Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6368_.pdf: 1202039 bytes, checksum: 042df281a737a29a468446c7898226f3 (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Este estudo tem como objetivo analisar a prevalência e incidência anual da infecção assintomática causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Avaliou-se 311 amostras provenientes de 79 indivíduos residentes em área rural do município de Santa Teresa, no estado do Espírito Santo. Os dados demográficos, socioeconômicos e de fatores associados à infecção foram coletados utilizando questionários, que foram atualizados trimestralmente. A seleção dos indivíduos foi realizada a partir de uma coorte pré-existente, referente ao estudo de casos assintomáticos de malária na região montanhosa do estado. Após seleção dos participantes, o plasma foi coletado trimestralmente para realização da sorologia anti-T. gondii pela técnica de ELISA e complementado a investigação, o teste de avidez de IgG dos indivíduos positivos foi executado para avaliação da taxa de soroconversão nessa coorte. A prevalência de infecção pelo Toxoplasma gondii na comunidade foi de 67,1% e a incidência foi de 6,2 por 100 pessoas-ano de observação. Não foi encontrada uma associação estatisticamente significativa entre os indivíduos que tiveram contato com gatos e nem entre o consumo de carne de porco ou carneiro, mesmo crua ou mal cozida, e a toxoplasmose. Segundo a análise multivariada, o único fator de risco que está relacionado com a infecção parece ser o aumento da idade dos indivíduos (OR = 1,086). Confirmando dados da literatura, a análise estatística mostrou que a cada ano que passa, os indivíduos estão 8,6% mais propensos a adquirir toxoplasmose. PALAVRAS CHAVES: Toxoplasma gondii; Toxoplasmose; População Rural; Epidemiologia; Fatores de Risco; Brasil.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7605_Kamila da Cunha Covre -Dissertação Pós Defesa.pdf: 1964154 bytes, checksum: 95d680872a3b35ce05f6830024049e7f (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / A toxoplasmose, causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, apresenta grande soroprevalência em humanos e animais em todo mundo. O perfil sorológico da infecção em animais domésticos, como cães e gatos, é um indicativo da contaminação ambiental pelo parasito e do risco potencial para o homem. Neste trabalho, avaliou-se a frequência de resultados positivos para T. gondii em exames sorológicos realizados em cães e gatos na Região Metropolitana de Vitória, no estado do Espírito Santo. Foram analisadas amostras de soro de 378 cães e 79 gatos provenientes de Centros de Controle de Zoonoses (CCZ) e de abrigos temporários, além de dados epidemiológicos sobre município, origem, sexo, raça e idade de cada animal. Imunoglobulinas da classe IgG anti-T. gondii foram avaliadas por Ensaio Imunoenzimático (ELISA) e Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A frequência de anticorpos em cães foi de 39,4% (149/378) pelo ELISA e de 38,1% (142/373) pela RIFI, e em gatos foi de 15,2% (12/79) pelo ELISA e de 7,6% (6/79) pela RIFI. Os fatores associados à infecção canina foram a origem errante e a idade igual ou superior a um ano. Sorologia positiva por ELISA foi relacionada ao sexo dos felinos, com fêmeas apresentando maior chance de infecção. A avaliação dos resultados dos cães mostrou uma excelente concordância entre as técnicas (k = 0,82), sem diferenças estatisticamente significativas (p = 0,377). Entre os felinos, apesar de ter havido concordância entre os testes (k = 0,63), eles foram significantemente diferentes de acordo com as análises estatísticas (p = 0,041). Os resultados demonstram alta contaminação do ambiente pelo parasito, sugerindo grande risco de infecção humana e de outros animais. Este é o primeiro estudo de determinação da frequência de anticorpos anti-T. gondii em cães e gatos no Espírito Santo. Palavras-chave: Toxoplasma gondii. Estudos Soroepidemiológicos. Cães. Gatos. ELISA. Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo. Brasil.

