Introdução: a colonização de indivíduos com HIV/aids por microrganismos patogênicos tem sido associada a maior risco de morbidade e mortalidade, principalmente quando esse microrganismo é o Staphylococcus aureus. Identificar precocemente esta condição permite implementar medidas preventivas do adoecimento a ele relacionado, em nível individual e coletivo. Objetivo: avaliar a prevalência de colonização por Staphylococcus aureus em indivíduos com HIV/aids internados em um hospital escola. Metodologia: estudo de corte transversal, tendo como sujeito pessoas vivendo com HIV/aids, internadas em duas unidades especializadas em HIV/aids de um Hospital Escola do município de Ribeirão Preto- SP. Todos os preceitos éticos foram criteriosamente respeitados. No período de Agosto/2011 a Julho/2012, todos os indivíduos internados foram abordados e para aqueles que aceitaram participar, procedeu-se a coleta de amostra de saliva e secreção nasal, além da coleta de dados sociodemográficos, clínicos e imunológicos, obtidos por meio do prontuário e entrevista individual. As amostras foram encaminhadas e processadas pelo Laboratório de Microbiologia e Sorologia da instituição em estudo. Foram semeadas em meios de cultura ágar sangue e manitol, e após, transferidas para o sistema automatizado Vitek® 2 (BioMérieux(TM)), por meio dos cartões GP Test Kit Vitek® 2, para bactérias gram-positivas. Foram empregados cartões AST-P585 para avaliar a sensibilidade dos Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA) aos antibióticos. Os dados foram armazenados em planilhas do Microsoft Office Excel 2011 for Mac e organizados por meio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), versão 17.0 for Windows. Resultados: De 229 indivíduos com HIV/aids internados nas unidades, 169 constituíram os sujeitos desta pesquisa, dos quais 57,4% eram do sexo masculino, 39,6% apresentaram idade de 40 a 49 anos e 45% tinham o primeiro grau completo. Foram obtidas 338 amostras (169 de secreção nasal e 169 de saliva). A prevalência de colonização por Staphylococcus aureus foi identificada em 20,4% das amostras, com 21,7% de resistência à oxacilina, sendo em secreção nasal 66,7% e em saliva 33,3%. Apresentaram contagem de linfócitos T CD4 abaixo de 200 células/mm3 60,0% dos indivíduos com MRSA nasal e 80,0% estavam em uso de antimicrobianos. Em 40,0% dos indivíduos com MRSA na saliva carga viral foi igual ou superior a 500.001 cópias/mL, e 80,0% destes também usavam antimicrobianos, MRSA nasal e saliva foi identificado em 60,0% dos indivíduos que não estavam em uso de antirretroviral. Conclusão: a prevalência de colonização por Staphylococcus aureus em indivíduos com HIV/aids foi predominante em secreção nasal, com baixa contagem de linfócitos T CD4, com história de internação prévia, uso de antimicrobiano e ausência do uso de antirretroviral, podendo representar importante fonte de infecção. / Introduction: colonization by pathogenic microorganisms in individuals with HIV/AIDS has been associated with increased risk of morbidity and mortality, especially when that organism is Staphylococcus aureus. Early identification of this condition allows implementing preventive measures of illness related to it, both individually and collectively. Objective: to evaluate the prevalence of Staphylococcus aureus colonization in individuals with HIV/AIDS in a teaching hospital. Method: cross-sectional study; the subjects were people living with HIV/AIDS and hospitalized in two specialized HIV/AIDS care units of a Teaching Hospital in the city of Ribeirão Preto. All ethical principles were carefully observed. In the period from August 2011 to July 2012, all subjects hospitalized were approached and, for those who agreed to participate, the collection of saliva and nasal discharge sample was performed, in addition to collecting sociodemographic, clinical and immunological data, obtained through medical record and individual interviews. The samples were forwarded and processed by the Laboratory of Microbiology and Sorology of the institution. They were seeded in blood agar and mannitol-salt-agar culture medium, and thereafter, transferred to the automated system Vitek® 2 (BioMérieux(TM)) through Vitek® 2 Test Cards for Gram-positive bacteria. AST-P585 cards were used to assess the sensitivity of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) to the antibiotic. Data were stored in spreadsheets of Microsoft Office Excel 2011 for Mac and organized by the Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) version 17.0 for Windows. Results: of the 229 individuals with HIV/AIDS hospitalized in the units, 169 were the subjects in this study, of whom 57.4% were male, 39.6% were aged from 40 to 49 years, and 45% had completed elementary school. 