Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Marília Trierveiler Martins / Banca: Janete Dias Almeida / Resumo: A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal do vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O principal fator etiológico envolvido nestas doenças é a exposição excessiva ou em longo prazo à radiação ultravioleta (UV) do sol. Além dos danos diretos aos tecidos do lábio, a radiação UV induz mastócitos (MCs) a liberarem substâncias que participam do processo de imunossupressão permitindo o desenvolvimento neoplásico. Estas células também são associadas a um pior prognóstico e favorecimento a metástase de diversas neoplasias. O objetivo deste trabalho foi analisar a densidade de MCs a fim de melhorar o entendimento da patogenia da QA e o possível mecanismo de sua progressão para o CE. Estudou-se 66 casos de QA, com diferentes graus de atipia epitelial, 57 de CE e 28 casos de mucosa de lábio com lesão benigna não relacionada à exposição solar (grupo controle), diagnosticados clínica e histologicamente, no Departamento de Biociências e Diagnóstico Bucal da FOSJC-UNESP. A amostra foi corada histoquimicamente com hematoxilina-eosina e azul de toluidina e imunoistoquimicamente com anticorpo anti-triptase. Em todos os casos a contagem de MCs foi realizada em microscópio de luz, com aumento final de 400x, em três campos com área de 0,04 mm2 cada. A densidade de MCs no CE, QA e grupo controle foi de 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 ( triptase) e 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 ( azul de toluidina) cells/mm2 , respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-wallis, Wilcoxon e Dunn, adotando-se nível de significância de 5%. Houve diferença estatisticamente significante na densidade de MCs entre os três grupos estudados (p=0,0001). Concluiu-se que os MCs participam das alterações que ocorrem na matriz extra-celular da QA, o que pode ser um indício do favorecimento à malignização da QA para CE. / Abstract: Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion of lip vermillion with malignant potential to squamous cell carcinoma (SCC). The main etiology involved in this disease is excessive or long exposure to ultraviolet radiation (UV) of sunlight. UV radiation damages lip tissues, furthermore it is able to activate mast cells (MCs) that participate of immunossupression process, contributing to tumour development. These cells are associated with a worst prognosis and contribute to tumour metastasis. The aim of this study was perform an assessment of MCs density which can improve the knowledge of AC pathogenesis and the possible mechanism of its progression to SCC. Sixty six cases of AC with different levels of epithelial atypia, fifty seven cases of SCC and twenty eight cases of lip mucosa with benign lesion non related to sunlight exposure (Control group) were studied in Department of Biosciences and Oral Diagnosis of São Paulo State University/UNESP. Samples were stained by histochemistry with hematoxylin/eosin, toluidine blue and, by immunohistochemistry with antitryptase. Quantitative analysis was done in all cases by light microscopy (magnification x400), in three fields with 0,04 mm2 each one. Mast cell density in SCC, AC and control group was 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 cells/mm2 (triptase) and 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 cells/mm2 (toluidine blue), respectively. Data was analyzed by Kruskal-wallis, Wilcoxon and Dunn's tests, p-values of < 0,05. There was statistically significant difference in mast cell density between the experimental and control groups (p=0,0001). This study concluded that mast cells contribute to changes in extracelular matrix in AC and may be used as indicators for disease progression in lip carcinogenesis. / Mestre