A toxoplasmose é uma infecção comum nos animais causada pelo Toxoplasma gondii configurando-se como uma importante zoonose. O homem infecta-se, principalmente, através da ingestão de carne contaminada com cistos do protozoário. São encontradas altas taxas de prevalência de toxoplasmose nos rebanhos de ovinos do mundo todo, sendo a ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos as mais importantes fontes de infecção da espécie. No ovino, a toxoplasmose pode ser assintomática ou causar distúrbios reprodutivos, notadamente abortos, levando a perdas econômicas consideráveis. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para o T. gondii em ovinos na região da Grande Porto Alegre-RS, foram estimadas as freqüências de anticorpos para T. gondii da classe IgG em soros de ovinos provenientes de propriedades da região citada, utilizando a técnica de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). A freqüência estimada de anticorpos para T. gondii em uma amostragem de 250 ovinos foi de 13,6% pela técnica de HAI e 15,2% pela técnica de IFI. A amostragem foi estratificada em dois grupos experimentais de acordo com o sexo e a idade dos animais. No grupo I, composto de 127 machos, obteve-se 4,8% de positivos para HAI e 7,6% de positivos para IFI. Enquanto nas 123 fêmeas, detectou-se um percentual de 8,8% de positivas pela técnica de HAI e 7,6% reagiram para IFI. Em relação a faixa etária se encontrou: 11 positivos (4,4%) nos animais com menos de um ano e 23 (9,2%) para aqueles com mais de um ano na reação de HAI, num total de 34 (13,6%) animais; enquanto que para técnica de IFI obteve-se o resultado de 19 (7,6%) ovinos jovens e 19 (7,6%) ovinos adultos em 38 (15,2%) animais analisados. A percentagem de co-positividade entre as técnicas utilizados foi de 55,26% e a co-negatividade foi de 93,865, e a concordância total ficou em 88%, enquanto o índice de Kappa calculado foi de 0,513. / Toxoplasmosis is a serious zoonosis. It is a common infection in animals caused by a parasite called Toxoplasma gondii. Human infection occurs mainly for ingestion of meat contaminated with T. gondii cysts. A high prevalence rate of toxoplasmosis is found in sheep cattle all over the world, being the consumption of food and water contaminated with oocystes the major source of infection of the species. In ovine, toxoplasmosis can be assymptomatique or cause reproduction disorders, especially abortions, which leads to significant economic losses.With the objective of providing data about the frequency of T. gondii antibodies in sheep from the Greater Porto Alegre area, we estimated the frequency of IgG class antibodies to T. gondii in sheep sera. The techniques employed were the Indirect Hemagglutination Technique (HAI) and the Indirect Imunofluorescence Test (IFI). The estimated frequency of antibodies to T. gondii in a sample of 250 sheep sera was 13,6% (HAI), and 15,2% (IFI). The sample was stratified into two experimental groups, according to gender and age. In group one, composed by 127 males, 4,8% were HAI positive, and 7,6% were IFI positive, whereas in the group composed by 123 females, 8,8% were HAI positive, and IFI 7,6%. Concerning age group, there were 11 HAI positives (4,4%) among the animals with less than one year of age, and 23 HAI positive (9,2%) among the animals over one year, totalizing 34 animals. For the IFI technique, the results obtained showed 19 (7,6%) young sheep and 19 (7,6%) adults in 38 animals analyzed. The co-positivity between the techniques was 55,26% and the co-negativity was 93,865. Total agreement was 88% while the Kappa index calculated was 0,513.

