Orientador: Selma Maria Michelin Matheus / Resumo: As lesões nervosas periféricas (LNPs) levam a uma perda da conexão entre o axônio e o músculo, ocasionandointerrupção na transmissão do impulso nervoso e alterações nas junções neuromusculares (JNMs). O reparo das LNPs através da neurorrafia é um método amplamente utilizado, porém a recuperação tanto morfológica e funcional é incompleta, sendo um desafio para a clínica médica. Diante disso métodos alternativos como uso de selante de fibrina vêm sendo utilizados para minimizar danos e acelerar a recuperação nervosa e muscular, havendo poucas referências em relação às JNMs. O objetivo deste estudo foi verificar se o uso do selante de fibrina associado a um ponto de sutura atinge ou supera os resultados da sutura convencional após LNP com foco nos receptores de acetilcolina (nAChRs) e proteínas associadas às JNMs no músculo sóleo. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos adultos (CEUA: 1173/2016), divididos em 4 grupos: Controle-Sham (CS), Controle-Desnervado (CD), Lesão Sutura (LS) e Lesão Sutura + Selante de Fibrina (LSS). No grupo CS foi realizada incisão, afastamento da musculatura e localização do nervo isquiático direito. No grupo CD foi realizada neurotmese (gap de 6 mm).Nos grupos CD, LS e LSS foi realizadafixação dos cotos na musculaturaapós a neurotmese. Após 7 dias foi realizada reconexão dos cotos com três pontos de sutura no grupo LS e no grupo LSS um ponto de sutura foi associada ao selante de fibrina(CEVAP). Após 60 dias os animais foram eutanasiados, os músculos s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Peripherical nerve lesions (PNLs) lead to a loss of the connection between axons and muscle, resulting in the interruption of the transmission of nerve impulses and alterations in the neuromuscular junctions (NMJs). The repair of PNLs through neurorrhaphy is a widely utilized method, however the recuperation of both morphology and function is incomplete, challenging medical clinic. Thus, alternative methods such as the usage of fibrin sealants have been utilized to minimize damages and accelerate nerve and muscular recuperation, with few references in relation to NMJs. The objective of this study was to verify if the use of fibrin sealants associated to a stitch of suture reaches or surpasses the results of traditional suture after PNLs with focus in the acetylcholine receptors (nAChRs) and proteins associated to the NMJs in the soleus muscle. Forty male adult Wistar rats were utilized (CEUA: 1173/2016), divided into4 groups: Sham-Control (SC), Denervated-Control (DC), Suture Lesion (SL) and Suture Lesion + Fibrin Sealant (SFS). In SC group,it was performed incision, muscle spacing and identification of the right sciatic nerve. In DC group,it was performed neurotmesis (gap of 6 mm). In DC, SL and SFS groups,it wascarried out fixation of stumps on the musculature after neurotmesis. After 7 days the reconnection of the stumps with suture was accomplished in SL group and in SFS group the suture was associated with the fibrin sealant (CEVAP). After 60 days the animals were euthan... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Introdução: Os benefícios do emprego do selante de fibrina no reforço de anastomoses pancreatico-jejunais, após ressecção duodenopancreática, visando a redução da incidência de fístula pancreática pós operatória (FPPO), ainda são questionáveis. Objetivo: Avaliar a influência do emprego do selante de fibrina na anastomose pancreatico-jejunal, após duodenopancreatectomia, na incidência de fístula, bem como suas consequências clínicas e os custos hospitalares. Metodologia: Estudo retrospectivo de 62 pacientes consecutivos submetidos a duodenopancreatectomia, divididos em dois grupos: 31 pacientes utilizando o selante de fibrina (GCS) e 31 pacientes sem o emprego de selante (GSS). As variáveis estudadas foram agrupadas em epidemiológicas, clínicas, laboratoriais, com destaque para a incidência de fístula pancreática, classificada segundo a definição do International Study Group on Pancreatic Fistula, suas complicações pós operatórias catalogadas segundo a classificação de Clavien e suas repercussões na assistência e nos seus custos avaliados pelo método de absorção