Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T19:43:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Miria de Oliveira Barbosa.pdf: 1891641 bytes, checksum: 5418e93f232ae4badc49c2702841d383 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T19:43:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Miria de Oliveira Barbosa.pdf: 1891641 bytes, checksum: 5418e93f232ae4badc49c2702841d383 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / CNPq e FACEPE / A doença de Chagas é considerada pela Organização Mundial da Saúde uma das doenças mais negligenciadas do mundo, cerca de 6 a 8 milhões de pessoas estão infectadas e 25 milhões sob risco de adquirir a doença. A quimioterapia para a enfermidade é composta por apenas um medicamento disponível no mercado, o benznidazol. O tratamento com o fármaco necessita de um longo período e apresenta graves efeitos colaterais. Haja vista a grande parcela da população afetada e com uma quimioterapia restrita, a busca de novos protótipos a fármacos antichagásicos se torna necessária e emergencial. Para o planejamento da série química utilizaram-se dois heterociclos, os 1,3-tiazóis e as 4-tiazolinonas. Estes constituem classes de compostos bastante exploradas no âmbito da Química Medicinal, devido a sua versatilidade química e ampla gama de atividades biológicas, com destaque para sua potencial atividade tripanocida. Para o planejamento da síntese utilizou-se técnicas de bioisosterismos e hibridação molecular. Com base nisso, este trabalho apresenta o planejamento, a síntese e avaliação farmacológica de 31 compostos, dos quais 21 se classificam como 1,3-tiazóis e 10 como 4-tiazolinonas.Todos os compostos tiveram sua estrutura química determinada por técnicas espectroscópicas como infravermelho, ressonância magnética nuclear 1H e 13C e espectrometria de massas. A atividade tripanocida foi determinada em epimastigotas (DM28c) e tripomastigota (cepa Y), além da citotoxicidade que foi estimada em esplenócitos de camundongos BALB/c. Os compostos compostos cíclicos produzidos não demonstraram atividade tripanocida relevante sobre a forma tripomastigota, no entanto, os tiazóis apresentaram em sua maioria uma boa citotoxicidade, que pode ser até quatro vezes inferior ao benznidazol. A atividade frente à forma epimastigota foi até 10 vezes superior ao benznidazol,

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4590_1.pdf: 2364872 bytes, checksum: f24749346bedcbc3c6bc648961872005 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do ácido barbático (BARB) na viabilidade celular, no crescimento e na ultra-estrutura da forma epimastigota do Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas. A fim de aumentar a biodisponibilidade do ácido barbático, este composto foi incorporado a nanocápsulas (BARB-NC) de ácido poli-láctico- glicol (PLGA). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados através da contagem na câmara de Neubauer nos tempos 24, 48 e 72 horas. Os parasites foram incubados a diferentes concentrações de BARB e BARB-NC por 72 horas após 24 horas de cultivo. Parasitas cresceram em meio livre de droga que foi usado como controle. A incubação dos parasites com nanocápsulas vazias não resultaram em atividade inibitória quando comparados ao controle, embora mudanças estruturais terem sido verificadas. Tratamento dos parasitas tanto com BARB e BARB-NC resultaram em uma inibição do cresciemtno dose-dependente. Verificou no BARB uma inibição de apenas 32% nas primeiras 24 horas com a concentração de 62,5 μg/ml. No entanto, o valor da IC50 da BARB-NC nas 24h foi 24.66 μg/ml. A incorporação do BARB dentro de nanocápsulas potencializou o efeito tripanosomicida deste. Embora, o tratamento com BARB e BARB-NC cause trágicas mudanças morfológicas, essas alterações foram mais severas nos parasites tratados com BARB-NC