338 samples were collected (169 of nasal discharge and 169 of saliva). The prevalence of Staphylococcus aureus colonization was identified in 20.4% of samples, with 21.7% of oxacillin resistance, being 66.7% in nasal discharge and 33.3% in saliva. 60.0% of individuals with MRSA in nasal had lymphocytes T CD4 count below 200 cells/mm3 , and 80.0% were taking antimicrobials. In 40.0% of the individuals with MRSA in saliva, the viral load was equal or higher than 500.001 copies/mL, and 80.0% of these also used antimicrobials; MRSA in nasal and in saliva were detected in 60.0% of individuals who were not taking antiretroviral. Conclusion: the prevalence of Staphylococcus aureus colonization in individuals with HIV/AIDS was prevalent in nasal discharge, had lymphocytes T CD4 low count, with a history of previous hospitalization, antimicrobial use and the absence of antiretroviral use, and it may represent an important source of infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:12:21Z : No. of bitstreams: 1 martins_a_me_botfm.pdf: 634920 bytes, checksum: 7df863ce968556a78e7af6c51b134a5e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A oxacilina é a principal droga de escolha no tratamento das infecções causadas por S. aureus. Contudo, a resistência a esta droga tem se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi verificar as taxas de resistência à oxacilina em amostras de S. aureus provenientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP e a comparação de métodos fenotípicos com o método padrão ouro (detecção do gene mecA) na detecção de amostras MRSA. Um total de 102 amostras previamente isoladas no período de 2002 a 2006 e estocadas na Coleção de Culturas do Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, UNESP, foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 6 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test e detecção do gene mecA. Das amostras estudadas, 46 (45,1%) foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade obtida para o disco de oxacilina foi de 86,9%, com 91,1% de especificidade. O disco de cefoxitina apresentou sensibilidade de 91,3% e especificidade de 91,1%. O método de triagem apresentou os mesmos valores de sensibilidade (91,3%) e especificidade (91,1%) verificados no método do disco de cefoxitina. A fita de E-test mostrou melhor taxa de sensibilidade, com 97,8% e a mesma especificidade encontrada nos outros métodos (91,1%). Das amostras estudadas, 93% foram produtoras de - lactamase, sendo 05 destas negativas na detecção do gene mecA. Verificou-se um aumento gradativo no número de amostras resistentes à oxacilina no período de 2002 a 2004, entretanto, de 2004 a 2006 os resultados revelaram uma redução no número de amostras resistentes, de 55% de MRSA em 2004 para 45% em 2005 e 34,6% em 2006. Os dados revelaram que o E-test obteve melhores resultados, com alta sensibilidade comparada aos outros métodos. / Oxacillin is the main drug of choice for the treatment of S. aureus infections. However, S. aureus resistance to oxacillin has become a major problem in the past decades. To assess the rates of oxacillin resistance in S. aureus samples obtained at the Botucatu Medical School Hospital - Sao Paulo State University/UNESP, Brazil, and to compare phenotypic techniques for the detection of MRSA against the gold standard method (mecA gene detection) in these samples. A total of 102 samples, previously isolated between 2002 and 2006, and kept at the Culture Collection of the Department of Microbiology and Immunology, Botucatu Institute of Biosciences, São Paulo State University/UNESP, Brazil were included. Oxacillin resistance was assessed by oxacillin and cefoxitin disk diffusion and agar dilution tests, screening tests using Mueller-Hinton agar with 6 μg/mL of oxacillin and 4% of NaCl, E-test, and mecA gene detection. Of the samples analyzed, 46 (45.1%) were mecA-positive. Oxacillin disk sensitivity and specificity were 86.9% and 91.1%, respectively. Cefoxitin disk sensitivity and specificity were 91.3% and 91.1%, respectively. The screening test showed same level of sensitivity (91.3%) e specificity (91.1%) found with the cefoxitin disk. With E-test strips, sensitivity was higher (97.8%) and specificity was comparable to that found with the other methods (91.1%). Ninety-three percent of the samples produced - lactamase, and 05 of them were mecA-negative. There was a gradual increase in the number of oxacillin-resistant S. aureus samples between 2002 and 2004. However, from 2004 to 2006, the number of resistant samples dropped from 55% of MRSA in 2004, to 45% in 2005 and 34.6% in 2006. The data obtained reveal that, among phenotypic methods, E-test yielded the best results, with higher sensitivity levels when compared to the other methods.

