Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:00Z : No. of bitstreams: 1 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:01Z : No. of bitstreams: 2 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5) Publico-121b.pdf: 377848 bytes, checksum: 1f16cca8d25f6c593fc89b9ae72d44c3 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:01Z : No. of bitstreams: 3 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5) Publico-121b.pdf: 377848 bytes, checksum: 1f16cca8d25f6c593fc89b9ae72d44c3 (MD5) Publico-121c.pdf: 1158835 bytes, checksum: 2200b05ae8bd3e1d60fb93b403ba5f89 (MD5). 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A presença da acetilcolina (ACh) no NTS e sua participação na transmissão ou modulação central das funções neurovegetativas foi sugerida desde a década de 80 (Kobayashi et al., 1978; Simon et al., 1981; Criscione et al., 1983; Helke et al., 1983). Contudo, a maioria dos estudos da literatura foram realizados in vitro e não há evidências de estudos da transmissão colinérgica in vivo em animais não anestesiados. Estudos prévios de nosso laboratório mostraram que a microinjeção de ACh no NTS de ratos não anestesiados causa hipotensão e bradicardia dose-dependentes e estas respostas parecem ser mediadas ou moduladas em parte pela liberação de óxido nítrico derivado da isoforma neuronal da enzima óxido nítrico sintase (NOS). A queda de pressão arterial causada pela ACh não foi abolida após o bloqueio parassimpático com metilatropina, indicando que a ativação do sistema colinérgico no NTS causa redução significante do componente simpático. A fim de discriminar as respostas de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) causadas pela estimulação dos receptores colinérgicos nicotínicos e muscarínicos no NTS, realizamos as curvas dose-resposta para os agonistas seletivos nicotina (NIC) e pilocarpina (PIL) microinjetados no NTS de ratos não anestesiados. Além disso, investigamos também os efeitos do bloqueio central da NOS neuronal (TRIM) sobre estas respostas. Ratos Wistar foram preparados de acordo com a técnina de implante crônico de cânulas guia em direção ao NTS e da metodologia para microinjeção de drogas em animais não anestesiados e registro de pressão arterial in vivo. A microinjeção unilateral do agonista colinérgico de receptor nicotínico (nicotina) no NTS de ratos não anestesiados causou significante hipotensão e bradicardia que se mostrou dosedependente. Com a microinjeção unilateral do agonista colinérgico de receptor muscarínico (pilocarpina) no NTS observamos significante hipotensão e bradicardia, onde as doses maiores que 1 nmol/100 nL causaram hipotensão seguida de aumento da pressão arterial e bradicardia. A microinjeção unilateral do inibidor da nNOS (TRIM 13,3 nmol/100 nL) no NTS reduziu significantemente a hipotensão e bradicardia causadas pela nicotina e pilocarpina no NTS. O bloqueio da nNOS também reduziu significantemente o aumento de pressão arterial média causado pela microinjeção de pilocarpina na dose de 5 nmol/100 nL. Os resultados são a primeira evidência funcional, em animais não anestesiados, da participação de ambos os subtipos de receptores colinérgicos (nicotínico e muscarínico) na resposta da ACh no NTS. As diferenças observadas com a estimulação seletiva dos receptores colinérgicos no NTS sugerem a participação de cada subtipo de receptor na modulação da transmissão de estímulos cardiovasculares distintos, e, a função do sistema colinérgico sofre influência, ainda por meios desconhecidos, do óxido nítrico de origem central. / The Nucleus of the Solitary Tract is the first sites of cardiovascular reflex afferent terminations in the central nervous system (CNS). Acetylcholine (ACh) is present within neurons and terminals in the NTS and its participation in modulation of neurovegetative function was suggested since the 80´s. However, most part of the studies in literature was performed in vitro and there were no evidences in nonanesthetized rats. Previous studies of our laboratory showed that ACh microinjection into the NTS of non-anesthetized rats elicits dose-dependent hypotension and bradicardia; and NO from nNOS may have a role in modulating these responses. Peripheral blockade of cholinergic muscarinic receptors (i.v. injection of methylatropine) did not alter hypotension induced by microinjection of ACh into the NTS of non-anesthetized rats, indicating that the activation of cholinergic system in the NTS elicits reduction of the sympathetic component. In order to discriminate cardiovascular responses elicited by cholinergic receptors stimulation in the NTS, we performed the dose-response curves for selective agonists nicotine (NIC) and pilocarpine (PIL) microinjected into the NTS of non-anesthetized rats. In addition, we investigated whether inhibition of the nNOS in the NTS affects the responses caused by cholinergic agonists. Male Wistar rats were prepared according to the methodology of guide cannulas implantation in the direction of the NTS for microinjection in freely-moving rats; and recording of blood pressure in nonanesthetized rats. Unilateral nicotine microinjection in the NTS of non-anesthetized rats caused dose-dependent hypotension and bradicardia. Microinjection of the muscarinic agonist (pilocarpine) in the NTS of non-anesthetized rats elicited significant hypotension and bradicardia, and with doses higher than 1nmol/ 100 nL it was observed hypotension followed by an increased in arterial pressure, and bradicardia. Blockade of neuronal nitric oxide syntase (nNOS) (TRIM 13.3 nmol/ 100 nL), in the NTS, significantly reduced responses elicited by nicotine and pilocarpine. Microinjection of TRIM also inhibited the increase in arterial pressure elicited by PIL 5 nmol/ 100 nL. These results are the first functional evidence in non-anesthetized rats of cholinergic receptors participation in ACh transmission s in the NTS. Differences observed with selective stimulation of cholinergic receptors in the NTS suggest the participation of each receptor subtype in modulation of distinct pathways of stimulus of cardiovascular integration to the NTS. Finally, the physiological effects of cholinergic transmission in the NTS are still unclear and NO modulation of this system remains to be elucidated. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The present thesis will try to elucidate important excitatory mechanisms in the brainstem related to cardio-respiratory control. We will discuss 4 recently published papers (cardiovascular control: Moreira e cols., 2005 e 2007; cardiorespiratory control: Takakura e cols., 2006; Moreira e cols., 2006). Papers 1 and 2: Glutamatergic mechanisms related to cardiovascular control. In the present study, we investigated the effects of inhibition of the caudal ventrolateral medulla (CVLM) with the GABA(A) agonist muscimol combined with the blockade of glutamatergic mechanism in the nucleus of the solitary tract (NTS) with kynurenic acid (kyn) on mean arterial pressure (MAP), heart rate (HR), and regional vascular resistances. In male Holtzman rats anesthetized intravenously with urethane/chloralose, bilateral injections of muscimol (120 pmol) into the CVLM or bilateral injections of kyn (2.7 nmol) into the NTS alone increased MAP to 186 ± 11 and to 142 ± 6 mmHg, respectively, vs. control: 105 ± 4 mmHg; HR to 407 ± 15 and to 412 ± 18 beats per minute (bpm), respectively, vs. control: 352 ± 12 bpm; and renal, mesenteric and hindquarter vascular resistances. However, in rats with the CVLM bilaterally blocked by muscimol, additional injections of kyn into the NTS reduced MAP to 88 ± 5 mmHg and mesenteric and hindquarter vascular resistances below control baseline levels. Moreover, in rats with the glutamatergic mechanisms of the NTS blocked by bilateral injections of kyn, additional injections of muscimol into the CVLM also reduced MAP to 