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo72_1.pdf: 2710899 bytes, checksum: 92a4e972e0e35dc46f719fed1b0eb2ed (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A Doença de Chagas ou Trypanosomiase Americana é um grave problema de saúde pública que afeta cerca de 18 milhões de pessoas por todo o mundo, principalmente na América Latina. A doença pode ser contraída de diversas formas onde as principais são pela transmissão do protozoário a partir de um mosquito infectado, por via oral ou transfusão sanguínea. O movimento de migração, do interior do país para as grandes cidades ou de turistas estrangeiros, tem feito com que a doença se disseminasse por mais lugares. Assim como as outras doenças tropicais negligenciadas, o tratamento disponível para os pacientes chagásicos é escasso. Atualmente apenas dois medicamentos são comercializados, o benzonidazol e o nifurtimox, ambos com sérios problemas com suas administrações. Políticas de incentivo a novos medicamentos e/ou terapias vem sendo estimuladas pelo TDR (Programa Especial para Pesquisa e Treinamento em Doenças Tropicais) e o DNDi (Drugs for Neglected Diseases initiative). Baseado nisto, este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial antichagásico de novos derivados tiazolidínicos, verificando seus efeitos citotóxicos em células de camundongos isogênicos, sua atividade tripanocida contra as formas tripomastigota e epimastigota dos Trypanosoma cruzi e verificar através de microscopia eletrônica os sítios de interação dos compostos nas ultra-estruturas do Trypanosoma cruzi. Os resultados encontrados demonstram que os derivados tiazolidínicos testados apresentam valores da concentração de citotoxicidade compatíveis em relação às drogas padrão. Dois derivados se destacaram nos testes de atividade anti-Trypanosoma cruzi, LPSF-SF 29 e o LPSF-GQ 109, com valores de IC50 relativamente baixos. Ao se observar as mudanças que estes dois compostos ocasionaram no interior do T. cruzi, verificamos modificações que possivelmente indicam que os parasitam estão em um processo de morte celular programada. Pode-se concluir então que além das atividades biológicas já descritas na literatura, os derivados tiazolidínicos podem ser novos candidatos a agentes anti-Trypanosoma cruzi, sendo necessários estudos com novos compostos com substituintes estruturalmente diferentes além de testes biológicos mais aprofundados

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-10T22:21:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Aldo César Passilongo da Silva.pdf: 2908680 bytes, checksum: 3c3df9c7f042870bbd0ebb439ab434b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T22:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Aldo César Passilongo da Silva.pdf: 2908680 bytes, checksum: 3c3df9c7f042870bbd0ebb439ab434b1 (MD5) Previous issue date: 2016-05-16 / O desenvolvimento de novos fármacos é um dos grandes desafios para a indústria farmacêutica que envolve altos investimentos na área de pesquisa e desenvolvimento; apesar do baixo número de moléculas viáveis farmacologicamente, ainda o planejamento de fármacos é considerado como uma etapa crucial na descoberta de novos compostos, para tanto, é necessário implementar diversas estratégias. As tiossemicarbazonas são um grupo de moléculas pertencentes a classe das iminas (-C=N), e apresentam uma versatilidade reacional frente a diversos reagentes e excelentes ligantes orgânicos por sua natureza química. Desta forma, este trabalho teve por objetivo a síntese de 11 compostos derivados (AP-01 a AP-11) de forma indireta, onde as tiossemicarbazonas foram previamente preparadas a partir de reações da hidrazina (NH2-NH2) com isotiocianato e avaliação biológica anti-fungica, antitripanossomida e leshimanicida de novos derivados. A fim de avaliar o modo de interação dos compostos com melhores resultados frente a inibição da enzima cruzaína, foram realizados estudos de docking. Os resultados acerca da atividade antifúngica para os derivados indol-tiossemicarbazonas sintetizados verifica-se a atividade considerável para os derivados AP-05 e AP-07 frente a cepa Cryptococcus neoformans URM 6898. Por outro lado, a cepa de Candida parapsilosis URM4970, demonstrou-se insensível aos derivados testados, onde pode ser observado ausência de atividade na máxima concentração