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Augusto Cezar Montelli / Banca: Izabel Yoko Ito / Resumo: A oxacilina é a principal droga de escolha no tratamento das infecções causadas por S. aureus. Contudo, a resistência a esta droga tem se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi verificar as taxas de resistência à oxacilina em amostras de S. aureus provenientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP e a comparação de métodos fenotípicos com o método padrão ouro (detecção do gene mecA) na detecção de amostras MRSA. Um total de 102 amostras previamente isoladas no período de 2002 a 2006 e estocadas na Coleção de Culturas do Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, UNESP, foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 6 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test e detecção do gene mecA. Das amostras estudadas, 46 (45,1%) foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade obtida para o disco de oxacilina foi de 86,9%, com 91,1% de especificidade. O disco de cefoxitina apresentou sensibilidade de 91,3% e especificidade de 91,1%. O método de triagem apresentou os mesmos valores de sensibilidade (91,3%) e especificidade (91,1%) verificados no método do disco de cefoxitina. A fita de E-test mostrou melhor taxa de sensibilidade, com 97,8% e a mesma especificidade encontrada nos outros métodos (91,1%). Das amostras estudadas, 93% foram produtoras de - lactamase, sendo 05 destas negativas na detecção do gene mecA. Verificou-se um aumento gradativo no número de amostras resistentes à oxacilina no período de 2002 a 2004, entretanto, de 2004 a 2006 os resultados revelaram uma redução no número de amostras resistentes, de 55% de MRSA em 2004 para 45% em 2005 e 34,6% em 2006. Os dados revelaram que o E-test obteve melhores resultados, com alta sensibilidade comparada aos outros métodos. / Abstract: Oxacillin is the main drug of choice for the treatment of S. aureus infections. However, S. aureus resistance to oxacillin has become a major problem in the past decades. To assess the rates of oxacillin resistance in S. aureus samples obtained at the Botucatu Medical School Hospital - Sao Paulo State University/UNESP, Brazil, and to compare phenotypic techniques for the detection of MRSA against the gold standard method (mecA gene detection) in these samples. A total of 102 samples, previously isolated between 2002 and 2006, and kept at the Culture Collection of the Department of Microbiology and Immunology, Botucatu Institute of Biosciences, São Paulo State University/UNESP, Brazil were included. Oxacillin resistance was assessed by oxacillin and cefoxitin disk diffusion and agar dilution tests, screening tests using Mueller-Hinton agar with 6 μg/mL of oxacillin and 4% of NaCl, E-test, and mecA gene detection. Of the samples analyzed, 46 (45.1%) were mecA-positive. Oxacillin disk sensitivity and specificity were 86.9% and 91.1%, respectively. Cefoxitin disk sensitivity and specificity were 91.3% and 91.1%, respectively. The screening test showed same level of sensitivity (91.3%) e specificity (91.1%) found with the cefoxitin disk. With E-test strips, sensitivity was higher (97.8%) and specificity was comparable to that found with the other methods (91.1%). Ninety-three percent of the samples produced - lactamase, and 05 of them were mecA-negative. There was a gradual increase in the number of oxacillin-resistant S. aureus samples between 2002 and 2004. However, from 2004 to 2006, the number of resistant samples dropped from 55% of MRSA in 2004, to 45% in 2005 and 34.6% in 2006. The data obtained reveal that, among phenotypic methods, E-test yielded the best results, with higher sensitivity levels when compared to the other methods. / Mestre

Enzimas microbianas, quando produzidas a um custo acessível e preservadas suas propriedades catalíticas, são ferramentas determinantes para a sustentabilidade das indústrias química e energética. Buscando aprimorar a produção de lipases pela cepa de Staphylococcus warneri EX17, diferentes estratégias de cultivo em biorreatores submersos foram aplicadas para analisar a influência de algumas variáveis na produção da enzima e então foi proposto o cultivo em batelada alimentada. Paralelamente, lipases de S. warneri EX17 (SWL) foram imobilizadas por adsorção hidrofóbica em Octyl-Sepharose, Immobead 150 e MCI GEL CHP20P. Os resultados indicaram que a interação entre enzima e suporte interfere nas propriedades da enzima imobilizada. Os preparados Octyl-SWL e MCI-SWL preservaram sua atividade lipolítica quando expostos a 50 % (v/v) de Butanol, Etanol, n-Hexano, Isopropanol e Metanol. Na síntese do éster aromático butirato de etila, Octyl-SWL e MCI-SWL exibiram desempenho promissor, alcançando em 24 h de reação 28 % e 35,6 % de rendimento, respectivamente. Lipases de S. warneri EX17 purificadas e imobilizadas em suportes hidrofóbicos preservaram propriedades que apontam seu potencial como biocatalisador industrial. / Microbial enzymes, when produced at affordable costs and preserving their catalytic properties, are crucial tools for sustainable chemical and energy industries. To enhance lipase production by Staphylococcus warneri EX17 strain, different cultivation strategies were applied to investigate the influence of some variables on enzyme production and then fed-batch cultivation was proposed. Additionally, three hydrophobic supports, Octyl-Sepharose, Immobead 150 and MCI GEL CHP20P have been assayed to purify and immobilize the lipase from S. warneri EX17 (SWL) via interfacial adsorption. Results indicated that the intensity of the interaction between the lipase and the support surface interferes in properties of the immobilized enzyme. The immobilized preparations Octyl-SWL and MCI-SWL preserved their lipolytic activity in the presence of 50 % (v/v) Butanol, Ethanol, n-Hexane, Isopropanol and Methanol. Octyl-SWL and MCI-SWL catalyzed the ester synthesis reaction giving 28 % and 35.6 % of conversion in 24 h. These enzyme preparations may be promising alternatives as industrial biocatalysts.

