Ao longo da vida reprodutiva dos machos adultos, espermatozoides são formados pelas células-tronco espermatogoniais (SSCs, do inglês spermatogonial stem cells) por um processo conhecido como espermatogênese. O cultivo in vitro de SSCs abriu novas possibilidades para a transgenia, no entanto os protocolos requerem a adição de fatores de crescimento, o que encarece a manutenção dessas células por um tempo prolongado, fazendo da criopreservação de SSCs uma alternativa para esse problema. O fenótipo molecular de células-tronco espermatogoniais tem sido objeto de estudo nas últimas décadas. Uma das moléculas mais estudadas como marcador na caracterização de espermatogônias é a alfa-6 integrina. Baseado nestas informações, a seguinte hipótese foi proposta: SSCs que apresentam maior expressão de alfa-6 integrina são mais eficientes para modificações genéticas e colonização de túbulos seminíferos. Para testar essa hipótese, as SSCs murinas foram dissociadas de testículos de camundongos com 8 a 11 dias de idade. Essas células foram cultivadas in vitro, caracterizadas quanto sua morfologia, congeladas e incubadas com anticorpo anti-alfa-6 integrina para a purificação das SSCs por separação celular ativada por fluorescência (FACS). Células testiculares foram geneticamente modificadas com a inserção do gene marcador LacZ e o transplante através dos ductos eferentes foi padronizado. As Células germinativas testiculares foram dissociadas e cultivadas in vitro, porém a viabilidade foi aquém da desejada, inviabilizando as etapas de transformação, transplante e posterior avaliação histológica. Usando o marcador molecular alfa-6 integrina foi possível separar populações de células germinativas testiculares por FACS e a expressão gênica de ITGα6, GFRα1, Oct-4 e Thy-1 foi detectada por RT-PCR quantitativo. Em conclusão, não foi possível comprovar a eficiência de transdução e colonização em túbulos seminíferos por células-tronco espermatogoniais selecionadas com alfa-6 integrina. / Throughout the reproductive life of adult males, spermatozoa are formed from spermatogonial stem cells (SSCs) by a process known as spermatogenesis. The in vitro culture of SSCs created new possibilities for transgenesis, however the protocols require addition of growth factors, which increases the maintenance costs of these cells for a prolonged time, making of the cryopreservation of SSCs an alternative for this problem. The molecular phenotype of spermatogonial stem cells have been target of studies in recent decades. One of the most studied marker molecule in the characterization of spermatogonia is integrin alpha-6. Based on these informations, the following hypothesis was proposed: SSCs that show increased expression of integrin alpha-6 are more efficient for genetic modification and colonization of seminiferous tubules. In order to test this hypotesis, murine SSCs were dissociated from testes of 8 to 11 days old mice. These cells were in vitro cultured, characterized based on its morphology, frozen and incubated with anti-integrin alpha-6 antibody for the purification of SSCs by activated cell sorting fluorescence (FACS). Testicular cells were genetically modified with the insertion of the marker gene LacZ and transplantation through the efferent ducts was standardized. The testicular germ cells were dissociated and in vitro cultured, however viability was below expected, precluding the steps of transformation, transplantation and subsequent histological evaluation. Using molecular marker integrin alpha-6 it was possible to separate testicular germ cell populations by FACS and gene expression of ITGα6, GFRα1, Oct-4 and Thy-1was detected by quantitative RT-PCR. In conclusion, it was not possible to prove the efficiency of transduction and colonization in the seminiferous tubules by spermatogonial stem cells selected with alpha 6 integrin.