Das diversas neoplasias denominadas câncer de boca, mais de 95% tem o diagnóstico de carcinoma epidermóide (CE). O carcinoma epidermóide apresenta etiologia e patogênese complexas e não totalmente compreendidas determinando altos índices de morbidade e mortalidade. Por isso crescentes esforços têm sido empregados para a melhor compreensão dos eventos celulares, da susceptibilidade genética e dos fatores de risco que atuando em conjunto dão origem e atuam na progressão do carcinoma epidermóide de boca. Buscando novas facetas da carcinogênese oral e baseando-se no papel pró-carcinogênico que os hormônios esteróides desempenham nas neoplasias dos órgãos reprodutivos, alguns estudos passaram a avaliar o papel desses hormônios na patogênese e progressão do CE. O propósito deste trabalho foi avaliar a presença dos receptores de androgênio, estrogênio (alfa e beta) e da enzima aromatase em carcinomas epidermóides de boca (CE), através das técnicas de imuno-histoquímica, western-blotting e imunofluorescência, e comparar, com base no gênero (masculino e feminino), os resultados encontrados. Da amostra de CE utilizada, 30 eram pertencentes a pacientes do gênero feminino e 30 do masculino. Para as reações de Western blotting e imunofluorescência foram utilizadas duas linhagens celulares: OSCC9 e OSCC25, derivadas de CE de língua. Nas reações imunohistoquímicas, apesar de um número maior de casos negativos do que positivos, observou-se que o receptor de estrogênio beta foi o mais expresso, seguido pelo receptor de androgênio e aromatase. O receptor de estrogênio alfa apresentou menor imunoexpressão. Houve diferença estatisticamente significante entre os gêneros apenas na expressão dos receptores de androgênio. Os resultados obtidos pelo western blotting e imunofluorescência evidenciaram que as duas linhagens celulares utilizadas apresentaram receptores de estrogênio beta no núcleo, bem como, a presença da enzima aromatase com localização citoplasmática. Os receptores de androgênio foram observados no núcleo somente na linhagem OSCC9 enquanto que os receptores de estrogênio alfa não foram evidenciados em nenhuma das linhagens. Esses resultados sugerem que em alguns casos de CE possa existir contribuição hormonal na progressão da doença, evidenciando a necessidade da utilização desses marcadores nesse tipo de neoplasia. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the main type of oral cancer presenting complex and not completely understood pathogenesis. OSCC implies quite significant mortality and morbidity rates and in spite of the vast amount of research and the advances in the field of oncology and surgery, the overall survival remains largely unchanged. Therefore, the identification of new pathways involved in the mechanisms of carcinogenesis can bring knowledge to the control and advent of new treatments. The role of androgens and estrogens in several endocrine-related malignancies is well known. The successful use of these hormones antagonists in the treatment of these neoplasms has prompted researches to investigate the presence of hormones receptors in other tissues and tumor types. The aim of this study was to asses through immunohistochemistry, western blot and immunoflorescence assays the expression, genderrelated, of androgen, estrogen alpha and beta receptors and aromatase enzyme in cases of OSSC. A total of 60 cases of OSCC (30 from males and 30 from females) were retrieved and submitted to immunohistochemical assay. Two OSCC cell lines were used for western blot and immunoflurescence techniques: OSCC-9 and OSCC-25, originated from the tongue. Immunohistochemical staining demonstrated that estrogen beta and androgen receptors and aromatase enzyme, respectively, were more frequently expressed in OSCC. Estrogen alpha receptor had the lower immuno expression. Only androgen receptors presented differences statistically significant between genders. Western blotting and immunofluorescence analysis demonstrated that estrogen beta receptor was abundantly present in nuclear region of SCC9 and SCC25 cell lines, as well as aromatase protein, although its localization was cytoplasmatic. Androgen receptor was observed in the nucleus of SCC9 cell line and absent in the SCC25 cell line. On the other hand, estrogen alpha receptor was not detected either in western blot assay or in immunofluorescence. Even though these proteins presented a variable expression in OSCC, it is interesting to conduct more studies about them, since we could have more possibilities to predict and control oral squamous cell carcinoma.