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Anderson Barbosa Moura / Resumo: Seis caprinos machos em idade reprodutiva foram selecionados e distribuídos em três grupos: GI dois caprinos mantidos como controle (placebo), GII dois caprinos inoculados com 1 x 106 taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e GIII dois caprinos inoculados com 2 x 105 oocistos de T. gondii (cepa P). Periodicamente foram aferidos parâmetros clínicos, hematológicos e sorológicos, assim como avaliações parasitêmicas, além de exames andrológicos. A presença do parasito no sêmen e, também, nos tecidos do sistema reprodutor foi pesquisada por meio das técnicas de bioprova, PCR e imunohistoquímica. Surtos parasitêmicos foram detectados em todos os animais inoculados com taquizoítos ou com oocistos. A recíproca dos títulos sorológicos (RIFI) alcançou valores máximos de 4096 nos dois grupos de animais que receberam o Toxoplasma gondii. Pela técnica da bioprova foi possível revelar precocemente a presença do coccídio nas amostras seminais dos animais inoculados como taquizoítos (5°, 7°, 28°, 49°, 63° e 70° DPI) e um pouco mais tardiamente nas amostras seminais daqueles inoculados com oocistos (56° e 70° DPI). Pela PCR foi possível identificar, no sêmen, material genético de T. gondii, em cinco e em duas datas experimentais pós-inoculanção dos animais pertencentes aos grupos GII e GIII, respectivamente. Por esta mesma técnica foi possível, ainda, isolar material genético deste protozoário também em amostras teciduais (pool de próstata, testículo, vesícula seminal e epidídimo) dos caprinos 11 e 36 inoculados com taquizoítos e oocistos, respectivamente. Pela imunohistoquímica foi diagnosticado o T. gondii no epidídimo de todos os caprinos que receberam o protozoário. O isolamento de T. gondii, no sistema reprodutor de caprinos (sêmen e tecidos), sugere a possibilidade da transmissão sexual constituir uma importante via na disseminação desta zoonose tão difundida na caprinocultura mundial. / Abstract: Six goat males in reproductive age had been selected and distributed in three groups: GI - two goat noninoculated (control), GII - two goat inoculated with 1 x 106 tachyzoites of T. gondii (RH strain) and GIII - two goat inoculated with 2 x 105 oocysts of T. gondii (P strain). Periodically had been measured clinical parameters, hematologics and sorologics evaluations, as well as parasitemics, beyond andrologics examinations. The presence of the parasite in the semen, and also in tissues of the reproductive system was searched by means of the techniques of bioassay, PCR and immunehistochemistry (only for tissues). Parasitemia was detected in the two animals inoculated with tachyzoites and in the inoculated others two with oocysts. The reciprocal one of the sorologicys titles (RIFI) reached maximal level of 4096 in the two groups of animals inoculated with the Toxoplasma gondii. Using biossay technique was possible precociously to disclose to the presence of the coccidy in the seminal samples of animals inoculated with tachyzoites (5°, 7°, 28°, 4 9°, 63° e 70° DPI) and a little more delayed in the seminal samples of it inoculated with oocysts (56° e 70° DPI). For the PCR it was possible to identify to the genetic material of the T. gondii, in the semen in five and two experimental dates after-inoculanção of the pertaining animals to groups GII and GIII respectively. For this same technique was possible still to isolate material genetic of this protozoario also in tissues samples (pool of prostate, testícule, vesicula seminal and epididim) of goat 11 and 36 inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. By the immunehistochemistry was diagnosised T. gondii in epididim of all goats ones that had received the protozoario. The isolation of T. gondii, in the reproductive system of goat (semen and tissues), suggests the possibility of the sexual transmission to constitute... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: A doença de Chagas e toxoplasmose são problemas de saúde pública no Brasil e entender com detalhes a biologia dos agentes causais, T. cruzi e T. gondii respectivamente, pode ser um ponto crucial para gerar informações relevantes voltadas para o desenvolvimento de tratamento efetivo no combate a estas doenças. No entanto, a busca de novos alvos para quimioterapia de algumas doenças parasitárias esbarra, por exemplo, na ausência de ferramentas que possibilitem o estudo da função de genes essenciais para a sobrevivência do organismo. Dentro desta problemática, o objetivo central deste estudo é a identificação de proteínas envolvidas no transporte nucleocitoplasmático de RNAs, mais especificamente a exportação de mRNAs, com a utilização de ferramentas de genética reversa para análise de proteínas essenciais envolvidas nestas vias em T. cruzi e T. gondii. Além