Os Staphylococcus spp coagulase negativa (SCoN) são reconhecidos como agentes etiológicos importantes de infecções humanas. A maioria dos países desenvolvidos relata um aumento de infecções nosocomiais por SCoN resistentes a meticilina e outros antibióticos. A resistência a meticilina é uma característica importante destas bactérias, porém difícil de detectar pelos métodos convencionais de suscetibilidade. Esta resistência é devido à presença de um elemento genético chamado staphylococcal cassette chromosome (SCCmec), que codifica o gene mecA. A identificação dos tipos de SCCmec é relevante para epidemiologia da resistência a meticilina dos Staphylococcus spp. Este estudo prospectivo teve como objetivo determinar a prevalência do gene mecA e a distribuição dos tipos de SCCmec nos SCoN. Também foi avaliada a eficiência do teste de disco difusão com cefoxitina e oxacilina para caracterizar a resistência a meticilina mediada pelo gene mecA. Foram analisadas um total de 181 SCoN de hemoculturas. A prevalência do gene mecA entre estes isolados foi de 71,3%. A sensibilidade dos discos de cefoxitina e oxacilina para todas as espécies de SCoN foi de 100% e 98,4%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 93% e 89,3%. As espécies mais prevalentes de SCoN foram S. epidermidis (64%), seguido pelo S. hominis (10%), S. haemolyticus (8,8%) e S. capitis (7,7%). A percentagem de isolados positivos para o gene mecA foi maior para S. haemolyticus (98,3%), seguido pelo S. epidermidis (75%) e S. hominis (72,2%). Entre os 129 isolados resistentes, 36 (27.9%) foram identificados com o SCCmec tipo I, 4 (3.0%) com o SCCmec tipo II, 67 (52%) com o SCCmec tipo III, 1 (0.8%) com o SCCmec tipo IV e 4 (3.0%) com os SCCmec tipos I e III. Dezessete isolados foram não tipáveis. O SCCmec tipo III foi o mais prevalente entre os isolados de S. epidermidis (52%). Entre estas cepas, 30 (23%) apresentaram um SCCmec tipo III modificado, que amplificou uma região dcs adicional. Os SCoN meticilina resistentes (MR-SCoN) mostraram um nível de resistência aos antibióticos não -lactamicos maior quando comparados aos SCoN meticilina suscetíveis (MS-SCoN). Os isolados com o SCCmec tipo III foram mais resistentes aos antibióticos não -lactamicos do que os isolados com SCCmec tipos I, II, e IV. / Coagulase negative staphylococci (CoNS) are now recognized as important etiological agents of infections in humans. Most developed countries have reported an increase in CoNS infection in hospitalized patients, which are resistant to methicillin and other antibiotics. The methicillin resistance is an important characteristic of these bacteria. Moreover, the resistance to methicillin may not be easily detected by conventional susceptibility methods. Methicillin resistance is due to the acquisition of a large DNA element termed staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), which harbored the mecA gene. The SCCmec typing is essential for understanding the molecular epidemiology of methicillin resistant Staphylococcus spp. This prospective study was aimed to determine the prevalence of mecA gene and the distribution of SCCmec types in CoNS. Also was evaluated the efficiency of the cefoxitin and oxacilin disk diffusion test to characterize the meticillin resistance mediated by the gene mecA. A total of 181 CoNS from bloodstream isolate were available for the study. The prevalence to mecA gene was 71.3%. The sensivity of oxacillin and cefoxitin disks for all CoNS species were 100% and 98.4% respectively, whereas the specificity were 93% and 89,3 %. The most prevalent SCoN species were: S. epidermidis 116 (64%) followed by S. hominis 18 (10%), S. haemolyticus 16 (8.8%) and S.capitis 14 (7.7%). The percentage of mecApositive isolates was highest for S. haemolyticus (93.8%), followed by S. epidermidis (75%) and S. hominis (72.2%). Among the 129 bloodstream isolates witch mecA gene, 36 (27.9%) harbored SCCmec type I, 4 (3.0%) harbored SCCmec type II, 67 (52%) harbored SCCmec type III, 1 (0.8%) harbored SCCmec type IV and 4 (3.0%) harbored SCCmec type I and III. Seventeen isolates were not typeable. The SCCmec type III was the most prevalent among the isolates of S. epidermidis (52%). Among these strains, 30 (23%) harbored a modified SCCmec type III, which contained, in contrast to regular type III, an additional dcs region. Methicillin resistant CoNS showed higher level of resistance to all non beta lactamics antimicrobials as compared to methicillin susceptible. The isolates with SCCmec type III were more resistant to non-beta lactamics antimicrobials than the isolates harboring SCCmec type I, II and IV.