com rateio simples de todas as despesas, exceto a despesa com medicamentos, tratada de forma separada. Resultados: Os grupos foram homogêneos para os parâmetros epidemiológicos, clínicos, e laboratoriais e não foram registradas diferenças significativas na comparação da evolução pós operatória e dos indicadores assistenciais hospitalares. Por outro lado, os custos hospitalares foram mais elevados no GCS, em relação ao GSS (p<0,0001). Conclusão: O emprego do selante de fibrina, no reforço da anastomose pancreatico-jejunal, em pacientes submetidos a duodenopancreatectomias, nas condições estudadas, não melhorou os resultados clínicos e assistenciais e ainda aumentou os custos hospitalares. / Introduction: The benefits of fibrin sealant employment in strengthening pancreatico-jejunal anastomosis after duodenopancreatic resection, reducing the incidence of pancreatic fistula postoperative (PFPO) are still questionable. Objective: To evaluate the influence of the use of fibrin sealant in pancreatico-jejunal anastomosis after pancreaticoduodenectomy in the incidence of fistula and its clinical consequences and hospital costs. Methodology: A retrospective study of 62 consecutive patients who underwent pancreaticoduodenectomy, divided into two groups: 31 patients using fibrin sealant (GCS) and 31 patients without the sealant employment (GSS). The variables were grouped into epidemiological, clinical, laboratory, especially the incidence of pancreatic fistula classified as defined by the International Study Group on Pancreatic Fistula, their postoperative complications cataloged according to Clavien rating and its repercussions on care and its costs assessed by the absorption method with simple apportionment of all expenses except the expenditure on medicines, treated separately. Results: The groups were homogeneous for clinical, epidemiological and laboratory parameters and no significant differences were recorded in the comparison given postoperative progress and hospital assistance indicators. Moreover, hospital costs were higher in GCS, with respect to GSS (p <0.0001). Conclusion: The use of fibrin sealant in pancreatojejunal anastomosis after pancreaticoduodenectomy, in the studied conditions, did not improve the results of care and also increased hospital costs

Introdução: Os benefícios do emprego do selante de fibrina no reforço de anastomoses pancreatico-jejunais, após ressecção duodenopancreática, visando a redução da incidência de fístula pancreática pós operatória (FPPO), ainda são questionáveis. Objetivo: Avaliar a influência do emprego do selante de fibrina na anastomose pancreatico-jejunal, após duodenopancreatectomia, na incidência de fístula, bem como suas consequências clínicas e os custos hospitalares. Metodologia: Estudo retrospectivo de 62 pacientes consecutivos submetidos a duodenopancreatectomia, divididos em dois grupos: 31 pacientes utilizando o selante de fibrina (GCS) e 31 pacientes sem o emprego de selante (GSS). As variáveis estudadas foram agrupadas em epidemiológicas, clínicas, laboratoriais, com destaque para a incidência de fístula pancreática, classificada segundo a definição do International Study Group on Pancreatic Fistula, suas complicações pós operatórias catalogadas segundo a classificação de Clavien e suas repercussões na assistência e nos seus custos avaliados pelo método de absorção com rateio simples de todas as despesas, exceto a despesa com medicamentos, tratada de forma separada. Resultados: Os grupos foram homogêneos para os parâmetros epidemiológicos, clínicos, e laboratoriais e não foram registradas diferenças significativas na comparação da evolução pós operatória e dos indicadores assistenciais hospitalares. Por outro lado, os custos hospitalares foram mais elevados no GCS, em relação ao GSS (p<0,0001). Conclusão: O emprego do selante de fibrina, no reforço da anastomose pancreatico-jejunal, em pacientes submetidos a duodenopancreatectomias, nas condições estudadas, não melhorou os resultados clínicos e assistenciais e ainda aumentou os custos hospitalares. / Introduction: The benefits of fibrin sealant employment in strengthening pancreatico-jejunal anastomosis after duodenopancreatic resection, reducing the incidence of pancreatic