92 ± 2 mmHg and mesenteric and hindquarter vascular resistances below control baseline levels. Simultaneous blockade of NTS and CVLM did not modify the increase in HR but also abolished the increase in renal vascular resistance produced by each treatment alone. The results suggest that important pressor mechanisms arise from the NTS and CVLM to control vascular resistance and arterial pressure under the conditions of the present study. Papers 3 and 4: Central chemoreceptors brainstem mechanisms related to cardio-respiratory control. Paper 3: Interaction between central and peripheral chemoreceptors. The rat retrotrapezoid nucleus (RTN) contains pH-sensitive neurons that are putative central chemoreceptors. Here, we examined whether these neurons respond to peripheral chemoreceptor stimulation and whether the input is direct from the solitary tract nucleus (NTS) or indirect via the respiratory network. A dense neuronal projection from commissural NTS (commNTS) to RTN was revealed using the anterograde tracer biotinylated dextran amine (BDA). Within RTN, 51% of BDA-labelled axonal varicosities contained detectable levels of vesicular glutamate transporter-2 (VGLUT2) but only 5% contained glutamic acid decarboxylase-67 (GAD67). Awake rats were exposed to hypoxia (n = 6) or normoxia (n = 5) 1 week after injection of the retrograde tracer cholera toxin B (CTB) into RTN. Hypoxia-activated neurons were identified by the presence of Fosimmunoreactive nuclei. CommNTS neurons immunoreactive for both Fos and CTB were found only in hypoxia-treated rats. VGLUT2 mRNA was detected in 92 ± 13% of these neurons whereas only 12 ± 9% contained GAD67 mRNA. In urethane-chloralose-anaesthetized rats, bilateral inhibition of the RTN with muscimol eliminated the phrenic nerve discharge (PND) at rest, during hyperoxic hypercapnia (10% CO2), and during peripheral chemoreceptor stimulation (hypoxia and/or i.v. sodium cyanide, NaCN). RTN CO2-activated neurons were recorded extracellularly in anaesthetized intact or vagotomized rats. These neurons were strongly activated by hypoxia (10-15% O2; 30 s) or by NaCN. Hypoxia and NaCN were ineffective in rats with carotid chemoreceptor denervation. Bilateral injection of muscimol into the ventral respiratory column 1.5 mm caudal to RTN eliminated PND and the respiratory modulation of RTN neurons. Muscimol did not change the threshold and sensitivity of RTN neurons to hyperoxic hypercapnia nor their activation by peripheral chemoreceptor stimulation. In conclusion, RTN neurons respond to brain pCO2 presumably via their intrinsic chemosensitivity and to carotid chemoreceptor activation via a direct glutamatergic pathway from commNTS that bypasses the respiratory network. RTN neurons probably contribute a portion of the chemical drive to breathe. Paper 4: Central chemoreceptors and sympathetic vasomotor outflow. The present study explores how elevations in brain pCO2 increase the sympathetic nerve discharge (SND). SND, phrenic nerve discharge (PND) and putative sympathoexcitatory vasomotor neurons of the rostral ventrolateral medulla (RVLM) were recorded in anaesthetized sino-aortic denervated and vagotomized rats. Hypercapnia (end-expiratory CO2 from 5% to 10%) increased SND (97 ± 6%) and the activity of RVLM neurons (67 ± 4%). Injection of kynurenic acid (Kyn, ionotropic glutamate receptor antagonist) into RVLM or the retrotrapezoid nucleus (RTN) eliminated or reduced PND, respectively, but did not change the effect of CO2 on SND. Bilateral injection of Kyn or muscimol into the rostral ventral respiratory group (rVRG-pre-Botzinger region, also called CVLM) eliminated PND while increasing the stimulatory effect of CO2 on SND. Muscimol injection into commissural part of the solitary tract nucleus (commNTS) had no effect on PND or SND activation by CO2. As expected, injection of Kyn into RVLM or muscimol into commNTS virtually blocked the effect of carotid body stimulation on SND in rats with intact carotid sinus nerves. In conclusion, CO2 increases SND by activating RVLM sympathoexcitatory neurons. The relevant central chemoreceptors are probably located within or close to RVLM and not in the NTS or in the rVRG-pre-Botzinger/CVLM region. RVLM sympathoexcitatory neurons may be intrinsically pH-sensitive and/or receive excitatory synaptic inputs from RTN chemoreceptors. Activation of the central respiratory network reduces the overall sympathetic response to CO2, presumably by activating barosensitive CVLM neurons and inhibiting RTN chemoreceptors. / A presente tese de doutorado vai tentar elucidar os mecanismos excitatórios do bulbo relacionados ao controle cardiovascular e respiratório. Para tanto serão discutidos 4 trabalhos recentemente publicados (controle cardiovascular: Moreira e cols., 2005 e 2007; controle cardio-respiratório: Takakura e cols., 2006; Moreira e cols., 2006). Trabalhos 1 e 2: Relacionado aos mecanismos glutamatérgicos responsáveis pelo controle cardiovascular. No presente estudo, procuramos investigar os efeitos cardiovasculares promovidos pela inibição da região caudoventrolateral (CVL) do bulbo com a injeção bilateral de muscimol, juntamente com o bloqueio glutamatérgico dos núcleos do trato solitário (NTS) (região postremal ou comissural) com a injeção de ácido quinurênico (antagonista de receptores glutamatérgicos). Foram utilizados ratos Holtzman, anestesiados com uretana e alfa-cloralose e registrou-se a pressão arterial média (PAM), frequência cardíaca (FC) e fluxo sanguíneo para os leitos renal, mesentérico e aórtico. A injeção bilateral de muscimol (agonista GABAérgico do sub-tipo A) (2 mM) na região do CVL ou a injeção de ácido quinurênico (50 mM) no NTS postremal produzem aumento de PAM (186 ± 11 ou 142 ± 6 mmHg, respectivamente, vs. controle: 105 ± 4 mmHg), de FC (407 ± 15 ou 412 ± 18 bpm, respectivamente, vs. controle: 352 ± 12 bpm) e aumento de resistência vascular renal, mesentérica e aórtica. A injeção de ácido quinurênico no NTS comissural (NTScom) não produz alterações nos valores basais da PAM, FC e resistência vascular. Entretanto, em animais com a injeção bilateral de muscimol no CVL, a injeção de ácido quinurênico no NTS (postremal ou comissural) reduziu a PAM e resistência vascular para valores abaixo do valor controle. Do mesmo modo, em ratos com o bloqueio do NTS (postremal ou comissural), a subsequente inibição do CVL produziu também uma redução da PAM e resistência vascular para valores abaixo do valor controle. Em animais com lesão eletrolítica da região do NTScom, a injeção de muscimol na região do CVL produziu redução da PAM e resistência vascular para valores abaixo do valor controle. Dinte disso, os resultados sugerem a existência de importantes mecanismos excitatórios no NTS (região postremal e comissural) e no CVL para controle da pressão arterial e resistência vascular. Trabalhos 3 e 4: Relacionado aos mecanismos bulbares ativados pelos quimiorreceptores centrais no controle cardio-respiratório. Trabalho 3: Interação entre quimiorreceptores centrais e periféricos. O núcleo retrotapezóide (NRT) contém neurônios sensíveis ao pH e são característicos como sendo quimiorreceptores centrais. A hipótese desse trabalho é procurar mostrar que a ativação dos quimiorreceptores periféricos promove a ativação dos quimiorreceptores centrais no NRT e que essa ativação é mediada por uma via direta do NTScom para o NRT. Nesse estudo foram utilizados ratos Sprague-Dawley. Uma densa projeção do NTScom para a região do NRT foi mostrada com o uso de traçadores anterógrados (amina dextrana biotinilada - BDA) injetados por iontoforese na região do NTScom. Na região do NRT, mais de 50% dos terminais que expressam BDA contêm a vesícula de transporte para glutamato (VGLUT2), mas apenas 5% contêm glutamina ácido descarboxilase (GAD67). Em um outro grupo de animais, uma semana após a injeção do traçador