As naftoquinonas são amplamente distribuídas na natureza e várias destas moléculas tem um papel importante na produção de energia, através da fotossíntese e respiração celular. No entanto, a atividade biológica de naftoquinonas com grupamentos amino é pouco investigada em células procarióticas e eucarióticas. No presente trabalho nós estudamos a atividade biológica da 5-amino-8-hidroxi-1,4- naftoquinona (ANQ) em comparação com a 1,4-naftoquinona (NQ) na bactéria Staphylococcus aureus. ANQ e NQ inibem o crescimento do S. aureus nas concentrações de 50 e 10 μg/mL, respectivamente. O efeito antimicrobiano das naftoquinonas diminui na presença de ascorbato de sódio, por outro lado o ácido 4,5-dihidroxi-1,3-benzeno-sulfônico (Tiron), um antioxidante especifico para o ânion superóxido foi capaz de proteger o S. aureus somente dos efeitos da ANQ. A ANQ e NQ bloqueiam o consumo de oxigênio e com a cadeia respiratória bloqueada com cianeto induzem o consumo de oxigênio. Os ensaios realizados com a presença das naftoquinonas se verificou que estes compostos induzem peroxidação de lipídios, sendo demonstrado pela formação de substancias reativas ao ácido tiobabitúrico. Estes resultados mostram que estes compostos atuam como aceptores de elétrons e induzem a formação de espécies reativas de oxigênio, que são tóxicas para o S. aureus. Com a proposta de elucidar a atividade mutagênica da ANQ e da 5-amino—2,8-dihidroxi- 1,4-naftoquinona (ANQ-OH) em comparação com a NQ, nós utilizamos o ensaio Salmonella/microssoma. A genotoxicidade e o potencial recombinogênico foram analisados nas linhagens haplóide e diplóide da levedura Saccharomyces cerevisiae. No ensaio Salmonella/microssoma a NQ não foi mutagênica, enquanto as aminonaftoquinonas apresentaram uma fraca mutagênese nas linhagens TA98 e TA102. Na linhagem haplóide, somente NQ induziu mutagênese. Na diplóide, as naftoquinonas não induziram eventos recombinacionais. Os resultados sugerem que as aminonaftoquinonas são fracos agentes mutagênicos em células procarióticas. Além disto, a genotoxicidade destes compostos foi determinada utilizando o ensaio Cometa (single cell gel – SCG) e o ensaio Cometa modificado com as enzimas formamidopirimidina DNA-glicosilase (FPG) e endonuclease III (ENDOIII) em células de fibroblasto de pulmão de hamster Chinês (células V79). Em nosso estudo foi demonstrado que ANQ e NQ induzem danos oxidativos no DNA das células V79, como apresentado no ensaio na presença de enzimas. O pós-tratamento com ENDOIII e FPG não reconhecem danos promovidos pela ANQ-OH, quando comparado com o ensaio cometa padrão. Além disso, todas as naftoquinonas apresentaram genotoxicidade nas células V79 em presença de ativação metabólica. Nas células de mamíferos, NQ e ANQ são agentes genotóxicos, enquanto ANQ-OH é genotóxico somente com metabolização. O conjunto destes resultados reforça que ANQ e NQ produzem o radical superóxido e demonstra que o grupamento amino na posição 5 não elimina a capacidade da ANQ em produzir espécies reativas de oxigênio. Por fim, nós podemos afirmar que a citotoxicidade e genotoxicidade destes compostos é pela produção de danos oxidativos em todos os sistemas celulares. / Naphthoquinones are widely distributed in nature and some of these molecules have an important role in the biochemistry of microbial energy production, by means of photosynthesis and respiratory chain. However, the biological activity of naphthoquinones amino derivates on prokaryotic and eukaryotic cells is poorly investigated. In the present work we have studied the biological activity of 5-amino-8-hydroxi-1,4- naphthoquinone (ANQ) on Staphylococcus aureus in comparison with unsubstituted 1,4- naphthoquinone (NQ). Complete inhibition of microbial growth was observed with ANQ and NQ at 50 and 10 μg/mL, respectively. The antibacterial effect of naphthoquinones decrease in presence of sodium ascorbate, but the superoxide scavenger 4,5-dihydroxi-1,3- benzene-disulfonic acid (Tiron) was able to protect S. aureus only from the harmful effect of ANQ. Naphthoquinones blocked oxygen uptake and induced-cyanide insensitive oxygen consumption. Assays in presence of naphthoquinones induced an increase of lipid peroxidation in S. aureus, as determined by thiobarbituric acid reactive substances. These results showed that 1,4-naphthoquinones effectively act as electron acceptor and induced an increase in reactive oxygen species that are toxic to S. aureus cells. In order to elucidate the mutagenic activity of ANQ and 5-amino-2,8-dihydroxy-1,4- naphthoquinone (ANQ-OH) in comparison with the unsubstituted 1,4-naphthoquinone (NQ) we have employed the Salmonella microssoma/assay. The genotoxic and recombinogenic potencial effects were analysed in haploid and diploid yeast Saccharomyces cerevisiae strains. In Salmonella microssoma/assay the NQ was not mutagenic while the aminonaphthoquinones were weakly mutagenic in TA98 and TA102 stains. In haploid yeast, only NQ showed a mutagenic response. In diploid yeast, the naphthoquinones did not induce any recombinogenic events. All these results suggest that aminonaphthoquinones are weak mutagenic agents only in prokaryotic cells. Moreover, the genotoxicity of these compounds was determined using standard Comet assay (single-cell gel – SCG) and modified Comet assay with bacterial enzymes formamidopyrimidine DNAglycosylase (FPG) and endonuclease III (ENDOIII) in V79 Chinese hamster lung fibroblast cells. Our study demonstrated