A radiação ultravioleta ao atingir os seres humanos em grande quantidade e durante uma longa exposição pode provocar danos específicos ao DNA, sendo causa de várias lesões como o carcinoma epidermoide de lábio e a queilite actínica, que é considerada uma lesão precedente ao aparecimento da primeira. Entre os danos causados pela radiação UV está a alteração genética do TP53, provocando anomalias na proteína por ele codificada. A produção da proteína p53 somente é recrutada em situações de estresse como: radiação ionizante, hipoxia ou ativação de oncogenes, nas quais sua função é regular o ciclo celular e ativar vias de apoptose. Contudo, sabe-se que no processo de carcinogênese não somente as alterações não reparadas do DNA são responsáveis pelo aparecimento de uma lesão. Outro fator de extrema importância nesse processo são os mecanismos de apoptose, entre os quais estão as vias do Bcl2 e do Fas. A queilite actínica normalmente é classificada segundo seus graus de displasia, o que para alguns sugeriria os passos percorridos por essa lesão até o carcinoma epidermoide de lábio já que esta lesão possui um potencial de malignização. Os resultados deste trabalho demonstraram que não há diferença estatística na expressão gênica e imuno-histoquímica de p53 entre os diversos graus de displasia. Demonstraram ainda que as vias de apoptose de Bcl2 e Fas estavam ocorrendo normalmente. Sugere-se então que não há comprovação de que ocorra uma progressão para a malignização passando por todos os graus de displasia da queilite actínica tendo, todos a mesma possibilidade de se transformarem em um carcinoma epidermoide de lábio. / The long exposition of the human tissues to the ultraviolet radiation causes DNA damages and consequently several lesions might appear. Among them, lip squamous cell carcinoma and actinic cheilitis which is considered to be a condition that precedes squamous cell carcinomas. The TP53 mutation is a well-known effect of UV radiation, leading to the synthesis of an anomalous protein. The p53 production is only recruit in stress conditions like: ionizing radiation, hypoxia or oncogene activation, where it plays a role in cell cycle regulation and apoptosis activation. Apoptosis is also a fundamental mechanism associated to carcinogenesis. Bcl2 e Fas pathways are central in the regulation of this process. It is usual to classify the epithelial dysplasia degree in actinic cheilitis as a prognosticator. This type of classification suggests a one way path towards malignization. Our results have shown that there is no statistical difference in TP53 status and p53 expression among the different degrees of actinic cheilitis epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma. Based on the findings, there is no prove that the malignant transformation occurs as the epithelial dysplasia progresses. Therefore, should be considered that any degree has the same probability to become a lip squamous cell carcinoma

A instabilidade genética é um importante evento associado ao carcinoma epidermóide de boca, sendo alterações na região cromossômica 11q constantemente relatadas. Neste estudo, genes localizados na região cromossômica 11q, especificamente os genes CTTN, PPFIA1, SHANK2, TAOS1 e MMP-7, foram investigados quanto a diferenças de expressão de transcritos entre carcinomas epidermóides de boca e suas margens correspondentes. A expressão desses genes foi relacionada com aspectos clínicos e histológicos, com critérios de agressividade estabelecidos, e com a sobrevida dos pacientes. Foram analisadas pela técnica de qRT-PCR 29 amostras congeladas de tumores e 25 margens. Todos os genes apresentaram maiores valores de expressão nos tumores em comparação com as margens, embora apenas o gene MMP-7 tenha exibido valores estatisticamente significantes. A expressão do gene MMP-7 mostrou fraca associação com tumores menos agressivos, e os outros genes apresentaram maiores valores de expressão em tumores mais agressivos, sem significância estatística. Não houve diferença estatística entre a freqüência das variáveis clínicas e histopatológicas com a expressão dos genes estudados, porém o PPFIA1 demonstrou maiores níveis de expressão em tumores de assoalho. Em relação à sobrevida, a expressão elevada de PPFIA1 pode implicar em um maior risco de óbito. Assim, é possível a participação do gene MMP-7 no desenvolvimento da neoplasia, e a relação do PPFIA1 com o risco de óbito, porém a expressão de transcritos dos genes CTTN, SHANK2, TAOS1 e MMP-7 não pode ser relacionada com agressividade tumoral e prognóstico. / Genetic instability is an important event associated with oral squamous cell carcinoma, and alterations in the chromosome region 11q are constantly reported. In this study, genes located on chromosome region 11q, specifically genes CTTN, PPFIA1, SHANK2, TAOS1 and MMP-7, were investigated for differences in the expression of transcripts in oral squamous cell carcinoma and their corresponding margins. The expression of these genes was correlated with clinical and histological aspects, aggressiveness criteria established, and with patient survival. Twenty-nine frozen samples of tumors and 25 samples of margin tissue were analyzed using qRT-PCR. All genes showed a higher expression in tumors, compared with the margins, although only the MMP-7 gene demonstrated statistically significant values. The expression of the MMP-7 gene showed weak association with less aggressive tumors, and the other genes showed higher expression in more aggressive tumors, without statistical significance. There was no statistical difference between the frequency of clinical and histopathological variables and the expression of genes studied, however the PPFIA1 gene demonstrated higher levels of expression in tumors of the floor of mouth. With regard to survival, the high expression of PPFIA1 may imply a greater risk of death. Thus, it is possible that the MMP-7 gene participates in the development of malignancy, and PPFIA1 expression may also be associated with risk of death, however, the expression of transcripts of the CTTN, SHANK2, TAOS1 and MMP-7 genes may not be related to tumor aggressiveness and prognosis.