retrógrado cólera toxina B (CTB) no NRT, os animais foram expostos a períodos de hipóxia por 3 horas. A presença da proteína Fos serviu para identificar os neurônios que eram ativados pela hipóxia. Neurônios imunorreativos para Fos e CTB foram encontrados na região do NTScom. A grande maioria dos neurônios que eram imunorreativos para Fos e CTB, expressavam VGLUT2 mRNA, enquanto uma minoria expressou GAD67 mRNA. Na segunda parte do estudo foram utilizados animais anestesiados com uretana e alfa-cloralose e vagotomizados. A injeção bilateral de muscimol no NRT promoveu a eliminação do nervo frênico durante uma situação controle, durante a estimulação dos quimiorreceptores centrais (hipercapnia – 10% de CO2) e durante a estimulação dos quimiorreceptores periféricos (injeção endovenosa de cianeto de sódio ou hipóxia (10-15% de O2). A atividade dos neurônios quimiossensíveis do NRT foram registrados em animais intactos ou vagotomizados para possíveis comparações. Todos os neurônios quimiossensíveis do NRT foram ativados pelos quimiorreceptores periféricos. A ativação dos quimiorreceptores periféricos não promoveu a ativação dos neurônios do NRT em animais com desnervação dos quimiorreceptores. A injeção bilateral de muscimol na região do CVL promoveu a eliminação do nervo frênico e a modulação respiratória nos neurônios do NRT. A injeção de muscimol não alterou o limiar e a sensibilidade dos neurônios do NRT durante uma situação de hipercapnia e também durante a ativação dos quimiorreceptores periféricos. Portanto, podemos concluir nesse estudo que os neurônios do NRT respondem às variações de CO2 devido a presença de 2 mecanismos: sua quimiossensibilidade intrínseca e por meio da ativação dos quimiorreptores periféricos (via glutamatérgica direta do NTScom para o NRT). Trabalho 4: Quimiorreceptores centrais e atividade simpática. O próximo estudo procurou explorar como elevações na pCO2 pode aumentar a atividade simpática. Foram registrados a atividade simpática eferente do nervo esplâncnico, atividade do nervo frênico e atividade dos neurônios vasomotores da região rostroventrolateral (RVL) do bulbo. Os experimentos foram realizados em ratos Sprague-Dawley, anestesiados com halotana e completamente desnervados. Hipercapnia (variação do CO2 expirado de 5 para 10%) promoveu aumento da atividade simpática (97 ± 6%) e da atividade dos neurônios do RVL (67 ± 4%). A injeção bilateral de ácido quinurênico no RVL ou no NRT eliminou ou reduziu a atividade do nervo frênico, respectivamente, mas não alterou a atividade simpática eferente produzida pela hipercapnia. A injeção bilateral de ácido quinurênico ou muscimol na região do CVL eliminou a atividade do nervo frênico e promoveu um aumento do efeito estimulatório do CO2 na atividade simpática. A injeção de muscimol na região comissural do NTS não alterou as respostas estimulatórias do CO2 sobre a atividade simpática e atividade do nervo frênico. Como esperado, a injeção de ácido quinurênico no RVL ou a injeção de muscimol no NTS comissural, em ratos intactos, bloqueou os efeitos cardio-respiratórios da estimulação dos quimiorreceptores periféricos com a injeção endovenosa de cianeto de sódio. Em conclusão, a hipercapnia aumentou a atividade simpática por ativação dos neurônios bulbo-espinais do RVL. Os neurônios excitatórios do RVL podem ser sensíveis a variações de CO2 e/ou receber projeções excitatórias dos quimiorreceptores centrais da região do NRT. Durante uma situação de hipercapnia, o total de aumento da atividade simpática produzido pela ativação dos quimiorreceptores centrais parece estar reduzido. Esse efeito é, portanto, mediado pela ativação de neurônios barossensíveis da região do CVL ou, então, pela inibição dos quimiorreceptores centrais do NRT. / FAPESP: 03/08163-4 / FAPESP: 98/06231-2 / Capes: 3495/04-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-04-07T14:01:06Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Final.pdf: 1635879 bytes, checksum: 8074ee580e0faa29dd1c10468ac9846f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-07T14:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Final.pdf: 1635879 bytes, checksum: 8074ee580e0faa29dd1c10468ac9846f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2-02-15 / CAPES / Os períodos pré e pós-natal representam a fase de maior desenvolvimento neuronal. Nessa fase crítica do desenvolvimento, o organismo é suscetível às influências de estímulos ambientais que podem modular os eventos ontogenéticos posteriores promovendo sérias consequências na vida adulta. Dentre esses estímulos ambientais, a desnutrição e o tratamento com inibidores seletivos da receptação de serotonina (ISRS) estão associados a vários prejuízos morfofuncionais na vida adulta. Algumas regiões encefálicas responsáveis pela manutenção do balanço energético são alvos de ajustes permanentes promovidos por desnutrição ou ISRS no período perinatal. Nesse estudo, o objetivo foi investigar no núcleo do trato solitário (NTS) os efeitos da desnutrição ou tratamento com ISRS durante os estágios inicias do desenvolvimento sobre o controle da ingestão alimentar. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar distribuídos aleatoriamente nos grupos Controle e Desnutrido formados por animais cujas mães receberam durante a gestação e lactação dieta contendo 17% ou 8% de caseína respectivamente. Dois outros grupos foram formados de acordo com tratamento farmacológico durante a lactação. Estes foram os grupos Salina e Fluoxetina, compostos por filhotes que receberam, respectivamente, solução de salina (NaCl 0.9%,) ou Fluoxetina (10mg/Kg) via subcutânea, diariamente, do 1º ao 21º dia de vida. Foram avaliados aos 35 e 180 dias de vida: a) Peso corporal; b) Ingestão Alimentar; c) Expressão da proteína FOS por imunohistoquímica no NTS em resposta a estímulo alimentar. As áreas estudadas foram identificadas e os neurônios imunorreativos quantificados através do microscópio ótico de campo claro com auxilio do atlas estereotáxico de Paxinos e Watson (1998). Com base nessas avaliações, o presente trabalho demonstrou que: a) a desnutrição perinatal promoveu aumento no consumo alimentar e número de células ativadas nas porções rostral (Controle= 166,3±33,8 vs Desnutrido=297,8±33, P=0.028) e medial (Controle= 167,8±47,44 vs Desnutrido=291,2±28,3, P=0.0043) do NTS em resposta a estímulo alimentar apenas em animais com 35 dias de vida; b) o tratamento neonatal com fluoxetina promoveu aumento no número de neurônios ativados em resposta a estímulo alimentar na porção rostral (Salina= 218,3±6,6; Fluoxetina=367±25,9, P=0.005) de animais adultos (180 dias); Estes resultados indicam que o NTS é uma estrutura particularmente vulnerável as influências da manipulação nutricional e farmacológica do sistema serotoninérgico nos estágios iniciais do desenvolvimento, e pode ser alvo de processos adaptativos do controle do balanço energético observados nesses animais na vida adulta.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9047_1.pdf: 1637307 bytes, checksum: f62840bbf4343e1158be0160291245d7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os períodos pré e pós-natal representam a fase de maior desenvolvimento neuronal. Nessa fase crítica do desenvolvimento, o organismo é suscetível às influências de estímulos ambientais que podem modular os eventos ontogenéticos posteriores promovendo sérias consequências na vida adulta. Dentre esses estímulos ambientais, a desnutrição e o tratamento com inibidores seletivos da receptação de serotonina (ISRS) estão associados a vários prejuízos morfofuncionais na vida adulta. Algumas regiões encefálicas responsáveis pela manutenção do balanço energético são alvos de ajustes permanentes promovidos por desnutrição ou ISRS no período perinatal. Nesse estudo, o objetivo foi investigar no núcleo do trato solitário (NTS) os efeitos da desnutrição ou tratamento com ISRS durante os estágios inicias do desenvolvimento sobre o controle da ingestão alimentar. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar distribuídos aleatoriamente nos grupos Controle e Desnutrido formados por animais cujas mães receberam durante a gestação e lactação dieta contendo 17% ou 8% de caseína respectivamente. Dois outros grupos foram formados de acordo com tratamento farmacológico durante a lactação. Estes foram os grupos Salina e Fluoxetina, compostos por filhotes que receberam, respectivamente, solução de salina (NaCl 0.9%,) ou Fluoxetina (10mg/Kg) via subcutânea, diariamente, do 1º ao 21º dia de vida. Foram avaliados aos 35 e 180 dias de vida: a) Peso corporal; b) Ingestão Alimentar; c) Expressão da proteína FOS por imunohistoquímica no NTS em resposta a estímulo alimentar. As áreas estudadas foram identificadas e os neurônios imunorreativos quantificados através do microscópio ótico de campo claro com auxilio do atlas estereotáxico de Paxinos e Watson (1998). Com base nessas avaliações, o presente trabalho demonstrou que: a) a desnutrição perinatal promoveu aumento no consumo alimentar e número de células ativadas nas porções rostral (Controle= 166,3±33,8 vs Desnutrido=297,8±33, P=0.028) e medial (Controle= 167,8±47,44 vs Desnutrido=291,2±28,3, P=0.0043) do NTS em resposta a estímulo alimentar apenas em animais com 35 dias de vida; b) o tratamento neonatal com fluoxetina promoveu aumento no número de neurônios ativados em resposta a estímulo alimentar na porção rostral (Salina= 218,3±6,6; Fluoxetina=367±25,9, P=0.005) de animais adultos (180 dias); Estes resultados indicam que o NTS é uma estrutura particularmente vulnerável as influências da manipulação nutricional e farmacológica do sistema serotoninérgico nos estágios iniciais do desenvolvimento, e pode ser alvo de processos adaptativos do controle do balanço energético observados nesses animais na vida adulta

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:41Z : No. of bitstreams: 1 Publico-086a.pdf: 1000885 bytes, checksum: a8256b60ac3216d579a9701c84515583 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:41Z : No. of bitstreams: 2 Publico-086a.pdf: 1000885 bytes, checksum: a8256b60ac3216d579a9701c84515583 (MD5) Publico-086b.pdf: 507734 bytes, checksum: 35a71879a83bad776c76020f76fb96ee (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:41Z : No. of bitstreams: 3 Publico-086a.pdf: 1000885 bytes, checksum: a8256b60ac3216d579a9701c84515583 (MD5) Publico-086b.pdf: 507734 bytes, checksum: 35a71879a83bad776c76020f76fb96ee (MD5) Publico-086c.pdf: 1776030 bytes, checksum: d420deb32e6a60ac8db7b56dccce3684 (MD5) / Respostas cardiovasculares podem ser integradas em diferentes níveis do sistema nervoso central (SNC). No bulbo existem várias áreas importantes para o controle cardiovascular. Sabe-se que, na superfície ventrolateral do bulbo, existem pelo menos três regiões relevantes ao controle cardiovascular: região rostroventrolateral (RVL), região caudoventrolateral (CVL) e a área pressora caudal (APC). A região RVL tem importante função na manutenção do tônus vasomotor e a região CVL interfere na regulação da pressão arterial (PA) por modular a atividade da região RVL. Além disso, essas duas regiões participam na interação de reflexos cardiovasculares, que incluem a participação de outra estrutura bulbar (Núcleos do Trato Solitário - NTS) como primeira sinapse de fibras aferentes reflexas. A APC foi recentemente descoberta e interfere na regulação da PA por modular a atividade dos neurônios das regiões RVL e CVL. Desse modo, o presente estudo procurou investigar a participação do NTS (região comissural e intermediária) nas respostas produzidas pela estimulação ou inibição da APC. Foram utilizados ratos Holtzman (280-350 g; n = 6-8) anestesiados com uretana (1,2 g/kg, i.v.). Um cateter foi inserido na artéria e veia femoral desses animais para registro de pressão arterial, freqüência cardíaca e injeção de drogas. Em alguns animais, foi registrada a atividade elétrica do nervo esplâncnico e do nervo frênico. Os animais foram adaptados a um aparelho estereotáxico e submetidos a uma craniotomia parcial para injeções de drogas. Num primeiro grupo experimental, os animais foram submetidos a lesão fictícia ou eletrolítica (1 mA x 10s) do NTS comissural (NTScom). A injeção unilateral do aminoácido excitatório L-glutamato (1 mM - 100 nl) na APC produziu resposta pressora (D = +28 ± 3 mmHg, vs. controle: D = +2 ± 2 mmHg, p<0,05) e taquicárdica (D = +20 ± 1 bpm, vs. controle: D = +3 ± 3 bpm, p<0,05). As respostas pressora e taquicárdica promovidas pela injeção unilateral de L-glutamato na APC foram abolidas 10 (D = +5 ± 7 mmHg e D = +4 ± 3 bpm, respectivamente), 30 (D = +7 ± 3 mmHg e D = +6 ± 3 bpm, respectivamente) e 60 minutos (D = +11 ± 3 mmHg e D = +5 ± 1 bpm, respectivamente) após a lesão eletrolítica do NTScom. Da mesma maneira, no grupo de animais que recebeu a injeção do agonista GABA-A muscimol no NTScom, as respostas pressora e taquicárdica promovidas pela injeção unilateral de L-glutamato na APC foram abolidas 10 (D = +5 ± 5 mmHg e D = +5 ± 3 bpm, respectivamente), 30 (D = +8 ± 5 mmHg e D = +7 ± 2 bpm, respectivamente) e 60 minutos (D = +11 ± 6 mmHg e D = +5 ± 2 bpm, respectivamente) após a injeção de muscimol. Por outro lado, as respostas pressora e taquicárdica promovidas pela injeção unilateral de L-glutamato na APC não foram modificadas 10 (D = +11 ± 2 mmHg e D = +30 ± 12 bpm, respectivamente), 30 (D = +27 ± 4 mmHg e D = +32 ± 15 bpm, respectivamente) e 60 minutos (D = +24 ± 7 mmHg e D = +24 ± 8 bpm, respectivamente) após as injeções bilaterais de muscimol no NTS intermediário. Dessa forma, as repostas de estimulação da APC parecem depender da integridade dos neurônios localizados no NTScom. Sendo assim, será que a integridade da APC é importante para as respostas de estimulação do NTScom? Apenas as injeções bilaterais do agonista GABAérgico muscimol (2 mM - 100 nl) na APC promoveu queda de PAM (D = -18 ± 6 mmHg, p<0,05) e FC (D = - 21 ± 8 bpm, p<0,05). As respostas depressora e bradicárdica promovidas pela injeção unilateral de L-glutamato no NTScom foram abolidas 10 (D = -5 ± 3 mmHg e D = +8 ± 9 bpm, respectivamente), 30 (D = -5 ± 2 mmHg e D = +7 ± 4 bpm, respectivamente) e 60 minutos (D = -6 ± 4 mmHg e D = +10 ± 6 bpm, respectivamente) após as injeções bilaterais de muscimol na APC. Da mesma maneira do ocorrido com as respostas de estimulação da APC, as respostas depressora e bradicárdica promovidas pela injeção unilateral de L-glutamato no NTS intermediário não foram modificadas 10 (D = -41 ± 9 mmHg e D = -67 ± 26 bpm, respectivamente), 30 (D = -31 ± 12 mmHg e D = -23 ± 4 bpm, respectivamente) e 60 minutos (D = -32 ± 8 mmHg e D = -21 ± 3 bpm, respectivamente) após as injeções bilaterais de muscimol na APC. Nossa próxima questão era saber se a inibição da APC promoveria alterações nos reflexos cardiovasculares. A curva do barorreflexo foi construída com injeções endovenosas de uma dose depressora de nitroprussiato de sódio (30 mg/kg) e com a inflação de um balão na aorta torácica. A relação de atividade simpática e PAM (curva do barorreflexo) não revelou nenhum efeito significativo alterado após as injeções bilaterais de muscimol na APC. Após a inibição da APC o barorreflexo continuou operando nos mesmos valores de PAM50 quando comparado ao grupo controle. Os valores de platô superior e inferior, bem como o ganho também não tiveram diferença quando comparados com o grupo controle. A ativação do quimiorreflexo foi realizada com injeções endovenosas de cianeto de sódio (NaCN – 50 mg/kg). A ativação do quimiorreflexo com NaCN produziu resposta pressora (D = +16 ± 4 mmHg, vs. salina D = +2 ± 2 mmHg, p<0,05), aumento da atividade simpática do nervo esplâncnico (D = +236 ± 11% em relação ao controle, p<0,01) e aumento da atividade do nervo frênico. Muscimol