disso, T. gondii tem sido o modelo de estudo escolhido por diversos grupos, uma vez que dispõe de várias ferramentas de genética reversa consideradas inviáveis ou laboriosas em outros parasitas (como Plasmodium ou Trypanosoma). A escolha do tema foi baseada em dois fatos principais: a) dentro do contexto de eventos moleculares essenciais, o transporte de RNA mensageiro (mRNA) ao local de tradução é uma etapa essencial e crucial na seleção de genes a serem expressos em uma célula eucariótica; b) escassez de publicações envolvendo diversos grupos de parasitas, demonstrando ser um tema da pesquisa básica em parasitologia que necessita ser explorado. Os dados gerados neste estudo permitiram identificar que a maioria das proteínas relacionadas com a exportação de mRNAs não são tão conservadas ao longo da filogenia de eucariotos, principalmente em relação aos protozoários que divergiram na base da árvore filogenética. A exceção encontrada foi Sub2/UAP56, uma proteína relacionada com exportação de mRNAs em fungos e humanos, respectivamente, que se encontra altamente conservada ao longo da filogenia de eucariotos. Em T. cruzi foi observado que TcSub2 é uma proteína nuclear, relacionada com alguns sítios de transcrição por RNA Polimerase II e essencial, não sendo possível obter o nocaute duplo do respectivo gene. Em T. brucei e T. gondii foi observado que a diminuição gradual das proteínas em questão, TbSub2 e TgUAP56 respectivamente, resulta em acúmulo de mRNAs poliadenilados nos núcleos afetando a exportação dos mRNAs e resultando em morte celular. A partir da observação da participação de proteínas ortólogas de Sub2 na exportação de mRNAs em parasitas, a outra parte deste estudo foi identificar proteínas associadas a TcSub2 para iniciar o entendimento sobre esta via bem como verificar a presença de proteínas específicas e provavelmente essenciais de parasitas para futuros estudos funcionais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-25Bitstream added on 2014-06-13T20:35:35Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_kr_me_botfmvz.pdf: 157744 bytes, checksum: f115a70ad010444fe6ca9960d82e76d8 (MD5) / A toxoplasmose é uma das mais freqüentes zoonoses parasitárias, de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o Toxoplasma gondii. A infecção em suínos tem sido descrita em diversos países, demonstrando seu caráter cosmopolita e a susceptibilidade desta espécie. O T.gondii pode ser transmitido sob várias formas, e com relação à espécie suína, a ingestão de carne crua ou mal cozida e seus derivados são importantes vias de transmissão para o homem. Estudou-se a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em 550 amostras de soros de suínos de criações de fundo de quintal na microrregião de Registro - SP, utilizando como prova sorológica o método de aglutinação direta (MAD). Este mostrou-se uma ferramenta diagnóstica de fácil realização, baixo custo, não necessitando de equipamentos especiais para a leitura e interpretação dos resultados. Das 550 amostras de soro, 111(20,18%) reagiram positivamente com os títulos 64 (15,32%), 256 (27,93%), 1024 (39,64%), 4096 (10,81%), 16384 (4,50%) e 65536 (1,80%). Concluí-se que os resultados obtidos indicam alta prevalência desta enfermidade nas condições e região de origem dos animais. À medida que foram obtidos títulos altos de anticorpos contra o agente, pode-se concluir também que há risco potencial de transmissão da toxoplasmose para o homem, sugerindo que muitos desses animais poderiam apresentar bradizoítos em sua musculatura. / Toxoplasmosis is one of the most frequent parasitic zoonosis with worldwide distribution whose etiological agent is Toxoplasma gondii. The infection in swine has been described in many countries, showing the cosmopolitan character and susceptibility of this specie. T.gondii can be transmitted by many ways. The ingestion of swine raw or badly cocked meat and derivatives are important pathways of transmission to man. The anti-T.gondii antibodies prevalence was studied in 550 serum samples of swine under rustic condition (animals with no breed, popular named as backyard breeding) in Registro-SP, using the modified agglutination test (MAT). Such method is verified as an easy-appliance tool, with low costs and non necessity of special equipment in order to achieve interpretation of results. In 550 samples of serum, 111 (20.18%) were positive with titles of 64 (15.32%), 256 (27.93%), 1024 (39.64:%), 4096 (10.81%), 16384 (4.50%), 65536 (1.80%). These results achieved indicate a high prevalence of the disease on the region studied and under the specific conditions described. The high rate obtained as result also leads to the conclusion that there is potential risk of toxoplasmosis transmission to man due to the possibility of the animals to have bradyzoits in their musculature.