fistula postoperative (PFPO) are still questionable. Objective: To evaluate the influence of the use of fibrin sealant in pancreatico-jejunal anastomosis after pancreaticoduodenectomy in the incidence of fistula and its clinical consequences and hospital costs. Methodology: A retrospective study of 62 consecutive patients who underwent pancreaticoduodenectomy, divided into two groups: 31 patients using fibrin sealant (GCS) and 31 patients without the sealant employment (GSS). The variables were grouped into epidemiological, clinical, laboratory, especially the incidence of pancreatic fistula classified as defined by the International Study Group on Pancreatic Fistula, their postoperative complications cataloged according to Clavien rating and its repercussions on care and its costs assessed by the absorption method with simple apportionment of all expenses except the expenditure on medicines, treated separately. Results: The groups were homogeneous for clinical, epidemiological and laboratory parameters and no significant differences were recorded in the comparison given postoperative progress and hospital assistance indicators. Moreover, hospital costs were higher in GCS, with respect to GSS (p <0.0001). Conclusion: The use of fibrin sealant in pancreatojejunal anastomosis after pancreaticoduodenectomy, in the studied conditions, did not improve the results of care and also increased hospital costs

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cartarozzi_LucianaPolitti_M.pdf: 5081962 bytes, checksum: 794c493e497a269465a5b035175dfbcb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A regeneração nervosa periférica é um processo complexo dependente do rearranjo e ativação das células de Schwann. O estímulo das células de Schwann pode ser alcançado através do enxerto de células tronco exógenas. Com o intuito de entender a importância do enxerto de células tronco mesenquimais (MSC) no processo regenerativo periférico, utilizamos o modelo de tubulização do nervo isquiático. As próteses tubulares foram preparadas a partir de membranas de poli-caprolactona (PCL) e preenchidas com selante de fibrina (FG), utilizado, neste caso, como substrato para as MSC. A técnica de tubulização foi feita em ratas fêmeas Lewis adultas, divididas em 4 grupos (n = 5 por grupo): normal, PCL (tubo vazio); FG (tubo preenchido com selante de fibrina) e FG+MSC (tubo preenchido com selante de fibrina e enxertado com MSC). Sessenta dias após lesão, os nervos regenerados foram processados para imunoistoquímica e microscopia de luz. A presença de MSC GFP-positivas foi detectada nos nervos dos animais que receberam enxerto de MSC, indicando que a sobrevivência, a longo prazo, das células tronco no tecido. A regeneração axonal, analisada por imunoistoquímica, revelou expressão de elementos básicos do nervo periférico, ou seja, componentes dos axônios e da lâmina basal tiveram a expressão equivalente em todos os grupos experimentais. A organização axonal foi observada através da marcação anti-neurofilamento. A presença das células de Schwann foi analisada através da marcação anti-S100 e o anticorpo anti-colágeno IV foi utilizado para detecção da lâmina basal. A imunomarcação anti-p75NTR, o receptor de baixa afinidade para neurotrofinas, foi utilizada para investigar a reatividade das células de Schwann. A marcação basal deste, em nervos não lesionados, foi aumentada pelo processo regenerativo, sendo estatisticamente maior no grupo FG+MSC (77% em relação ao nervo contralateral; p<0.001). Além disso, houve colocalização de MSC GFP-positivas e imunomarcação anti-BDNF, evidenciando uma possível via de atuação das células sobre o comportamento das células de Schwann. A partir da análise das secções semi-finas dos nervos pudemos avaliar que a área dos nervos regenerados no interior das próteses tubulares foi estatisticamente igual nos diferentes grupos experimentais. Quando quantificamos o número de axônios mielinizados por uma área fixa, o grupo FG+MSC apresentou maior densidade de axônios em relação ao grupo controle (25%, p<0,05). Da mesma maneira, quando analisamos os parâmetros morfométricos nos diferentes grupos experimentais, o grupo FG+MSC apresentou uma tendência a apresentar axônios de maior