injetado bilateralmente na APC promoveu uma redução da resposta pressora (D = +9 ± 2 mmHg, vs. salina D = +18 ± 4 mmHg, p<0,05), da resposta simpatoexcitatória (D = +88 ± 18%, vs. salina D = +217 ± 33 %, p<0,01) e do aumento da atividade do nervo frênico produzido pela ativação dos quimiorreceptores periféricos com NaCN. As aferências dos quimiorreceptores periféricos terminam predominantemente no NTScom. Para corroborar a interação existente entre os neurônios do NTScom e a APC, o próximo experimento foi realizado para testar se os neurônios localizados no NTS ou na APC, ativados por hipóxia, são predominantemente glutamatérgicos ou gabaérgicos. Os animais foram expostos a situações de hipóxia (8% O2, n = 5) ou normóxia (ar ambiente, n = 4). A imunorretividade para a proteína Fos foi utilizada para identificação dos neurônios ativados por hipóxia. Os neurônios glutamatérgicos ou gabaérgicos foram definidos devido à expressão, via hibridzação in situ, de VGLUT2 mRNA ou GAD67 mRNA, respectivamente. A maioria dos neurônios que expressam Fos após hipóxia são glutamatérgicos na região do NTScom (64 ± 13%) e NTS intermediário (41 ± 9%). Na região da APC, dos neurônios que expressam Fos após hipóxia, somente uma pequena parcela (26 ± 9%) são glutamatérgicos. Apenas uma pequena quantidade de neurônios que expressam Fos também expressam GAD67 mRNA na região do NTScom (7 ± 4%), na região do NTS intermediário (16 ± 9%) e na APC (5 ± 3%). A imunorreatividade para a proteína Fos foi praticamente inexistente nos animais que foram expostos ao ar ambiente. Diante disso, os nossos resultados são os primeiros a mostrar a existência da interação entre a região comissural do NTS e a APC no que diz respeito ao controle cardiovascular. Sabe-se que a região do NTScom contém neurônios de segunda ordem que recebem as aferências dos quimiorreceptores periféricos e que as respostas de estimulação do NTScom parecem depender da integridade da APC. Logo, os resultados do presente estudo também mostraram que a inibição da APC foi capaz de reduzir as respostas simpatoexcitatórias e respiratórias após a estimulação dos quimiorreceptores periféricos. Por outro lado, a inibição da APC não foi capaz de reduzir as respostas de ativação do barorreflexo. / Cardiovascular responses are integrated at different levels of the central nervous system (CNS). In the brainstem, there are different areas related to the cardiovascular control. It is well known that in the ventrolateral medulla there are, at least, three important regions involved with cardiovascular control: the rostral ventrolateral medulla (RVLM), the caudal ventrolateral medulla (CVLM) and the caudal pressor area (CPA). The RVLM is the main source of excitatory input to sympathetic preganglionic neurons playing a crucial role for tonic and reflex control of the cardiovascular system. The caudal ventrolateral medulla (CVLM) contains the GABAergic sympathoinhibitory neurons that project to RVLM. Besides these two regions, the NTS is the site of the first synapse of the viscerosensory afferent fibers in the brainstem including those related to cardiovascular and respiratory afferents. Besides the circuitry described above, more recent studies have also shown a new site, the CPA, located in the caudal end of the ventrolateral medulla, which provides excitatory signals that affect sympathetic activity to the cardiovascular system in rats. Therefore, the aim of the present study was to investigate the involvement of the NTS (commissural and/or intermediate regions) on the stimulation or inhibition of the CPA. Male Holtzman rats (280-350 g; n = 6-8) anesthetized with urethane (1.2 g/kg, i.v.) were used. Unilateral microinjection of L-glutamate (1 mM - 100 nL) into the CPA resulted in an increase in mean arterial pressure (MAP, D = +28 ± 3 mmHg, vs. controle: D = +2 ± 2 mmHg, p<0.05) and heart rate (HR, D = +20 ± 1 bpm, vs. controle: D = +3 ± 3 bpm, p<0.05). Electrolytic lesions of the commissural NTS (commNTS) (1 mA x 10s) abolished the pressor and tachycardic responses at 10 (D = +5 ± 7 mmHg and D = +4 ± 3 bpm), 30 (D = +7 ± 3 mmHg and D = +6 ± 3 bpm) and 60 minutes (D = +11 ± 3 mmHg and D = +5 ± 1 bpm) produced by injection of L-glutamate into the CPA. In the same way, muscimol (GABA-A receptor agonist) (2 mM - 60 nL) injected into the commNTS abolished the pressor and tachycardic responses at 10 (D = +5 ± 5 mmHg and D = +5 ± 3 bpm), 30 (D = +8 ± 5 mmHg and D = +7 ± 2 bpm) and 60 minutes (D = +11 ± 6 mmHg and D = +5 ± 2 bpm) produced by injection of L-glutamate into the CPA. On the other hand, the injection of Lglutamate unilaterally into the CPA 10, 30 and 60 minutes after the injection of muscimol into the intermediate NTS produced no change on MAP increase (D = +11± 2, +27 ± 4 and +24 ± 7 mmHg, respectively) and HR (D = +30 ± 12, +32 ± 15 and +24 ± 8 bpm, respectively). It seems that the activation of the CPA depends on the integrity of the commNTS neurons. Does the CPA integrity depend on NTS activation? Bilateral injection of muscimol (GABA-A agonist, 2 mM – 60 nl) into the CPA produced a decrease in MAP (D = -18 ± 2 mmHg, p<0.05) and HR (D = -21 ± 6 bpm, p<0.05). The depressor and bradycardia responses produced by L-glutamate into the commNTS was abolished at 10 (D = -5 ± 3 mmHg and D = +8 ± 9 bpm), 30 (D = -5 ± 2 mmHg and D = +7 ± 4 bpm) and 60 minutes (D = -6 ± 4 mmHg and D = +10 ± 6 bpm) after muscimol injection into the CPA. On the other hand, the depressor and bradicardic responses produced by L-glutamate into the intermediate NTS was not changed at 10 (D = -41 ± 9 mmHg and D = -67 ± 26 bpm), 30 (D = -31 ± 12 mmHg and D = -23 ± 4 bpm) and 60 minutes (D = -32 ± 8 mmHg and D = -21 ± 3 bpm) after muscimol injection into the CPA. Our next question was to know if the inhibition of the CPA will change the cardiovascular reflexes. Baroreflex curves were generated by lowering MAP with sodium nitroprusside (30 mg/kg) and increasing MAP by constricting an abdominal aortic snare. The relationship between MAP and sympathetic nerve discharge (SND) (baroreflex curves) revealed no change after muscimol injection into the CPA. After inhibition of the CPA, the baroreflex operated around a comparable MAP (MAP50) in all groups of rats. The lower and upper plateau, as well the baroreflex range was not different from the control group. The chemoreflex was actvated by i.v. injections of sodium cyanide (NaCN – 50 mg/kg). The activation of chemoreflex with NaCN produced a rise in MAP (D = +16 ± 4 mmHg, vs. saline D = +2 ± 2 mmHg, p<0.05), an increase in SND (D = +236 ± 11% of resting, p<0.01) and an increase in phrenic nerve discharge (PND). Muscimol injection into the CPA reduced the pressor (D = +9 ± 2 mmHg, vs. saline D = +18 ± 4 mmHg, p<0.05), sympathoexcitatory (D = +88 ± 18%, vs. saline D = +217 ± 33 %, p<0.01) and the increase in PND produced by chemoreflex activation with NaCN. Carotid chemoreceptor afferents terminate predominantly in commNTS. The next experiment was designed to test and to confirm the interaction between the commNTS and the CPA neurons by anatomical approaches. We tested whether glutamatergic or GABAergic. The rats were exposed to hypoxia (8% O2, n = 5) or to normal air (n = 4). Fos-immunoreactivity was used to identify commNTS neurons that were activated by hypoxia. NTS or CPA neurons were classified as glutamatergic or GABAergic based on whether they contained VGLUT2 mRNA or GAD67 mRNA. The vast majority of the commNTS (64 ± 13%), intermediate NTS (41 ± 9%) and CPA (26 ± 9%) neurons that were immunoreactive for Fos contained VGLUT2 mRNA, whereas only a small proportion of the same class of neurons contained GAD-67 mRNA (commNTS: 7 ± 4%; intermediate NTS: 16 ± 9% and CPA: 5 ± 3%). Therefore, our results are the first to show the existence of an interaction between the commNTS and CPA in terms of cardiovascular control. However we know that commNTS neurons receive inputs from peripheral chemoreceptors and the stimulation of commNTS depends on CPA integrity. These data suggest that CPA contributes to resting MAP, sSND and to the sympathoexcitatory effect during stimulation of peripheral chemoreceptors. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A hipóxia mantida de curta duração (HM) está associada a alterações cardiorrespiratórias e ao desencadeamento de processo inflamatório em humanos e modelos experimentais. Ademais, há evidências de que a HM pode alterar a transmissão sináptica na região do Núcleo do Trato Solitários (NTS). No presente estudo, utilizamos a minociclina, um inibidor da ativação microglial e antiinflamatório, para avaliar a influência da inflamação desencadeada pela HM sobre a neurotransmissão glutamatérgica nos neurônios do NTS que enviam projeções para a região ventrolateral da medula (NTS-VLM). A hipótese geral do nosso estudo foi a seguinte: a HM induz processo inflamatório no tronco encefálico, o qual contribui para o aumento da neurotransmissão glutamatérgica em neurônios NTS-VLM, colaborando para a elevação da pressão arterial média (PAM) observada nestes ratos. Embora tenhamos observado aumento da pressão arterial média em ambos os grupos de ratos tratados com veículo (solução salina + água destilada, ip) ou minociclina [(30mg/Kg ip por 3 dias) submetidos a 24h de HM (FiO2 0.1) em relação aos seus respectivos grupos controle (FiO2 0,28), o aumento da MAP foi menor nos ratos previamente tratados com minociclina. Os registros eletrofisiológicos utilizando a técnica de whole cell patch-clamp mostraram que a HM não produziu alterações nas propriedades ativas e passivas dos neurônios NTS-VLM. No entanto, os neurônios de ratos submetidos a HM apresentaram aumento nas correntes glutamatérgicas espontâneas e evocadas pelo estímulo do trato solitário. Esse grupo de animais também apresentou aumento no número de microgliais na região do NTS. As alterações mencionadas foram atenuadas pelo tratamento prévio com minociclina. Concluímos que a inflamação induzida pela HM contribui para o aumento da neurotransmissão glutamatérgica nos neurônios NTS-VLM o qual poderia estar relacionado com a hipertensão arterial observada nestes ratos. / Short-term Sustained hypoxia (SH) is associated with cardiorespiratory changes and inflammatory process in humans and experimental models. There is also evidence that SH can change the synaptic transmission in the nucleus tractus solitarius (NTS) region. Here we use the minocycline, an anti-inflammatory and microglial inhibitor, to evaluate the role of inflammation triggered by SH on the excitatory neurotransmission in the NTS neurons sending projections to the ventrolateral medulla (NTS-VLM). We hypothesized that SH induces brainstem inflammatory process, which may contribute to increase in excitatory neurotransmission and excitability of the NTS-VLM neurons, collaborating to the high blood pressure observed on these rats. Although we have observed increased MAP in both groups of rats treated with vehicle (saline + distilled water, i.p) or minociclina [(30mg/Kg i.p for 3 days) submitted to 24h of SH (FiO2 0.1) in relation to their respective control groups (FiO2 0.28), the MAP increase was lower in rats treated with minociclina. The whole cell patch-clamp recordings showed that SH produced no changes in active properties of NTS neurons. However, neurons of rats submitted SH presented an increase in the glutamatergic neurotransmission and the number of microglial at the NTS region. These increases were prevented in the groups previously treated with minociclina. We conclude that inflammation induced by SH contributes to the increased excitatory neurotransmission in NTS-VLM neurons that could be associated to high blood pressure observed in these rats.

Submitted by Manoelle Gabrielle Guerra (manuhguerra@gmail.com) on 2018-06-23T00:53:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Manoelle Gabrielle Guerra.pdf: 790256 bytes, checksum: 7d1dda574a20ed10fcf02b650a248b9d (MD5) / Approved for entry into archive by Priscila Carreira B Vicentini null (priscila@fclar.unesp.br) on 2018-06-25T14:13:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guerra_mg_me_arafcl.pdf: 791788 bytes, checksum: 43de884aff847fc12819f14499237f23 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-25T14:13:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guerra_mg_me_arafcl.pdf: 791788 bytes, checksum: 43de884aff847fc12819f14499237f23 (MD5) Previous issue date: 2018-04-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho tem por objetivo problematizar a representação de Manaus no primeiro romance de Milton Hatoum, Relato de um certo Oriente, publicado em 1989, e em seu conjunto de crônicas Um solitário à espreita, lançado em 2013, observando de que forma o espaço da cidade está atrelado a uma memória individual dos sujeitos que a narram, e a uma possível memória coletiva, que diz respeito aos diferentes habitantes que a ocupam. A hipótese que fundamenta esta discussão é a de que o espaço da cidade é representado na obra do autor por meio de diferentes vozes, cada uma atrelada a determinadas esferas sociais, delimitando, a cada narrativa, traços urbanos que fazem parte de um quadro maior, por meio do qual é possível recuperar a história de Manaus, seus processos de modernização, e também a composição de sua população. Nesse contexto, o conjunto de crônicas possibilitou uma análise que se ateve ao modo como esse processo de transformação do espaço urbano ocorreu, delimitando por meio dos passos das diferentes personagens um trajeto pelas ruas da cidade. Evidenciam-se, nessa primeira etapa, as glórias e derrocadas de uma capital cuja modernização afetou muito seus habitantes, e estabelece-se, assim, uma crítica ao desenvolvimentismo. Em um segundo momento, a análise de Relato de um certo Oriente proporciona a entrada em uma nova face da história de Manaus, atrelada aos processos migratórios. A narrativa ancorada no seio de uma família libanesa delimita no universo da casa uma contraposição ao espaço da cidade, gerando dois mundos com hábitos e vivências conflitantes. Tem-se, assim, a memória de um dos grupos sociais que compõem a população manauara, e a representação de seus espaços privados proporciona à discussão inicial a possibilidade de entrever a relação das diversas comunidades que se estabeleceram na cidade com o espaço que ocupam. A comparação entre o modo de representação demarcado por cada conjunto narrativo se dá por meio das identidades que se constituem nesses espaços e de que forma a cidade se constrói a partir dessas esferas sociais que a habitam. / This work aims to discuss the representation of Manaus inside the Milton Hatoum’s first novel, Relato de um certo Oriente, published in 1989, as well as his compilation of chronicles Um solitário à espreita, released in 2013, examining how the city’s space is related to an individual memory belonging to the subjects who narrates it; and also related to a possible collective memory concerning the distinct residents who live in this city. The hypothesis that set up this discussion highlights the space of the city is represented in this author’s opus by different narrative voices, each one related to some particular social spheres, restricting in each narrative urban traces which take part in a greater frame. Departing from that idea, it is possible to recover the whole history of Manaus, its process of urbanization and also the arrangement of its population. In this context, the chronicles set enabled an analysis restricted to the way how such process of transformation of urban space occurred, limiting a kind of route through the streets of the city through the steps of different characters. In this first part of the work, all the glories and downs of a metropolis whose modernization had affected many of the residents are evident. Moreover, this discussion establishes a strong critic to the developmentalism. In a posterior moment, the analysis of Relato de um certo Oriente enables the access of another part of Manaus’ history regarding the migratory process. The narrative, which is stated inside a Lebanese family, bounds the house’s universe in opposition to the space of the city, creating two different worlds with conflicting habits and experiences. Consequently, there is in this narrative a memory which belongs to one of the social group who composes the manauara population. In addition, the representation of their private spaces allows us to discuss the possibility of seeing indistinctly how the many communities which occupy the city are related to this space. The method of representation developed by each narrative set can be compared by the identities which are constructed departing from each space, public or private, and the way how the city is built from the social spheres located in Manaus / CAPES/DS

