Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O (-)-a-bisabolol, um Ãlcool sesquiterpenico comumente obtido de Matricaria chamomilla e de espÃcies do gÃnero Vanillosmopsis, foi testado em modelos animais padronizado de nocicepÃÃo, inflamaÃÃo e Ãlcera gÃstrica em camundongos. Nestes ensaios, o (-)-a-bisabolol foi utilizado nas doses de 25 e 50 mg/Kg nos modelos de nocicepÃÃo e 100 e 200 mg/Kg nos modelos de inflamaÃÃo e Ãlceras gÃstricas, administrados por via oral. O (-)-a-bisabolol demonstrou possuir atividade antinociceptiva nos modelos de nocicepÃÃo visceral induzida por Ãcido acÃtico intraperitoneal e na segunda fase do teste de nocicepÃÃo induzida pela injeÃÃo intraplantar de formalina. O (-)-a-bisabolol nÃo demonstrou atividade no modelo de nocicepÃÃo tÃrmica da placa quente. Esses achados sugerem que a aÃÃo antinociceptiva do (-)- a-bisabolol nÃo està ligada a mecanismos centrais e deve estar relacionada com o processo inflamatÃrio. Nos modelos de edema de pata induzidos por carragenina e dextrano os animais tratados com (-)-a-bisabolol exibiram edemas menores em comparaÃÃo com os animais tratados apenas com veÃculo. (-)-a-bisabolol foi capaz de diminuir os edemas de pata induzidos por 5-HT, mas nÃo os edemas induzidos por histamina, assim, pode-se relacionar a atividade anti-inflamatÃria do (-)-a-bisabolol a sua interferÃncia na aÃÃo/liberaÃÃo ou na sÃntese/metabolismo da 5-HT. O (-)-a-bisabolol mostrou ter atividade gastroprotetoras frente Ãs lesÃes gÃstricas induzidas por etanol absoluto ou indometacina. O mecanismo dessa aÃÃo foi testado farmacologicamente, realizando prÃ-tratamentos com L-NAME, Glibenclamida e Indometacina. Estes experimentos demonstraram que a aÃÃo gastroprotetora do (-)-a- bisabolol parece nÃo envolver o Ãxido nÃtrico, os canais de potÃssio ATP-dependentes ou a sÃntese de prostaglandinas. Por outro lado, a quantificaÃÃo de GSH nos tecidos gÃstricos dos animais nÃo lesionados e lesionados por etanol ou indometacina mostraram que o tratamento com (-)-a-bisabolol atenua o decrÃscimo de GSH associado as lesÃes pelos agentes lesivos, mas nÃo aumenta a sua quantidade nos estÃmagos dos animais nÃo tratados com etanol ou indometacina. Dessa forma o (-)-a-bisabolol aumenta a disponibilidade de GSH no tecido gÃstrico, possuindo aÃÃo antioxidante in vivo, o que nos permite associar esse achado a sua aÃÃo gastroprotetora. / (-)-a-bisabolol, a sesquiterpenic Ãlcool, is commonly obtained from Matricaria chamomilla and from species of Vanillosmopsis, it was tested in animal standardized models of nociception, inflamation and gastric ulcer in mice. In this assays, (-)-a-bisabolol was used in the doses of 25 and 50 mg/Kg in the models of nociception and 100 and 200 mg/Kg in the models of inflamatiom and gastric ulcers, administered by via oral. (-)-a-bisabolol demonstrated to have an antinociceptive activity in the models of visceral nociception induced by intraperitoneal acetic acid and in the second phase of the test nociception was induced by intraplantar administration of formaline. (-)-a-bisabolol did not demonstrate activity in the thermal nociception model of hot plate. These findings suggests that the antinociceptive action of (-)-a-bisabolol is not linked to central mechanisms and may be related with pre inflamatory process. In the models of paw oedema induced by carragenine and dextran the animals treated with (-)-a-bisabolol showed smaller oedemas as compared to animals treated only with the vehicle. (-)-a-bisabolol was capable to reduce the paw oedemas induced by 5- HT, but not the oedema induced by histamine, so it could relate the antiinflamatory activity of (-)-a-bisabolol to the interference in the action/liberation or in the systesis/metabolism of 5- HT. (-)-a-bisabolol demostrated having gastroprotective activity in the absolute ethanol and indomethacin-induced gastric lesions. The mechanism of this action was pharmacologicaly tested, doing pre-treatments with L-NAME, Glibenclamide and Indomethacin. These experiments demonstrated that tha gastroprotective action of (-)-a-bisabolol seems not to be involved the nitric oxide, potassium channels ATP-dependents or the sysntesis of prostaglandines. By the way, the quantification of GSH in the gastric tissues of not lesioned animals e lesionated by ethanol or indomethacin showed that the treatment with (-)-a- bisabolol atenuate the decrease of GSH associated with the lesive agents, but it did not increase its levels in the animals that not recieve ethanol or indomethacin. This way (-)-a- bisabolol increase the disponibility of GSH in the gastric tissue, having in vivo antioxidant activity, that allows us to associate this finding to its gastroprotective action.