testada (16 μg/mL). Os derivados AP-01, AP-05, AP-06, AP-09 e AP-10 apresentaram valores de IC50 de 4, 4, 4, 4 e 2 μg/mL, respectivamente para a cepa de Candida albicans ATCC, sendo esses valores todos melhores que um dos fármacos padrão utilizados no experimento, o cetoconazol o qual apresentou IC50 8 μg/mL. Para a cepa de Candida krusei, apenas o derivado AP-11 conseguiu resultados mais expressivos na inibição do crescimento desse fungo, apresentando IC₅₀ = 4 μg/mL, sendo esse valor muito semelhante ao apresentado pelo cetoconazol (IC50= 2 μg/mL). Os derivados benzodioxólicos (3a-g e 4a-b) sintetizados e caracterizados foram avaliados no potencial terapêutico frente as formas epimastigotas e tripomastigotas contra Trypanosoma cruzi e a forma promastigotas de Leishmania amazonensis. A maioria dos compostos foi considerado não-tóxico em culturas de células do baço. No que diz respeito à atividade tripanocida, o composto 3c exibiu um nível elevado de atividade contra as formas epimastigota e tripomastigota (IC₅₀ = 1,48 e 3,89 μM, respectivamente). Os compostos 3a, 3f e 3g foram encontrados um elevado índice de atividade contra formas tripomastigota de T. cruzi (IC50=. 1,57, 0,79 e 1,61 μM, respectivamente). No caso de ação contra a L. amazonensis, composto 3d forneceu um resultado promissor, com IC₅₀ = 1,09 μM. A fim de avaliar o modo de interação dos compostos 3a e 3 g frente a cruzaína, foram realizados estudos de docking. No estudo Docking, os resultados demostraram que as interações hidrofóbicas e, especialmente, dois sítios de interação hidrofílicos (ligações de hidrogénio com os resíduos e ASP161 MET68) são importantes para a elevada estabilidade do complexo formado entre o composto 3g e o alvo cruzaína. Portanto, outras avaliações, tais como a avaliação in vivo e protocolos experimentais são necessários para determinar o mecanismo de ação destes compostos tiossemicarbazonas. / The development of new drugs is one of the great challenges for the pharmaceutical industry that involves high investments in the area of research and development. Despite the low number of pharmacologically viable molecules, drug planning is still considered a crucial step in the discovery of new compounds, for which it is necessary to implement several strategies. Thiosemicarbazones are a group of molecules belonging to the class of imines (-C = N), and have a reactional versatility against several reagents and excellent organic binders by their chemical nature. The aim of this work was to synthesize 11 indirect compounds (AP-01 to AP-11), where thiosemicarbazones were previously prepared from the reactions of hydrazine (NH2-NH2) with isothiocyanate and anti-biological evaluation Antitrypsomide and leshimanicide of novel derivatives. In order to evaluate the mode of interaction of the compounds with better results against the inhibition of the enzyme cruzaíne, docking studies were performed. The results on the antifungal activity for the indol-thiosemicarbazones synthesized derivatives show the considerable activity for the derivatives AP-05 and AP-07 against the strain Cryptococcus neoformans URM 6898. On the other hand, the strain of Candida parapsilosis URM4970, (16 μg / mL). The results showed that there was no activity at the highest concentration tested (16 μg / mL). The AP-01, AP-05, AP-06, AP-09 and AP-10 derivatives presented IC50 values of 4, 4, 4, and 2 μg / mL, respectively, for the Candida albicans strain ATCC. Values all better than one of the standard drugs used in the experiment, ketoconazole which had IC50 8 μg / mL. For the Candida krusei strain, only the AP-11 derivative achieved more expressive inhibition of the growth of this fungus, with IC50 = 4 μg / mL, which is very similar to that of ketoconazole (IC 50 = 2 μg / mL). The benzodioxolic derivatives (3a-g and 4a-b) synthesized and characterized were evaluated in the therapeutic potential against the epimastigote and trypomastigote forms against Trypanosoma cruzi and the promastigote form of Leishmania amazonensis. Most of the compounds were considered