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-16T14:35:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Livia de Almeida Lira_ POSNEURO 2016.pdf: 2312565 bytes, checksum: 6dc0de86f266e98ad31d5c7c89d2219e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T14:35:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Livia de Almeida Lira_ POSNEURO 2016.pdf: 2312565 bytes, checksum: 6dc0de86f266e98ad31d5c7c89d2219e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / FACEPE / O controle do comportamento alimentar é um fenômeno complexo dependente da interação entre os sinais originados na periferia do corpo e em várias regiões do sistema nervoso central, incluindo o núcleo do trato solitário (NTS). Esse núcleo regula muitos aspectos do comportamento alimentar e expressa receptores para vários peptídeos e hormônios indutores de saciedade, incluindo a serotonina. Prejuízos na via de sinalização e no conteúdo encefálico deste neurotransmissor estão associadas à hiperfagia e obesidade. Algumas regiões encefálicas responsáveis pela regulação do comportamento alimentar são alvos de ajustes permanentes promovidos por eventos que ocorrem durante os estágios iniciais do desenvolvimento. Nessa fase, a influência de estímulos ambientais, particularmente os nutricionais, podem modular os eventos ontogenéticos e promover sérias consequências na vida adulta. Nesse estudo, o objetivo foi investigar os efeitos da desnutrição proteica perinatal sobre aspectos morfofuncionais do NTS relacionados ao controle do comportamento alimentar. Ratos da linhagem Wistar, mantidos em condições padrões de biotério foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos de acordo com a dieta ofertada para mães durante a gestação e lactação: grupo controle (C, caseína 17% / n = 10) ou grupo desnutrido (D, caseína 8% / n =10). Foram avaliados aos 35 e 180 dias de vida: a) peso corporal; b) ingestão alimentar; c) expressão da proteína FOS nas regiões rostral e medial do NTS em resposta ao estímulo alimentar; d) sequência comportamental de saciedade e os parâmetros microestruturais da alimentação e apenas aos 35 dias de vida: e) densidade de terminais e distribuição de receptores serotoninérgicos 5-HT1B nos subnúcleos ventrolateral, intermediário, medial e comissural do NTS. As áreas estudadas foram identificadas e quantificadas com auxílio do atlas estereotáxico de Paxinos e Watson (1998). Com base nessas avaliações, o presente trabalho demonstrou que a desnutrição perinatal promove: 1) redução do peso corporal (35 dias: C=129.06±0.20; D=68.10±0.35; 180 dias: C = 435.70±0.70; D = 370.30±0.70); (2) hiperfagia (35 dias: C = 6.8±0.6; D = 11.9±0.9; 180 dias C = 6.6±0.4; D = 10±0.8); (3) retardo na saciedade, (4) aumento no tamanho (C= 5,5 ±0,43; D= 7,8± 0,57) e duração (C=14,3± 1.8; D= 20,4±1,7) das refeições; (5) aumento na ativação neuronal nas porções rostral (35 dias: C = 134.5±22.23; D= 366.8±58.02/ 180 dias = 240.6±38.10; D = 444.2±57.05) e medial do NTS (35 dias: C = 172.8±26.28; D= 435.2±72.69/180 dias: C= 224.4±33.10; D= 434.0±45.31); (6) aumento na densidade de terminais serotoninérgicos no NTS (C= 34,4 ± 1,5 n= 5; D= 48± 3,6) e no subnúcleo intermediário (C= 28,3 ± 2; D= 43± 1,5) e (7) maior quantidade de neurônios 5-HT1B-IR no NTS (C= 159,6± 18,2;D= 317,1± 18,6) e nos subnúcleos ventrolateral (C= 20,1± 2,7/N=5D= 34,4± 3,5), intermediário (C= 20,9± 2,8/N=5; D= 49,3± 3) e medial (C= 45,6 ± 6/N=5; D= 95,4± 6). Estes resultados indicam que o NTS é uma estrutura particularmente vulnerável às influências da manipulação nutricional nos estágios iniciais do desenvolvimento e pode ser alvo de processos adaptativos do controle comportamento alimentar observados nesses animais na vida adulta. / The control of feeding behavior is dependent on the interactions among a variety of signals originated from periphery and several brain areas, such as the nucleus of the solitary tract (NTS) in the caudal brainstem. This nucleus regulates many aspects of feeding behavior and expressed receptors for several satiety inducing peptides and hormones including serotonin. Losses in the signaling pathway and the brain content of this neurotransmitter are associated with hyperphagia and obesity. Some brain regions responsible for the regulation of feeding behavior are targets of permanent adjustments promoted by events that occur during the early stages of development. At that stage, the influence of environmental stimuli, particularly the nutritional, may modulate ontogenetic events and promote serious consequences in adult life. In this study, the main aim was to investigate the effects of perinatal protein malnutrition on morphological and functional aspects of the NTS related to control of feeding behavior. Male Wistar rats were divided into two groups according to the diet offered to the dams during gestation and lactation: control group (C, diet containing 17% casein/ n=10) or isocaloric lowprotein group (LP, diet containing 8% casein/ n=10). We evaluated: a) body weight; b) food intake; c) c-Fos protein expression in the rostral and medial NTS; d) behavioural sequence satiety and micro-structural parameters of feeding and e) density of serotoninergic terminals and distribution of 5-HT1B receptor in the ventro-lateral, intermediate, medial and commissural subnucleus of NTS. The areas studied were identified and quantified with Stereotactic atlas of Paxinos and Watson (2005). Based on these evaluations, the present study showed that the malnutrition: (1) promotes perinatal) reduced body weight (35 days: C = 129.06 ± 0.20; D = 68.10 ± 0.35; 180 days: C = 435.70 ± 0.70; D = 370.30 ± 0.70); (2) hyperphagia (35 days: C = 6.8 ± 0.6; D = 11.9 ± 0.9; 180 days C = 6.6 ± 0.4; D = 10 ± 0.8); (3) delay in satiety, (4) increase in size (C = 5.5 ± 0.43; D = 7.8 ± 0.57) and duration (C = 14.3 ± 1.8; D = 20.4 ± 1.7) meals; (5) increase in neuronal activation in the rostral portions (35 days: C = ± 134.5 22.23; D = ± 366.8/58.02 180 days = 240.6 ± 38.10; D = ± 444.2 57.05) and medial NTS (35 days: C = 172.8 ± 26.28; D = ± 72.69/180 days 435.2: C = ± 224.4 33.10; D = ± 45.31 434.0); (6) increase in density of serotonergic terminals in the NTS (C = 34.4 ± 1.5 n = 5; D = 48 ± 3.6) and the intermediate subnucleus (C = 28.3 ± 2; D = 43 ± 1.5) and (7) increased amount of 5-HT1B-IR neurons in the NTS (C = 159.6 ± 18.2; D = 317.1 ± 18.6) and ventro-lateral (C = 20.1 ± 2.7/N = 5 d = 34.4 ± 3.5), intermediate (C = 20.9 ± 2.8/N = 5; D = 49.3 ± 3) and medial subnucleus (C = 45.6 ± 6/N = 5; D = 95.4 ± 6). These results indicate that the NTS is a particularly vulnerable structure to the influences of nutritional manipulation in the early stages of development and may be adaptive processes of control feeding behavior observed in these animals into adulthood.

