Im Rahmen der vorliegenden Arbeit sollte geprüft werden ob durch Reduktion der Glutamatdecarboxylase (GAD) Expression eine Reduktion des autoimmunogenen Potenzials in insulinproduzierenden Beta-Zellen des endokrinen Pankreas erreicht werden kann. Aus der Literatur ist bekannt, dass GAD als Autoantigen eine zentrale Stellung bei der Induktion der T-Zell vermittelten Insulitis einnimmt. Der Prozess, welcher zur Beta-Zell-Apoptose des Typ 1 Diabetes führt, ist ein bislang wenig verstandener komplexer Vorgang. Ein besseres Verständnis dieses Prozesses könnte zur Prävention der Beta-Zell-Zerstörung in der frühen Phase des Typ 1 Diabetes beitragen. In den für die Untersuchungen verwendeten INS-1 Zellen werden die beiden Isoformen der GAD exprimiert. Durch einen antisense Ansatz sollte in INS-1 Zellen die GAD Expression beider Isoformen supprimiert werden. In dieser Arbeit wurden zwei Methoden zur gezielten Suppression der Expression des Autoantigens GAD65 etabliert. Es konnte ein antisense Klon identifiziert werden, bei dem die endogene GAD65 mRNA fast nicht mehr detektierbar war. Auf Protein Ebene, im Westernblot konnte dieses Ergebnis jedoch nicht bestätigt werden. Im zweiten Teil der Arbeit wurde die Funktion der INS-1 Zellen mit supprimierter GAD65 Expression charakterisiert. Dieser Punkt beinhaltet die Analyse der Expression von Genen, welche die Beta-Zell-Funktion definieren, die Glukose-abhängige Insulinsekretion sowie die Regulation der Zytokin-induzierten Apoptose. Dabei zeigte sich aus Daten der RT-PCR, dass die mRNAs von anderen Beta-Zell-spezifischen Genen wie GLUT2, Glukokinase, Proinsulin, IDX1 und Nkx6.1 in unveränderter Menge nachweisbar sind. Also bleibt die Funktion der INS-1 Beta-Zellen erhalten, da selbst durch forcierte Reduktion der Expression des Autoantigens GAD65 die Glukose-induzierte Insulinsekretionskapazität im Wesentlichen nicht beeinträchtigt wird. In vitro Untersuchungen zeigten eine unveränderte Sensitivität der Zytokin-induzierten Apoptose nach GAD65 Suppression in INS-1 Zellen. Die zuvor genannten Resultate und die Tatsache, dass die GAD wohl eines der wichtigsten Autoantigene im Rahmen der Immunpathogenese des Typ 1 Diabetes ist, stellen die Grundlage für die Generierung GAD-supprimierter transplantierbarer Beta-Zellen mit guter Transplantatfunktion dar. Im Hinblick auf eine mögliche therapeutische Anwendung bei der Behandlung dieser humanen Autoimmunerkrankung demonstrieren die vorliegenden Daten, dass im Rahmen einer Inselzelltransplantation die Verwendung von GAD-supprimierten Beta-Zellen bei der Transplantation in das endokrine Pankreas des Menschen zu einer Verminderung von Autoimmunreaktionen führen könnte. / In the present study we investigated genetic engineering approaches for the suppression of autoantigenic GAD expression in insulin producing pancreatic beta-cells. The enzyme glutamic acid decarboxylase (GAD) represents a major autoantigen in the early immunopathogenesis of T-cell-mediated destruction of pancreatic beta-cells in type 1 diabetes mellitus. The mechanisms which trigger the apoptotic destruction of insulin producing pancreatic beta-cells leading to autoimmune diabetes are incompletely understood. The exact mechanisms remain to be clarified. The enzyme glutamic acid decarboxylase (GAD), is expressed in INS-1 pancreatic beta-cells in two distinct isoforms GAD65 and GAD67. Thus, strategies to suppress GAD expression in INS-1 cell lines were tested. Two methods for suppression of autoantigenic GAD65 expression were established. One clone overexpression of GAD65 antisense mRNA yielded an almost complete suppression of endogenous GAD65 mRNA expression. In the second part of this thesis the characterization of INS-1 cells with suppressed autoantigenic GAD65 mRNA expression including beta-cell specific gene expression, glucose-dependent insulin secretion, and cytokine induced-apoptosis was tested. Expression of glucose transporter type 2, glucokinase, preproinsulin, islet/duodenum homeo box 1 transcription factor (IDX), and NK homeodomain transcription factor (Nkx6.1) were characterized by reverse transcription polymerase chain reaction. No differences in the amount of these beta-cell specific genes could be detected between GAD65 suppressed INS-1 cell clones and controls. Moreover, reduced GAD65 expression does not affect insulin secretory capacity in INS-1 cells. Suppression of GAD65 expression in INS-1 cells does not alter sensitivity to cytokine-induced apoptosis. The data presented here suggest that suppression of GAD expression may thus provide a therapeutical approach to prevent recurrence of autoimmune beta-cell destruction in transplanted pancreatic beta-cells in type 1 diabetic patients.