non-toxic in cultures of spleen cells. With respect to trypanocidal activity, compound 3c exhibited a high level of activity against the epimastigote and trypomastigote forms (IC 50 = 1.48 and 3.89 μM, respectively). Compounds 3a, 3f and 3g found a high activity index against trypomastigote forms of T. cruzi (IC 50 = 1.57, 0.79 and 1.61 μM, respectively). In the case of action against L. amazonensis, compound 3d provided a promising result, with IC 50 = 1.09 μM. In order to evaluate the interaction mode of compounds 3a and 3g against cruzaíne, docking studies were performed. In the Docking study, the results demonstrated that hydrophobic interactions, and especially two hydrophilic interaction sites (hydrogen bonds with residues and ASP161 MET68) are important for the high stability of the complex formed between compound 3g and cruzaíne target. Therefore, other evaluations, such as in vivo evaluation and experimental protocols are required to determine the mechanism of action of these thiosemicarbazones compounds.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9259_Maiara Bianchini Narde.pdf: 910677 bytes, checksum: ed4fd64f6460c6e884cbc534bb95f15e (MD5) Previous issue date: 2017-07-19 / A doença de Chagas causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi é considerada uma importante doença parasitária tropical negligenciada, caracterizada principalmente como uma infecção crônica e sistêmica. Não existe ainda nenhum fármaco adequado e eficaz para o seu tratamento. Os fármacos nitro-heterocíclicos nifurtimox e benznidazol são os medicamentos de primeira linha disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, porém, ambos apresentam grandes limitações. Neste sentido, um nutriente imunomodulador para melhorar o combate do T. cruzi pelo sistema imunológico do hospedeiro poderia ser útil em abordagens quimioterápicas da doença de Chagas. Assim, os efeitos da suplementação com arginina durante o estágio agudo da infecção foram avaliados em camundongos Swiss infectados com a cepa Berenice-78 do T. cruzi. Um total de 24 camundongos foram divididos em quatro grupos experimentais: 6 animais infectados com T. cruzi e suplementados com arginina durante a fase aguda; 6 infectados e não foram suplementados; 6 animais controles não infectados e suplementados com arginina e 6 animais infectados e não suplementados. A eficácia da arginina foi diariamente avaliada pela detecção de parasitos no sangue durante todo o estágio agudo da infecção, que corresponde do 4o dia de infecção até 10 dias após a negativação (51o dia de infecção). Os efeitos da arginina sobre a resposta imune frente a infecção com T. cruzi foram avaliados quanto ao desfecho do dano ao tecido cardíaco e aos níveis séricos de óxido nítrico e fator de necrose tumoral-α. A arginina foi eficaz na redução do número de parasitos circulantes e na amenização da resposta inflamatória visualizada pelos níveis séricos mais baixos de fator de necrose tumoral-α em aproximadamente 10% a menos no grupo suplementado. A contagem de células inflamatórias miocárdicas foi maior entre os animais infectados, sendo que o grupo infectado e suplementado apresentou 3% menos células inflamatórias quando comparado ao grupo não suplementado. Não houve diferenças nos níveis de óxido nítrico e de colágenos tipo I e III quantificados no miocárdio, embora os teores de óxido nítrico tenham sido correlacionados com os teores de colágeno III, ou colágeno novo. Entretanto, o grupo suplementado e infectado apresentou 127,5% mais colágeno do tipo III em detrimento aos demais grupos, que apresentaram mais colágeno tipo I. Esses achados sugerem os benefícios da arginina na resposta imune direcionada ao controle parasitário na infecção pelo T. cruzi.