Ao longo da vida reprodutiva dos machos adultos, espermatozoides são formados pelas células-tronco espermatogoniais (SSCs, do inglês spermatogonial stem cells) por um processo conhecido como espermatogênese. O cultivo in vitro de SSCs abriu novas possibilidades para a transgenia, no entanto os protocolos requerem a adição de fatores de crescimento, o que encarece a manutenção dessas células por um tempo prolongado, fazendo da criopreservação de SSCs uma alternativa para esse problema. O fenótipo molecular de células-tronco espermatogoniais tem sido objeto de estudo nas últimas décadas. Uma das moléculas mais estudadas como marcador na caracterização de espermatogônias é a alfa-6 integrina. Baseado nestas informações, a seguinte hipótese foi proposta: SSCs que apresentam maior expressão de alfa-6 integrina são mais eficientes para modificações genéticas e colonização de túbulos seminíferos. Para testar essa hipótese, as SSCs murinas foram dissociadas de testículos de camundongos com 8 a 11 dias de idade. Essas células foram cultivadas in vitro, caracterizadas quanto sua morfologia, congeladas e incubadas com anticorpo anti-alfa-6 integrina para a purificação das SSCs por separação celular ativada por fluorescência (FACS). Células testiculares foram geneticamente modificadas com a inserção do gene marcador LacZ e o transplante através dos ductos eferentes foi padronizado. As Células germinativas testiculares foram dissociadas e cultivadas in vitro, porém a viabilidade foi aquém da desejada, inviabilizando as etapas de transformação, transplante e posterior avaliação histológica. Usando o marcador molecular alfa-6 integrina foi possível separar populações de células germinativas testiculares por FACS e a expressão gênica de ITGα6, GFRα1, Oct-4 e Thy-1 foi detectada por RT-PCR quantitativo. Em conclusão, não foi possível comprovar a eficiência de transdução e colonização em túbulos seminíferos por células-tronco espermatogoniais selecionadas com alfa-6 integrina. / Throughout the reproductive life of adult males, spermatozoa are formed from spermatogonial stem cells (SSCs) by a process known as spermatogenesis. The in vitro culture of SSCs created new possibilities for transgenesis, however the protocols require addition of growth factors, which increases the maintenance costs of these cells for a prolonged time, making of the cryopreservation of SSCs an alternative for this problem. The molecular phenotype of spermatogonial stem cells have been target of studies in recent decades. One of the most studied marker molecule in the characterization of spermatogonia is integrin alpha-6. Based on these informations, the following hypothesis was proposed: SSCs that show increased expression of integrin alpha-6 are more efficient for genetic modification and colonization of seminiferous tubules. In order to test this hypotesis, murine SSCs were dissociated from testes of 8 to 11 days old mice. These cells were in vitro cultured, characterized based on its morphology, frozen and incubated with anti-integrin alpha-6 antibody for the purification of SSCs by activated cell sorting fluorescence (FACS). Testicular cells were genetically modified with the insertion of the marker gene LacZ and transplantation through the efferent ducts was standardized. The testicular germ cells were dissociated and in vitro cultured, however viability was below expected, precluding the steps of transformation, transplantation and subsequent histological evaluation. Using molecular marker integrin alpha-6 it was possible to separate testicular germ cell populations by FACS and gene expression of ITGα6, GFRα1, Oct-4 and Thy-1was detected by quantitative RT-PCR. In conclusion, it was not possible to prove the efficiency of transduction and colonization in the seminiferous tubules by spermatogonial stem cells selected with alpha 6 integrin.

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Fxrα est le récepteur nucléaire des acides biliaires, exprimé majoritairement dans le foie, l'intestin, les reins et les glandes surrénales. L'intérêt pour ce dernier est devenu croissant au cours des dernières années, de part le rôle central qu'il joue dans le contrôle de l'homéostasie du cholestérol, des acides biliaires, des triglycérides ou encore du glucose. Plus récemment, Fxrα ainsi que ses ligands, les acides biliaires, ont été localisés dans le testicule, soulevant la question du rôle potentiel de Fxrα dans cet organe, et plus généralement dans la fonction de reproduction mâle. Mais les études menées à ce sujet restent jusqu'à présent peu nombreuses, et focalisées sur son implication dans le contrôle du métabolisme des stéroïdes : l'activation in vivo de Fxrα par un agoniste synthétique conduit ainsi chez l'adulte à court terme à une répression de la stéroïdogenèse. Outre son rôle dans le contrôle de l'activité endocrine des cellules de Leydig, l'impact de l'activation in vivo de Fxrα sur la physiologie plus globale du testicule n'a jamais été abordé à ce jour. De telles études seraient pourtant pertinentes étant donné que Fxrα est ciblé pour le traitement de pathologies métaboliques telles que la dyslipidémie ou le diabète. Dans ce contexte, l'objectif de ce travail de