Orientador: Luís Gustavo Modelli de Andrade / Banca: André Luíz Balbi / Banca: Silvana Molina / Banca: Lilian Monteiro Pereira / Banca: Marilda Mazzali / Resumo: Introdução: Os receptores de transplante de órgãos sólidos apresentam elevada incidência de não adesão medicamentosa. Existem poucos estudos de intervenção com abordagens visando o aumento da adesão. Objetivo: Avaliar o impacto da estratégia educacional e comportamental na adesão de transplantados renais no período dos três primeiros meses após o transplante. Métodos: Estudo prospectivo de pacientes incidentes em transplante renal. Os pacientes foram randomizados em dois grupos: Grupo controle de orientações usuais da equipe médica e grupo intervenção de orientações usuais somadas à educação complementar (orientações sobre a importância dos imunossupressores e modificações comportamentais com duração de 30 minutos). A adesão foi avaliada pelo questionário de adesão ITAS ao fim de três meses. Foram avaliadas a função renal aos 3, 6 e 12 meses e a incidência de rejeição. Resultados: A não adesão foi de 46,4% no grupo controle e 14,5% no grupo de tratamento (p=0,001). O razão de chance para não adesão foi 2,59 (IC: 1,38 - 4,88) vezes maior no grupo controle. A análise multivariada mostrou que pertencer ao grupo controle aumentou o risco de não adesão em 5,84 vezes (IC: 1,8 - 18,8, p=0,003). Não houve diferenças na função renal e nas taxas de rejeição entre os grupos. Conclusão: A não adesão é elevada nos três primeiros meses do transplante. A estratégia comportamental e educativa objetivando maior esclarecimento da importância do uso dos imunossupressores aumentou significantemente à adesão a terapia imunossupressora / Abstract: Not available / Doutor

CD8 T lymphocytes are a crucial component of the adaptive immune system and mediate control of infections and malignancy, but also autoimmunity and allograft rejection. Given their central role in the immune system, CD8 T cell responses are tightly regulated by costimulatory signals and cytokines. Strategies targeting signals that are critical for T cell activation have been employed in a transplantation setting to impede alloreactive T cell responses and prevent graft rejection. The goal of my thesis is to understand how costimulatory signals and inflammation regulate alloreactive CD8 T cell responses and how to target these pathways to develop more effective tools to prevent graft rejection. Costimulation blockade is an effective approach to prolong allograft survival in murine and non-human primate models of transplantation and is an attractive alternative to immunosuppressants. I describe a novel murine anti-CD40 monoclonal antibody that prolongs skin allograft survival across major histocompatibility barriers and attenuates alloreactive CD8 T cell responses. I find that the pro-apoptotic proteins Fas and Bim function concurrently to regulate peripheral tolerance induction to allografts. Activation of the innate immune system by endogenous moIecules released during surgery or infections in transplant recipients can modulate T cell responses. However, the direct impact of inflammation on alloreactive CD8 T cell responses is not clear. Using a T cell receptor (TCR) transgenic mouse modeI, I demonstrate that inflammatory stimuli bacterial lipopolysaccharide (LPS) and the viral dsRNA mimetic poly(I:C) differentially regulate donor-reactive CD8 T cell responses by generating distinct cytokine milieus. Finally I demonstrate the role of pro-inflammatory cytokines stem cell factor (SCF), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-3 (IL-3) in improving human B cell development in humanized NOD-scid IL2Rγnull (NSG) mice.

Bakgrund: För många svårt sjuka patienter med organsvikt är organtransplantation deras enda chans till ett bättre och längre liv. Till följd av stora förändringar och framsteg har transplantationen utvecklats, men bristen på organ är global och beror på allmänhetens inställning. Förlorad kontroll är den mest centrala upplevelsen och upplevelsen av oförutsägbarhet och osäkerhet under väntetiden. Lagar och författningar som styr organdonation och organtransplantation ser olika ut i världen. Sverige har en samtyckeslag som betyder att personen är positivt inställd till donation, men närstående har vetorätt och kan motsätta sig ingreppet. Syfte: Syftet var att beskriva patienters upplevelse av att vänta på organtransplantation. Metod: En litteraturstudie med induktiv ansats som omfattas av tolv artiklar varav en kvantitativ. Databaserna Cinahl Complete och PubMed användes. Genom hela gransknings- och analysprocessen användes Polit och Becks niostegsmodell. Resultat: Fyra kategorier framkom: ”fysiska symtom”, ”den psykiska upplevelsen av att vänta”, ”copingstrategier” och ”sociala begränsningar”. Diskussion: Två huvudfynd framkom; det första beskriver fysiska symtom som genererar sociala begräsningar och det andra beskriver hur patienterna utvecklar copingstrategier, för att hantera den psykiska upplevelsen av att vänta. Dessa diskuteras med stöd från annan forskning och Antonovskys förhållningssätt KASAM.

Vinte e nove coelhos machos (Oryctolagus cuniculus) tiveram fragmentos ósseos corticais de 8mm de diâmetro removidos com trefina da metáfise proximal tibial que foram transplantados para uma área adjacente após a realização de um dos seguintes tratamentos: G-EDTA (desmineralização com EDTA pH neutro a 24% na forma de gel por 3 minutos das superfícies ósseas de contato); G-EDTA-P (o mesmo tratamento de G-EDTA e perfuração do leito receptor); G-P (perfuração do leito receptor) e G-C (nenhum tratamento adicional ao transplante). Noventa dias após as cirurgias, os animais foram eutanasiados para obtenção de blocos ósseos contendo os enxertos e preparo de corpos de prova para ensaio mecânico de determinação da resistência à tração e módulo de elasticidade. Os valores encontrados para resistência à tração foram: G-C = 2.0861.200 MPa; G-EDTA = 2.0330.976 MPa; G-EDTA-P = 1.9770.795 MPa e G-P = 1.8260.800 MPa. Entretanto, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0.819). Os valores médios do módulo de elasticidade foram: G-C = 38.8022.72 MPa; G-EDTA-P = 26.2414.17 MPa; G-EDTA = 25.119.89 MPa e G-P = 17.517.94 MPa, sendo identificada diferença estatística apenas entre o G-C e os demais. Concluiu-se que a desmineralização por EDTA das superfícies ósseas de contato em enxertos autógenos em bloco do tipo onlay não interfere na resistência à tração da interface independentemente da perfuração do leito receptor e que tanto a desmineralização como a perfuração aumentam a deformação dos corpos de prova sugerindo um melhor comportamento elástico nesses grupos. / Cortical bone fragments of 8mm of diameter were removed with trephine burr from the proximal tibial metaphysis of twenty nine male rabbits (Oryctolagus cuniculus) and transplanted to an adjacent area after one of the following treatments: G-EDTA (demineralization of the contacting bone surfaces with EDTA pH 24% during 3 minutes); G-EDTA-P (the same treatment of G-EDTA and perforation of the receiving host bed); G-P (perforation of the receiving host bed) and G-C (no additional treatment to the transplant). Ninety days post-operatively, the animals were euthanized in order to attain bone blocks with the grafts. The specimens were prepared to mechanical assay for tensile strength and Young modulus. The values found for tensile strenght were: G-C = 2.086±1.200 MPa; G-EDTA = 2.033±0.976 MPa; G-EDTA-P = 1.977±0.795 MPa and G-P = 1.826±0.800 MPa. These differences, therefore, were not statically significant (p=0.819). The Young modulus average values for the specimens were: G-C = 38.80±22.72 MPa; G-EDTA-P = 26.24±14.17 MPa; G-EDTA = 25.11±9.89 MPa and G-P = 17.51±7.94 MPa. There were statistically significant differences only between the G-C and the other groups. The results showed that EDTA demineralization of the contacting bone surfaces in onlay autogenous bone grafts does not interfere in the tensile strenght at the interface independently of the perforation of the host bed. On the other hand, demineralization as well as perforation increased the deformation of the specimens suggesting a better elastic behavior for these groups.

O alcoolismo é considerado uma doença crônica, trazendo prejuízos para saúde do indivíduo. O tecido ósseo também sofre sérios danos com o consumo crônico do álcool, pois induz defeitos na mineralização e redução da espessura do osso medular e cortical. Devido à grande procura por tratamentos reconstrutivos para lesões e perdas ósseas, os enxertos xenógenos vêm sendo uma boa opção para o tratamento regenerativo. Em vista da procura de pacientes que fazem consumo crônico do álcool e apresentam perdas ósseas, necessitando de enxertos xenógenos, este trabalho teve como objetivo comparar, por meio de análise histomorfológica e histomorfométrica, a ação de dois biomateriais, o Bio-Oss® e o OrthoGen®, no processo de reparo de defeitos ósseos em tíbia de ratos submetidos ou não ao alcoolismo experimental. Foram utilizados 80 ratos machos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar, com 60 dias de idade, separados aleatoriamente em quatro grupos experimentais contendo 20 animais cada: Grupo Água Bio-Oss® (GAB), Grupo Etanol Bio-Oss® (GEB), Grupo Água OrthoGen® (GAO) e Grupo Etanol OrthoGen® (GEO). Os animais dos grupos GEB e GEO foram submetidos à adaptação gradativa ao álcool e depois permaneceram a 25% por 90 dias. Após esse período, todos os animais foram submetidos à cirurgia experimental. Foi realizada uma cavidade cirúrgica de aproximadamente 3 mm de diâmetro na epífise proximal da tíbia e nos animais dos grupos experimentais GAB e GEB se fez o preenchimento com o biomaterial Bio-Oss®. Os animais dos grupos experimentais GAO e GEO receberam o preenchimento da cavidade com o biomaterial OrthoGen®. Decorridos os períodos de 10, 20, 40 e 60 dias pós-cirúrgico, cinco animais de cada grupo, por período, foram eutanasiados. Os resultados histomorfológicos demostraram que os animais dos grupos GAB e GEB apresentaram células sanguíneas e tecido conjuntivo nos períodos de 10 e 20 dias, e nos períodos de 40 e 60 dias ocorreu a formação de novo osso, sendo que o grupo GEB apresentou um maior retardo na formação quando comparado ao GAB. Nos grupos GAO e GEO o início da formação de tecido ósseo ocorreu nos períodos de 40 e 60 dias, com um retardo na formação quando comparado ao biomaterial Bio-Oss®. Na análise histomorfométrica, comparando os grupos que receberam a dieta líquida não alcóolica com biomaterias diferentes (GAB e GAO) ocorreu diferença significante em formação óssea em todos os períodos sendo que o grupo Água Bio-Oss® apresentou uma maior formação óssea. Nos grupos que receberam a dieta alcóolica, com biomateriais diferentes (GEB e GEO), ocorreu diferença em formação óssea nos períodos de 20, 40 e 60 dias, onde o biomaterial Bio-Oss® apresentou maiores médias. Comparando os grupos que receberam o mesmo biomaterial, mas com dieta líquida diferente (GABXGEB e GAOXGEO), evidenciou-se diferença significante em formação óssea em todos os períodos (exceto GAOXGEO; 10 dias), sendo que os grupos que receberam dieta líquida apenas com água apresentaram melhores resultados. Conclui-se que o biomaterial Bio-Oss® mostrou-se superior na neoformação óssea quando comparado ao Ortoghen®, e que a dieta alcoólica interferiu de forma negativa no processo de reparação. / Alcoholism is considered a chronic disease, which brings harm to an individuals health. Bones also suffer serious damage resulting from the chronic consumption of alcohol, since it induces defects in the mineralization and reduction of the thickness of the cortical and the cancellous bone. Xenografts have been a good option for regenerative treatments in response to the high search for reconstructive treatments for bone losses and lesions. Given the demand of patients who make chronic use of alcohol and present bone loss, needing xenografts, the aim of this study was to compare, by means of a histomorphological and histomorphometric analysis, the action of the biomaterials Bio-Oss® and OrthoGen® in the repair process of bone defects in the tibia of rats submitted or not to experimental alcoholism. Eighty male Wistar rats (Rattus norvegicus) aged 60 days were randomly separated into four experimental groups with 20 animals each: Bio-Oss® Water Group (GAB), Bio-Oss® Ethanol Group (GEB), OrthoGen® Water Group (GAO) and OrthoGen® Ethanol Group (GEO). The animals in the GEB and GEO were submitted to gradual adaptation to alcohol and later kept at 25% for 90 days. After this period, all animals were submitted to experimental surgery. A surgical cavity with approximately 3 mm of diameter was made in the proximal tibial epiphysis and in animals from the experimental groups GAB and GEB it was filled with the Bio-Oss® biomaterial. Animals from the experimental groups GAO and GEO had their cavity filled with the OrthoGen® biomaterial. After 10, 20, 40 and 60 days post-surgery, five animals in each group, per period, were euthanized. The histomorphological results showed that the animals from the GAB and GEB groups presented blood cells and connective tissue in the 10 and 20 days periods, and in the periods of 40 and 60 days there was formation of new bone, with the GEB group presenting greater delay in formation when compared to the GAB. In the GAO and GEO groups, bone formation started in the periods of 40 and 60 days, with a delay in formation when compared to the Bio-Oss® biomaterial. In the histomorphometric analysis, comparing the groups that received nonalcoholic liquid diet with different biomaterials (GAB and GAO), there was a significant difference in bone formation in all periods, with the Bio-Oss® Water Group presenting greater bone formation. In the groups that received an alcoholic diet, with different biomaterials (GEB and GEO), there was a difference in bone formation in the periods of 20, 40 and 60 days, in which the Bio-Oss® biomaterial presented greater means. Comparing the groups that received the same biomaterial, but with a different liquid diet (GABXGEB and GAOXGEO), there was a significant difference in bone formation in all periods (except for GAOXGEO; 10 days), in which the groups that received a liquid diet with only water presented better results. In conclusion, the Bio-Oss® biomaterial presented better performance in bone neoformation when compared to the Ortoghen®, and the alcoholic diet affected negatively the repair process.

Thesis advisor: Eric Strauss / A bioethics thesis focusing on the issues of organ transplantation and the organ trade in the nations of China and India. It explains how the organ transplantation procedure is done, the laws pertaining to organ transplantation, the ethics of organ transplantation, the organ trade in its various aspects in the nations of China and India, and finally shares the story of a living organ donor in the United States. It addresses questions such as: How do we classify brain death? Who should be allowed to donate their organs? Should organs be available for sale and purchase? Is the organ trade a violation human rights? It concludes with the author's opinions on the subject, which are decidedly against the organ trade. / Thesis (BS) — Boston College, 2007. / Submitted to: Boston College. College of Arts and Sciences. / Discipline: Biology. / Discipline: College Honors Program.

O tratamento das lesões ósseas cavitárias com autoenxerto ainda é considerado o padrão-ouro. Seu uso, entretanto, é limitado, devido principalmente à baixa disponibilidade e à morbidade do sítio doador. Os enxertos ósseos sintéticos são estudados com o objetivo de superar as limitações decorrentes da retirada de autoenxerto ou da disponibilidade de bancos de tecidos. O vidro bioativo é um material sintético osteoindutor, osteocondutor e antibacteriano, à base de sílica e cria um arcabouço para o crescimento ósseo. Objetivo: comparar o vidro bioativo com o autoenxerto, com relação às características histomorfométricas. Métodos: foi realizado um estudo experimental prospectivo caso-controle em animais, para comparar o vidro bioativo com o autoenxerto com relação às características histomorfométricas. Oito coelhos foram submetidos a uma cirurgia em que um defeito cavitário foi criado em ambos os fêmures proximais; de um lado, o defeito ósseo criado foi preenchido com os grânulos de vidro bioativo; do outro, o defeito ósseo foi preenchido com o autoenxerto retirado do lado contralateral. Os lados foram randomizados. Catorze dias após a cirurgia os animais foram sacrificados. Resultados: a análise histológica revelou que a neoformação óssea entre os dois grupos foi equivalente, e que a contagem de osteoblastos foi superior nos fêmures tratados com vidro bioativo. A contagem de osteócitos, por outro lado, foi menor. A semelhança na intensidade de neoformação óssea coincide com o encontrado na literatura. As diferenças de contagem celular são concordantes com o mecanismo de ação do vidro bioativo: aumento do turnover ósseo, estímulo dos osteoblastos e retardo na sua diferenciação para osteócitos. Conclusão: o vidro bioativo promove neoformação óssea semelhante ao autoenxerto neste modelo animal de defeito ósseo cavitário. Nível de evidência III, estudo caso-controle / Autograft is still considered the gold standard in the treatment of cavitary bone lesions. The low availability and donor site morbidity, however, limits its use. Synthetic bone grafts have been studied in order to overcome the limitations of autograft or allograft. Bioactive glass is an osteoinductive, osteoconductive and antibacterial silica-based synthetic material. It promotes the creation of a scaffold for bone growth. Objectives: to compare bioactive glass and autograft regarding their histomorphometric characteristics. Methods: the author conducted a prospective case-control experimental study on animals, to compare the histomorphometric characteristics of bioactive glass versus autograft. Eight rabbits underwent surgery in which a cavitary defect was created in both proximal femurs. On one side, the bone defect was filled with bioactive glass granules and on the other, the defect was filled with autograft grafted from the contralateral side. The sides were randomized. Fourteen days after surgery, the animals were euthanized. Results: histologic analysis revealed that bone neoformation was equivalent among the two groups and the osteoblasts cell-count was higher in the femurs treated with bioactive glass. The osteocytes cell-count, however, was lower. The similarity in bone formation between both groups was also found in the literature. The differences in cell-count of osteocytes and osteoblasts are in accordance with the mechanism of action of the bioactive glass: increase in bone turnover, stimulation of osteoblasts and inhibition of their differentiation into osteocytes. Conclusion: bioactive glass is similar to autograft regarding bone neoformation, in this animal model of cavitary bone defects. Level of evidence III, case-control study

O transplante de órgãos é hoje uma opção de tratamento de várias doenças terminais. Apesar de todos os progressos no campo do transplante, o principal problema enfrentado ainda é a rejeição. As principais moléculas responsáveis pela resposta alogeneica e subsequente rejeição ao enxerto, são os antígenos leucocitários humanos (HLA, do inglês Human Leucocyte Antigens). Porém, existem evidências que anticorpos dirigidos a antígenos não-HLA estão associados com rejeição de transplantes. Neste estudo, foi investigada a presença de anticorpos anti-célula endotelial (AACE) em 11 pacientes que perderam seus rins transplantados devido à rejeição humoral irreversível e em 2 com perda por trombose de veia renal. A ausência de anticorpos anti-HLA contra o doador foi verificada antes do transplante, da rejeição e antes e depois da transplantectomia, através da realização de provas cruzadas usando as técnicas mais sensíveis. Anticorpos não-HLA presentes em nove eluatos reagiram com EAHy.926. Eluatos positivos e negativos contra linhagem EAHy.926 foram testados contra cortes histológicos de 6 rins sadios para detecção de quais estruturas renais são reconhecidas por esses anticorpos. A reação foi avaliada pelo método de imunofluorescência indireta. Dos 13 eluatos testados, 4 (isotipo IgG) e 5 (isotipo IgM) reagiram com forte fluorescência nos glomérulos e endotélio arterial, mas não foi verificada reação na cápsula de Bowman e no epitélio tubular. Não foi observado polimorfismo na reatividade dos eluatos. Em onclusão, verificamos que os anticorpos não-HLA têm um importante papel na rejeição humoral. Estes estão reconhecendo antígenos de um sistema provavelmente não-polimórfico nas células de endoteliais presentes, principalmente, nos capilares glomerulares. / The transplant of organs is today an option of treatment to several terminal diseases. In spite of all the progress in the field of the transplants, the rejection remains a problem to be solved. The main target molecules for the allogenic response and subsequent allograft rejection are the human leukocyte antigens (HLA). However, there are growing evidences that non-HLA antibodies are associated with transplant rejection. In this study it was investigated the presence of anti-endothelial cell antibodies (AECA) in 11 patients who had early lost their transplanted kidney by irreversible humoral rejection and in 2 ones from renal venal thrombosis. The absence of anti-HLA antibodies against the donor was verified by the negativity of crossmatches performed using the most sensitive assays, at the transplant, at the rejection, and before and after the transplantectomy Antibodies from 9 eluates bound to EAHy.926. Positive and negatives eluates were tested against frozen sections from 6 normal kidneys in order to define the structures to which they were reactive. The reactivity was identified by indirect immunofluorescence method. From 13 eluates evaluated, 4 (isotipe IgG) and 5 (isotipe IgM) reacted to the glomerulus and renal arterial endothelium with intense fluorescence but they did not react to the Bowmans capsule and tubular epithelium. No polymorphism was observed in eluates reactivity. In conclusion, we have shown that non-HLA antibodies may represent a cause of the humoral rejection. These antibodies are probably recognizing antigens of a nonpolymorphic system in endothelial cells present, mainly, in the glomerular capillaries.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a neoformacão óssea induzida por um xenoenxerto bovino composto comparativamente ao ósseo autógeno, em cirurgias de levantamento de seio maxilar em coelhos. Nesse estudo utilizouse o seio maxilar de 18 coelhos machos, sendo que no seio maxilar esquerdo foi colocado 200mg de osso autógeno córtico-medular triturado e no seio maxilar direito, o biomaterial, de origem bovina, composto por matriz orgânica cortical e inorgânica medular, \'pool\' de BMPs e colágeno (Gen- Tech®). Realizou-se análise tomográfica por tomógrafo computadorizado (TC) para avaliar a densidade óptica comparativamente entre os grupos e períodos experimentais, a histológica descritiva para verificar a resposta tecidual frente aos materiais implantados e a histomorfométrica para obter os dados de densidade de volume de tecido ósseo neoformado, tecido conjuntivo e/ou granulação, material residual e tecido mielóide. Os resultados obtidos pela TC demonstraram densidade óptica cerca de 2 vezes maior no grupo teste. Na análise histológica observou-se infiltrado inflamatório apenas no período de 2 semanas do grupo teste e exclusivamente ao redor do componente orgânico do biomaterial. Quanto a neoformação óssea, não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos experimentais ou ao longo dos períodos, no entanto a área de tecido mielóide foi cerca de 2 vezes maior no grupo controle. Considerando-se os limites do modelo experimental e da técnica empregada podemos concluir que o biomaterial Gen-Tech® é potencialmente indicado como substituto ósseo em cirurgias de levantamento de seio maxilar, uma vez que promove uma neoformação óssea similar à do osso autógeno. / The purpose of this study was to evaluate new bone formation induced by a bovine xenograft compared to autogenous bone in maxillary sinus augmentation in rabbits. The maxillary sinus of 18 male rabbits were used, whereas the left sinus was filled with 200mg of a mixture of cortical and medullar autogenous bone and the right sinus was filled with a mix of organic and inorganic bovine matrix, plus \'pool\' of BMPs and collagen (Gen-Tech®). Computer tomography (CT) analysis was realized to evaluate and compare the optical density among the groups and experimental periods; descriptive histologic analysis was used to verify the tissue response to the materials implanted. In addition, histomorphometric analysis was realized to evaluate volume density of the newly formed bone, connective tissue and/or granulation tissue, residual material and myeloid tissue. The results obtained in the CT demonstrated an optical density approximately 2 times greater in the test groups. Histological analysis revealed an inflammatory infiltrate at 2 weeks in the test group and exclusively around the organic portion of the material. Regarding new bone formation, no statistical differences were observed among the two experimental groups or throughout the experimental periods. However the area of myeloid tissue was 2 times greater in the control group. Considering the limits of the experimental model and technique used in this study, it is possible to conclude that Gen-Tech® is a biomaterial with potential applications as a bone substitute in maxillary sinus augmentation once it is able to promote the formation of new bone similarly to autogenous bone.