A toxoplasmose é uma infecção comum nos animais causada pelo Toxoplasma gondii configurando-se como uma importante zoonose. O homem infecta-se, principalmente, através da ingestão de carne contaminada com cistos do protozoário. São encontradas altas taxas de prevalência de toxoplasmose nos rebanhos de ovinos do mundo todo, sendo a ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos as mais importantes fontes de infecção da espécie. No ovino, a toxoplasmose pode ser assintomática ou causar distúrbios reprodutivos, notadamente abortos, levando a perdas econômicas consideráveis. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para o T. gondii em ovinos na região da Grande Porto Alegre-RS, foram estimadas as freqüências de anticorpos para T. gondii da classe IgG em soros de ovinos provenientes de propriedades da região citada, utilizando a técnica de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). A freqüência estimada de anticorpos para T. gondii em uma amostragem de 250 ovinos foi de 13,6% pela técnica de HAI e 15,2% pela técnica de IFI. A amostragem foi estratificada em dois grupos experimentais de acordo com o sexo e a idade dos animais. No grupo I, composto de 127 machos, obteve-se 4,8% de positivos para HAI e 7,6% de positivos para IFI. Enquanto nas 123 fêmeas, detectou-se um percentual de 8,8% de positivas pela técnica de HAI e 7,6% reagiram para IFI. Em relação a faixa etária se encontrou: 11 positivos (4,4%) nos animais com menos de um ano e 23 (9,2%) para aqueles com mais de um ano na reação de HAI, num total de 34 (13,6%) animais; enquanto que para técnica de IFI obteve-se o resultado de 19 (7,6%) ovinos jovens e 19 (7,6%) ovinos adultos em 38 (15,2%) animais analisados. A percentagem de co-positividade entre as técnicas utilizados foi de 55,26% e a co-negatividade foi de 93,865, e a concordância total ficou em 88%, enquanto o índice de Kappa calculado foi de 0,513. / Toxoplasmosis is a serious zoonosis. It is a common infection in animals caused by a parasite called Toxoplasma gondii. Human infection occurs mainly for ingestion of meat contaminated with T. gondii cysts. A high prevalence rate of toxoplasmosis is found in sheep cattle all over the world, being the consumption of food and water contaminated with oocystes the major source of infection of the species. In ovine, toxoplasmosis can be assymptomatique or cause reproduction disorders, especially abortions, which leads to significant economic losses.With the objective of providing data about the frequency of T. gondii antibodies in sheep from the Greater Porto Alegre area, we estimated the frequency of IgG class antibodies to T. gondii in sheep sera. The techniques employed were the Indirect Hemagglutination Technique (HAI) and the Indirect Imunofluorescence Test (IFI). The estimated frequency of antibodies to T. gondii in a sample of 250 sheep sera was 13,6% (HAI), and 15,2% (IFI). The sample was stratified into two experimental groups, according to gender and age. In group one, composed by 127 males, 4,8% were HAI positive, and 7,6% were IFI positive, whereas in the group composed by 123 females, 8,8% were HAI positive, and IFI 7,6%. Concerning age group, there were 11 HAI positives (4,4%) among the animals with less than one year of age, and 23 HAI positive (9,2%) among the animals over one year, totalizing 34 animals. For the IFI technique, the results obtained showed 19 (7,6%) young sheep and 19 (7,6%) adults in 38 animals analyzed. The co-positivity between the techniques was 55,26% and the co-negativity was 93,865. Total agreement was 88% while the Kappa index calculated was 0,513.