thèse était d'étudier le rôle de Fxrα dans la physiologie et la pathophysiologie du testicule, en s'appuyant sur l'analyse d'un modèle murin dont le gène codant Fxrα a été invalidé. Nos résultats démontrent que : 1) la perte de Fxrα prédispose le testicule à une sur-mortalité des cellules germinales dans un contexte pathologique de cholestase ; 2) la sur-activation de la signalisation Fxrα au cours de la puberté conduit à un défaut de la différenciation germinale, associée à une altération de la fonction endocrine du testicule ; 3) outre la régulation de la stéroïdogenèse dans les cellules de Leydig, Fxrα participe au contrôle des fonctions sertoliennes et de la prolifération et / ou différenciation des cellules germinales souches. L'ensemble de ces données définissent Fxrα comme un nouvel acteur impliqué dans le contrôle de la physiologie testiculaire et devraient être prises en considération quant-à l'utilisation de molécules agonistes et / ou antagonistes de Fxrα dans le cadre du traitement de pathologies métaboliques. / Fxrα is the bile acid nuclear receptor, predominantly expressed in liver, intestine, kidney and adrenal glands. In recent years, interest in Fxrα has been increasing due to its central role in the control of cholesterol, bile acids, triglycerides or glucose homeostasis. More recently, Fxrα and its ligands, bile acids, have been detected in the testis pointing out its potential involvement in this tissue and more widely in the male reproductive functions. However, the few studies on this topic focused essentially on Fxrα involvement in the control of steroids metabolism. Indeed, activation of Fxrα in vivo with a synthetic agonist leads to short-term steroidogenesis repression in the adult. In vivo the impact of alteration of Fxrα signaling on the global testis physiology has never been explored so far. Such studies would be pertinent considering that Fxrα is a target for the treatment of metabolic diseases such as dyslipidemia or diabetes. In this context, the aim of my work was to study the implication of Fxrα in testis physiology and physiopathology by analyzing a knock out mouse model for Fxrα. Our results show that: 1) the loss of Fxrα increase germ cell mortality in the testis in a disease context of cholestasis ; 2) over-activation of Fxrα signaling during puberty leads to germ cell differentiation defects, associated with an alteration of testis endocrine function ; 3) besides steroidogenesis control in Leydig cell, Fxrα is involved in Sertoli cell functions and spermatogonial stem cell proliferation and/or differentiation. Taken together, these data define Fxrα as a new actor involved in the control of testis physiology, and should be taken into consideration regarding the use of Fxrα agonistic or antagonistic ligands for the treatment of metabolic diseases.

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The chemotherapeutic busulfan is widely used in studies of spermatogonial stem cells kinetics and studies of male infertility. However it effects on male germ cells in different animal lineages or species are unclear. The objective of this study was to assess the damage caused by busulfan in male mice spermatogenesis of two distinct lineages. The analyzed parameters were the mRNA pattern expression profile of spermatogonial stem cells (SSC) markers, analysis of spermatozoa motility, vigor and morphology, germinal epithelium histology and fertility recovery analysis. The animals received a single dose of 40 mg kg-1 of busulfan or vehicle. Past 30 days of the drug injection, the mice were weighted and anesthetized and had one of the testes and epididymis surgically removed. This procedure did not cause any damage to the other testis, once mice that had one of the testes removed were capable to generate offspring. From these testes, were evaluated the tissue histology and mRNA gene expression of spermatogonial stem cell (SSC) markers. The motility, vigor and spermatozoa morphology were analyzed from cauda epididymal spermatozoa. After 90 days of the drug injection, the mice were weighted, anesthetized and had the other testis removed for the same analyzes procedure. The analysis at 30 and 90 days after drug injection were from the same animals, minimizing the variation in individual response between periods. It was observed that, for Balb/C lineage, independent of the analyzed period, the busulfan treated animals showed a severe testicular degeneration, with loss of SSC, decreased motility and spermatozoa vigor and increased number of defective spermatozoa. In mRNA expression it was observed a marked reduction in Nanos2 expression, and an increase in Gdnf and Plzf gene expression. For animals of Swiss lineage, it was observed that at 30 days after the busulfan injection, the results obtained were similar to that obtained for Balb/C lineage, except in gene expression, which remained unchanged. However, 90 days after the drug injection, these animals show germinal epithelium almost normal, with spermatogenic lineage. They also show an increase in testicular and epididymal mass, spermatozoa motility and vigor and an increase in number of normal spermatozoa, did not differing from the control group. Moreover, this recovery was confirmed by the offspring obtained after matting with virgin females. The male mice utilized in these tests were not submitted to testes removal. These results shows the variation of busulfan effects in two distinct mice lineages, being the drug effective to cause a severe testicular degeneration for more than 90 days in Balb/C lineage, but not in Swiss lineage, due to genetic variations. / Apesar de amplamente utilizado em estudos de cinética das células-tronco espermatogoniais ou em estudos de infertilidade masculina, não se sabe ao certo quais efeitos o quimioterápico busulfan exerce, de fato, sobre as células germinativas masculinas e em diferentes linhagens e espécies animais. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi analisar os danos causados pelo busulfan na espermatogênese de camundongos machos de duas linhagens distintas, através do perfil de expressão de RNAm dos marcadores moleculares espermatogoniais, análises de motilidade, vigor e morfologia espermática, histopatologia do epitélio germinativo e teste de recuperação de fertilidade. Os animais receberam uma única dose de 40 mg/kg de busulfan ou do veículo. Após 30 dias da aplicação do fármaco, os camundongos foram pesados, anestesiados e tiveram um dos testículos e epidídimo cirurgicamente removidos. Este procedimento não acarretou dano algum ao outro testículo, uma vez que camundongos que tiveram um testículo e epidídimo removidos foram capazes de gerar prole após o período de recuperação cirúrgica. A partir destes testículos, foram avaliadas tanto características histológicas quanto a expressão de RNA mensageiro de marcadores de células-tronco espermatogoniais (SSC). Outros parâmetros avaliados foram a motilidade, vigor e morfologia espermática, a partir da recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo. Passados 90 dias da aplicação inicial do fármaco, os camundongos foram novamente pesados e anestesiados, e tiveram o outro testículo removido para as mesmas análises. Sendo assim, as análises referentes aos 30 e aos 90 dias pertencem aos mesmos animais, minimizando a variação da resposta individual entre os períodos analisados. Foi observado que para a linhagem Balb/C, independente do período analisado, os animais tratados com busulfan apresentaram uma severa degeneração testicular, com perda de célulastronco espermatogoniais, diminuição de motilidade e vigor espermáticos e aumento no número de espermatozoides defeituosos. Com relação à expressão gênica, foi observada uma marcada redução na expressão do gene Nanos2, e aumento da expressão dos genes Gdnf e Plzf. Para os animais da linhagem Swiss, foi observado que aos 30 dias após a aplicação do fármaco, os resultados foram semelhantes aos obtidos para a linhagem Balb/C, com exceção da expressão gênica, a qual não apresentou variação. Porém, noventa dias após a administração do fármaco, esses animais apresentaram epitélio germinativo quase normal, com linhagem espermatogênica, aumento na massa testicular e epididimal, aumento na motilidade e vigor espermáticos e aumento na quantidade de espermatozoides normais, não diferindo dos animais do grupo controle. Além disso, essa melhora foi comprovada através da obtenção de prole após o acasalamento com fêmeas virgens, sendo que os machos utilizados neste teste não foram submetidos ao processo de remoção dos testículos. Esses resultados demonstram a variação do efeito do busulfan em duas linhagens distintas de camundongos, sendo o fármaco eficiente para causar degeneração testicular severa por mais de 90 dias na linhagem Balb/C, porém não na linhagem Swiss, provavelmente devido as variações genéticas entre as duas linhagens.

[ES] Resumen Como pez de gran valor económico, procedente de una de las líneas de teleósteos más antiguas, con un ciclo de vida misterioso, un potencial de acuicultura excepcional, y con importancia cultural y actividades de pesca en casi todos los países de Europa, la anguila europea posee un enorme valor socioeconómico. Este valor se suma a la desgraciada situación actual en peligro crítico de población natural de anguilas europeas. Como el ciclo de vida de la anguila aún no se ha conseguido cerrar en cautiverio, si la especie se extingue en la naturaleza, no seremos capaces de recuperarla. El cierre del ciclo de vida de la anguila europea ha sido, por lo tanto, el objetivo final de varios estudios. Sin embargo, a pesar de una investigación científica sustancial, desde la década de 1930, varios aspectos de la maduración de la anguila, como el mecanismo que bloquea la maduración de la anguila en la etapa prepúber en cautiverio, aún no se conocen bien. Por lo tanto, es necesario ampliar nuestro conocimiento sobre la reproducción de la anguila para inducir mejores hipótesis y lograr un progreso sustancial. Para profundizar en este campo, esta tesis se realizó con el objetivo específico de desarrollar métodos innovadores para la inducción de la maduración de la anguila y aumentar el conjunto de conocimientos sobre los procesos europeos de maduración de la anguila. Los procedimientos hormonales utilizados actualmente para la maduración sexual de la anguila artificial probablemente no induzcan el proceso