O carcinoma adenóide cístico e o carcinoma epidermóide são neoplasmas de origem epitelial que afetam a cavidade oral. O carcinoma adenóide cístico pode apresentar-se em glândulas salivares maiores e menores, possue alta propensão de invasão perineural e o padrão de infiltracão: sólido, tubular e cribriforme. O carcinoma epidermóide foi descrito como um processo multifatorial envolvendo agentes físicos, químicos e virais, capazes de afetar o metabolismo celular e induzir a proliferação neoplásica. As proteínas c-jun e junB são membros da familia JUN, capazes de homodimerizar ou heterodimerizar com c-fos ou com outras proteinas bzip. Evidências das funções específicas das subunidades do AP-1 foram mostradas por c-jun e junB, que podem atuar antagonicamente ou não no controle da transformação celular, diferenciação e expressão do AP-1 dependente do gene alvo. Mas a função de ambos é complexa e pode depender do tipo celular. A cJun N Terminal quinase (JNK) é um importante regulador positivo e/ou negativo do AP1. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão das proteínas c-jun, pcjun, junB e JNK em carcinoma adenóide cístico de glândula salivar e no carcinoma epidermóide da cavidade oral, através das técnicas de imunohistoquímica, imunofluorescência e western-blotting, em biopsias de tecido e linhagens celulares provenientes destas lesões. Os resultados evidenciaram a expressão da proteina cjun no carcinoma adenoide cistico e de cjun e junB no carcinoma epidermóide. Nao foi detectada a expressao de JNK nas neoplasias estudadas. A expressão destas proteínas no carcinoma adenóide cístico e no carcinoma epidermoide sugere que estas participam na progressão tumoral e/ou tumorigênese destas neoplasias compartilhando uma via em comum. / Adenoid cystic carcinoma and squamous cell carcinoma are epithelial neoplasms that occur in the oral cavity. Adenoid cystic carcinoma can appear in minor and major salivary glands and it presents a high propensity to invade perineural areas and can show different patterns of growth: solid, tubular and cribiform. Squamous cell carcinoma was described as a multifactorial process involving chemical, physical and viral agents which are able to affect the celular metabolism and induce neoplasic proliferation The proteins cjun and junB are members of the JUN family able to homodimerizes or heterodimerizes with cfos and other bzip proteins. Evidence of specific functions of AP1 subunits was shown for cjun and junB that can act anthagonically or not on the control of celular transformation, differentiation and expression of AP1 depending on the target gene. But the way both of them function is complex and may depend on the cellular type. cJun N terminal quianse (JNK) is an important positive or negative regulator of AP1 The aim of this study is to evaluate the expressions of cjun, pcjun junB and JNK in the adenoid cystic carcinoma of salivary glands and squamous cell carcinoma from the oral cavity through inmunohistotochemistry, inmunofluorescence and western blot techniques in tissue biopsy and cell lines from both tumors. The results will show the expression of cjun protein in the adenoid cyctic carcinoma and cjun and junB expression in the squamous cell carcinoma. JNK expression was not detected in the studied tumors. The expression of these proteins in adenoid cystic and squamous cell carcinoma suggests that they participate on the tumor progression and tumorigenesis of these neoplasms, that can share a common pathway

Câncer e desenvolvimento embrionário possuem diversos aspectos em comum, pois ambos exibem alternância entre proliferação e diferenciação celular. A família dos genes homeobox codifica fatores de transcrição fundamentais para o adequado desenvolvimento embrionário, e têm sido descritos em diferentes neoplasias. O PMX1 (Paired Mesoderm Homeobox 1) é um gene homeobox que está expresso durante o desenvolvimento de diversos tecidos mesenquimais, como o sistema cardiovascular e elementos do esqueleto. A relação entre o PMX1 e neoplasias malignas ainda não está bem estabelecida. O objetivo desse trabalho foi verificar a presença dos transcritos do gene PMX1 em carcinomas epidermóides de boca e tecidos não tumorais adjacentes. Foi realizada hibridização in situ com sondas marcadas com