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4344_1.pdf: 1015492 bytes, checksum: d096bbe2d62601d478111a837c689e7b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Chagas continua a ser um problema de Saúde Pública relevante e, o único tratamento, o Benznidazol, acarreta severos efeitos colaterais e possui limitações terapêuticas. Diante disso, objetivou-se analisar o efeito do extrato acetônico (ACE) e dos ácidos fumarprotocetrárico (FUM) e protocetrárico (PRO) do líquen Cladonia verticillaris (Raddi) Fr.. contra Trypanosoma cruzi, in vitro. O extrato acetônico foi obtido mediante a uma seqüência eluotrópica de solventes orgânicos. Posteriormente foram obtidos os compostos isolados (FUM) e (PRO). Foram realizados leituras cromatográficas para confirmação e determinação do grau de pureza das substâncias. Os bioensaios foram conduzidos com formas epimastigotas e tripomastigotas sangüínea incubadas durante 72 e 24 horas respectivamente, na ausência ou presença de 75 a 300ig.mL-1das substâncias testes. Foram determinadas nesse período a IC50 e IL50. As análises foram realizadas em triplicatas em três experimentos independentes. As formas tripomastigotas revelaram maior susceptibilidade aos metabólitos secundários, com 100% de lise dos parasitas tratados com 300 ig·mL-1 de PRO, após 24 horas de incubação. A análise ultraestrutural de tripomastigotas tratadas revelaram desorganização de organelas, retração nuclear e danos ao cinetoplasto e a mitocôndria. Estas alterações foram mais evidentes nos tratamento com PRO. Concluindo, os resultados obtidos estimulam estudos futuros para elucidar os mecanismos de ação destes compostos bem como avaliar seus efeitos sobre formas amastigotas intracelulares. Estes resultados também apontam para o uso do PRO como agente potencial contra Trypanosoma cruzi

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Orsi_MariaAngela_M.pdf: 4219517 bytes, checksum: 3b74fc60bfe20e7919cb4ebd6130a066 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Os estudos sobre as protease do Trypanosoma cruzi foram realizados utilizando-se as formas epimastigota do parasita. Embora a enzima SH-dependente tenha sido detectada nas diferentes formas evolutivas do parasita (RANGEL et alli,1981 b). No entanto existem poucos estudos das enzimas presentes nas formas tripomastigota e amastigota. Neste trabalho, procuramos investigar através da eletroforese em gel de poliacrilamida, a expressão da proteinase nas formas tripomastigota e amastigota com capacidade de degradara gelatina e obtenção de anticorpos monoclonais reati vos com aproteinase de epimastigota. Os resultados obtidos, no presente trabalho mostram que as formas tripomastigota e amastigota expressam o mesmo pOlipeptideo de 48 kDa com atividade enzimática em pH ácido. Entretanto em pH neutro foi detectada uma banda de 35 kDa, e esse polipeptideo não apresentou nenhuma correlação antigênica com aproteinase de epimastigota.O efeito dos anticorpos monoclonais com especificidade para a proteinase na invasão e multiplicação do T. cruzi nas células hospedeiras mostrou um aumento da infectividade, sugerindo que as proteinase do T.cruzi interferem negativamente na penetração e multiplicação do parasita nas células hospedeiras / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:56:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_SimoneLopes_D.pdf: 5378281 bytes, checksum: 84ab71d223c77465ab9f02749d30fbb3 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O efeito dos choques térmicos, quentes e mos, foi estudado buscando-se investigar a ocorrência de tolerância termal em Panstrongylus megistus. A taxa de sobrevivência e mudas foi acompanhada em ninfas de 5º estádio e alados de ambos os sexos de P. megistus após choques térmicos seqüenciais nos quais o primeiro foi de 35°C ou 40°C (1 h) (hipertérmico) ou de 5°C ou O°C (1 h) (hipotérmico) precedendo um choque mais severo de 40°C ou O°C (12 h), respectivamente. Os choques foram separados por intervalos de 8, 18, 24 ou 72 h a 28°C. A fim de se investigar se a tolerância termal nessa espécie era acompanhada por alterações nucleares, ninfas foram dissecadas após intervalos de 24 h, 10 e 30 dias seguindo-se o segundo choque, para determinação e contagem de fenótipos nucleares em túbulos de Malpighi. Demonstrou-se tolerância aos choques quentes e mos sendo que dependendo da temperatura do choque, do intervalo entre os tratamentos