natural de maduración. Por lo tanto, esta tesis ha evaluado el potencial de las hormonas recombinantes específicas de la anguila para inducir un proceso de maduración más natural. Este estudio específico mostró que la espermatogénesis completa y la espermiación se pueden inducir con gonadotropinas específicas de anguila recombinante; sin embargo, la calidad del gameto resultante es aún inferior a los resultados de los protocolos establecidos. Sin embargo, la utilización de hormonas recombinantes tiene un gran potencial para futuras implementaciones. Además, el experimento de gonadotropina recombinante ha generado nuevos detalles sobre el efecto de las gonadotropinas homólogas en el eje BPG de las anguilas europeas. Trabajos previos han llevado a la hipótesis de que un tratamiento térmico adecuado puede reducir o reemplazar parcialmente los tratamientos hormonales estándar para la maduración sexual de la anguila europea, o puede mejorar la calidad y / o cantidad de gametos. En esta tesis, se probó el efecto de varios regímenes térmicos en el eje BPG de machos de anguila europeos prepúberes, sin administración de hormonas. Los resultados muestran claramente que un tratamiento de agua de mar fría durante 2 semanas (10 ° C) afecta el eje BPG de los machos de anguila europeas. Los resultados específicos incluyeron un aumento en la sincronización de espermatogonias, niveles elevados de testosterona y 11-ketotestosterona en plasma, agrupamiento de muestras de transcriptomas del eje BPG del grupo tratado con agua de mar fría y posiblemente niveles aumentados de la proteína subunidad ß de la hormona luteinizante de la hipófisis. Los genes transcritos diferencialmente incluyeron varios genes, procesos y vías interesantes, que parecen estar involucrados en la maduración "natural" temprana de la anguila y que pueden ser biomarcadores adecuados para las distintas etapas de este proceso. Para un análisis adecuado de los datos transcriptómicos, se creó un transcriptoma de anguila europea de novo. Se demostró que este transcriptoma de novo posee una superior integridad al genoma de anguila europea disponible y, por lo tanto, es una herramienta útil para el análisis adicional de genes específicos. Un análisis de este transcriptoma reveló un gran número de pares de genes parálogos, que mostraron una baja divergencia entre secuencias sinónimas. Entre las hipótesis potenciales sobre e / [CAT] Com a espècie de renom culinari que pertany a un dels llinatges teleostis més antics, amb un cicle vital misteriós, un potencial d'aqüicultura excepcional, i una tradició pesquera a gairebé tots els països d'Europa, l'anguila europea posseeix un enorme valor socioeconòmic. No obstant això, aquest valor només fa que augmentar la preocupació de la seva població, que actualment es troba catalogada com "en perill crític d'extinció". Atès que el cicle de vida de les anguiles encara no ha estat tancat en captivitat, l'espècie no serà salvable en el cas que s'extingeixi en estat natural, per la qual cosa tancar el cicle de vida d'aquesta espècie ha estat l'objectiu final de diversos grups d'investigació durant els últims anys.. No obstant això, i malgrat la investigació científica de qualitat duta a terme des de la dècada de 1930, encara hi han diversos aspectes de la maduració de les anguiles -com el mecanisme que bloqueja la maduració sexual de l'anguila a l'etapa pre-puberal en captivitat- que son poc coneguts en l'actualitat. Per tal d'ampliar els coneixements sobre la reproducció de les anguiles i aconseguir un progrés substancial, aquesta tesi es va dur a terme amb l'objectiu específic de desenvolupar mètodes innovadors per a la inducció de la maduració de l'anguila europea, a més de afegir-hi el coneixement en els processos de maduració bàsics d'aquesta espècie. Els procediments hormonals utilitzats actualment per a la maduració artificial de l'anguila europea no acaben d'induir el procés de maduració natural tal i com probablement es dóna a la natura. Doncs, en primer lloc, aquesta tesi va avaluar el potencial d'hormones recombinants específiques d'anguila europea per induir un procés de maduració molt més natural. Aquest estudi específic va mostrar que mitjançant estes gonadotropines específiques d'anguila europea és possible induir l'espermatogènesi i l'espermiació completes. Tot i que els resultats van mostrar que la qualitat dels gamets va ser inferior als resultats que generen els protocols establerts fins ara amb un altre tipus d'hormones (generalment d'origen humà), la utilització d'hormones recombinants específiques es presenta amb un gran potencial per a la seva implementació futura en la inducció de la maduració sexual de l'anguila europea, ja que l'estudi va generar noves idees sobre l'efecte de les gonadotropines l'eix BPG de l'anguila europea. En segon lloc, i treballant amb la hipòtesi que un tractament tèrmic adequat pot reduir o substituir parcialment els tractaments hormonals estàndards per a la maduració sexual de l'anguila europea, en aquesta tesi es va provar l'efecte de diversos règims tèrmics (sense administració d'hormones) en l'eix BPG dels mascles europeus pre-puberals amb l'objectiu de millorar la qualitat i / o quantitat dels gamets. Els