digoxigenina em dezesseis amostras de carcinoma epidemóide de boca e dez de tecido não tumoral adjacente. No tecido não tumoral adjacente o sinal de hibridização é mais intenso nas camadas basal e suprabasal, mesmo quando ele pode ser observado em outras camadas. No carcinoma epidermóide de boca, o sinal está disperso por todo o tecido sendo mais intenso em áreas com células isoladas. Nossos resultados mostram a presença dos transcritos do PMX1 em epitélio de boca e em carcinoma epidermóide de boca e sugerem a participação do gene PMX1 na carcinogênese de boca. A sua expressão em neoplasias pouco diferenciadas deve ser melhor analisada / Cancer and development share common features since both processes exhibit shifts between cell proliferation and differentiation. Homeobox gene family encodes transcription factors essentials for appropriate embryonic development and they have been described in different types of neoplastic tissues. PMX1 (Paired Mesoderm Homeobox 1) is homeobox gene that has been related with mesenchyma throughout development such cardiovascular system and skeletal elements, however its relation with tumor development is not well established yet. The purpose of this study was to verify the presence of PMX1 transcripts in oral squamous cell carcinomas and adjacent non-tumoral tissues. In situ hybridization was performed with probes labeled with digoxigenin in sixteen samples of squamous cell carcinoma and ten o adjacent non-tumoral tissues. In the adjacent non-tumoral tissues in situ hybridization signaling detected were more intense in the basal and parabasal layers even when it could be observed in other layers. In the oral squamous cell carcinoma the signaling was spread all over the tissue becoming more intense in areas with isolated carcinoma cells. Our findings show PMX1 transcripts in adjacent non-tumoral tissues and oral squamous cell carcinoma and suggest participation of PMX1 in oral carcinogenesis. Its expression in poorly differentiated carcinomas needs to be analyzed in detail

A busca de marcadores moleculares para o refinamento diagnóstico, classificação e estabelecimento do prognóstico dos tumores, e individualização terapêutica tem sido foco de várias pesquisas. O presente estudo teve como objetivo investigar, em carcinoma epidermóide de língua e/ou assoalho bucal, a presença de transcritos dos genes homeobox que pudessem se revelar marcadores moleculares de prognóstico e/ou agressividade tumoral. Após análise por microarray utilizando-se amostras de tumores e margens classificados como mais e menos agressivos, os genes homeobox HOXC13, HOXD10, HOXD11, IRX4, PROX1 e ZHX1 foram selecionados e sua hiper-expressão foi parcialmente validada por qRT-PCR. Observou-se aumento da expressão de HOXD10, HOXD11 e IRX4 em tumores com relação às margens correspondentes, bem como nos tumores menos agressivos em relação às suas respectivas margens. Por outro lado, os genes PROX1 e ZHX1 estavam mais expressos nas margens que nos tumores correspondentes. Esses resultados sugerem que a expressão alterada de HOXD10, HOXD11 e IRX4 pode participar no desenvolvimento do carcinoma epidermóide de língua e/ou assoalho bucal, enquanto os genes PROX1 e ZHX1 provavelmente exibem perda de função ou estão silenciados na neoplasia. Houve uma tendência de associação entre a expressão elevada de HOXD11 e presença de infiltrações linfática e perineural, e grau moderado de diferenciação da neoplasia, bem como entre a expressão elevada de HOXD10 e infiltração linfática. O gene IXR4 foi relacionado com um menor tempo de sobrevida global. Não foi possível estabelecer, dentre os genes homeobox validados por qRT-PCR, um gene ou uma combinação deles que pudesse(m) ser utilizado(s) como marcador(es) de agressividade tumoral. / The search for molecular markers to diagnosis improvement, treatment individualization and establishment of oral squamous cell carcinoma prognosis has been the focus of several studies. The present study investigated the presence of specific transcript of homeobox genes in squamous cell carcinoma of the tongue and/or floor of the mouth that might reflect relevant molecular markers of prognosis and/or tumor aggressiveness. After microarray analysis of tumor samples classified as more or less aggressive, and non tumoral