Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2018-04-24T20:10:43Z No. of bitstreams: 2 thome_as_condições_sanitarias.pdf: 24318415 bytes, checksum: 3cf981b46f41e14a2289359e7e33d606 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T20:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 thome_as_condições_sanitarias.pdf: 24318415 bytes, checksum: 3cf981b46f41e14a2289359e7e33d606 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2000-04-12 / As condições sanitárias e o manejo na incubação, larvicultura e alevinagem do tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) (Osteichthyes: Serrasalmidae) no Estado do Amazonas / Marcos Paulo Machado Thomé / As condições sanitárias e o manejo na incubação, larvicultura e alevinagem do tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) (Osteichthyes: Serrasalmidae) no Estado do Amazonas / Marcos Paulo Machado Thomé

Submitted by Izabel Monteiro (izabel_22@hotmail.com) on 2016-08-03T14:34:42Z No. of bitstreams: 1 Katherine López Vásquez - tese.pdf: 1602260 bytes, checksum: 9f650ea2d499842514f06a06392a5669 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-15T19:38:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Katherine López Vásquez - tese.pdf: 1602260 bytes, checksum: 9f650ea2d499842514f06a06392a5669 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-15T19:40:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Katherine López Vásquez - tese.pdf: 1602260 bytes, checksum: 9f650ea2d499842514f06a06392a5669 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T19:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Katherine López Vásquez - tese.pdf: 1602260 bytes, checksum: 9f650ea2d499842514f06a06392a5669 (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / One of the principal fetter in the development of technologies for the systematized cultivation of native fish in the Amazonian is the knowledge lack on the demands nutricionais of those species. The commercial rations for fish that dominate the world market are resulted of researches on habit of exotic species, this way, the establishment of the needs nutricionais of native fish and of the aspects that subsidize the formulation of adapted diets your physiology, they constitute important steps that make possible a productivity increase and consequent development of the aqüicultura in the area. This work had as objective accomplishes a biochemical study and of expression gênica of the main digestive enzymes of the tambaqui, Colossoma macropomum, in different phases of the initial development. For so much the activities of the enzymes pancreáticas tripsina were quantified, quimiotripsina, carboxipeptidase A and B, amilase and lipase; of the enzymes intestinal maltose, alkaline fosfatase and leucina aminopeptidase; and of the enzyme gastric pepsina. The results demonstrated that the behavior of the main digestive enzymes indicates that the tambaqui possesses a development of the balanced and precocious digestive function, where the enzymes pancreáticas tripsina, quimiotripsina, carboxipeptidase A and B and amilase presented a gradual increase in your activities during the development of this species. The intestinal digestion is active in apprenticeship that you/they precede the appearance of the larva becoming more important starting from the opening of the mouth and beginning of the feeding exógena. Already the activity of the pepsina in juvenile of tambaqui was smaller when compared to the first apprenticeships, what suggests the modulation of this enzyme for the food type. The differences of expression gênica of the tripsinogênio and pepsinogênio among the apprenticeships of development of the tambaqui was quantified by the qRT-PCR analysis and they demonstrated the ability of this species to express the genes of the main enzymes proteolíticas during the first phases of the embryonic and larval development, indicating the operation degree of the treatment gastrointestinal free from inherent interferences to the biochemical rehearsals. However it is necessary that new studies they are delineated, so much in the level molecular as biochemical to understand the processes regulatórios that you/they determine this ability. / Um dos principais entraves no desenvolvimento de tecnologias para o cultivo sistematizado de peixes nativos na Amazônia é a falta de conhecimento sobre as exigências nutricionais dessas espécies. As rações comerciais para peixes que dominam o mercado mundial são resultados de pesquisas sobre hábito de espécies exóticas. Por isso, o estabelecimento das necessidades nutricionais de peixes nativos e dos aspectos que subsidiem a formulação de dietas adaptadas a sua fisiologia, constituem passos importantes que possibilitam um aumento de produtividade e conseqüente desenvolvimento da aqüicultura na região. Este trabalho teve como objetivo realizar um estudo bioquímico e de expressão gênica das principais enzimas digestivas do tambaqui, Colossoma macropomum, em diferentes fases do desenvolvimento inicial. Para tanto foram quantificadas as atividades das enzimas pancreáticas tripsina, quimiotripsina, carboxipeptidase A e B, amilase e lipase; das enzimas intestinais maltose, fosfatase alcalina e leucina aminopeptidase; e da enzima gástrica pepsina. Os resultados demonstraram que o comportamento das principais enzimas digestivas indica que o tambaqui possui um desenvolvimento da função digestiva equilibrada e precoce, onde as enzimas pancreáticas tripsina, quimiotripsina, carboxipeptidase A e B e amilase apresentaram um aumento gradual em suas atividades durante o desenvolvimento desta espécie. A digestão intestinal é ativa em estágio que precede a eclosão da larva tornando-se mais importante a partir da abertura da boca e início da alimentação exógena. Já a atividade da pepsina em juvenis de tambaqui foi menor quando comparada aos primeiros estágios, o que sugere a modulação desta enzima pelo tipo de alimento. As diferenças de expressão gênica do tripsinogênio e do pepsinogênio entre os estágios de desenvolvimento do tambaqui foi quantificada pela análise de qRT-PCR e demonstraram a habilidade desta espécie de expressar os genes das principais enzimas proteolíticas durante as primeiras fases do desenvolvimento embrionário e larval, indicando o grau de funcionamento do trato gastrointestinal livre de interferências inerentes aos ensaios bioquímicos. Entretanto, é necessário que novos estudos sejam delineados, tanto no nível molecular quanto bioquímico pra compreender os processos regulatórios que determinam esta habilidade.