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T17:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suzuki_LisandraAkemi_M.pdf: 14558191 bytes, checksum: c85c5e0b4751c7cbf7f83293db450f8a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida é, freqüentemente, baseado na detecção de anticorpos específicos IgM anú-T.gondii e/ou elevação significativa dos títulos de anticorpos IgG. Entretanto, a elevada ocorrência de altos títulos de IgG anti-T. gondii em pessoas sadias e a persistência, em alguns casos, dos anticorpos IgM por muito tempo após infecção com o parasita pode dificultar a interpretação dos resultados dos testes sorológicos quando se suspeita de toxoplasmose aguda. Em nosso primeiro estudo, são apresentados os resultados da detecção de anticorpos específicos da classe IgA e da determinação da avidez dos anticorpos IgG em amostras seqüenciais de soros de um paciente apresentando níveis significativos de anticorpos IgM anú-T.gondii durante sete anos após o início dos sintomas clínicos da toxoplasmose. Os anticorpos IgA foram quantificados por uma técnica de ELISA de captura (ETI-TOXOK-A). O paciente ainda apresentou um resultado positivo (>10 UA/ml) em uma amostra de soro coletada dois anos após o inicio das manifestações clínicas. A avidez dos anticorpos IgG foi determinada com o sistema Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA, utilizando somente uma diluição da amostra de soro. índices de avidez compatíveis com uma infecção aguda foram encontrados nas amostras de soros obtidas durante os cinco primeiros meses após o início dos sintomas clínicos. O objetivo do segundo estudo foi avaliar vários marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida, tais como a detecção de anticorpos IgA e IgE anti-T. gondii, o teste de aglutinação diferencial (AC/HS) e os testes baseados na determinação da avidez dos anticorpos IgG. Foram testadas, num total de 64 amostras de soros, 31 amostras de soros de pacientes com infecção adquirida recentemente e 33 amostras de soros de pacientes com infecção crônica. Os anticorpos IgA foram quantificados por meio de dois "kits" de ELISA de captura (Platelia® Toxo-IgA e ETI-TOXOK A) e um "kit" de ELISA automatizado (IMx Toxo-IgA). Níveis de anticorpos IgA compatíveis com infecção recente foram detectados em todas as amostras de soros dos pacientes com toxoplasmose aguda, com os três "kits". Por outro lado, a análise das amostras de soros dos 33 pacientes com toxoplasmose crônica mostrou que níveis significativos de anticorpos IgA podem ser detectados com alta freqüência durante a fase crônica da infecção, com os três "kits". Anticorpos IgE anti-T. gondii foram detectados, pela técnica de imunocaptura-aglutinação (ISAGA), em 26 (84%) dos 31 pacientes com toxoplasmose aguda e em duas amostras de soros de pacientes com toxoplasmose crônica coletadas mais de um ano após o início das manifestações clínicas. Vinte e nove (94%) dos 31 pacientes com infecção aguda e 15 (45%) dos 33 pacientes com infecção crônica apresentaram, no teste AC/HS, um padrão compatível com toxoplasmose aguda. A avidez dos anticorpos IgG anti-T. gondii foi determinada por dois métodos diferentes. Um dos métodos, utilizando o "kit" comercial Platelia Toxo-IgG, foi baseado na titulação de cada amostra de soro e cálculo dos títulos, com e sem o tratamento com uréia, em relação a um valor de "cut-off" definido. No outro método, utilizando o sistema F.A.S.T.- ELISA, foi feita apenas uma única diluição da amostra de soro, e foram comparadas as absorbâncias das reações na presença e ausência de uréia. Todas as 31 amostras de soros de pacientes com infecção aguda apresentaram índices compatíveis com toxoplasmose aguda pelo método de titulação, ao passo que, com o método de diluição única, 4 destas amostras apresentaram resultados duvidosos, mostrando que o método de titulação das amostras foi mais sensível para o diagnóstico de infecção recente. Resultados semelhantes foram obtidos no grupo de 33 pacientes com toxoplasmose crônica pelos dois métodos; apenas uma amostra de soro apresentou um índice de avidez não compatível com a fase crônica, pelo método de titulação. Os resultados obtidos no presente estudo mostraram que os marcadores sorológicos, atualmente utilizados para o diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida, possuem limitações significativas. Nossos