margins, HOXC13, HOXD10, HOXD11, IRX4, PROX1 and ZHX1 selected and partially validated by qRT-PCR. Increased expression of HOXD10, HOXD11, IRX4 in tumors in comparison to margins as well as in less aggressive tumors related to their margins was observed. On the other hand, a decreased expression of PROX1 and ZHX1 was observed in margins compared to their respective tumors. These results suggest that the altered expression of HOXD10, HOXD11 and IRX4 may participate in the development of squamous cell carcinoma of the tongue and/or floor of the mouth, while PROX1 and ZHX1 probably present loss of function or are silenced in tumors. A tendency of association between increased expression of HOXD11 and lymphatic and perineural infiltration, as well as moderately differentiated tumors, and increased expression of HOXD10 and lymphatic infiltration was observed. Still, increased expression of IRX4 may apparently influence global survival rate. However, the results of the present study must be confirmed in a greater number of samples, and complemented with the evaluation of HOXD10, HOXD11, IRX4 protein levels. It was not possible to establish, among homeobox genes validated through qRT-PCR, a gene or a combination of genes capable of predicting tumor aggressiveness.

O carcinoma epidermóide representa mais de 90% das neoplasias malignas de cabeça e de pescoço, apresentando taxas elevadas de morbi-mortalidade. Proteínas relacionadas à invasão e proliferação celular estão em evidência devido ao seu envolvimento na carcinogênese, a exemplo da vimentina, encontrada em células de origem mesodérmica. Sua presença em células epiteliais neoplásicas contribui na transição epitélio mesenquimal e está associada à tumorigênese, à invasão celular e à metástase. O propósito deste estudo foi analisar através de métodos qualitativos (imunofluorescência e imunoistoquímica) e quantitativos (Western Blot) a expressão da vimentina em linhagens celulares de carcinoma epidermóide de cabeça e de pescoço (CECP) e em uma linhagem de queratinócitos imortalizados (HaCat) submetidas ao cultivo tridimensional em Matrigel®. O grupo controle foi representado pelas mesmas linhagens cultivadas na ausência de Matrigel®. A Vimentina apresentou marcação citoplasmática em algumas células das linhagens estudadas, exceto na HaCat, com evidente diminuição da sua expressão quando submetida ao cultivo com Matrigel®. Esses resultados foram confirmados por Western Blot. A expressão da Vimentina em diferentes linhagens de CECP pode variar dependendo da linhagem analisada, da reação de suas células aos componentes da matriz extracelular e da técnica utilizada para avaliação da expressão da proteína. / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) represents more than 90% of all head and neck malignancies, causing more deaths than any other oral disease. Proteins related to cancer growth, invasion and metastasis are in evidence due to their involvement in carcinogens, such as vimentin. This protein is observed in mesenquimal cells, however, it is considered a common finding in cervix, breast and bladder tumours. Thus its presencence in epithelial neoplasic cells contributes to epithelial-mesenchymal transition associated with tumorigenesis and tumor progression. The aim of this study was to analyse through Western Blot, Immunohistochemistry and Immunofluorescence methods, the expression of Vimentin in three different HNSCC cell lines and HaCat cell line (immortalized keratinocytes) submitted to a 3D assay into Matrigel®. The control group was represented by the same cell lines, without any treatment. Results showed that Vimentin had citoplasmatic staining in some cell of lines studied, except for HaCat cells, with evident decrease in its expression when submitted to cultive into Matrigel®. These findings were confirmed by Western Blot. Taking these results together, we conclude that in squamous cell carcinoma, the Vimentin is related to the process of tumour invasion and metastasis. This fact was showed by the reduction of its expression after treatment with Matrigel®. Therefore, the expression of Vimentin in different cell lines of HNSCC may vary according to the stimulus and, fundamentally, the localization of the tumor and the individual characteristics of neoplasic cells.