calibre e bainha de mielina mais espessa, em relação aos demais grupos, sendo que, a EBM, no intervalo de 1,46 a 2,25?m, foi significantemente maior em relação aos grupos PCL e FG (p<0,05). Como consequência, os animais do grupo FG+MSC mostraram recuperação motora significativamente maior na sétima e oitava semana de análise do índice funcional do nervo fibular. Os achados deste estudo mostram que as MSC enxertadas conjuntamente com selante de fibrina influenciam positivamente o processo regenerativo, modulando a reatividade das células de Schwann / Abstract: Peripheral nerve regeneration is a complex process that is dependent on the rearrangement and activation of Schwann Cells (SC). Such stimulation of SCs may be achieved by the use of exogenous stem cells. In order to better understand the importance of mesenchymal stem cell (MSC) grafting in the peripheral regeneration process we have used the model of sciatic nerve tubulization. Tubular prostheses were prepared from polycaprolactone (PCL) membranes and filled with fibrin sealant (FS), which was used as a substrate for the MSC. The technique of tubulization was applied in adult Lewis female rats that were divided into four groups (n = 5 per group): normal, PCL (empty tube), FS (tube filled with fibrin sealant) and FS + MSC (tube filled with fibrin sealant and grafted with MSC). Sixty days after injury, the regenerated nerves were processed for imunohistochemistry and observed under fluorescence microscopy. The presence of GFP positive stem cells was detected in the nerves of the animals that received MSC grafts, indicating the long term survival of such cells. The axonal regeneration process was studied by immunohistochemistry and revealed the presence of the basic elements of the peripheral nerve, namely axons and basal lamina components that were equivalent in all experimental groups. The axonal organization was observed with anti-neurofilament immunostaining. The presence of SCs was analyzed with anti-S100 immunostaining and anti-type IV collagen was used to detect the basal lamina. Anti-p75NTR, the low affinity receptor for neurotrophins, was used to investigate the reactivity of the SCs. A basal positive labeling in uninjured nerves was detected, which was upregulated by the regenerative process, being statistically higher in FS + MSC group (77% relative to uninjured nerve; p<0.001). Moreover there was colocalization between GFP-positive MSC and anti-BNDF immunolabeling, showing a possible pathway that these cells induce the reactivity of SCs. From sciatic nerve semi-thin sections we were able to evaluate that the areas of regenerated nerves were statistically the same in the different experimental groups. When we quantified the number of myelinated axons in 50.000?m2, the FG+MSC group showed higher density of axons when compared with PCL group (25%, p<0,05). In the same way, the analysis of morphometric parameters showed that the FG+MSC group have a tendency to present higher caliber axons and ticker myelin sheath when compared with other groups, being that the myelin sheath thickness, in the interval between 1,46 to 2,25?m, was significantly higher in FG+MSC group when compared to PCL and FG (p<0,05). As the functional result of the findings above, the FG+MSC animals showed higher motor function recovery, analyzed by FFI, at seventh and eighth weeks after lesion. The findings herein show that MSC associated with the FS scaffold improve the regeneration process by positively modulating the reactivity of SCs / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by CLAUDIA VILALVA CASSARO null (claudia.v.cassaro@gmail.com) on 2018-03-21T13:51:17Z No. of bitstreams: 1 dissertacao claudia_cassaroFINAL.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Rejected by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: Necessário fazer as seguintes correções no arquivo submetido: problema 1: Assinalar a agência de fomento (no seu caso CAPES). problema 2: No campo número do financiamento: colocar o número do processo. Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo em PDF novamente. Agradecemos a compreensão. on 2018-03-22T12:35:28Z (GMT) / Submitted by CLAUDIA VILALVA CASSARO null (claudia.v.cassaro@gmail.com) on 2018-03-22T15:52:41Z No. of bitstreams: 1 dissertacao claudia_cassaroFINAL.