à 28°C, fase do desenvolvimento e sexo, a intensidade de tolerância desenvolvida diferiu. Enquanto a tolerância ao calor nas ninfas se verificou quando o período entre os choques foi de até 24 h (choque inicial a 35°C) ou mais (choque inicial a 40°C), taxa expressiva de tolerância nos alados foi verificada apenas em condições de 8 h de intervalo entre os choques, sendo o choque inicial dado a 40°C. Também diferindo do que acontece nas ninfas, cuja tolerância ao choque mo se expressou de modo semelhante em todas as situações analisadas, nos alados foi demonstrada expressiva tolerância ao choque mo apenas quando o choque inicial foi dado a O°C e o tempo entre choques seguidos ultrapassou 18 h. As fêmeas apresentaram maior tolerância termal. Os resultados de tolerância termal foram os primeiros reportados em triatomíneos e sugerem o envolvimento de proteínas de choque térmico (HSP), embora outros mecanismos possam também estar envolvidos. Essa ação protetora, no entanto, parece perder a eficácia com o desenvolvimento do inseto. Igualmente foram encontrados modelos diferentes de alterações nos fenótipos nucleares induzidos pelos choques quentes e mos e identificados após reação de Feulgen. Tolerância ao choque quente envolveu alterações morfológicas representadas por um decréscimo na forma de morte celular por apoptose simultaneamente a um aumento nas respostas de sobrevivência celular. Choques mos seqüenciais não envolveram fusão celular/nuclear e ainda elicitaram aumento de necrose com a avanço do tempo pós-choque. As temperaturas de 40 e 0° C foram mais efetivas que as temperaturas de 35 e 5°C em elicitar tolerância ao calor e ao mo, respectivamente, como foi demonstrado pela análise dos fenótipos nucleares. Diferentes choques térmicos podem ativar diferentes mecanismos de proteção celular contra o estresse em P. megistus, favorecendo uma adaptação do inseto a vários ecótopos. O efeito do jejum seguido por realimentação e choque térmico nos fenótipos nucleares de P. megistus foi também estudado citologicamente em túbulos de Malpighi de ninfas de 40. estádio. Os insetos foram mantidos em jejum até 100 dias a 28°C e sua sobrevivência examinada diariamente. Parte dos insetos em jejum foi realimentada e parte dos insetos em jejum, ou realimentados após jejum, recebeu um choque de 40°C por 1 h. A análise dos fenótipos foi procedida 1 e 7 dias após tais procedimentos. Detectou-se que após 40 dias de jejum, a taxa de sobrevivência dos espécimes foi alta (90)%), decrescendo logo após. Com o avanço do tempo de jejum, a frequência de necroses aumentou. Realimentação após jejum agiu como um estresse médio, aumentando a frequência de apoptose. Ausência de núcleos gigantes foi observada em todos os insetos. Embora o choque térmico tenha promovido um aumento na frequência de núcleos necróticos, não afetou a resposta ao jejum e à realimentação, já que não se verificou uma associação entre os fatores. Espécimes bem nutridos apresentaram uma menor taxa de fenótipos alterados quando comparados a espécimes mantidos em jejum ou realimentados após o jejum. Uma vez que períodos de estresse nutricional podem influenciar a distribuição geográfica e temporal das espécies, as alterações celulares, de morte ou proteção, podem contribuir para o conhecimento do comportamento de P. megistus em condições naturais e em laboratório. O efeito dos choques térmicos em espécimes infectados com Trypanosoma cruzi sobre a incidência de sobrevivência e mudas, fenótipos nucleares, prevalência e intensidade de infecção por Trypanosoma crozi bem como multiplicação e metaciclogênese, inclusive após choque quente (40°C, 1 h), foi investigado em P. megistus. Ninfas de 4º. instar foram submetidas a infecção com a cepa Y de T. crozi e acompanhadas durante 45 dias. O número de epimastigotas e tripomastigotas foi determinado por exame do conteúdo da glândula retal e os fenótipos nucleares de P. megistus estudados em seus túbulos de Malpighi. Demonstrou-se que o choque térmico não promoveu diferenças na sobrevivência e na incidência de mudas em espécimes infectados