dados sugerem que a determinação da avidez dos anticorpos IgG anti-Z gondii, principalmente pelo método de titulação das amostras de soros, pode ser bastante útil para um diagnóstico mais confiável do estágio em que se encontra a infecção, nos pacientes que apresentam níveis significativos de anticorpos IgM. / Abstract: The diagnosis of acute acquired toxoplasmosis has been frequently based on the detection of specific IgM antibodies and on the demonstration of a significant increase in specific IgG antibodies titers. However, the prevalence of high Toxoplasma IgG antibody titers among normal subjects and the sustained persistence, in some persons, of specific IgM antibodies have complicated the interpretation of serological tests when acute toxoplasmosis is suspected. In our first study, we report the detection of specific IgA antibodies and the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG in sequential serum samples from a patient exhibiting significant levels of specific IgM antibodies for seven years after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. Anti-T.gondii IgA was quantified by an antibody capture ELISA (ETI-TOXOK-A). The patient still had a positive IgA result (> 10 AU/ml) in a serum sample taken two years after the beginning of the clinical manifestations. The IgG avidity was determined by a single serum dilution method, using the Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA system. Avidity indices compatible with an acute infection were found only in serum samples taken during the first five months after the onset of the clinical symptoms. The purpose of the second study was to assess the usefulness of newer serological markers, such as the detection of specific IgA and IgE antibodies, the differential agglutination (AC/HS) test using formalin and acetone-fixed tachyzoites of T. gondii and the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG, in the diagnosis of acute acquired toxoplasmosis. Sixty-four serum samples, 31 from patients with a recently acquired Toxoplasma infection and 33 from patients with chronic toxoplasmosis, were tested. Anti-Z gondii IgA was measured by two antibody capture ELISA tests (ETI-TOXOK-A and Platelia® Toxo IgA) and an automated direct ELISA (IMx® Toxo IgA). The three kits detected antibody levels compatible with a recent infection in serum samples of all patients with acute toxoplasmosis. On the other hand, the analysis of serum samples from 33 patients with chronic toxoplasmosis revealed that significant levels of IgA may be detected with a high frequency by the three kits during the chronic phase of infection. IgE antibodies detected by ISAGA were present in 26 (84%) of 31 patients with acute toxoplasmosis and in serum samples from two subjects with chronic infection taken more than one year after the beginning of the clinical symptoms of infection. Twenty-nine (94%) of 31 patients with a recent Toxoplasma infection and 15 (45%) of 33 subjects with chronic toxoplasmosis had an AC/HS pattern compatible with acute toxoplasmosis. The avidity of Toxoplasma IgG was evaluated by two methods. One method was based on titration of each serum sample and calculation of the titers, in the absence and presence of urea, in relation to a defined cut-off value. In the other method, a single serum dilution was used and the absorbances of the reactions in the presence and absence of urea were compared. The titration method was more sensitive for diagnosing a recent primary Toxoplasma infection: All 31 serum samples from patients with acute toxoplasmosis had avidity indices compatible with acute toxoplasmosis by the titration method whereas with the single dilution method serum samples from four patients had equivocal results. In the 33 patients with chronic toxoplasmosis, similar results were obtained with the two avidity methods; only one serum sample had a non compatible avidity value with the titration method. The results obtained in the present study show that the current serological markers used for diagnosing acute acquired toxoplasmosis have significant limitations. Our data suggest that the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG, mainly by the titration method, in patients with detectable IgM antibodies could permit a more efficient diagnosis of the stage of infection by T gondii. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Resumo: O objetivo foi verificar a soroprevalência de anticorpos IgG contra T. gondii e identificar pela primeira vez os fatores associados ao risco de infecção em gestantes com acompanhamento pré-natal em Araçatuba. Em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Araçatuba/SP, foram analisados 428 questionários no período de maio de 2018 a março de 2019, em quatro Unidades Básicas de Saúde (UBS) deste município. O questionário epidemiológico foi aplicado por enfermeiras de cada unidade e continha perguntas relacionadas aos fatores associados ao risco de infecção. Em 236/428 (54,91%) foram detectados anticorpos da classe IgG e a análise multivariada verificou que a soroprevalência foi associada a gestantes maior de 36 anos, casadas, ensino médio incompleto e gestação anterior. Aquelas que relataram gestação anterior têm 1,99 vezes mais chance de ser sororeagente para toxoplasmose neste município. Pela primeira vez, foi caracterizado o perfil epidemiológico de gestantes atendidas com toxoplasmose em Unidades Básicas de Saúde deste município do Estado de São Paulo. / Abstract: The objective was to verify the seroprevalence of IgG antibodies against T. gondii and to identify for the first time the factors associated with the risk of infection in pregnant women with prenatal care in Araçatuba. In partnership with the Municipal Health Secretariat of Araçatuba / SP, 428 questionnaires were analyzed from May 2018 to March 2019, in four Basic Health Units (BHU) of this municipality. The epidemiological questionnaire was administered by nurses from each unit and contained questions related to factors associated with risk of infection. In 236/428 (54.91%) IgG class antibodies were detected and the multivariate analysis found that seroprevalence was associated with pregnant women older than 36 years, married, incomplete high school and previous pregnancy. Those who reported previous pregnancy are 1.99 times more likely to be seropositive for toxoplasmosis in this municipality. For the first time, the epidemiological profile of pregnant women treated with toxoplasmosis in Basic Health Units of this municipality of the State of São Paulo was characterized. / Mestre

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Toxoplasma gondii is an obligate intracellular eukaryotic pathogen that causes severe neurologic disease in immunocompromised adults and congenitally infected neonates. Events critical to the propagation of T. gondii, such as invasion and egress, are regulated by calcium-dependent signaling. In order to identify unique components of the parasite’s calcium signaling networks, members of the Arrizabalaga laboratory have used a forward genetics approach to isolate mutants with altered sensitivity to the calcium ionophore A23187. Exposing extracellular parasites to A23187 induces protein secretion, motility and cytoskeletal rearrangements and prolonged treatment causes exhaustion of factors required for invasion, which results in what is referred to as ionophore induced death (iiDeath). Mutants capable of surviving this treatment were isolated from a chemically mutagenized population. Whole genome sequencing of one such mutant, MBD2.1, identified a nonsense mutation in a protein of unknown function (TGGT1_069070, ToxoDBv7.2) Complementation of MBD 2.1 with a wild-type copy of TGGT1_069070 restored sensitivity to iiDeath treatment. Endogenous tagging of this locus revealed that the encoded protein is secreted from a unique parasite secretory organelle known as the dense granule into the parasitophorous vacuole, leading to its designation as TgGRA41. Complete knockout of TgGRA41 recapitulates the resistance to iiDeath observed in MBD2.1 but also exhibits a dramatic decrease in propagation in tissue culture not seen in the original mutant. The knockout shows defects in multiple steps of the lytic including compromised invasion efficiency and premature egress of parasites from host cells. Cytosolic calcium measurements of extracellular parasites show enhanced uptake of calcium in the knockout strain as compared to parental and complemented, suggesting that the loss of TgGra41 results in calcium dysregulation. Together, these results provide a novel insight into the role that the parasitophorous vacuole of T. gondii plays in calcium homeostasis and calcium-dependent signaling processes.