Neste trabalho descrevemos vários estudos sintéticos realizados com o objetivo de desenvolver um método para a preparação de Microbiotol (1). A estratégia planejada consistiu em preparar o anel ciclopentano que constitui a metade esquerda da fórmula de (1) acima por contração de anel de isoforona (58), e depois juntar uma cadeia aberta que seria posteriormente ciclizada para formar o segundo anel. A contração do anel da isoforona (58) foi realizada de acordo com as reações a seguir: Os compostos de fórmula geral (85) apresenta considerável congestionamento estérico e resistem fortemente à adição de nucleófilos. Neste trabalho desenvolvemos apenas estudos de adição de derivados de levulinato de metila, este mesmo apresentando problemas de reatividade devido a problemas estéricos, e mostramos que este não é o caminho adequado para adicionar um nucleófilo aos compostos (85). / In this work we describe several synthetic studies realized with the purpose of developing a method for the preparation of Microbiotol (1). Our synthetic strategy consisted of preparing the ciclopentane ring which is the left moiety of structure (1) by a ring contraction , starting from isophorone (58), and then add an open chain which would be cyclized to for second ring. The ring contraction was realised according to the following steps. The compounds of general structure (58) have a considerable steric hindrance and are strongly resistant to the addition of a nucleophile. In this work we used only derivatives of methyl levulinate as nucleophiles ; these substrates are themselves sterically hindered, and we showed that this is not the appropriate method to add a nucleophile to compounds (85).

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / A β-ionona (4-[2,6,6-trimetill-1-ciclohexeno]-3-buten-2-ona) à um sesquiterpeno (terpenoide degradado - C13) presente na estrutura molecular do retinol, β-caroteno e Ãcido retinÃico, sendo formado a partir da via do mevalonato em diferentes tipos de plantas. As pesquisas sobre as atividades biolÃgicas da β-ionona ainda sÃo incipientes e poucos resultados com este composto sÃo encontrados na literatura. Este estudo visa investigar a atividade da β-ionona no modelo de lesÃo gÃstrica induzida por etanol. A manipulaÃÃo dos animais e os protocolos experimentais foram registrados na ComissÃo de Ãtica em Pesquisa Animal (CEPA) sob o nÃmero 87/2011. Camundongos Swiss (n = 8), em jejum de 18 h, receberam, por gavagem, BI nas doses de 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg. ApÃs 60 min da administraÃÃo de BI os animais receberam 0,2 ml de etanol absoluto por gavagem. Decorridos 60 min dessa administraÃÃo, os animais foram sacrificados, os estÃmagos removidos e analisados para determinaÃÃo do Ãndice de lesÃo. A avaliaÃÃo histopatolÃgica do estÃmago foi realizada atribuindo escores aos parÃmetros de edema, hemorragia, perda de cÃlulas epiteliais e infiltrado inflamatÃrio. Para investigar o envolvimento de mediadores no efeito de BI, os animais receberam indometacina (10 mg/kg; v.o.), L-NAME (20 mg/kg; i.p.), ODQ (10 mg/kg; i.p.), glibenclamida (5 mg/kg; i.p.) e capsazepina (5 mg/kg; i.p) antes do tratamento com BI (12,5 mg/kg; v.o.). Misoprostol (50 Âg/kg v.o), L-arginina (600 mg/kg; i.p.), diazÃxido (3 mg/kg; i.p.) e capsaicina (0,3 mg/kg; v.o.) foram utilizados padrÃo positivo. Os nÃveis de nitrito e glutationa foram dosados na mucosa do estÃmago para investigar o efeito da BI sobre os nÃveis de NO e seu efeito antioxidante, respectivamente. O tratamento dos animais com a BI (12,5; 25; 50 e 100 mg/kg), reduziu significativamente e de forma dose-dependente, a Ãrea da lesÃo gÃstrica induzida pelo etanol para (11,41  2,0; 7,92  1,8*; 6,32  2,0 e 1,43  0,42 % respectivamente). Entretanto, a BI na menor dose avaliada (6,25 mg/kg), nÃo apresentou reduÃÃo significativa da Ãrea ulcerada (21,97  1,8%). A administraÃÃo de BI reduziu os escores de hemorragia, edema e a perda de cÃlulas epiteliais. A Indometacina e capsazepina nÃo foram capazes de reverter o efeito protetor da BI. O prÃ-tratamento dos animais com L-NAME, ODQ e Glibenclamida reverteu o efeito gastroprotetora da BI, mostrando o envolvimento do NO e canais KATP no seu mecanismo de aÃÃo. O grupo prÃ-tratado com BI (12,5 mg/kg v.o.) mostrou uma maior concentraÃÃo de nitrito (24,18 mM) quando comparado ao grupo controle (17,68 mM). O prà tratamento com BI foi efetivo em proteger contra o dano oxidativo (346,4  60,32 Âg/g de tecido), evitando a depleÃÃo nos nÃveis de GSH no tecido. Estes resultados indicam que a β-ionona possui efeito gastroprotetor no modelo de LesÃo GÃstrica induzida por Etanol mediado pela via NOGMPcKATP e atravÃs da mediaÃÃo do terpeno na depleÃÃo dos nÃveis de GSH provocado pelo etanol. / The β-ionone (4-[2,6,6-cyclohexene-1-trimetill]-3-butene-2-one) is a sesquiterpene (degraded terpenoid - C13) present in the molecular structure of retinol and β-carotene acid retinoic being formed from the mevalonate pathway in different types of plants. Research on the biological activities of β-ionone are still incipient and limited results with this compound are found in the literature. This study aims to investigate the activity of β-ionone in the model of ethanol-induced gastric injury. Handling of animals and experimental protocols were recorded by the Ethics Committee on Animal Research (CEPA) under number 87/2011. Swiss mice (n = 8), fasted 18 hours, were orally treated with BI at doses of 6.25, 12.5, 25, 50 and 100mg/kg. After 60 min of administration BI animals received 0.2 ml of absolute ethanol po. After 60 min this administration, the animals were sacrificed, the stomachs removed and analyzed to determine the rate of injury. Histologic examination of the stomach was performed by assigning scores to the parameters of edema, hemorrhage, loss of