that ANQ and NQ induced oxidative DNA damage in V79 cells as shown in comet assay with the lesion-specific enzymes. Post-treatment with ENDOIII and FPG proteins had not significant effect on ANQ-OH-induced oxidative DNA damage when compared to standard alkaline comet assay. Besides, all naphthoquinones showed genotoxic effect on V79 cells in presence of metabolic activation. In mammalian cells, NQ and ANQ are genotoxic agents and ANQ-OH is genotoxic only in presence of metabolic activation. Taken together these results reinforce that ANQ and NQ produce superoxide radicals and reveal that amino group in position 5 does not abolish the ability of ANQ in producing reactive oxygen species. Finally, we were able to affirm that cytotoxicity and genotoxicity of these compounds is promoted by oxidative damage despite the cell system.

Os Staphylococcus spp coagulase negativa (SCoN) são reconhecidos como agentes etiológicos importantes de infecções humanas. A maioria dos países desenvolvidos relata um aumento de infecções nosocomiais por SCoN resistentes a meticilina e outros antibióticos. A resistência a meticilina é uma característica importante destas bactérias, porém difícil de detectar pelos métodos convencionais de suscetibilidade. Esta resistência é devido à presença de um elemento genético chamado staphylococcal cassette chromosome (SCCmec), que codifica o gene mecA. A identificação dos tipos de SCCmec é relevante para epidemiologia da resistência a meticilina dos Staphylococcus spp. Este estudo prospectivo teve como objetivo determinar a prevalência do gene mecA e a distribuição dos tipos de SCCmec nos SCoN. Também foi avaliada a eficiência do teste de disco difusão com cefoxitina e oxacilina para caracterizar a resistência a meticilina mediada pelo gene mecA. Foram analisadas um total de 181 SCoN de hemoculturas. A prevalência do gene mecA entre estes isolados foi de 71,3%. A sensibilidade dos discos de cefoxitina e oxacilina para todas as espécies de SCoN foi de 100% e 98,4%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 93% e 89,3%. As espécies mais prevalentes de SCoN foram S. epidermidis (64%), seguido pelo S. hominis (10%), S. haemolyticus (8,8%) e S. capitis (7,7%). A percentagem de isolados positivos para o gene mecA foi maior para S. haemolyticus (98,3%), seguido pelo S. epidermidis (75%) e S. hominis (72,2%). Entre os 129 isolados resistentes, 36 (27.9%) foram identificados com o SCCmec tipo I, 4 (3.0%) com o SCCmec tipo II, 67 (52%) com o SCCmec tipo III, 1 (0.8%) com o SCCmec tipo IV e 4 (3.0%) com os SCCmec tipos I e III. Dezessete isolados foram não tipáveis. O SCCmec tipo III foi o mais prevalente entre os isolados de S. epidermidis (52%). Entre estas cepas, 30 (23%) apresentaram um SCCmec tipo III modificado, que amplificou uma região dcs adicional. Os SCoN meticilina resistentes (MR-SCoN) mostraram um nível de resistência aos antibióticos não -lactamicos maior quando comparados aos SCoN meticilina suscetíveis (MS-SCoN). Os isolados com o SCCmec tipo III foram mais resistentes aos antibióticos não -lactamicos do que os isolados com SCCmec tipos I, II, e IV. / Coagulase negative staphylococci (CoNS) are now recognized as important etiological agents of infections in humans. Most developed countries have reported an increase in CoNS infection in hospitalized patients, which are resistant to methicillin and other antibiotics. The methicillin resistance is an important characteristic of these bacteria. Moreover, the resistance to methicillin may not be easily detected by conventional susceptibility methods. Methicillin resistance is due to the acquisition of a large DNA element termed staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), which harbored the mecA gene. The SCCmec typing is essential for understanding the molecular epidemiology of methicillin resistant Staphylococcus spp. This prospective study was aimed to determine the prevalence of mecA gene and the distribution of SCCmec types in CoNS. Also was evaluated the efficiency of the cefoxitin and oxacilin disk diffusion test to characterize the meticillin resistance mediated by the gene mecA. A total of 181 CoNS from bloodstream isolate were available for the study. The prevalence to mecA gene was 71.3%. The sensivity of oxacillin and cefoxitin disks for all CoNS species were 100% and 98.4% respectively, whereas the specificity were 93% and 89,3 %. The most prevalent SCoN species were: S. epidermidis 116 (64%) followed by S. hominis 18 (10%), S. haemolyticus 16 (8.8%) and S.capitis 14 (7.7%). The percentage of mecApositive isolates was highest for S. haemolyticus (93.8%), followed by S. epidermidis (75%) and S. hominis (72.2%). Among the 129 bloodstream isolates witch mecA gene, 36 (27.9%) harbored SCCmec type I, 4 (3.0%) harbored SCCmec type II, 67 (52%) harbored SCCmec type III, 1 (0.8%) harbored SCCmec type IV and 4 (3.0%) harbored SCCmec type I and III. Seventeen isolates were not typeable. The SCCmec type III was the most prevalent among the isolates of S. epidermidis (52%). Among these strains, 30 (23%) harbored a modified SCCmec type III, which contained, in contrast to regular type III, an additional dcs region. Methicillin resistant CoNS showed higher level of resistance to all non beta lactamics antimicrobials as compared to methicillin susceptible. The isolates with SCCmec type III were more resistant to non-beta lactamics antimicrobials than the isolates harboring SCCmec type I, II and IV.