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-03-23T12:00:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cassaro_cv_me_bot.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T12:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cassaro_cv_me_bot.pdf: 3809022 bytes, checksum: a5c8891039ce6bc569b42ee66058c846 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O reparo do tecido ósseo é um desafio antigo da ciência mundial. A partir das décadas de 70-80, os biomateriais passaram a ser explorados e hoje desempenham importante papel na engenharia tecidual. Estes, quando aplicados na enxertia óssea, devem ser bioativos, biocompatíveis e reabsorvíveis. A integração entre os diversos materiais de origem sintética e os arcabouços biológicos possui amplo espectro de uso. Dentre os arcabouços destacam-se os compostos à base de fibrina por suas propriedades hemostáticas, estabilidade e morfologia favorável à proliferação celular. A presente revisão abordou a estrutura e constituição do tecido ósseo e suas limitações no processo de reparo, a relevância da engenharia tecidual aplicada à esta finalidade e os biomateriais utilizados para otimizar tal processo, com ênfase especial aos materiais compostos por fosfatos de cálcio, células tronco mesenquimais e sua aplicação junto ao arcabouço biológico selante de fibrina, com destaque para o selante heterólogo de fibrina, agora denominado biopolímero de fibrina, um produto único e em fase de testes em experimentação animal e estudos clínicos. Propõe-se, ao final desta, uma nova abordagem para a regeneração de defeitos ósseos de ratos baseada na associação entre o selante heterólogo de fibrina, o fosfato de cálcio bifásico e células tronco mesenquimais. / Bone tissue repair is an ancient challenge of world science. From the 70s and 80s, biomaterials began to be explored and nowadays play an important role in tissue engineering. These, when applied in bone grafting, have to be bioactive, biocompatible and resorbable. The integration between the various materials of synthetic origin and biological scaffolds has a wide spectrum of use. Among these scaffolds, fibrin-based compounds are distinguished by their hemostatic properties, stability and morphology favorable to cell proliferation. The present review addressed the structure and constitution of bone tissue and its limitations in the repair process, the relevance of tissue engineering approaches applied to this purpose and the biomaterials used to optimize this process, with special emphasis on materials composed of calcium phosphates, mesenchymal stem cells and its application with the biological sealant fibrin scaffold, highlighting the heterologous fibrin sealant, now named as fibrin biopolymer, a unique product testing in animal experimentation and clinical studies. At the end of this, a new approach is proposed for the regeneration of rat bone defects based on the association between heterologous fibrin sealant, biphasic calcium phosphate and mesenchymal stem cells.

Orientador: Benedito Barraviera / Resumo: O reparo do tecido ósseo é um desafio antigo da ciência mundial. A partir das décadas de 70-80, os biomateriais passaram a ser explorados e hoje desempenham importante papel na engenharia tecidual. Estes, quando aplicados na enxertia óssea, devem ser bioativos, biocompatíveis e reabsorvíveis. A integração entre os diversos materiais de origem sintética e os arcabouços biológicos possui amplo espectro de uso. Dentre os arcabouços destacam-se os compostos à base de fibrina por suas propriedades hemostáticas, estabilidade e morfologia favorável à proliferação celular. A presente revisão abordou a estrutura e constituição do tecido ósseo e suas limitações no processo de reparo, a relevância da engenharia tecidual aplicada à esta finalidade e os biomateriais utilizados para otimizar tal processo, com ênfase especial aos materiais compostos por fosfatos de cálcio, células tronco mesenquimais e sua aplicação junto ao arcabouço biológico selante de fibrina, com destaque para o selante heterólogo de fibrina, agora denominado biopolímero de fibrina, um produto único e em fase de testes em experimentação