epithelial cells and inflammatory infiltrate. To investigate the role of mediators in BI effect, animals received indomethacin (10 mg / kg, po), L-NAME (20 mg / kg, ip) ODQ (10 mg / kg, ip), glibenclamide (5 mg / kg, ip) and capsazepine (5 mg / kg, ip) before treatment with BI (12.5 mg / kg, po). Misoprostol (50 mg / kg po), L-arginine (600 mg / kg, ip), diazoxide (3 mg / kg, ip) and capsaicin (0.3 mg / kg, po) was used positive pattern. The levels of nitrite and glutathione were measured in the stomach mucosa to investigate the effect of BI on the levels of NO and its antioxidant effect, respectively. Treatment of animals with the BI (12.5, 25, 50 and 100 mg / kg) reduced significantly and dose-dependent manner, the area of ethanol-induced gastric lesion to (11.41  2.0, 7 92 *  1.8, 6.32  2.0 and 1.43  0.42% respectively). However, the BI lowest tested dose (6.25 mg / kg) showed no significant reduction of the ulcerated area (21.97  1.8%). The administration of BI scores decreased hemorrhage, edema and loss of epithelial cells. The capsazepine and indomethacin were not able to reverse the protective effect of BI. Pretreatment of animals with L-NAME, ODQ and glibenclamide reversed the gastroprotective effect of BI, showing the involvement of NO and KATP channels in its mechanism of action. The group pretreated with BI (12.5 mg / kg po) showed a higher concentration of nitrite (24.18 mM) compared to the control group (17.68 mM). The pretreatment BI was effective in protecting against oxidative damage (346.4  60.32 mg / g of tissue), preventing depletion of GSH levels in tissue. These results indicate that the β-ionone has gastroprotective effect in the model of ethanol-induced gastric injury mediated by the NO cGMP K ATP and terpene through the mediation of the GSH depletion induced by ethanol.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-11-18T17:15:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jorge Luiz Vieira dos Anjos.pdf: 1923779 bytes, checksum: 68298e97b9af0abd00eec5540da11ee7 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-11-18T17:15:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jorge Luiz Vieira dos Anjos.pdf: 1923779 bytes, checksum: 68298e97b9af0abd00eec5540da11ee7 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T17:16:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jorge Luiz Vieira dos Anjos.pdf: 1923779 bytes, checksum: 68298e97b9af0abd00eec5540da11ee7 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2008-02-18 / The interaction of the skin penetration enhancers DL-menthol, -terpineol, 1,8-cineole and (+)-limonene with membranes of the uppermost skin layer, the stratum corneum (SC) and with multilamellar vesicles from 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphaticylcholine (DPPC)is investigated by electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy using spin-labeled analogs of androstanol ASL),stearic acid (5-DSA), methyl stearate (5-DMS) and a small spin label 2,2,6,6-tetramethylpiperedine-1-oxyl (TEMPO). The terpenes were added to SC samples using ethanol as a co-solvent (20% ethanol in the buffer), the effect of ethanol on the SC also was investigated. The spectra of spin labels ASL, 5-DSA and 5-DMS in the membranes of SC are characterized by the presence of two spectral components differing in mobility.Component 1 was attributed to the spin labels H-bonded to the headgroups, while component 2 was assigned to the spin labels H-bonded to water molecules or temporally non-hydrogen-bonded. EPR results showed that ethanol in the range 0-70% did not alter the fluidity in SC membranes or the relative fractions of these two components. Instead, ethanol only caused a selective extraction of spin labels, indicating that ethanol acts as extractor and not as fluidizer when facilitates molecular permeation in the skin. Addition of 1% DLmenthol to the solvent containing 20% ethanol increases both the mobility and the fraction of spin labels in the component 2 (more mobile spectral component). Similarly, with the addition of 1,8-cineole, the spin probes were gradually transferred from the motionally more restricted component 1 to the more mobile component 2. The spectrum of the spin label TEMPO in the membranes of SC allows for the determination of the actual partition coefficient and rotational diffusion rates of the spin probe in the aqueous and hydrocarbon environments. The enthalpy changes,H°,to transfer the spin probe from the aqueous to the hydrocarbon phase, as well as the activation energies associated to its rotational motion, were considerably smaller for SC when compared to DPPC, indicating less pronounced thermal reorganizations for SC samples. For DPPC,all terpenes increased both the partition coefficient and the rotational diffusion rate of the spin label in the membrane, except in the liquid-crystalline phase. These results suggest that the terpenes,effectively acting as spacers in the membrane,fluidize the lipids and cause ruptures in the hydrogen-bonded network of the membrane-water interface, with consequent displacements of spin probes towards the hydrophobic core. The EPR spectra of maleimide derivative spin label (6-MSL)covalently attached to stratum corneum proteins indicate that 1,8-cineole does not alter the dynamics of protein backbones.Instead, this terpene only increases the solvent s ability to dissolve and mobilize the nitroxide side chain, which is in agreement with its low irritation response. / A interação dos aumentadores de permeação da pele DL-mentol, -terpineol, 1,8-cineole e (+)-limoneno com as membranas da camada mais externa da pele, o estrato córneo (EC) e com vesículas multilamelares de 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphaticylcholine (DPPC) foi investigado por espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica (RPE) utilizando marcadores de spin análogos do androstanol (ASL), acido esteárico (5-DSA) e estearato de metila (5-DMS), além de um pequeno marcador anfifílico, o 2,2,6,6-tetramethylpiperedine-1-oxyl (TEMPO), que se particiona entre as fases aquosa e hidrocarbônica. Como os terpenos foram adicionados ao EC usando soluções do etanol a 20% no tampão, foram também investigados os efeitos do etanol sobre as membranas do EC. Os espectros dos marcadores de spin ASL, 5-DSA e 5-DMS nas membranas de EC são caracterizados pela presença de duas componentes espectrais diferindo em mobilidade. A componente 1 foi atribuída aos marcadores de spin que formam ligações de hidrogênio com os grupos polares da membrana, enquanto que a componente 2 foi atribuída aos marcadores de spin que formam ligações de hidrogênio com as moléculas de água ou que, temporariamente, não estão formando ligações de hidrogênio. Os resultados de RPE mostraram que o etanol em concentrações variando de 0-70% não causa alteração de fluidez nem alteração das frações relativas das duas componentes espectrais. Ao invés disso, o etanol apenas causou uma seletiva extração dos marcadores lipídicos, indicando que os efeitos do etanol como facilitador advém de sua capacidade de extrair lipídios da membrana. Com a adição de 1% de L-mentol ao solvente contendo 20% de etanol houve um aumento tanto da mobilidade quanto da fração dos marcadores de spin da componente 2 (componente espectral mais móvel). Analogamente, com a adição de 1,8-cineole, os marcadores de spin foram gradualmente transferidos da componente 1, de mobilidade mais restrita, para a componente 2 mais móvel. O espectro do marcador de spin TEMPO nas membranas de EC permite determinar o coeficiente de partição e a taxa de difusão rotacional do marcador de spin nos ambientes aquoso e hidrofóbico. As mudanças de entalpia, H°, para transferir o marcador de spin da fase aquosa para fase hidrocarbônica, bem como as energias de ativação associadas com o movimento rotacional, foram consideravelmente menores para o EC em relação às amostras de DPPC, indicando reorganizações térmicas menos pronunciadas para as membranas do EC. Para DPPC, todos os terpenos aumentaram tanto o coeficiente de partição quanto a taxa de difusão rotacional dos marcadores de spin na membrana, exceto na fase líquido-cristalina. Estes resultados sugerem que os terpenos agem efetivamente como espaçadores dos lipídios da membrana reduzindo seu empacotamento e aumentando sua fluidez, desse modo causando rupturas da rede de ligações de hidrogênio na interface membrana-água e assim gerando deslocamentos dos marcadores de spin para o core hidrofóbico. O espectro de RPE do marcador de spin derivado do maleimido (6-MSL) covalentemente ligado às proteínas do EC indicou que o 1,8-cineole não altera a dinâmica do esqueleto protéico. Ao invés disso, este terpeno apenas aumenta a habilidade do solvente em dissolver e mobilizar a cadeia lateral do nitróxido, o que está em acordo com seu baixo potencial de irritação.

Submitted by Taiwany Oliveira (taiwanyrodriguess@gmail.com) on 2018-10-22T14:08:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) minha tese pronta em pdf.pdf: 3260829 bytes, checksum: 4f79fe4884cb35fde794ffb3be8d205b (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Roberto Gomes (mrobertosg@gmail.com) on 2018-10-22T15:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) minha tese pronta em pdf.pdf: 3260829 bytes, checksum: 4f79fe4884cb35fde794ffb3be8d205b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-23T14:13:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) minha tese pronta em pdf.pdf: 3260829 bytes, checksum: 4f79fe4884cb35fde794ffb3be8d205b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-23T14:13:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) minha tese pronta em pdf.pdf: 3260829 bytes, checksum: 4f79fe4884cb35fde794ffb3be8d205b (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Copaifera multijuga Hayne is a large plant species, popularly known as copaiba, native to Latin America and Africa. They are widely used in Amazonian folk medicine, due to the properties of oleoresin extracted from the trunk of their trees, mainly used as: diuretic, laxative, anti-tetanic, anti-inflammatory, antitussive, healing and anti-tumor. Therefore, it is of great importance for research aimed at identifying in plants substances with potential medical and biotechnological purposes. Therefore, this work aimed to search for the transcriptome of C. multijuga Hayne, which was sequenced using the Roche 454 platform, obtaining a total of 638,576 reads, assembled using the de novo methodology using the MIRA and TRINITY platforms. Being generated, from the assembly by TRINITY 53.319 contigs and 62.839 by assembly MIRA. The transcriptome annotation was performed using BLASTx (NCBI) and the functional annotation through the Gene Ontology (GO) bank. The results were categorized according to GO, where the contigs were grouped in the categories: "Cell Component" with 6.249 contigs involved in this category, "Molecular Function" with a total of 17.208 contigs and "Biological Process" with 9,499 contigs. In the three categories the contigs evidenced are involved in the primary plant metabolism. A total of 184 unigenes were detected in 22 clusters, mainly involved in responses to plant oxidative stress, terpenes, important metabolites involved in the formation of copaiba oleoresin, diterpenes (resinous portion of oleoresin) and sesquiterpenes (volatile components of oil) and unigenes related to vegetal pigmentation such as: flavonoids, carotenoids and anthocyanins. In phylogenetic analysis, evolutionary comparisons of terpene synthase enzymes, copaiba oil formation components, with enzymes from the NCBI database were made. C. multijuga TPS4-2 