resultats mostraren clarament que un tractament d'aigua de mar de 2 setmanes a baixa temperatura (10 °C) va afectar l'eix BPG dels mascles europeus d'anguila. Resultats més específics van mostrar un augment de la sincronització de les espermatogonies, elevats nivells plasmàtics de testosterona i 11-ketotestosterona, una agrupació de mostres de transcriptoma de l'eix BPG del grup tractat amb aigua de mar freda i, possiblement, un augment dels nivells de la proteïna de la subunitat ß de la hormona luteinitzant de la hipofisi. Els gens transcrits diferencials van al·ludir a diversos gens, processos i vies interessants, que semblen estar implicats en la maduració inicial de l'anguila "natural" i podrien resultar biomarcadors adequats per a les etapes d'aquest procés. No obstant això, es necessiten estudis addicionals per avaluar el potencial dels biomarcadors d'aquests gens i, de manera complementària, comprovar si un pre-tractament d'aigua de mar freda pot millorar la resposta de les anguiles europees a un tractament hormonal artificial, com suggereixen els resultats. Finalment, amb l'objectiu / [EN] As an expensive fish from one of the most ancient teleost lineages, with a mysterious life cycle, exceptional aquaculture potential, and cultural associations and fishing activity in almost every country in Europe, the European eel possess huge socioeconomic value. This value only adds to the misfortune of the current critically endangered state of the wild European eel population. As the eel lifecycle has not yet been closed in captivity, the species will not be salvable if it went extinct in the wild. Closing the life-cycle of the European eel has thus been the ultimate objective of several studies. However, despite the substantial scientific investigation, since the 1930s, several aspects of eel maturation, such as the mechanism which blocks eel sexual maturation at the pre-pubertal stage in captivity, is still poorly understood. Therefore, it is necessary to broaden our knowledge of eel reproduction to induce better hypotheses and therethrough achieve substantial progress. In order to further this field, this thesis was conducted with the specific objective of developing innovative methods for induction of eel maturation and add to the pool of knowledge of European eel maturation processes. The hormonal procedures currently used for artificial eel sexual maturation are probably not inducing the natural maturation process. Therefore, this thesis has evaluated the potential of eel specific recombinant hormones to induce a more natural maturation process. This specific study showed that full spermatogenesis and spermiation can be induced with recombinant eel specific gonadotropins; however, the resulting gamete quality is still inferior to the results of established protocols. Nevertheless, the utilization of recombinant hormones holds a large potential for future implementation. Furthermore, the recombinant gonadotropin experiment has generated novel insights into the effect of homologous gonadotropins on the BPG axis of European eels. Previous work has led to the hypothesis that the right thermal environmental treatment may reduce or partially replace the standard hormonal treatments for sexual maturation of European eel, or may improve gamete quality and/or quantity. In this thesis, the effect of various thermal regimes was tested on the BPG axis of pre-pubertal European eel males, without administration of hormones. The results clearly show that a 2 week cold (10 °C) seawater treatment effects the BPG-axis of European eel males. Specific results included an increase in the synchronization of spermatogonial cells, elevated testosterone and 11-ketotestosterone plasma levels, clustering of BPG-axis transcriptome samples from the cold seawater treated group and possibly increased levels of pituitary luteinizing hormone ß-subunit protein. Differentially transcribed genes alluded to several interesting genes, processes, and pathways, which appears to be involved in early "natural" eel maturation and may prove to be suitable biomarkers for the stages of this process. In order for proper analysis of the transcriptomic data, a de novo European eel transcriptome was assembled. This de novo transcriptome was proven to have superior completeness to the available European eel genome and is thus a useful tool for further analysis of specific genes. An analysis of this transcriptome revealed a large number of paralog gene pairs, which showed low synonymous sequence divergence. Among the potential hypothesis regarding the origin of these paralog gene pairs, the hypothesis of a 4R whole genome duplication is among the most parsimonious. Several of these duplicated genes were involved in reproduction and the onset of puberty. Regardless of the origin, further analysis of these genes may reveal eel specific adaptations, which could help to better understand the exceptional reproductive system of eels. / Rozenfeld, C. (2019). Development of innovative methods for induction of European eel (Anguilla anguilla) spermatogenesis [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/125697 / TESIS

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