Enzimas microbianas, quando produzidas a um custo acessível e preservadas suas propriedades catalíticas, são ferramentas determinantes para a sustentabilidade das indústrias química e energética. Buscando aprimorar a produção de lipases pela cepa de Staphylococcus warneri EX17, diferentes estratégias de cultivo em biorreatores submersos foram aplicadas para analisar a influência de algumas variáveis na produção da enzima e então foi proposto o cultivo em batelada alimentada. Paralelamente, lipases de S. warneri EX17 (SWL) foram imobilizadas por adsorção hidrofóbica em Octyl-Sepharose, Immobead 150 e MCI GEL CHP20P. Os resultados indicaram que a interação entre enzima e suporte interfere nas propriedades da enzima imobilizada. Os preparados Octyl-SWL e MCI-SWL preservaram sua atividade lipolítica quando expostos a 50 % (v/v) de Butanol, Etanol, n-Hexano, Isopropanol e Metanol. Na síntese do éster aromático butirato de etila, Octyl-SWL e MCI-SWL exibiram desempenho promissor, alcançando em 24 h de reação 28 % e 35,6 % de rendimento, respectivamente. Lipases de S. warneri EX17 purificadas e imobilizadas em suportes hidrofóbicos preservaram propriedades que apontam seu potencial como biocatalisador industrial. / Microbial enzymes, when produced at affordable costs and preserving their catalytic properties, are crucial tools for sustainable chemical and energy industries. To enhance lipase production by Staphylococcus warneri EX17 strain, different cultivation strategies were applied to investigate the influence of some variables on enzyme production and then fed-batch cultivation was proposed. Additionally, three hydrophobic supports, Octyl-Sepharose, Immobead 150 and MCI GEL CHP20P have been assayed to purify and immobilize the lipase from S. warneri EX17 (SWL) via interfacial adsorption. Results indicated that the intensity of the interaction between the lipase and the support surface interferes in properties of the immobilized enzyme. The immobilized preparations Octyl-SWL and MCI-SWL preserved their lipolytic activity in the presence of 50 % (v/v) Butanol, Ethanol, n-Hexane, Isopropanol and Methanol. Octyl-SWL and MCI-SWL catalyzed the ester synthesis reaction giving 28 % and 35.6 % of conversion in 24 h. These enzyme preparations may be promising alternatives as industrial biocatalysts.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:34:56Z No. of bitstreams: 2 TESE Wagner Oliveira.pdf: 1211878 bytes, checksum: 2511da52ea7b930ceb06c98d5e740455 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Wagner Oliveira.pdf: 1211878 bytes, checksum: 2511da52ea7b930ceb06c98d5e740455 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE; CNPq / Os estafilococos fazem parte da microflora da pele e mucosa humana e podem se comportam como patógenos oportunistas. Staphylococcus aureus é a espécie responsável por grande número de infecções principalmente em ambiente hospitalar devido à diversidade de fatores de virulência que abriga. Staphylococcus Coagulase Negativo (SCN) vem se destacando como patógeno principalmente associado a colonização de biomateriais utilizados em procedimentos médicos. Como agravante essas bactérias têm capacidade de adquirir mecanismos de resistência aos antimicrobianos. Neste trabalho analisamos mecanismos de patogenicidade (produção de biofilme e presença de genes toxigênicos) e resistência à meticilina (classificação do cassete SCCmec e produção de PBP2a) em Staphylococcus spp. de infecções nosocomiais de um hospital universitário da cidade de Recife, Pernambuco, Brasil. A maioria das amostras de S. aureus e SCN revelaram-se icaAD positivas e produtoras de biofilme no meio Agar Vermelho Congo-AVC. O loco hlgCB que codifica a γ-toxina foi encontrado em 42/45 (93,9%) S. aureus e 24/49 (49%) SCN; lukSF que codifica a leucocidina de Panton-Valentine-PVL, em 13/45 (28,9%) S. aureus e 06/49 (12%) SCN; e tst que codifica a toxina da síndrome do choque tóxico-TSST-1, foi encontrada em três das 45 amostras de S. aureus e uma das 49 amostras de SCN analisadas. Sessenta e oito dos 84 isolados analisados foram classificados nos seguintes tipos de SCCmec: SCCmec tipo II (17%), SCCmec tipo III (26%), SCCmec tipo IV (34,5%) e SCCmec tipo V (3,5%); em 19% dos isolados o tipo do SCCmec não foi determinado e nomeados como SCCmec Não Definido (ND). 