unigene had similarity to other Copaifera TPS4-2 terpene sequences available from the bank. Thus, in this work the transcriptome of C. multijuga was carried out with new assembly and annotation, which leads to the perspective of studies with the unigenes encoding enzymes components of the oleoresin evidenced in this work, aiming with this future research for biotechnological purposes. / Copaifera multijuga Hayne é uma espécie de planta de grande porte, popularmente conhecida como copaíba, nativa da América Latina e da África. São amplamente utilizadas na medicina popular amazônica, devido as propriedades do óleo-resina extraído do tronco de suas árvores, utilizado principalmente como: diurético, laxativo, antitetânico, anti-inflamatório, antitussígeno, cicatrizante e anti-tumoral. Sendo, portanto, de grande importância para pesquisas que visem identificar nas plantas substâncias com potenciais finalidades médicas e biotecnológicas. Por isto, este trabalho visou pesquisar o transcriptoma de C. multijuga Hayne, o qual foi sequênciado utilizando a plataforma 454 Roche, sendo obtido um total de 638.576 reads, montados através da metodologia de novo com auxílio das plataformas MIRA e TRINITY. Sendo gerados, a partir da montagem por TRINITY 53.319 contigs e 62.839 pela montagem MIRA. A anotação do transcriptoma foi realizada utilizando BLASTx (NCBI) e a anotação funcional através do banco Gene Ontology (GO). Os resultados obtidos foram categorizados de acordo com GO, onde os unigenes foram agrupados nas categorias: “Componente Celular” com 6.249 contigs envolvidos nesta categoria, “Função Molecular” com total 17.208 contigs e “Processo Biológico” com 9.499 contigs. Nas três categorias os contigs evidenciados estão envolvidos no metabolismo primário vegetal. Já do metabolismo secundário foram detectados 184 unigenes, sendo organizados em 22 clusters, envolvidos principalmente em respostas ao estresse oxidativo vegetal, compostos terpenos, importantes metabólitos envolvidos na formação do óleo-resina de copaíba, diterpenos (porção resinosa do óleo-resina) e sesquiterpenos (componentes voláteis do óleo) e unigenes relacionados com a pigmentação vegetal tais como: flavonóides, carotenóides e antocianinas. Na análise filogenética foram feitas comparações evolutivas de enzimas de terpenos sintases, componentes de formação do óleo de copaíba, com enzimas do banco de dados NCBI. O unigene de TPS4-2 de C. multijuga mostrou-se mais próximo a outras sequências de terpenos TPS4-2 de Copaifera disponíveis no banco. Com isto, neste trabalho realizou-se o transcriptoma de C. multijuga com a montagem de novo e anotação o que leva a perspectiva de estudos com os unigenes codificadores de enzimas componentes do óleo-resina evidenciados neste trabalho, visando com isto futuras pesquisas para fins biotecnológicos.

Neste trabalho descrevemos vários estudos sintéticos realizados com o objetivo de desenvolver um método para a preparação de Microbiotol (1). A estratégia planejada consistiu em preparar o anel ciclopentano que constitui a metade esquerda da fórmula de (1) acima por contração de anel de isoforona (58), e depois juntar uma cadeia aberta que seria posteriormente ciclizada para formar o segundo anel. A contração do anel da isoforona (58) foi realizada de acordo com as reações a seguir: Os compostos de fórmula geral (85) apresenta considerável congestionamento estérico e resistem fortemente à adição de nucleófilos. Neste trabalho desenvolvemos apenas estudos de adição de derivados de levulinato de metila, este mesmo apresentando problemas de reatividade devido a problemas estéricos, e mostramos que este não é o caminho adequado para adicionar um nucleófilo aos compostos (85). / In this work we describe several synthetic studies realized with the purpose of developing a method for the preparation of Microbiotol (1). Our synthetic strategy consisted of preparing the ciclopentane ring which is the left moiety of structure (1) by a ring contraction , starting from isophorone (58), and then add an open chain which would be cyclized to for second ring. The ring contraction was realised according to the following steps. The compounds of general structure (58) have a considerable steric hindrance and are strongly resistant to the addition of a nucleophile. In this work we used only derivatives of methyl levulinate as nucleophiles ; these substrates are themselves sterically hindered, and we showed that this is not the appropriate method to add a nucleophile to compounds (85).

Secondary metabolites are compounds that are not necessary for the survival of the organism, but which are to be related to the organism's interaction with its environment. This work studied compounds of secondary metabolism through the study of chemical and biological extracts and fractions Simaba Maiana Casar. and the involvement of candidate genes (TPS10, TPS14, and CYP71B31 CYP76C3) in the metabolism of monoterpenes in Arabidopsis thaliana. The extracts from roots and stems of Simaba Maiana were tested in antioxidant activity, molluscicide, inhibition of lymphocyte proliferation, inhibition of NO production, anti-Leishmania amazonensis and anti-Trypanosoma cruzi. The four candidate genes (CYP76C3, CYP71B31, TPS10 and TPS14) were selected with the CYPedia, which calculates the coexpression between genes based on the Arabidopsis Affymetrix ATH1 microarray. The extracts and fractions Simaba Maiana showed a lower antioxidant activity by DPPH method, low concentrations of total phenols measured by Folin-Ciocalteu, however, a good antioxidant activity by TBARS method, using three agents of oxidative damage (AAPH, FeSO4 and H2O2). The extract showed cytotoxic activity and molluscicidal concentration of 100 mg/mL. The crude extract of the stem was not active for leishmanicidal and trypanocidal. This