Thesis (M.Sc.)--Memorial University of Newfoundland, 2002. / Restricted until May 2003. Bibliography: leaves 72-83.

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-02-13T18:52:52Z No. of bitstreams: 2 Tese de Doutorado_Marcos Prado Lima_GCBEv.pdf: 4143016 bytes, checksum: 33bb9eb6b868b0a6893a86ded5c5480c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T18:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese de Doutorado_Marcos Prado Lima_GCBEv.pdf: 4143016 bytes, checksum: 33bb9eb6b868b0a6893a86ded5c5480c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-05-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In recent years, the balance of the natural ecosystems has been affected by climate change resulting from a continuous increase of greenhouse gases, mainly carbon dioxide. According to the Intergovernmental Panel on Climate Change, the IPCC, there will be an increase in the temperature around the planet, which enhances the risk of biodiversity loss in vulnerable regions such as the Amazon. Fish, like other ectothermic animals, do not control their body temperature and will then be subject to environmental variations that can compromise vital metabolic processes, causing to death. Thus, to understand how Amazonian fish can respond to global climate change, this study aimed to evaluate the biological effects of exposure of tambaqui, an Amazonian important fish species, to major climate change scenarios foreseen by IPCC for the year 2100. Juveniles of tambaqui were exposed during 150 days to the current environmental situation and B1, A1B and A2 climate change scenarios. Firstly were investigated changes in gene expression profile after 5 and 15 days of exposure through the construction of eight RNA-Seq libraries, which were sequenced using a next generation sequencer SOLID 4. The obtained results enabled to identify 32,512 genes on the transcriptome of tambaqui, being 236 and 209 differentially expressed after 5 and 15 days of exposure, respectively. A large number of differentially expressed genes identified indicates that a complex combination of genes is involved in tambaqui's response to climate change, especially genes related to energy metabolism, chaperones, transcription initiation factors and translation and ribosomal genes. Secondly, we investigated the occurrence of DNA damage in erythrocytes, several hematological parameters and ion regulation of tambaqui during 150 days of exposure to the various climate change driven environmental scenarios. The results revealed the existence of DNA strand breaks in erythrocytes after 30 days of exposure, changes in several hematological parameters, particularly those related to increase of red blood cells to compensate the increased demand of oxygen to tissues, as well as a severe imbalance in the plasma ion concentrations and the activity of key ion regulation enzymes of the gills. Thus, we concluded that the exposure of tambaqui to the analyzed climate change driven environmental scenarios can result in severe imbalances of vital metabolic processes that impair cellular homeostasis and pose a greater health risk to the analyzed species. / Nos últimos anos o equilíbrio dos ecossistemas naturais do planeta tem sido afetado pelas mudanças climáticas resultantes do aumento de gases do efeito estufa, especialmente dióxido de carbono. De acordo com o Painel Internacional sobre Mudanças no Clima, o IPCC, até o ano 2100 haverá elevação na temperatura média em todo o planeta, o que aumenta o risco de perda de biodiversidade em regiões mais vulneráveis como a Amazônia. Os peixes, assim como outros animais ectotérmicos, não possuem a capacidade de controlar sua temperatura corporal, ficando então sujeitos a variações ambientais que podem inviabilizar processos metabólicos vitais, levando o organismo à morte. Assim, para compreender como o tambaqui e outros peixes amazônicos poderão reagir ao aumento nos níveis de CO2 e de temperatura, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos biológicos da exposição do tambaqui, uma espécie símbolo da Amazônia, aos principais cenários de mudanças climáticas previstos pelo IPCC para o ano 2100. Exemplares de tambaqui foram expostos durante 150 dias ao cenário atual e a três cenários climáticos B1, A1B e A2. Na primeira parte do estudo foram investigadas alterações na expressão gênica após 5 e 15 dias de exposição por meio da construção de oito bibliotecas de RNA-Seq, que foram sequenciadas em um sequenciador de nova geração SOLID 4. Os resultados obtidos possibilitaram a identificação de 32.512 genes do transcriptoma do tambaqui, sendo 236 e 209 diferencialmente expressos após 5 e 15 dias de exposição, respectivamente. O grande número de genes diferencialmente expressos identificados sugere que uma complexa combinação de genes está envolvida na resposta do tambaqui às mudanças climáticas, especialmente genes relacionados ao metabolismo energético, chaperonas, fatores de iniciação da transcrição e tradução e genes ribossomais. Na segunda parte do estudo foram investigadas a ocorrência de danos ao DNA de eritrócitos, diversos parâmetros hematológicos e aspectos de regulação iônica do tambaqui durante 150 dias de exposição. Os resultados revelaram aumento no número de quebras no DNA de eritrócitos após 30 dias de exposição, alterações em diversos parâmetros hematológicos, especialmente aqueles relacionados ao aumento no número de eritrócitos e um severo desbalanceamento na concentração de íons plasmáticos e na atividade das principais enzimas branquiais de regulação iônica. Dessa forma, concluímos que os três cenários de mudanças climáticas avaliados podem provocar graves desequilíbrios em processos metabólicos vitais que alteram a homeostase celular do tambaqui e podem colocar em risco a sobrevivência da espécie.