e não infectados. A infecção promoveu aumento na taxa de sobrevivência e decréscimo na ocorrência de mudas. Não houve diferença significante quanto à prevalência e à magnitude de infecção em espécimes submetidos ou não a choque térmico. Os espécimes submetidos a choque tiveram um decréscimo no número de epimastigotas e tripomastigotas, indicando que alterações na multiplicação do parasita e na metaciclogênese foram induzidas pelo choque térmico. Somente para núcleos com suspeita de apoptose, os fatores infecção e estresse, isoladamente, foram significantes, sugerindo que a presença do parasita possa ser um estímulo para indução do programa de morte celular. As alterações induzidas pela infecção em associação ao choque térmico, especialmente com relação à multiplicação e metaciclogênese, poderão vir a contribuir para nossa compreensão do sistema vetor-parasita, dos modelos epidemiológicos envolvidos e criação adequada desses insetos em laboratório / Abstract: The effects of heat and cold shocks on thermal tolerance in Panstrongylus megistus were studied. The incidence of survival and molting in fifth-instar nymphs and adults was determined following treatments in which a mild heat shock (35°C or 40°C, 1 h) or cold shock (5°C or O°C, 1 h) preceded a more drastic shock (40°C or O°C, 12 h), respectively. Sequential shocks were separated by intervals of 8, 18, 24 or 72 h at 28°C (control temperature). To investigate whether insect survival was accompanied by nuclear changes, fifth-instar nymphs were dissected 1, 10 and 30 days after the second shock and the frequency of nuclear phenotypes present in the Malpighian tubules was determined. Heat and cold shock tolerance was induced but varied according to shock temperature, interval between shocks at 28°C, developmental stage and sex. In contrast to the response in nymphs, for which higher values of heat tolerance were sustained for up to 24 h (preliminary shock at 35°C) or even longer (preliminary shock at 40°C) between sequential shocks, in adults marked tolerance was seen only when the intervals between shocks was = 8 h (preliminary shock at 40°C). Also in contrast to nymphs, which exhibited cold-tolerance is all conditions, adult insects acquired tolerance to more severe shocks only when the preliminary shock was given at O°C and the time between shocks was greater than 18 h. Females showed greater tolerance than males. These results are the first to show thermal tolerance in a bloodsucking hemipteran and suggest the involvement of heat shock proteins, although other protective mechanisms may also be operating. This cellular protection may become less effective as the insect develops. Heat and cold shocks produced different patterns and frequencies of nuclear phenotypes as shown by the Feulgen reaction. Heat shock tolerance involved a decrease in apoptosis and a simultaneous increase in cell survival responses' Sequential cold shocks did not involve cell/nuclear fusion and even elicited an increase in necrosis with increasing time after the shock. Temperatures of 40° and O°C were more effective than 35° and 5°e in eliciting heat and cold shock tolerance, respectively, as shown by cytologica1 analysis of the nuclear phenotypes. Different sequential thermal shocks can tigger different mechanisms of cellular protection against stress in P. megistus and may allow the insect to adapt to various ecotopes. The effect of fasting in association with refeeding and heat shock on the nuclear phenotypes of P. megistus was studied cytologically in Malpighian tubules of fourth-instar nymphs. The insects were fasted up to 100 days at 28°C and their survival followed daily. Groups of nymphs were separated each month, with part of the group being refed and the other part kept fasting. Insects in each of these subgroups received either a heat shock at 40°C for 1 h or where maintained at 28°C (no heat shock). The Malpighian tubules were removed 1 and 7 days after each assay and subjected to the Feulgen reaction for identification and counting of the nuclear. Insect survival was high (900.10) after 40 days of starvation but decreased thereafter. Only necrosis increased with the duration of fasting. Feeding after fasting acted as a mild stressing agent and increased the frequency of apoptosis. No giant nuclei was observed in the insects. Although heat shock increased the frequency of necrotic nuclei it did not affect the starvation and refeeding responses since there was significant interaction between factors. Well-nourished specimens showed a smaller frequency of altered phenotypes than starved or refed insects. Since periods of nutritional stress influence the geographic and temporal distribution of a species, cellular changes such as death or protective mechanisms can contribute to our understanding of the biological behaviour in P. megistus in natural or laboratory conditions. The incidence of survival and molting, the frequency of nuclear phenotypes, the frequency of infection by T. cruzi, and the grades of metacyclogenesis, including after heat shock (40°C, 1 h), were also investigated. Fourth-instar nymphs infected with the strain Y of T. cruzi and monitored for 45 days therea:fter. The number of epimastigotes and trypomastigotes was determined by examining the rectal gland contents. The Malpighian tubules were used to determine the nuclear phenotypes. Heat shock did not alter differences in the survival and molting rates in infected, compared to non-infected insects. However, infection increased the survival and decreased the molting rates. There were no significant changes in the prevalence and magnitude of infectivity following heat shock. Shocked insects showed reduced number of epimastigotes and trypomastigotes, indicating that changes in the multiplication of the parasite and metacyclogenesis were affected by heat shock. Infection and stress increased the frequency of nuclei suspected of apoptosis and suggest that the presence parasite could induce apoptosis. The changes induced by infection in association with heat shock, especially the multiplication and metacyclogenesis of T. cruz; and the mechanisms of resistance developed in the vector, may contribute to our understanding of the vector-parasite system, of the epidemiological patterns involved and adequate rearing of P. megistus in the laboratory / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Passos_LuizAugustoCorrea_D.pdf: 2722441 bytes, checksum: 4c6afe0c705cf3194732bf0eb7808897 (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Atta_AjaxMerces_D.pdf: 4025928 bytes, checksum: 7566d65143049ff5d9262a12d5c07092 (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: No presente trabalho procuramos obter informações sobre as proteínas responsáveis pela atividade inibitória dos soros humanos normais sobre a atividade proteolltica da proteinase do Trypanosoma Cruzi. Na investigaçio destas proteínas foram realizados testes de inibição da atividade proteinásica com amostras de soros fracionados por eletroforese em gel de agarose e por cromatografia em coluna de Sephadex G-200. Através destes testes foi demonstrado que a atividade inibitória dos soros era mediada por proteínas como mobilidade eletroforética nas regiões das alfa-globulinas,que por sua vez foram eluidas em diferentes volumes da gel-filtração do soro, indicando que possuiam diferentes pesos moleculares. Realizando-se testes imunoquímicos com as frações correspondentes às zonas de inibição obtidas com esta gel-filtração, através do emprego de antissoros monoespecíficos para inibidores plasmáticos de proteinases, foi sugerido que a alfa2-macroglobulina, o inativador de cI, a antitrornbina 111 e a alfal-antitripsina poderiam participar do bloqueio da ação enzimática da proteinase do parasito. A remoção da alfa2-macroglobulina das frações correspondentes à primeira zona de inibição, situada no volume de exclusão da gel-filtração do soro, através da precipitação imune desta proteína com a fração IgG de antissoro de coelho específico para este inibidor, aboliu completamente a atividade inibitória. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Ciências Biológicas