extract did not inhibit NO production, but showed a high percentage of inhibition of lymphoproliferation. The skimmianine furoquinoline alkaloid and pellopterin furanocoumarin were isolated from chloroform fraction. The candidate genes showed a similar pattern of expression of the stamen, more specifically the top of the filaments. Heterologous expression in transiently expressed in leaves of Nicotiana benthamiana, in the volatiles of TPS10 TPS14 (alone) were found enantiomers R-(-)-linalool and S-(+)-linalool. In the extraction buffer leaf discs were found that CYP76C3 converts linalool to E-8-hydroxy-linalool and E-8-oxo-linalool, and CYP71B31 in 1,2-epoxy-linalool. The analysis of the methanol extract of the discs incubated in S-(+)-linalool showed the use of this substrate by P450s converting to lilac alcohol for both P450s. Analysis of flowers of Arabidopsis mutants showed minor differences, analyzes with extracts of fresh flowers in UPLC-MS/MS MRM mode, has been found a compound having the same signature as linalool, however with different retention time and may be is an indication of linalool bound. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os metabólitos secundários são compostos que não são necessários para a sobrevivência do organismo, mas que apresentam-se relacionados com a interação do organismo com o seu ambiente. O presente trabalho estudou compostos do metabolismo secundário através do estudo químico e biológico dos extratos e frações Simaba maiana Casar. e a envolvimento dos genes candidatos (TPS10, TPS14, CYP76C3 e CYP71B31) no metabolismo de monoterpenóides em Arabidopsis thaliana. Os extratos das raízes e caule de Simaba maiana foram testadas em ensaios de atividade antioxidante, moluscicida, inibição da linfoproliferação, inibição da produção de NO, anti-Leishmania amazonensis e anti-Trypanosoma cruzi. Os quatro genes candidatos (CYP76C3, CYP71B31, TPS10 e TPS14) foram selecionados com o CYPedia, que calcula a co-expressão entre os genes de Arabidopsis com base no Affymetrix ATH1 microarray. Os extratos e frações de Simaba maiana mostraram uma baixa atividade antioxidante pelo método do DPPH, baixas concentrações de fenóis totais avaliados pelo método de Folin-Ciocalteu, entretanto, uma boa atividade antioxidante pelo método de TBARS, usando três agentes de danos oxidativos (AAPH, FeSO4 e H2O2). Os extratos mostraram atividade moluscicida e citotóxica na concentração de 100 mg/mL. O extrato bruto do caule não foi ativo para as atividades anti-Leishmania e anti-Trypanosoma. Este extrato não inibiu a produção de NO, mas apresentou uma alta porcentagem da inibição da linfoproliferação. O alcalóide furoquinolínico esquiamina e a furanocumarina felopterina foram isolados da fração clorofórmica. Os genes candidatos mostraram um similar padrão de expressão nos estames, mais especificamente na parte superior dos filamentos. Na expressão heteróloga transitoriamente expressa em folhas de Nicotiana benthamiana, nos voláteis de TPS10 e TPS14 (sozinho) foram encontrados os enantiômeros R-(-)-linalol e S-(+)-linalol. No tampão de extração de discos de folhas, verificou-se que CYP76C3 converte linalol em E-8-hidroxi-linalol e E-8-oxo-linalol, e CYP71B31 em 1,2-epoxilinalol. A análise do extrato metanólico dos discos foliares incubados em S-(+)-linalol mostrou a utilização deste substrato por P450s convertendo para lilac álcool para ambos os P450s. Análises de flores em plantas mutantes de Arabidopsis thaliana mostraram pequenas diferenças, em que análises com extratos de flores frescas em UPLC-MS/MS no modo MRM, foi encontrado um composto com a mesma assinatura que linalol, no entanto, com tempo de retenção diferente e pode ser uma indicação de forma ligada do linalol.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-01T11:42:20Z No. of bitstreams: 1 diegorodriguesmelo.pdf: 1192469 bytes, checksum: 7a17e7c77b3319206eae586410dc02e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-01T15:48:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diegorodriguesmelo.pdf: 1192469 bytes, checksum: 7a17e7c77b3319206eae586410dc02e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T15:48:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diegorodriguesmelo.pdf: 1192469 bytes, checksum: 7a17e7c77b3319206eae586410dc02e3 (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetivou-se avaliar a atividade inseticida do óleo essencial de Lippia sidoides e dos monoterpenos timol e carvacrol sobre larvas e pupas de Musca domestica através de testes de contato. Para a avaliação da mortalidade larval (ML) foram feitas observações 48h após o tratamento e acompanhamento das larvas sobreviventes até o estágio adulto, e estes índices foram incluídos na eficácia de tratamento larval (ETL). Para a eficácia de tratamento pupal (ETP), foram calculados a mortalidade pupal (MP) após seis dias do tratamento e o percentual de mal desenvolvimento dos adultos (PMD). Foram testadas oito concentrações do óleo essencial e das substâncias puras, variando de 0,625 até 30,0 mg/ml. A análise dos constituintes do óleo essencial mostrou o timol como seu componente majoritário (69,91%). As doses letais (DL50 e DL90) para larvas e pupas foram estimadas e o carvacrol apresentou os menores valores, seguido pelo timol e óleo de L. sidoides. Verificou-se ML de 100% a partir da concentração de 10,0 mg/ml para o carvacrol, 15,0 mg/ml para o óleo de L. sidoides e 30,0 mg/ml para o timol. Já para a ETL foi observada 100% de eficácia a partir da concentração de 5,0 mg/ml para o carvacrol e L. sidoides e 10,0 mg/ml para o timol. Com relação a MP, o óleo essencial de L. sidoides não apresentou atividade pupicida. Entretanto, para as concentrações de 20,0 e 30,0 mg/ml foi observado PMD, o que contribuiu para ETP de 44 e 46%, respectivamente. Já para o carvacrol