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-04-11T20:00:33Z No. of bitstreams: 2 Tese_Grazy_GCBEV_2016.pdf: 4348642 bytes, checksum: bfcda1c216855cf7089f37381109893d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T20:00:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Grazy_GCBEV_2016.pdf: 4348642 bytes, checksum: bfcda1c216855cf7089f37381109893d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-23 / This study aimed to understand the effects (genetic, histological and physiological) of different environmental stressors such as temperature, CO2 levels and O2, as well as the action of benzo[a]pyrene (BaP) and Roundup® (RD) in Colossoma macropomum. In the first chapter we evaluated the acute effect (96 h) of BaP (4, 8, 16, 32 mol/kg) in tambaqui fish. Changes were observed in the expression of the ras oncogene and hypoxia-inducible factor-1 (hif-1). Tissue damage in the liver increased in fish exposed to BaP (8, 16, 32 mol / kg) compared with the control, being classified as irreparable damage. There has also been an increase in genotoxic damage index in blood cells by the comet assay. The second chapter describes the effects of BaP (8 and 16 mol/kg) in tambaquis exposed to climate scenario A2 (extreme scenario) which provides an average increase of 4.5 °C in air temperature and CO2 levels (850 ppm), as forecasted by IPCC (2007). The increased temperature and CO2 levels in the extreme scenario induced changes in expression of the ras oncogene and hif-1 gene. Both ras oncogene and hif-1 showed an increase in gene expression in fish injected with both concentrations of BaP and exposed to the extreme scenario compared to the same treatments in the current scenario. Moreover, the responses of detoxifying enzyme and antioxidant defense, glutathione-S-transferase (GST), catalase (CAT) and levels of lipid peroxidation LPO were greater in the control setting. The activity of GST and CAT decreased in fish exposed to BaP in the extreme scenario compared to the control scenario. Extreme scenario with high temperatures and CO₂ levels weaken the body's antioxidant response. Likewise, the LPO levels decreased. In consequence of the failure in the antioxidant system, the extreme scenario had a greater influence on genetic variables increasing the expression of ras oncogene and hif-1, also DNA strand breaks in blood cells and histological damage, causing irreversible injuries to the liver cells and tissue necrosis. In the third chapter were evaluated toxicological responses of C. macropomum exposed simultaneously to RD and hypoxia. Surprisingly, animals exposed to hypoxia and hypoxia more RD had their levels of expression of hif1 smaller than those subjected to normoxic and normoxic more RD, suggesting greater cell damage in these groups. The ras oncogene showed higher relative expression in animals contaminated with RD in normoxic, reducing their relative expression in animals exposed to hypoxia and RD, which could also be explained by cellular injury (see below). The enzymes of oxidative stress GST and CAT showed greater activity in both treatments under hypoxia, being able to minimize the damage of oxidative stress in the membranes, which was evidenced by the low lipid peroxidation rate (LPO). Histological changes C. macropomum liver exposed to normoxia plus RD, hypoxia and hypoxia plus RD were similar, and the occurrence of fish had massive necrosis. Tambaqui proved to be an excellent model for studies of genes related to cancer, complemented by molecular markers such as ras oncogene and the hif-1 gene. / Esse estudo objetivou compreender os efeitos (genéticos, histológicos e fisiológicos) de diferentes estressores ambientais como: temperatura, níveis de CO2 e O2, bem como a ação dos contaminantes benzo[a]pireno (BaP) e Roundup® (RD) em Colossoma macropomum. No primeiro capítulo foi avaliado o efeito agudo (96 h) do BaP (4, 8, 16, 32 mol/kg) em tambaquis. Foram observadas alterações no nível de expressão do oncogene ras e do fator de indução à hipóxia-1 (hif-1). Os danos teciduais no fígado aumentaram nos peixes expostos ao BaP (8, 16, 32 mol/kg) quando comparados com o controle, sendo classificados como danos irreparáveis. Verificou-se também o aumento no índice de danos genéticos das células sanguíneas por meio do ensaio cometa. O segundo capítulo descreve os efeitos do BaP (8 e 16mol/kg) em tambaquis expostos ao cenário climático A2 (cenário extremo) que prevê um aumento médio de 4.5 °C na temperatura do ar e 850 ppm de CO2, como proposto pelo IPCC (2007). O aumento da temperatura e dos níveis de CO2 no cenário extremo induziu modificações nos níveis de expressão do oncogene ras e do gene hif-1. Tanto o oncogene ras como hif-1. apresentaram aumento nos níveis de expressão nos peixes injetados com ambas as concentrações de BaP e expostos ao cenário extremo, quando comparados aos mesmos tratamentos no cenário atual. Por outro lado, as respostas das enzimas glutationa-S-transferase (GST) e catalase (CAT) e nível de lipoperoxidação (LPO) foram maiores no cenário controle. A atividade da GST e CAT diminuiu nos peixes expostos ao BaP no cenário extremo, em relação ao cenário controle, mostrando que um possível cenário com altas temperaturas e níveis de CO2 enfraqueceriam as respostas antioxidantes do organismo. Da mesma maneira, os níveis de LPO diminuíram. Em consequência da falha no sistema antioxidante, o cenário extremo teve maior influência sobre as variáveis genéticas aumentando a expressão do oncogene ras e hif-1, bem como os danos no DNA a alterações histológicas, causando danos irreversíveis nas células hepáticas e necrose do tecido. No terceiro capítulo foram avaliadas as repostas toxicológicas de C. macropomum expostos simultaneamente ao RD e hipóxia. Surpreendentemente, os animais expostos à hipóxia e à hipóxia mais RD tiveram seus níveis de expressão de hif-1 menores doque aqueles submetidos à normóxia e normóxia mais RD, sugerindo uma lesão celular maior nesses grupos. O oncogene ras apresentou expressão relativa maior nos animais contaminados com RD em normóxia, diminuindo sua expressão relativa nos animais expostos à hipóxia e RD, o que também pôde ser explicado pelas lesões celulares (vide abaixo). As enzimas de estresse oxidativo GST e CAT apresentaram maior atividade em ambos os tratamentos sob hipóxia, sendo capazes de minimizar os danos de estresse oxidativo nas membranas, o que foi evidenciado pela baixa taxa de lipoperoxidação (LPO). As alterações histológicas do fígado de C. macropomum expostos à normóxia mais RD, hipóxia e hipóxia mais RD foram similares, sendo que os peixes tiveram massiva ocorrência de necrose. O tambaqui se mostrou um excelente modelo para os estudos de genes relacionados ao câncer, complementado pelos marcadores moleculares como o oncogene ras e o gene hif-1