animal e estudos clínicos. Propõe-se, ao final desta, uma nova abordagem para a regeneração de defeitos ósseos de ratos baseada na associação entre o selante heterólogo de fibrina, o fosfato de cálcio bifásico e células tronco mesenquimais. / Abstract: Bone tissue repair is an ancient challenge of world science. From the 70s and 80s, biomaterials began to be explored and nowadays play an important role in tissue engineering. These, when applied in bone grafting, have to be bioactive, biocompatible and resorbable. The integration between the various materials of synthetic origin and biological scaffolds has a wide spectrum of use. Among these scaffolds, fibrin-based compounds are distinguished by their hemostatic properties, stability and morphology favorable to cell proliferation. The present review addressed the structure and constitution of bone tissue and its limitations in the repair process, the relevance of tissue engineering approaches applied to this purpose and the biomaterials used to optimize this process, with special emphasis on materials composed of calcium phosphates, mesenchymal stem cells and its application with the biological sealant fibrin scaffold, highlighting the heterologous fibrin sealant, now named as fibrin biopolymer, a unique product testing in animal experimentation and clinical studies. At the end of this, a new approach is proposed for the regeneration of rat bone defects based on the association between heterologous fibrin sealant, biphasic calcium phosphate and mesenchymal stem cells. / Mestre

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:39:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BarbizanPetinari_Roberta_D.pdf: 7051900 bytes, checksum: b3567758721f93532b336cb79e8aa570 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A avulsão de raízes motoras (ARV) tem se mostrado um modelo experimental reprodutível de degeneração de neurônios motores em ratos adultos. O emprego da ARV permite investigar degeneração/neuroproteção e plasticidade sináptica em motoneurônios, bem como testar a eficiência de diferentes tratamentos, devido à atual impossibilidade de reparo eficiente de lesões no sistema nervoso central (SNC). Os motoneurônios lesados têm potencial regenerativo após o reimplante de raízes nervosas, podendo servir como um modelo de regeneração no SNC. Contudo, na maioria das vezes, o reimplante das raízes não é suficiente para se obter retorno funcional, uma vez que a lesão causa grande perda neuronal. Há, portanto, necessidade do desenvolvimento de estratégias para diminuição da morte neuronal pós-lesão e direcionamento dos neuritos para seu alvo correto. O emprego de selante de fibrina pode auxiliar nesse processo e sua aplicação abre ainda a possibilidade de associação com células mononucleares de medula óssea (CMMO), as quais secretam fatores tróficos. Assim, o presente trabalho visa contribuir para o futuro emprego clínico desta abordagem terapêutica, preenchendo uma importante lacuna nos procedimentos reparativos após a avulsão. No presente trabalho, investigamos a eficácia do selante de fibrina, juntamente com o efeito neuroprotetor de CMMO de ratos Lewis-GFP, após avulsão e reimplante das raízes motoras. As intumescências lombares desses animais foram dissecadas e analisadas até 12 semanas após a AVR. Microscopia de luz foi empregada para a investigação da sobrevivência neuronal, quantificação das fibras nervosas e sua morfometria. Imunoistoquímica foi realizada para análise da estabilidade sináptica e da gliose reativa e RT-PCR foi utilizada para quantificação de transcritos gênicos para neurotrofinas, Iba-1 e GFAP. Microscopia eletrônica de transmissão foi usada para detectar possíveis alterações no equilíbrio de inputs excitatórios/inibitórios e avaliação motora foi realizada pelo walking track test. Os resultados do presente estudo indicam que ocorreu neuroproteção pelo reimplante com o selante de fibrina, com preservação parcial da cobertura sináptica dos motoneurônios resgatados. Não foram observadas diferenças na reatividade microglial na fase crônica pós-lesão, entre os grupos estudados por imunuistoquimica. No entanto, mais transcritos gênicos de Iba-1 foram obtidos 1 semana pós-cirúrgica no grupo com CMMO. Já