A hipóxia mantida de curta duração (HM) está associada a alterações cardiorrespiratórias e ao desencadeamento de processo inflamatório em humanos e modelos experimentais. Ademais, há evidências de que a HM pode alterar a transmissão sináptica na região do Núcleo do Trato Solitários (NTS). No presente estudo, utilizamos a minociclina, um inibidor da ativação microglial e antiinflamatório, para avaliar a influência da inflamação desencadeada pela HM sobre a neurotransmissão glutamatérgica nos neurônios do NTS que enviam projeções para a região ventrolateral da medula (NTS-VLM). A hipótese geral do nosso estudo foi a seguinte: a HM induz processo inflamatório no tronco encefálico, o qual contribui para o aumento da neurotransmissão glutamatérgica em neurônios NTS-VLM, colaborando para a elevação da pressão arterial média (PAM) observada nestes ratos. Embora tenhamos observado aumento da pressão arterial média em ambos os grupos de ratos tratados com veículo (solução salina + água destilada, ip) ou minociclina [(30mg/Kg ip por 3 dias) submetidos a 24h de HM (FiO2 0.1) em relação aos seus respectivos grupos controle (FiO2 0,28), o aumento da MAP foi menor nos ratos previamente tratados com minociclina. Os registros eletrofisiológicos utilizando a técnica de whole cell patch-clamp mostraram que a HM não produziu alterações nas propriedades ativas e passivas dos neurônios NTS-VLM. No entanto, os neurônios de ratos submetidos a HM apresentaram aumento nas correntes glutamatérgicas espontâneas e evocadas pelo estímulo do trato solitário. Esse grupo de animais também apresentou aumento no número de microgliais na região do NTS. As alterações mencionadas foram atenuadas pelo tratamento prévio com minociclina. Concluímos que a inflamação induzida pela HM contribui para o aumento da neurotransmissão glutamatérgica nos neurônios NTS-VLM o qual poderia estar relacionado com a hipertensão arterial observada nestes ratos. / Short-term Sustained hypoxia (SH) is associated with cardiorespiratory changes and inflammatory process in humans and experimental models. There is also evidence that SH can change the synaptic transmission in the nucleus tractus solitarius (NTS) region. Here we use the minocycline, an anti-inflammatory and microglial inhibitor, to evaluate the role of inflammation triggered by SH on the excitatory neurotransmission in the NTS neurons sending projections to the ventrolateral medulla (NTS-VLM). We hypothesized that SH induces brainstem inflammatory process, which may contribute to increase in excitatory neurotransmission and excitability of the NTS-VLM neurons, collaborating to the high blood pressure observed on these rats. Although we have observed increased MAP in both groups of rats treated with vehicle (saline + distilled water, i.p) or minociclina [(30mg/Kg i.p for 3 days) submitted to 24h of SH (FiO2 0.1) in relation to their respective control groups (FiO2 0.28), the MAP increase was lower in rats treated with minociclina. The whole cell patch-clamp recordings showed that SH produced no changes in active properties of NTS neurons. However, neurons of rats submitted SH presented an increase in the glutamatergic neurotransmission and the number of microglial at the NTS region. These increases were prevented in the groups previously treated with minociclina. We conclude that inflammation induced by SH contributes to the increased excitatory neurotransmission in NTS-VLM neurons that could be associated to high blood pressure observed in these rats.

O núcleo do trato solitário é uma área integrativa do sistema nervoso central (CNS) envolvida no controle autonômico e respiratório. Estudos da literatura sugerem que o óxido nítrico (NO) exerce um importante papel na modulação dos reflexos cardiovasculares e ventilatórios no NTS. Além disso, evidências da literatura indicam uma possível interação entre o NO e o ATP no SNC. Fundamentados nessas evidências, no presente estudo, avaliamos a possível participação do NO na modulação dos parâmetros cardiorespiratórios basais e no processamento das respostas cardiovasculares e respiratórias à ativação do quimiorreflexo no NTS caudal de ratos não-anestesiados. Além disso, o possível papel do NO produzido pela óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) nas respostas cardiovasculares e respiratórias à microinjeção unilateral de ATP no NTS caudal também foi avaliado. Para tanto, os animais foram submetidos ao implante de cânulas guia em direção ao NTS caudal e à canulação da artéria e veia femoral. Os parâmetros ventilatórios foram avaliados pelo método de pletismografia de corpo inteiro. A análise dos resultados monstrou que as microinjeções bilaterais do L-NAME, um inibidor nãoseletivo da NOS, no NTS caudal, promoveram um aumento significativo na pressão arterial basal dos animais, sugerindo um papel modulatório do NO sobre os neurônios envolvidos com as vias neurais do barorreflexo. No entanto, as microinjeções bilaterais do N-PLA, um inibidor seletivo da nNOS, no NTS caudal, não promoveram alterações significativas na pressão arterial basal, sugerindo que a produção do NO envolvido no controle autonômico basal no NTS caudal não é dependente da atividade da nNOS. Com relação às respostas do quimiorreflexo, as microinjeções bilaterais do L-NAME ou do N-PLA, no NTS caudal de ratos nãoanestesiados, promoveram um atenuação significativa no aumento da freqüência respiratória (fR) à ativação do quimiorreflexo, sugerindo a participação do NO Resumo xii produzido pela nNOS na modulação do componente respiratório do quimiorreflexo no NTS caudal. No entanto, as respostas pressora e bradicárdicas decorrentes da ativação do quimiorreflexo não foram alteradas pelas microinjeções bilaterais do LNAME ou N-PLA no NTS caudal, sugerindo que o NO não está envolvido na modulação das respostas cardiovasculares decorrentes da ativação deste reflexo. No que diz respeito às respostas decorrentes da microinjeção de ATP no NTS caudal, a análise dos resultados demonstrou que as respostas de aumento na pressão arterial, fR e ventilação minuto produzidas pela microinjeção unilateral de ATP no NTS caudal de ratos não-anestesiados foram significativamente atenuadas após a microinjeção do N-PLA no mesmo sítio, sugerindo a participação do NO produzido pela nNOS na modulação de tais respostas. Neste contexto, os achados do presente trabalho sugerem que no NTS caudal: 1) o NO, provavelmente produzido pela NOS endotelial, exerce um importante papel modulatório nas vias neurais do barorreflexo; 2) a neurotransmissão do aumento da fR decorrente da ativação do quimiorreflexo envolve a formação de NO produzido pela nNOS; 3) a neurotransmissão das respostas cardiovasculares decorrentes da ativação do quimiorreflexo não envolve a formação de NO; 4) a neurotransmissão das respostas cardiovascualres e respiratórias decorrentes da microinjeção unilateral de ATP envolve a formação de NO produzido pela nNOS. / The nucleus tractus solitarius (NTS) is an integrative area in the central nervous system (CNS) involved with the ventilatory and autonomic control. Several studies suggest that nitric oxide (NO) in the NTS plays an important role in the modulation of the cardiovascular and ventilatory reflexes. In addition, there is evidence indicating a possible interaction of NO and ATP in the CNS. Considering these findings, in the present study, we evaluated the possible role of NO on the modulation of the basal cardiorespiratory parameters as well as on the processing of the cardiovascular and ventilatory responses elicited by chemoreflex activation in the caudal NTS of awake rats. In addition, the possible role of NO produced by neuronal nitric oxide sintase (nNOS) on the cardiovascular and respiratory responses produced by unilateral microinjection of ATP into the caudal NTS was also evaluated. For this purpose, rats received bilateral guide cannulae in direction of the caudal NTS and femoral artery and vein were cannulated. The ventilatory measurements were obtained by whole-body pletismograph method. Our data showed that bilateral microinjections of L-NAME, a non-selective NOS inhibitor, into the caudal NTS, produced a significant increase in basaline mean arterial pressure, suggesting a modulatory role of NO in the neural pathways of the baroreflex. However, bilateral microinjections of N-PLA, a selective nNOS inhibitor, into the caudal NTS, produced no significant changes in the baseline mean arterial pressure, suggesting that NO produced by nNOS is not involved in the basal autonomic control in the caudal NTS. With respect to chemoreflex responses, bilateral microinjections of L-NAME or NPLA, into the caudal, produced a significant attenuation in the increase in respiratory frequency (fR) produced by chemoreflex activation, suggesting that NO produced by nNOS is involved in the modulation of the respiratory component of the chemoreflex. However, the pressor and bradicardic responses elicited by chemoreflex actiovation Abstract xv were not affected by microinjections of L-NAME or N-PLA, suggesting that NO is not involved in the modulation of the cardiovascular responses. With respect to ATP microinjection responses, the data showed that unilateral microinjection of ATP into the caudal NTS produced increase in arterial pressure, fR and minute ventilation, which were significantly attenuated by N-PLA, suggesting that NO produced by nNOS is involved in the modulation of the cardiovascular and ventilatory responses to ATP microinjection into the caudal NTS. In conclusion, the data of present study indicate that in the caudal NTS: 1) NO, produced probably by endothelial NOS, plays an important modulatory role on the neural pathways of the baroreflex; 2) the neurotransmission of the increase in respiratory frequency to chemoreflex activation involve NO production by nNOS. 3) NO is not involved in modulation of the autonomic components of chemoreflex; 4) the cardiovascular and ventillatory responses produced by ATP micronjection are, at least in part, mediated by NO produced by nNOS.