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-06-21T13:48:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Versão Final_Samara Souza (2).pdf: 2706874 bytes, checksum: 0e270573be068fdb37b99c2f5b654756 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T13:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Versão Final_Samara Souza (2).pdf: 2706874 bytes, checksum: 0e270573be068fdb37b99c2f5b654756 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The specific characteristics of Amazonian aquatic ecosystems, such as seasonal and daily variations in dissolved oxygen in water can aggravate the effects of aquatic contamination, increasing the damages caused by pollutants to aquatic organisms. Thus, the aim of the present study was to evaluate the physiological, biochemical, genotoxic, histopathological and genetic responses of Colossoma macropomum, emphasizing the expression of the gene TP53, a tumor supressor after naphthalene (Naph) contamination and subsequent hypoxia exposures. Firstly, the effects of Naph on metabolic rate at different water PO2, to set the critical oxygen tension (PO2 crit), was deternined. Therefore, tambaqui were intraperitoneally injeted with Naph (50 mg/kg), using corn oil as carrier, and maintained in individual glass containers under constant aeration. After 96 hours fish were transferred to respirometry chambers, submitted to progressive hypoxia, and the O2 consumption was monitored for the determination of PO2 crit. In the second experiment, fish received intraperitoneal injection of Naph (50 mg/kg), kept for 96 hours under normal oxygen conditions and, subsequently subjected to hypoxia during 6 hours. We observed that oxygen consumption and the critical oxygen tension in C. macropomum were not affected by Naph. Moreover, hematological parameters and plasma glucose were altered in response to hypoxia but not to Naph. Instead, Naph contamination and subsequent exposure to hypoxia altered the activity of biotransformation (GST) and antioxidant (CAT) enzymes with no effects on lipidic peroxidation. Exposure to Naph resulted in DNA damages without the influence of hypoxia. Hepatic lesions were moderate, and some were accentuated by further exposure to hypoxia. Naphthalene and hypoxia presented opposite effects on expression of the tumor suppressor TP53. The responses of C. macropomum to Naph were accentuated by hypoxia, mainly in the hepatic damage. Furthermore, hypoxia impaired transcription of TP53 in fish contaminated with Naph, demonstrating the importance of considering hypoxia as a risk factor for aquatic contamination, particularly where hypoxic conditions occur in a daily and seasonal basis. / As características particulares dos ecossistemas aquáticos amazônicos, como as variações sazonais e diárias na concentração de oxigênio dissolvido na água, podem agravar os efeitos da contaminação aquática, acentuando os danos causados por poluentes aos organismos aquáticos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar as respostas fisiológicas, bioquímicas, genotóxicas, histopatológicas e genéticas da espécie Colossoma macropomum, enfatizando a expressão do gene supressor tumoral TP53, após a contaminação por naftaleno e posterior exposição a hipóxia. Primeiramente, foi observado o efeito do naftaleno (Naph) na taxa metabólica dos animais em diferentes pressões de oxigênio para determinar a pressão crítica de oxigênio (PO2 crit), quando o animal passa de oxi-regulador para oxi-conformador. Para tanto, os peixes foram injetados intraperitonealmente com naftaleno (50 mg/kg), tendo o óleo de milho como carreador, mantidos durante 96 horas em recipientes de vidro sob aeração constante. Decorrido o tempo de exposição, os peixes foram transferidos para câmaras de respirometria, onde foram submetidos a hipóxia progressiva e o consumo de O2 foi monitorado para a determinação da PO2 crit. No segundo experimento, os peixes receberam injeção intraperitoneal de Naph (50 mg/kg) e, foram mantidos durante 96 horas em condições normais de oxigênio, posteriormente, foram submetidos a 6 horas de hipóxia. Os resultados demonstraram que o naftaleno não afetou o consumo de oxigênio e a pressão crítica de oxigênio em C. macropomum. Além disso, os parâmetros hematológicos e a glicose plasmática foram modulados apenas em resposta à hipóxia. Por outro lado, a contaminação com naftaleno e exposição posterior à hipóxia alterou a atividade de enzimas de biotransformação (GST) e antioxidante (CAT) sem efeitos sobre a lipoperoxidação. A contaminação com naftaleno resultou em danos à molécula de DNA sem, no entanto, que houvesse posterior influência da hipóxia. As lesões hepáticas foram moderadas, mas algumas foram acentuadas pela exposição à hipóxia. Naftaleno e hipóxia apresentaram efeitos opostos sobre à expressão do supressor tumoral TP53. As respostas de C. macropomum ao naftaleno foram acentuadas pela exposição à hipóxia, especialmente nos danos hepáticos, além disso, a hipóxia prejudicou a transcrição de TP53 em peixes contaminados com naftaleno, demonstrando a importância de se considerar a hipóxia como um fator de risco para a contaminação aquática, especialmente, em ambiente onde condições hipóxicas ocorrem diária e sazonalmente.

O primeiro experimento, teve o objetivo de comparar os efeitos da indução hormonal na qualidade espermática de Brycon insignis. Foram utilizados 12 reprodutores que tiveram uma alíquota do sêmen coletado e avaliado antes da indução hormonal (Ctrl) e em seguida foram divididos em tratamentos de acordo com o hormônio e dosagem recebida, Extrato de Hipófise de Carpa – EHC (T1 – 2,5 mg/kg-1 de peso vivo), análogos de GnRH sendo aplicado em duas dosagens diferentes (T2 – 0,7 mg/kg-1 de peso vivo e T3 – 1,4 mg/kg-1 de peso vivo). Dentre as análises utilizadas para comparar o efeito da indução e dos hormônios utilizados foram; taxa de motilidade – Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), onde foi observado um ligeiro aumento e concentração espermática – Ctrl (11,52 x109), T1 (4,37 x109), T2 (4,34 x109) e T3 (4,01 x109), que pode ser observado uma redução na concentração após a indução hormonal. No entanto a utilização de indutores hormonais não altera negativamente as características seminais de piabanha. No segundo experimento, o objetivo foi de avaliar a qualidade do sêmen diluído com três diluidores e resfriado a temperatura de 6 °C durante um período de 120 horas. Foram utilizados 32 machos, o liquido seminal era dividido em quatro tratamentos; sem diluição, diluído com BTS®, HBSS e ACP®, na proporção de 1:4 (sêmen:diluidor), as avaliações eram realizadas para; motilidade espermática, tempo de motilidade, morfologia espermática e vigor, no momento da diluição (tempo 0) e nos tempos seguintes de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a diluição. A taxa de fertilização e eclosão foi coletada apenas no momento da diluição do sêmen. Os resultados apontam que a diluição é eficaz para conservação do sêmen de C. macropomum, porém ainda por um curto período de tempo. A recomendação é que esse procedimento seja realiado com o diluidor BTS® por até 72 horas. No terceiro experimento, o objetivo foi classificar por meio de análise de clusters os reprodutores C. macropomum após a criopreservação seminal como sendo de baixo ou alto potencial de congelabilidade e correlacionar com as características do sêmen fresco e fenotípicas. Foram utilizados 25 machos, o sêmen de cada animal foi submetido ao mesmo protoloco de criopreservação que era composto de BTS®+DMF (90:10), e o sêmen diluído na proposção de 1:4. Os resultados demonstram que mesmo sobre as mesmas condições o liquido seminal apresenta diferentes variações, e através da análise de clusters foi possível diferenciar a formação de três grupos de reprodutores (G1, G2, G3). O G1 foi classificado como sendo de alta qualidade espermática após a criopreservação, porém as correlações demonstram que os animais com menor tamanho de cabeça apresentam FR melhores após a criopreservação, e possivelmente a MT pode ser utilizada como pré indicador de congelabilidade para reprodutores C. macropomum. / The first experiment aimed to compare the effects of hormonal induction on the spermatic quality of Brycon insignis. 12 broodstocks that had an aliquot of the semen collected and evaluated before to hormonal induction (Ctrl) were used and then divided into treatments according to the hormone and dosage received, Carpal Hypophysis Extract - EHC (T1 - 2.5 mg/Kg-1 live weight), GnRH analogs being administered in two different dosages (T2 - 0.7 mg/kg-1 live weight and T3 - 1.4 mg/kg-1 live weight). Among the analyzes used to compare the effect of induction and hormones used were: motility rate, that showed a slight increase, Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%) and sperm concentraction wich may be observed a reduction, Ctrl (11.52 x109), T1 (4.37 x109), T2 (4.34 x109) and T3 (4.01 x109). However, the use of hormone inducers does not negatively affect the seminal characteristics of piabanha. In the second experiment, the objective was to evaluate the quality of semen of the Colossoma macropomum diluted with three extenders and cooled to 6 °C for a period of 120 hours. 32 males were used, the seminal fluid was divided into four treatments; Without dilution, diluted with BTSTM, HBSS and ACPTM, at the ratio of 1:4 (semen:extender), evaluations were performed for; Sperm motility, sperm motility and vigor, at the time of dilution (time 0) and at the following times of 24, 48, 72, 96 and 120 hours after dilution. The rate of fertilization and hatching was collected only at the time of the semen dilution. The results indicate that the dilution is effective for the conservation of semen of C. macropomum, but still for a short period of time. The recommendation is that this procedure be performed with the BTSTM thinner for up to 72 hours. In the third experiment, the objective was to classify by means of clusters analysis the C. macropomum broodstock after seminal cryopreservation as being of low or high freeze potential and to correlate with the characteristics phenotypic and fresh semen. 25 males were used, the semen from each animal was submitted to the same cryopreservation protocol that was composed of BTSTM+DMF (90:10), and the semen diluted in the 1:4 ratio. The results show that even on the same conditions, the seminal fluid presents different variations, and through the analysis of clusters it was possible to differentiate the formation of three broodstock groups (G1, G2, G3). G1 was classified as being of high spermatic quality after cryopreservation, but correlations show that animals with smaller head sizes have better fertilization rate after cryopreservation, and possibly motility time can be used as a pre-freeze indicator for C. macropomum.

da severidade produzida pela baixa temperatura no processo de criopreservação. Neste estudo o objetivo foi avaliar a qualidade do sêmen de Colossoma macropomum pós-descongelamento, utilizando dimetilsulfóxido (DMSO) como crioprotetor combinado com duas soluções diluidoras (tratamentos): T1 (Glicose – 90,0 g/L, Citrato de Sódio - 6,0 g/L, EDTA - 1,5 g/L, Bicarbonato de Sódio - 1,5 g/L, Cloreto de Potássio - 0,8 g/L, Sulfato de Gertamicina - 0,2 g/mL) e T2 (Glicose - 90,0 g/L e Água de Coco em Pó - ACP® - 10,0 g/L). O sêmen de 26 animais machos, previamente analisados foi criopreservado em cinco momentos diferentes dentro do período reprodutivo, constituindo cinco pools. Quatro fêmeas foram utilizadas para observação dos índices de produtividade (taxas de fertilização e eclosão). Foram avaliados nos tratamentos, motilidade (Mot), tempo de motilidade (TMot), patologias espermáticas, taxa de fertilização e eclosão, integridade da membrana espermática, funcionalidade da mitocôndria e do DNA espermático. A Mot e o TMot não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos T1 e T2 e ambos foram inferiores ao sêmen in natura. O número de espermatozoides normais foi significativamente diferente (P<0,05) nos tratamentos T1 (15,1%) e T2 (21,9%), e ambos apresentaram uma redução no percentual de espermatozoides normais quando comparados ao sêmen in natura (57,4%).Quanto as taxas de fertilização e eclosão não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos avaliados (T1 e T2). Após a criopreservação dos espermatozoides, não foram verificadas diferenças (P>0,05) entre os tratamentos, na funcionalidade da mitocôndria e integridade do DNA espermático. Quanto a integridade da membrana, no T1 (53,4%) apresentou maior percentual (P<0,05) de espermatozoides com a membrana integra do que no T2 (43,7%). A solução crioprotetora composta com duas soluções testadas não foram efetivas na proteção estrutural da célula espermática. Porém, mantiveram integro em quase que toda sua totalidade o DNA dos espermatozoides de C. macropomum. / Cryoprotectant solutions aim to protect spermatozoa from injuries produced by low temperature in the cryopreservation process. In this study we evaluated the quality of Colossoma macropomum semen after thawing, using dimethyl sulfoxide (DMSO) as a cryoprotectant combined with two extender solutions (treatments): T1 (Glucose - 90.0 g/L, Sodium Citrate - 6 0 g/L, EDTA - 1.5 g/L, Sodium Bicarbonate - 1.5 g/L, Potassium Chloride - 0.8 g/L, Gertamicine Sulfate - 0.2 g/mL) and T2 (Glucose - 90.0 g/L and Powder Coconut Water - ACP® - 10.0 g/L). Semen from 26 males, previously cryopreserved was analyzed at five different times throughout the reproductive season, forming five pools. Four females were used for observation of reproductive indexes (fertilization and hatching rate). The following parameters were assessed: motility (Mot), motility time (TMot) sperm pathologies, fertilization rate and hatching rate, sperm membrane integrity, mitochondrial and sperm DNA function. The Mot and TMot did not differ (P> 0.05) between T1 and T2 and both showed lower values compared to fresh semen. The number of normal spermatozoa was significantly different (P <0.05) in T1 (15.1%) and T2 (21.9%) treatments, and both showed a reduction in the percentage of normal spermatozoa when compared to fresh semen (57.4%). Regarding fertilization and hatching rates, there was no difference (P> 0.05) between the treatments (T1 and T2). After sperm cryopreservation, no differences were evidenced (P> 0.05) between the treatments for mitochondrial functionality and sperm DNA integrity. T1showed a higher membrane integrity (53.4%) than that found in T2 (43.7%). The cryoprotectant solution tested in this study did not work effectively in protecting spermatic cells from structural damages. However, majority of the cells remained with intact DNA after thawing.

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-11-03T15:26:26Z No. of bitstreams: 2 Vinícius Faria de Oliveira_Dissertaçao (Versão Final).pdf: 1315708 bytes, checksum: 88b3eabf4c4bb0d057f2684af85f0bc7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-03T15:26:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Vinícius Faria de Oliveira_Dissertaçao (Versão Final).pdf: 1315708 bytes, checksum: 88b3eabf4c4bb0d057f2684af85f0bc7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-08-21 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Hypoxia events are common in the aquatic ecosystems of the Amazon. As a result, numerous adaptive adjustments to optimize oxygen uptake are known in the fish of this region, including, but not limited to, increased opercular beats, the release of circulating blood cells, metabolic suppression, and reduction of organic phosphate concentration in erythrocytes. This study aimed to find out how the regulation of the concentration of guanosine triphosphate ([GTP]) occurs in the red cells of tambaqui exposed to hypoxia. GTP by acting as a negative modulator of the affinity of hemoglobin with O 2 decreases oxygen uptake; thus, a reduction of [GTP] in hypoxia represents a strategy to improve the transfer of oxygen to tissues. An important cellular process that may be involved in the reduction of GTP levels in erythrocytes is the synthesis of proteins, specifically the translation stage. At this point there is an element designate eIF2α, which requires GTP to be able to recruit the RNAt Met i and continue the formation of the translation machinery. Thus, we investigated the relative expression of two eIFs (eIF2α and eIF3A) by real-time PCR and quantified the GTP in erythrocytes of tambaqui juveniles exposed to normoxia, four exposures to hypoxia (<1 mgO 2 /L) (30, 140, 200 e 260 min) and recovery from hypoxia (240 e 480 min) in >6.0 mgO 2 /L. Our results showed an increase in the relative expression of the two genes analyzed at practically all times of exposure to hypoxia. eIF2α gene was not elevated relatively to the control group at 30 min only. The concentrations of GTP were sharply reduced until the group exposed to 140 min of hypoxia, remaining practically stable until 480 min of recovery. In this way, we noticed that the decrease in the [GTP] occurred between the 30 and 140 min of hypoxia. We confirmed that Colossoma macropomum specimens were hypoxic by high plasma levels of glucose and lactate of animals subjected to low oxygen availability in water. The increase in the relative expression of the eIFs at the same time as a sharp reduction in the GTP concentration in the tambaqui erythrocytes a relationship between the intensity of the protein synthesis and the consumption of GTP molecules. However, during hypoxia, a severe metabolic suppression occurs to establish a balance between production and consumption of ATP, since the primary source of this compound is compromised. As a consequence an overall decrease in protein synthesis is observed. On the other hand, many genes linked to the mechanisms of hypoxia response are regulated positively, increasing their transcripts in the cell, which, to become functional products, depend on an elevation of the translation rate, even if only transient. This phenomenon contributes to the metabolic reorganization, essential for greater resistance of organisms to hypoxia. / Eventos de hipóxia são comuns nos ecossistemas aquáticos da Amazônia. Como resultado, inúmeros ajustes adaptativos voltados a otimizar a captação de oxigênio são conhecidos nos peixes dessa região, que incluem, entre outros, aumento dos batimentos operculares, liberação de células sanguíneas na circulação, supressão metabólica e redução da concentração dos fosfatos orgânicos nos eritrócitos. O principal objetivo deste estudo foi desvendar como ocorre a regulação da concentração do trifosfato de guanosina ([GTP]) nas células vermelhas do tambaqui em hipóxia. O GTP diminui a eficiência no transporte de oxigênio porque atua como modulador negativo da afinidade da hemoglobina com O 2 . Dessa forma, a diminuição da [GTP] em hipóxia representa uma estratégia para melhorar a transferência de oxigênio para os tecidos. Um importante processo celular que pode estar envolvido com a queda na concentração de GTP nos eritrócitos é a síntese de proteínas, especificamente a etapa de tradução. Nesse ponto atua um elemento denominado eIF2α, o qual necessita de GTP para poder recrutar o RNAt Met i e dar continuidade à formação da maquinaria de tradução. Sendo assim, investigamos a expressão relativa de dois eIFs (eIF2α e eIF3A) por meio de PCR em tempo real e quantificamos o GTP nos eritrócitos de juvenis de tambaqui expostos à normóxia, quatro exposições à hipóxia (<1 mgO 2 /L) (30, 140, 200 e 260 min) e recuperação da hipóxia (240 e 480 min) em >6.0 mgO 2 /L. Nossos resultados mostraram claro aumento da expressão relativa dos dois genes analisados em praticamente todos os tempos de exposição àhipóxia; já que apenas no tempo 30 min o gene eIF2α não apresentou-se elevado em relação ao grupo controle. As concentrações de GTP sofreram forte redução até o grupo exposto a 140 min de hipóxia, mantendo-se praticamente estável até 480 min de recuperação. Sendo assim, notamos que a queda na [GTP] ocorreu entre os tempos 30 min e 140 min de hipóxia. Confirmamos que os exemplares de Colossoma macropomum estavam em hipóxia por meio dos altos níveis de glicose e lactato plasmáticos quantificados nos animais submetidos a baixa disponibilidade de oxigênio na água. O incremento na expressão relativa dos eIFs ao mesmo tempo em que houve a brusca redução na concentração de GTP nos eritrócitos do tambaqui constitui evidência a favor da relação entre intensidade da síntese de proteínas e consumo de moléculas de GTP. No entanto, durante a hipóxia, ocorre uma séria supressão metabólica para estabelecer um equilíbrio entre a produção e o consumo de ATP, uma vez que a principal fonte geradora desse composto encontra-se comprometida. Isso resulta em uma diminuição global na síntese de proteínas. Por outro lado, inúmeros genes ligados aos mecanismos de resposta à hipóxia são regulados positivamente, aumentando seus transcritos na célula, os quais, para se tornarem produtos funcionais dependem de uma elevação da taxa de tradução, mesmo que apenas transitória. Esse fenômeno contribui para a reorganização metabólica, essencial para maior resistência dos organismos à hipóxia.

da severidade produzida pela baixa temperatura no processo de criopreservação. Neste estudo o objetivo foi avaliar a qualidade do sêmen de Colossoma macropomum pós-descongelamento, utilizando dimetilsulfóxido (DMSO) como crioprotetor combinado com duas soluções diluidoras (tratamentos): T1 (Glicose – 90,0 g/L, Citrato de Sódio - 6,0 g/L, EDTA - 1,5 g/L, Bicarbonato de Sódio - 1,5 g/L, Cloreto de Potássio - 0,8 g/L, Sulfato de Gertamicina - 0,2 g/mL) e T2 (Glicose - 90,0 g/L e Água de Coco em Pó - ACP® - 10,0 g/L). O sêmen de 26 animais machos, previamente analisados foi criopreservado em cinco momentos diferentes dentro do período reprodutivo, constituindo cinco pools. Quatro fêmeas foram utilizadas para observação dos índices de produtividade (taxas de fertilização e eclosão). Foram avaliados nos tratamentos, motilidade (Mot), tempo de motilidade (TMot), patologias espermáticas, taxa de fertilização e eclosão, integridade da membrana espermática, funcionalidade da mitocôndria e do DNA espermático. A Mot e o TMot não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos T1 e T2 e ambos foram inferiores ao sêmen in natura. O número de espermatozoides normais foi significativamente diferente (P<0,05) nos tratamentos T1 (15,1%) e T2 (21,9%), e ambos apresentaram uma redução no percentual de espermatozoides normais quando comparados ao sêmen in natura (57,4%).Quanto as taxas de fertilização e eclosão não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos avaliados (T1 e T2). Após a criopreservação dos espermatozoides, não foram verificadas diferenças (P>0,05) entre os tratamentos, na funcionalidade da mitocôndria e integridade do DNA espermático. Quanto a integridade da membrana, no T1 (53,4%) apresentou maior percentual (P<0,05) de espermatozoides com a membrana integra do que no T2 (43,7%). A solução crioprotetora composta com duas soluções testadas não foram efetivas na proteção estrutural da célula espermática. Porém, mantiveram integro em quase que toda sua totalidade o DNA dos espermatozoides de C. macropomum. / Cryoprotectant solutions aim to protect spermatozoa from injuries produced by low temperature in the cryopreservation process. In this study we evaluated the quality of Colossoma macropomum semen after thawing, using dimethyl sulfoxide (DMSO) as a cryoprotectant combined with two extender solutions (treatments): T1 (Glucose - 90.0 g/L, Sodium Citrate - 6 0 g/L, EDTA - 1.5 g/L, Sodium Bicarbonate - 1.5 g/L, Potassium Chloride - 0.8 g/L, Gertamicine Sulfate - 0.2 g/mL) and T2 (Glucose - 90.0 g/L and Powder Coconut Water - ACP® - 10.0 g/L). Semen from 26 males, previously cryopreserved was analyzed at five different times throughout the reproductive season, forming five pools. Four females were used for observation of reproductive indexes (fertilization and hatching rate). The following parameters were assessed: motility (Mot), motility time (TMot) sperm pathologies, fertilization rate and hatching rate, sperm membrane integrity, mitochondrial and sperm DNA function. The Mot and TMot did not differ (P> 0.05) between T1 and T2 and both showed lower values compared to fresh semen. The number of normal spermatozoa was significantly different (P <0.05) in T1 (15.1%) and T2 (21.9%) treatments, and both showed a reduction in the percentage of normal spermatozoa when compared to fresh semen (57.4%). Regarding fertilization and hatching rates, there was no difference (P> 0.05) between the treatments (T1 and T2). After sperm cryopreservation, no differences were evidenced (P> 0.05) between the treatments for mitochondrial functionality and sperm DNA integrity. T1showed a higher membrane integrity (53.4%) than that found in T2 (43.7%). The cryoprotectant solution tested in this study did not work effectively in protecting spermatic cells from structural damages. However, majority of the cells remained with intact DNA after thawing.