em relação à astrogliose reativa, foi vista maior reatividade no grupo somente avulsão, 12 semanas após a lesão. Foi observada, também, produção de BDNF e GDNF após 1 semana pelas CMMO. Há maior número de fibras nervosas nos grupos com reimplante e essas fibras apresentaram diâmetros e espessura da bainha de mielina mais próximas ao controle, em relação ao grupo somente avulsão. Ainda foi observado que os grupos com reimplante, utilizando selante de fibrina, apresentaram melhor recuperação motora, analisada pelo cálculo do índice funcional do nervo fibular e da pressão exercida pela pata traseira. Em conjunto, podemos afirmar que o reimplante das raízes ventrais com selante de fibrina, associado ou não às CMMO, resultou em melhora da capacidade regenerativa dos neurônios após lesão e, consequentemente, recuperação da capacidade motora / Abstract: Ventral root avulsion (VRA) is an experimental model of proximal axonal injury at the central/peripheral nervous system interface that results in expressive neuronal death. In order to decrease neuronal degeneration, bone marrow stem cell (BMSC) has been proposed to treat such injuries. However, BMSC therapy is not effective without concurrent root replantation. In this sense, the use of a brasilian fibrin sealant, may be useful to facilitate the reconnection of avulsed roots at the spinal cord surface. The aim of the present work was to study the neuronal survival, synaptic plasticity, glial reaction and neurotrophic factor (BDNF and GDNF) production in the spinal motoneuron microenviroment and nerve regeneration after VRA and replantation with fibrin glue associated with BMSC therapy. Female Lewis rats (7 weeks old) were subjected to VRA and roots replantation. The animals were divided into the following groups (n=5 for each group): Group 1 ¿ avulsion only; Group 2 ¿ avulsion and DMEM injected; Group 3- the roots were replanted with fibrin sealant; Group 4 - the avulsed roots were repaired with fibrin sealant associated with BMSC; Group 5 ¿ the avulsed roots were repaired with sealant and BMSC injected at the respective spinal cord segments. EGFP-Lewis rats were used as BMSC donors. Flow cytometry was used to characterize the BMSC. The rats were sacrificed (1, 4, 8 and 12 weeks after surgery) and their lumbar intumescences processed for motoneuron counting, immunohistochemistry (used antisera: GFAP- glial fibrillary acidic protein, an astroglial marker; Iba-1- ionized calcium binding adaptor molecule, a microglial marker; synaptophysin - a synaptic marker and BDNF - brain derived neurotrophic factor) and PCR (Iba-1, GFAP, BDNF, GDNF). Nerve regeneration was assessed by morphological analysis of the sciatic nerve (nerve size, number and morphology of myelinated fibers) and motor function recovery (walking track test). The results indicated preservation of synaptic covering of the lesioned motoneurons and neuronal survival in the groups repaired with sealant alone and SCT treated. The replanted groups did not show significant changes in microglial response as compared to VRA by immunohistochemistry although these changes were observed at lumbar by PCR. Replanted groups show changes in astrogliosis reaction at motoneuron vicinity 12 weeks after surgery. Additionally, the cell transplanted group showed increased neurotrophins expression by PCR analysis. Nerve regeneration results indicated that the replantation alone or associated with BMSC promoted improvement in motor recovery and the intensity of the pressure exerted by the paws. Moreover, the average number of myelinated axons was higher in treated group when compared to avulsion only. In addition to counting of axons, the morphometric analysis of different parameters namely the diameter of nerve fibers, diameter of axons, thickness of myelin sheath and ratio "g" were significantly improved after reimplantation of ventral roots. The present data suggest that the repair of avulsed roots with the fibrin sealant alone or associated with BMSC is neuroprotective and contributes to the maintenance of spinal cord circuits leading to regeneration and recovery of motor function / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benitez_SuzanaUlian_M.pdf: 7544701 bytes, checksum: 