É ainda bastante controverso na literatura se o HPV pode ou não ser considerado fator etiológico ou de risco para o desenvolvimento de lesões malignas/malignizantes em boca. Já há um consenso de que existe evidência ao menos numérica da relação entre HPV e carcinogênese oral, pois em geral os estudos encontram uma relação de proporção entre grau de malignidade e infecção por HPV ? os índices de HPV encontrados em carcinoma epidermóide oral são maiores do que os encontrados em lesões potencialmente malignas, que por sua vez são maiores do que os encontrados em mucosa normal. Sabe-se, porém, que as lesões potencialmente malignas podem apresentar variados graus de displasia epitelial, o que não permite analisá-las como um grupo. Assim, nesse contexto, o objetivo desse estudo foi analisar mais refinadamente a relação entre grau de malignidade e infecção por HPV através da detecção de DNA do vírus em leucoplasias e carcinomas epidermóides orais, desmembrando-se o grupo das lesões potencialmente malignas de acordo com o grau de displasia epitelial. Foram selecionados 50 casos diagnosticados como leucoplasia e carcinoma epidermóide orais, os quais foram divididos em 5 grupos: leucoplasia sem displasia, leucoplasia com displasia discreta, leucoplasia com displasia moderada, leucoplasia com displasia intensa e carcinoma epidermóide. Dados clínicos como idade e sexo do paciente e sítio da lesão foram observados e a presença de DNA de HPV foi pesquisada através do método CSA-ISH com sonda de amplo espectro. Nos casos positivos para a sonda de amplo espectro foi realizada a genotipagem com sondas específicas para HPV dos tipos 6/11, 16/18 e 31/33. A prevalência de infecção por HPV foi de 24%, notadamente maior que a reportada em mucosa normal, que é de 1 a 2%. Os resultados mostraram uma discreta relação de proporção entre grau de malignidade e os índices encontrados em leucoplasia sem displasia, leucoplasia com displasia e carcinoma epidermóide, porém sem significância estatística. Desmembrando-se o grupo das leucoplasias com displasia, essa proporcionalidade não foi observada entre os grupos. Na genotipagem, a maior positividade foi para a sonda dos tipos 16/18, de alto potencial oncogênico, e a positividade para a sonda 6/11 só foi encontrada nos grupos de menor grau de malignidade. Apenas um caso mostrou positividade para duas sondas (16/18 e 31/33). Não houve correlação significante entre nenhuma característica clínica e infecção por HPV. Os resultados sugerem portanto que a detecção do HPV não está relacionada com o grau de malignidade das lesões, haja visto a ausência de proporcionalidade entre os índices de detecção do vírus nos grupos analisados. Entretanto, o fato de que a prevalência em nossa casuística, constituída por lesões malignas/malignizantes, foi maior do que àquela encontrada em mucosa normal e que os tipos de alto risco foram os mais prevalentes dentre os casos positivos não nos permite descartar o HPV como fator de risco para a carcinogênese oral. / It is still highly controversial whether HPV can be considered an aetiological or risk factor for the development of malignant/premalignant lesions of the oral cavity. There is an agreement that there is at least quantitative evidence to relate HPV and oral carcinogenesis, since in general the studies find a proportional relation between degree of malignancy and HPV infection ? the prevalence of HPV in squamous cell carcinoma is higher than in premalignant lesions which is higher than in normal mucosa. It is known, however, that premalignant lesions can present several degrees of epithelial dysplasia, which does not allow analyzing them as a group. Hence, in this context, the aim of this study was to analyze more refinedly the relation between degree of malignancy and infection by HPV by means of viral DNA detection in oral leucoplakias and oral squamous cell carcinomas, dividing the group of premalignant lesions according to the degree of epithelial dysplasia within the lesion. Fifty cases diagnosed as oral leucoplakia and oral squamous cell carcinoma were selected and divided into 5 groups: leucoplakia with no dysplasia, leucoplakia with mild dysplasia, leucoplakia with moderate dysplasia, leucoplakia with severe dysplasia and squamous cell carcinoma. Clinical data regarding patients? age and gender and anatomic site of the lesion were observed and the presence of HPV DNA was assessed using CSA-ISH method with a wide spectrum probe. In positive cases