a maior mortalidade foi alcançada na concentração de 20 mg/ml (58%) e para este terpeno não houve PMD. Para o timol observou-se maior MP (74%) para a concentração de 30,0 mg/ml com PMD de 60%, o que contribuiu para ETP de 84%. Os produtos testados apresentaram elevado potencial larvicida, o que os tornam promissores para o desenvolvimento de formulações ambientalmente seguras e não tóxicas para o controle de larvas de M. domestica e que, apesar de não terem sido totalmente efetivas no controle de pupas, seu uso para esse estágio pode ser indicado em um programa de Manejo Integrado de Pragas. / This study aimed to evaluate the insecticidal activity of the essential oil of Lippia sidoides and thymol and carvacrol monoterpenes against larvae and pupae of Musca domestica by contact tests. For the evaluation of larval mortality (LM) observations were made 48 hours after treatment and follow-up of surviving larvae to the adult stage, and these indices were included in the effectiveness of larval treatment (ELT). For the effectiveness of pupal treatment (EPT) were calculated pupal mortality (PM) after six days of treatment and the percentage of bad development of adults (PBD). Eight concentrations of the essential oil and pure substances, ranging from 0.625 to 30.0 mg/ml were tested. The analysis of the constituents of the essential oil thymol showed as its major component (69.91 %). The lethal dose (LD50 and LD90) for larvae and pupae were estimated and carvacrol showed the lowest values, followed by thymol and L. sidoides oil. It was found LM 100% at concentrations of 10.0 mg/ml for carvacrol, 15.0 mg/ml for L. sidoides oil and 30.0 mg/ml to thymol. As for the ELT 100% efficacy was observed starting at a concentration of 5.0 mg/ml for carvacrol and L. sidoides and 10.0 mg/ml to thymol. With respect to PM, the essential oil of L. sidoides showed no pupicida activity. However, for concentrations of 20.0 and 30.0 mg/ml was observed PBD, which contributed to EPT of 44 and 46%, respectively. As for carvacrol the highest mortality was achieved at a concentration of 20 mg/ml (58%) and to that terpene was not PBD. To thymol observed a higher PM (74%) for the concentration of 30.0 mg/ml with the PBD 60%, which contributed to 84% of EPT. The products tested showed high potential larvicide, which make them promising for the development of formulations environmentally safe and non-toxic for the control of larvae of M. domestica and that although they were not fully effective in the control pupae, their use for this stage can be indicated in a program of Integrated Pest Management.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os terpenos Ãcido centipÃdico e lactona do Ãcido hawtiwaico (LAH), isolados dos capÃtulos florais de Egletes viscosa Less, popularmente conhecida como macela ou macela da terra, foram avaliados em modelos de dermatite de contato irritativa induzida pelo 13-acetato-12-o-tetradecanoil-forbol (TPA) e de dermatite de contato alÃrgica induzida por oxazolona (OXA) em camundongos. O Ãcido centipÃdico e a LAH, por via tÃpica (0,125; 0,25 e 0,5mg/orelha), reduziram significativamente o edema de orelha induzido por TPA (2,5Âg/orelha) em 45,5; 55,5; 61,1% e 33,3; 42,2 e 63,3%, respectivamente. Quando administrados por via oral, (12,5; 25 e 50mg/kg), reduziram o edema em 46,6; 59,3; 67,9% e 58,7; 59,7; 71%, respectivamente quando comparado ao controle veÃculo. A dexametasona na dose tÃpica de 0,05mg/orelha e na dose oral de 1mg/kg reduziu o edema de orelha em 90 e 73,1%, respectivamente. O Ãcido centipÃdico e a LAH, na dose de 0,5mg/orelha, via tÃpica reduziu de a atividade da mieloperoxidase (MPO) em 90,1 e 94,6%, respectivamente, enquanto a dexametasona (0,05mg/orelha) reduziu em 96,2% a atividade da MPO quando comparado ao controle veÃculo. Os terpenos na dose tÃpica de 0,5mg/orelha foram capazes de reduzir os nÃveis teciduais de TNF-α, o mesmo sendo observado com a dexametasona. A aÃÃo antiinflamatÃria dos terpenos no modelo da dermatite pelo TPA foram confirmados pelos achados histolÃgicos. O modelo de dermatite de contato induzida por oxazolona (OXA, 1%/orelha), provocou uma hiperplasia epidÃrmica onde o INF-γ teve papel crucial. Os terpenos Ãcido centipÃdico (0,25 e 0,5) e a LAH (0,5mg/orelha), por via tÃpica, diminuÃram, a hiperplasia epidÃrmica induzida por oxazolona (1%/orelha)em todos os perÃodos de observaÃÃo (4Â - 19Â dia). O Ãcido centipÃdico e a LAH na dose de 0,5mg/orelha diminuÃram significativamente os nÃveis teciduais de INF-γ (92,2 e 99,4%, respectivamente) quando comparados ao controle veÃculo. Quando administrado por via oral, o Ãcido centipÃdico (12,5; 25 e 50mg/kg) reduziu de forma significativa a hiperplasia epidÃrmica do 7Â ao 19Â dia de observaÃÃo. A dexamentasona na dose tÃpica (0,05/mg) e na dose oral (1mg/kg) reduziu a hiperplasia epidÃrmica em 100 e 75%, respectivamente. Os resultados encontrados, comprovados pelo estudo histolÃgico, demonstram o efeito antiinflamatÃrio desses terpenos em modelo de dermatite de contato alÃrgica crÃnica onde a hiperplasia epidÃrmica e o aumento nos nÃveis teciduais de INF-γ sÃo caracterÃsticas importantes, como no caso da psorÃase / The terpens centipedic acid (CA) and lactone of hawtriwaic acid (LAH) isolated from the flowers chapters of Egletes viscosa Less, popularly known as macela or macela da terra, were evaluated on 13-acetate-12-o-tetradecanoil-forbol (TPA) induced irritative contact dermatitis model and on oxazolone induced allergic contact dermatitis in mice. The centipedic acid and LAH on the following dosage of 0,125; 0,25 and 0,5 mg/ear using the skin surface as a via reduced in a significative way the ear oedema induced by application of TPA (2,5 μg/ear). The values of reduction are the following respectively: 45,5; 55,1; 61,1% and 33,3; 42,2 and 63,3%. When