurs de transcription corégulent les deux enzymes de la néoglucogenèse FBP (Fructose-1,6-biphosphatase) et PCK (Phosphoénolpyruvate carboxykinase). Des allèles gain de fonction des gènes rse2 et rse3 ont été isolés et le crible pratiquement saturé. L’analyse de ces mutations ainsi que des approches de mutagenèse dirigée, ont permis de proposer l’existence de régions régulatrices dans les séquences protéiques RSE2 et RSE3. Une approche transcriptomique a permis d’identifier de nouvelles cibles de RSE2 et RSE3 activées lors d’un dysfonctionnement mitochondrial : le gène fhb (codant une flavohémoglobine) et le gène Pa_6_4030 (codant une α/β hydrolase). Une approche métabolomique a permis une meilleure compréhension de la reprogrammation métabolique en réponse à un dysfonctionnement de la chaîne respiratoire et du rôle de RSE2/RSE3 dans cette reprogrammation.RSE2 et RSE3 sont donc des acteurs d’une régulation rétrograde mitochondriale responsables de l’activation de voies respiratoires alternatives mais aussi d’une reprogrammation du métabolisme de P. anserina qui permettrait de maintenir une homéostasie cellulaire en condition de dysfonctionnement mitochondrial. / The filamentous fungus Podospora anserina is a model system for the study of many biological processes, including aging. A causal relationship between the respiratory chain efficiency and longevity has been established for the first time in P. anserina. This causal relationship seems to be conserved between species. The link between the respiratory chain efficiency and longevity could be in part explained by the induction of retrograde regulation in response to mitochondrial dysfunction. Studies of mitochondrial and chloroplast retrograde regulation show that in response to a dysfunction of these organelles, there is a reprogramming of gene expression involved in the adaptive plasticity of organisms in response to the environment.A target gene of mitochondrial retrograde regulation was identified in P. anserina: the aox gene. The alternative oxidase belongs to the respiratory alternative pathway induced when the mitochondrial electron transport chain is impaired. Two transcription factors involved in mitochondrial retrograde regulation were identified by a genetic approach. These proteins, RSE2 and RSE3 belong to the family of Zn2Cys6 proteins and are major regulators of aox. Besides the aox gene, these two transcription factors are responsible for the coregulation of two gluconeogenic enzymes: FBP (fructose-1,6-bisphosphatase) and PCK (phosphoenolpyruvate carboxykinase). By a genetic approach, several gain-of-function mutations were isolated in RSE2 and RSE3 and our screen was likely to be saturated. Analysis of these mutations, together with other mutagenesis approaches allowed us to propose the existence of regulatory regions in RSE2 and RSE3 sequences.Microarray transcriptional profiling was conducted on rse2 and rse3 gain of function mutants. This identified new targets of RSE2 and RSE3 activated during mitochondrial dysfunction: FHB (a gene encoding a flavohemoglobin) and Pa_6_4030 (a gene encoding an α / β hydrolase). A metabolomic approach was also used and it gave new insight to the metabolic reprogramming in response to a malfunction of the respiratory chain and the role of RSE2/RSE3 in this reprogramming.Thus we showed that RSE2 and RSE3 play a role in mitochondrial retrograde regulation that is responsible for the activation of the respiratory alternative pathway, and also for the activation of metabolic reprogramming of P. anserina that would maintain cellular homeostasis under conditions of mitochondrial dysfunction.