to the wide spectrum probe, genotyping with specific probes to HPV types 6/11, 16/18 and 31/33 was performed. The overall prevalence of HPV infection was 24%, which is higher than the reported for oral normal mucosa, which stands around 1 and 2%. Results show a discrete proportional relation between degree of malignancy and HPV infection indexes found in leucoplakia with no dysplasia, leucoplakia with dysplasia and squamous cell carcinoma, but with no statistical significance. Dividing the group of leucoplakia with dysplasia, this relation of proportion was not observed. In genotyping, most cases were positive to the probe for types 16/18, of high oncogenic potential, and cases positive to the probe for types 6/11, of low oncogenic potential, were only found within groups of lower degrees of malignancy. Only one case was positive for two specific probes (16/18 and 31/33). There was no correlation between clinical features and HPV infection. These results suggest that HPV detection is not related to the degree of malignancy in these lesions. Nevertheless, the fact that the prevalence in these cases, which were all malignant/premalignant lesions, was higher than the one found in oral normal mucosa, and that the high-risk types of HPV were the most frequently found within the positive cases does not allow excluding HPV as a risk factor in oral carcinogenesis.

A neoplasia escamosa da superfície ocular constitui é uma das lesões mais frequentes que envolve a conjuntiva ou a córnea e tem como principais fatores de risco a exposição solar (radiação ultravioleta), a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) e os estados de imunodeficiência, especialmente a infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Em suas formas mais avançadas, a neoplasia pode cursar com infiltração do globo ocular, da órbita e, mais raramente, com ocorrência de metástases para linfonodos ou a distância. O presente estudo teve como objetivo investigar os dados clínicos, histopatológicos, a presença de HPV e a expressão das proteínas p16 e p53 em 45 casos de neoplasia escamosa da superfície ocular diagnosticados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, no período de 2005-2015. Avaliação histopatológica das lesões, estudo imuno-histoquímico para a detecção das proteínas e hibridização in situ cromogênica (CISH) para a detecção do DNA de HPV de alto e baixo grau foram realizados em todas as amostras. As lesões foram mais frequentes em homens de cor branca, com idade superior a 40 anos. A avaliação histopatológica revelou 31 casos (69%) de carcinoma invasivo e 14 casos (31%) de carcinoma in situ. Em 6 casos (13%) foi detectado DNA de HPV de alto grau por CISH. A frequência de expressão de proteínas p53 e p16 foi alta nas lesões, 89% e 53%, respectivamente. Em nosso estudo, a neoplasia escamosa da superfície ocular predomina em homens de cor branca, com idade acima dos 40 anos, com presença de HPV de alto grau em 13% dos casos. A expressão de p16 não apresentou um valor preditivo positivo alto quanto a possibilidade de associação com o vírus. / Ocular surface squamous neoplasia (OSSN) is one the most frequent lesions involving the conjunctiva or cornea and its main risk factors are solar exposure (ultraviolet radiation), human papilloma virus (HPV) infection and immunodeficiency states, especially human immunodeficiency virus (HIV) infection. In advanced cases one can observe eyeball or orbital infiltration and, rarely, lymph node or distant metastases. The present study aimed to investigate the clinical and histopathological data, as well as the presence of HPV and the expression of proteins p16 e p53 in 45 cases of OSSN diagnosed at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, from 2005 through 2015. Histopathological examination, immunohistochemical study for proteins p16 and p53, and chromogenic in situ hybridization (CISH) for low and high grade HPV were performed in all samples. Lesions were more frequent in white males, above 40 years old. Histopathological examination revealed 31 cases (69%) of invasive carcinoma and 14 cases (31%) of carcinoma in situ. In 6 cases (13%) high grade HPV was detected by CISH. The expressions of p53 and p16 were high, 89% and 53%, respectively. In our study, increased incidence of OSSN was observed in white males, above 40 years old, with high grade HPV in 13% of the cases. The expression of p16 did not show a high positive predictive value for HPV positivity in OSSN.