the oral administration was used the doses of 12,5; 25 and 50 mg/kg had showed a significative oedema reduction of 46,6; 59,3; 67,9% and 58,7; 59,7; 71%, respectively. Dexametasone through skin surface administration on dosage of 0,05 mg/ear and oral dosage of 1mg/kg have reduced in a significative way the ear oedema in 90 and 73,1%, respectively. The centipedic acid and LAH using the dosage of 0,05 mg/ear through the skin surface had reduced the mieloperoxydase activity in 90,1 and 94,6%, respectively, while dexametasone (0,05 mg/ear) had reduced in 96,2% when compared to the group treated only with the vehicle. The terpens on the topic dosage of 0,05 mg/ear were capable to reduce the tecidual levels of TNF-α as well as dexametasone. The antiinflamatory action of the terpens on TPA induced dermatitis model was confirmed through histological analysis of the tissue. The oxazolone induced contact dermatitis model (OXA 1%/ear) had promoted an epidermic hyperplasia in which INF-γ have a central role. The products under evaluation centipedic acid (0,25 and 0,5 mg/ear) and LAH (0,5 mg/ear) through skin surface reduced in a significative way the epidermic hyperplasia Throughout the observation period (4Â- 19Â day). Centipedic acid and LAH on the following dosage 0,5/mg reduced in a significative way the tecidual levels of INF-γ (92,2 and 99,4%, respectively) after 19 days of treatment. When using oral administration the centipedic acid (12,5; 25 e 50 mg/kg) reduced the epidermic hyperplasia from seventh through tenth ninth day. Dexametasone through skin surface administration on dosage of 0,05 mg/ear and oral dosage of 1mg/kg have reduced the epidermic hyperplasia in 100 and 75%, respectively The data that were found plus the histological analysis have showed the antiinflammatory effect, mainly through topic administration, of these terpens on allergic contact dermatitis models in which epidermic hyperplasia and increased tecidual levels of INF-γ are important features, such as psoriasis

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-04T13:14:56Z No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-04T15:36:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T15:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) Previous issue date: 2009-03-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O gênero Lippia pertence à família Verbenaceae, inclusa no clado Asteridaee, ordem Lamiales, compreendendo aproximadamente 175 gêneros e 2800 espécies, onde muitos gêneros apresentam plantas com propriedades medicinais e ornamentais. A espécie Lippia alba, originária da América do Sul, também ocorre no Brasil e é uma das mais estudadas do gênero Lippia. Ela floresce durante o ano todo e recebe grande destaque no gênero, devido às suas inúmeras propriedades medicinais. O óleo essencial de Lippia alba é composto basicamente por sesqui e monoterpenos, que são as substâncias responsáveis por suas propriedades medicinais. O objetivo central do presente trabalho foi clonar e analisar a expressão de dois potenciais genes codificadores de terpeno sintases em Lippia alba. Através do alinhamento de genes codificadores de monoterpeno sintases caracterizadas, primers degenerados foram desenhados dentro de regiões conservadas e utilizados para se obter a clonagem de genes codificadores de terpeno sintases em Lippia alba. Dois potenciais genes codificadores de terpeno sintases foram clonados, LaTPS12 e LaTPS23. Após a clonagem, técnicas de RT-PCR semiquantitativo foram empregadas para análises de expressão desses dois genes em diferentes estágios foliares e em três diferentes quimiotipos de Lippia alba. Os resultados mostraram que em folhas situadas no quarto segmento nodal o gene LaTPS12 apresenta maior nível de expressão. A diferença na expressão do gene LaTPS23 foi menos acentuada nos três quimiotipos analisados em relação ao gene LaTPS12, que apresentou uma expressão diferencial. Análises filogenéticas foram realizadas comparando-se as seqüências desses dois genes com outros genes codificadores de terpeno sintases já caracterizadas de diferentes espécies de plantas. De acordo com essas análises, LaTPS12 e LaTPS23 pertencem à classe TPS-b, que é composta principalmente por monoterpeno sintases de angiospermas. / The genus Lippia belongs to Verbenaceae family, Asteridaee, order Lamiales. This family comprises about 175 genus and 2800 species, and many of them have medicals and ornamentals proprierties. Lippia alba is native from South America, and is also found in Brazil and is the most studied species of the genus Lippia. This plant blooms throughout the year and has great importance due to its medicinal properties. The Lippia alba essential oils are composed by sesquiterpenes and monoterpenes conferring its medicinal properties. The aim of this work was to clone and to analize gene expression of putative terpene synthases genes (TPS) in Lippia alba. Alignment of TPS genes was used to design degenerate primers into conserved domains for cloning of these genes in Lippia alba. We have cloned two putative TPS genes, LaTPS12 and LaTPS23. After cloning, semiquantitative RT-PCR was employed to expression analysis of these two genes in different leaf stages and among three different chemotypes of Lippia alba. The result of expression level showed that LaTPS12 occurred at higher level in leaves located in fourth nodal segment and showed a marked differential expression among the chemotypes. The difference of expression of the LaTPS23 was less prominent comparing the three studied chemotypes. We performed a phylogenetic analysis in order to compare the LaTPS12 and LaTPS23 to others TPS genes in different plant species. The results showed that these LaTPS12 and LaTPS23 belong to the class TPS-b, which comprises mainly angiosperms monoterpene synthases genes.