61% da população estudada revelou-se resistente à oxacilina e 39% sensível nos testes de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e MHA suplementado com oxacilina e a presença da PBP2a foi detectada por Western blot com antissoro anti-PBP2a em 76% dos isolados. Em conclusão foram encontrados os genes da γ-toxina e da leucocidina de Panton-Valentine e do gene do choque tóxico em SCN. A presença de genes toxigênicos e genes associados epidemiologicamente com cepas da comunidade, em cepas nosocomiais de SCN, sugere transferência horizontal de genes e representa um importante incremento do potencial patogênico dos SCN no ambiente hospitalar. Foi demonstrado que a presença dos genes icaAD não está diretamente associada a formação de biofilme em testes fenotípicos (AVC e PCT), embora o meio AVC seja mais eficaz nessa determinação que o teste em PCT, principalmente se otimizado pela substituição de componentes na sua formulação (meios básicos e fonte de açúcar) e no inóculo (suplementação com glicose e NaCl). A diversidade de elementos SCCmec e a ocorrência de linhagens clonais associadas epidemiologicamente com a comunidade em ambiente hospitalar sugere que isolados de SCN podem atuar como reservatórios de elementos SCCmec contribuindo para emergência de novos clones meticilina resistentes e corrobora com a dissolução da classificação de cepas comunitárias e nosocomiais.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1576_1.pdf: 1438880 bytes, checksum: abad07e4ffff905ffbde5f7819b2accd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Staphylococcus, embora presente na microflora da pele e mucosa humana se comporta como patógeno oportunista responsável por complicações infecciosas, principalmente após implantação de dispositivos protéticos. Além disso, possui extraordinária capacidade para adquirir resistência a antimicrobianos. Atualmente, Staphylococcus resistentes à meticilina (MRS) estão dispersos e relacionados com processos infecciosos tanto em âmbito hospitalar como na comunidade. A capacidade de aderir e colonizar materiais inertes por meio da formação de um biofilme confere proteção contra defesas do hospedeiro e a agentes antimicrobianos. A formação de biofilme tem sido associada com o nível de susceptibilidade à meticilina. O presente trabalho visou caracterizar amostras estafilocócicas pela identificação de genes relacionados à produção de biofilme (icaAD) e à regulação da resistência à meticilina (mecI e mecR1) correlacionando com a capacidade para formar biofilme in vitro e a susceptibilidade à oxacilina respectivamente, além de determinar o tipo de recombinase (ccr) presente no SCCmec das amostras e de estabelecer relação genética entre os isolados. As análises realizadas em 46 amostras de Staphylococcus obtidas de infecções nosocomiais de um hospital universitário da cidade de Recife, Pernambuco, Brasil permitiram observar que a habilidade para formar biofilme nem sempre está associada à presença ou mesmo à transcrição dos genes icaAD, principalmente nos MRS. Diante disso os genes icaAD não constituem marcadores moleculares eficazes para diferenciar isolados produtores de biofilme dos não produtores sendo recomendável associar a detecção molecular dos genes ica com a prova fenotípica de determinação da produção de biofilme. Nossos resultados mostram que o alelo tipo ccrA3 é conservado tanto em S. aureus quanto em SCN sugerindo transferência horizontal entre as amostras. Foi observada uma deleção de aproximadamente 700pb no gene mecR1 apontando para um novo arranjo nessa região em MRSA e MRSCN. Essa alteração ainda não havia sido descrita em isolados de origem hospitalar. A avaliação da relação genética dos isolados revelou grande diversidade entre isolados sensíveis e resistentes com a prevalência de alguns clones dentro do hospital. A diversidade dos perfis encontrados sugere uma origem comunitária das amostras. O conhecimento do perfil fenotípico e molecular das amostras de Staphylococcus obtido no nosso estudo pode contribuir para orientar a conduta terapêutica no tratamento e controle de infecções hospitalares