2e552c7219f0c635a4b0afecffd3204d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Lesões nas raízes dorsais da medula espinal são frequentes e muitas vezes decorrentes de acidentes automobilísticos. Devido à possibilidade de geração de dor neuropática, os procedimentos cirúrgicos não priorizam o reparo do componente aferente, sendo reparado apenas o componente motor. Adicionalmente, a perda das informações sensoriais gera parestesia ou anestesia do membro lesado, bem como descoordenação motora. Nesse contexto, novas terapias precisam ser desenvolvidas para o reparo das raízes dorsais. Uma substância capaz de conectar tecidos por adesão e que promova a hemostase e estabilidade do tecido, como o selante de fibrina (SF), pode ser uma alternativa a ser empregada no reparo de raízes lesadas. Além disso, o emprego conjunto do SF com células-tronco mononuclares de medula óssea (CTMMO) pode potencializar uma eventual regeneração tecidual. Assim, o presente estudo avaliou a resposta glial, a reorganização sináptica, a morfologia das fibras sensoriais e a coordenação motora após reparo com SF e terapia celular. Para isso, foram empregados ratos Lewis fêmeas (6-8 semanas), sendo divididos em três grupos: rizotomia (RZ, n=20), rizotomia reparada com SF (RZ+SF; n=22) e rizotomia reparada com SF e CTMMO (RZ+SF+CT; n=20). O tempo de sobrevida pós-cirúrgico foi de até 8 semanas. Para imunoistoquímica, foram utilizados anticorpos anti-VGLUT1 (terminais pré-sinápticos glutamatérgicos), GAD65 (terminais pré-sinápticos gabaérgicos), sinaptofisina (terminais sinápticos), GFAP (astrócitos), Iba1 (microglia) e BDNF (fator neurotrófico). Além disso, foram realizados citoquímica com Sudan black (coloração para lipídeos) e os testes comportamentais von-Frey eletrônico e walking track test (sistema CatWalk). Os resultados demonstraram regeneração das aferências nos grupos RZ+SF e RZ+SF+CT. Porém, apenas no segundo grupo, houve crescimento axonal até lâminas mais profundas da medula espinal, o que resultou em melhor desempenho nos testes comportamentais. Concluímos que o reimplante de raízes sensitivas com SF e CTMMO pode ser uma alternativa terapêutica para o reparo de lesões dorsais na interface do SNC e SNP / Abstract: Dorsal root lesions are common and often occur in automobile accidents. Due to the possibility of generating neuropathic pain, surgical procedures do not prioritize the repair of the afferent component, focusing on the motor output instead. Moreover, the loss of sensory inputs triggers paresthesis or anesthesia of the injured limb, and motor impairments. In this context, new therapies have to be developed for dorsal root repair. A substance that can promote tissue adhesion and stability and tissue haemostasis, such as fibrin sealant (FS), could be an alternative for the repair of damaged roots. Furthermore, the combined use of FS plus bone marrow mononuclear stem cells (BMSC) may enhance tissue regeneration. Thus, the present study evaluated the glial response, synaptic changes, the cytoarchitecture of the sensory fibers and motor coordination with FS with or without cell therapy for root replantation. Female Lewis rats (6-8 weeks old) were divided into three groups: rhizotomy (RZ, n = 20), rhizotomy repaired with FS (RZ+FS, n = 22) and rhizotomy repaired with SF and BMSC (RZ+FS+SC, n = 20). The survival time after surgery was up to 8 weeks. For immunohistochemistry VGLUT 1 (presynaptic glutamatergic terminals), GAD65 (GABAergic presynaptic terminals), synaptophysin (synaptic terminals), GFAP (astrocytes), Iba1 (microglia) and BDNF (neurotrophic factor) antibodies were used. Also, cytochemistry with Sudan black (lipid staining) and the behavioral tests electronic von-Frey and Walking track test (CatWalk system) were carried out. The results showed regeneration of afferent inputs in groups RZ+FS and RZ+FS+SC. However, only in the group with BMSC, the axonal growth was able to reach deeper laminae of the spinal cord, resulting in a better performance in behavioral tests. We conclude that the sensory root replantation with FS and BMSC may be an alternative therapy for the repair of dorsal root injuries in the CNS and PNS interface / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural